大肠菌群测定
大肠菌群测定能力验证技术方案
大肠菌群测定能力验证技术方案大肠菌群测定能力验证是指验证分析实验室的技术能力以测定大肠菌群（也称为肠道菌群）的项目。
大肠菌群是指人体消化道中的一类菌群，对维持肠道健康和消化系统正常功能起着重要作用。
因此，准确测定大肠菌群的能力对于研究肠道健康和疾病的发生机制具有重要意义。
下面将详细介绍大肠菌群测定能力验证的技术方案。
一、能力验证目标和内容：1.验证实验室准确测定大肠菌群的能力，包括测定菌群的种类、数量、多样性等指标。
2.验证实验室对样品的处理和分析方法的准确性和可重复性。
二、样品准备：1.采集肠道样品，可以是粪便样品或直肠拭子样品。
2.样品采集后应尽快进行处理，最好在4小时内完成。
三、实验室操作步骤：1.样品处理：（1）将样品加入消化液中，利用机械分散器将其均匀混合。
（2）将混合液离心，分离菌群所需的细胞沉淀。
（3）去除上清液，保留细胞沉淀。
2.提取DNA：（1）采用商用DNA提取试剂盒，按照说明书进行DNA提取。
（2）检测DNA的浓度和质量，确保提取的DNA质量良好。
3.扩增16SrRNA基因：（1）设计合适的引物，用于扩增16SrRNA基因片段。
（2）利用聚合酶链反应（PCR）技术进行扩增。
（3）检测PCR产物的大小和纯度，确保扩增效果良好。
4.高通量测序：（1）将扩增得到的PCR产物进行纯化和定量。
（2）将样品测序准备好的文库送至测序中心进行高通量测序。
（3）获取测序数据，准备进行下一步的数据分析。
5.数据分析：（1）对测序得到的原始数据进行质量控制和去除低质量序列。
（2）利用生物信息学方法对高质量序列进行聚类分析和物种注释。
（3）根据分析结果计算大肠菌群的多样性指数、物种组成和数量等重要指标。
四、能力验证方法：为验证实验室测定大肠菌群的能力，可以采用以下两种能力验证方法之一：1.实验室内对照：（1）从分析实验室中随机选取若干研究人员进行大肠菌群测定。
（2）研究人员之间相互进行样本交换，对测定结果进行比对和统计分析。
大肠菌群测定—食品中大肠菌群的测定方法
培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄 糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃， 在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。
➢ 在普通营养琼脂上有3中菌落形 态：
➢ 1）光滑型：菌落边缘整齐， 表面有光泽、湿润、
➢ 光滑、呈灰色，在生理盐水 中易分散；
计，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳 糖胆盐发酵管。
•
接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml
以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，同时用大肠埃希氏菌和产气肠
杆菌混合菌种混合接种于1支作单料乳糖胆盐发酵管对照。
• 置36±1℃温箱培养24±2小时，如所有发酵管 都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产 气者，则与对照的混合菌种一起按下列程序进 行。
4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
➢ 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见附录
B ) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的 MPN 值。 ✓注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，
表内的数也应相应减少或增加。
大肠杆菌 0157显色 培养基上 的菌落
在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上
大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征
设备和材料
食品中大肠菌群测定
参考 GB4789．3-2010
➢主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌 属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属 的Ⅲ亚属细菌组成。
3、大肠杆菌的生物学特性
基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但 不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛， 但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体 动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微 荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良 好，革兰氏染色阴性。
大肠菌群测定方法
大肠菌群测定方法大肠菌群是人体内肠道中的一类细菌群，对人体具有重要的生理功能。
测定大肠菌群的方法有很多种，包括传统的培养法、分子生物学方法以及肠道菌群DNA测序等。
传统的培养法是测定大肠菌群的一种常用方法。
这种方法主要是将肠道样本采集后，通过在培养基上培养细菌来测定大肠菌群的分布情况。
首先，将采集到的样本放入富营养培养基中培养，然后通过对细菌在培养基上的生长情况以及染色特性进行观察和鉴别。
通过这种方法可以初步了解肠道中细菌的类型和数量，但是存在着一些限制，比如只能培养出一些特定的细菌，而有些细菌无法通过这种方法来测定。
分子生物学方法是一种较新的测定大肠菌群的方法。
这种方法主要是通过分析肠道样本中的细菌DNA来测定大肠菌群的类型和数量。
首先，将肠道样本中的细菌进行裂解，提取其中的DNA。
然后利用特定的引物对DNA进行扩增，最后通过凝胶电泳等方法分析扩增产物的大小和数量来判断肠道中细菌的组成。
与传统的培养法相比，分子生物学方法可以测定更多种类的细菌，并且更加准确和快速，但是也有一些限制，比如需要复杂的实验操作和设备，以及对样本的处理要求较高。
肠道菌群DNA测序是一种较新的测定大肠菌群的方法。
这种方法是在分子生物学方法的基础上发展而来的，主要是利用高通量测序技术对肠道样本中的细菌DNA进行全面的测序分析。
首先，将肠道样本中的细菌DNA进行提取和净化，然后对DNA进行测序，得到大量的序列数据。
最后通过对序列数据进行比对和分析，可以得到肠道中细菌的种类和数量，进一步了解整体的菌群结构和功能。
与前两种方法相比，肠道菌群DNA测序具有更高的准确性和分辨率，可以得到更全面和详细的信息，但是也需要更多的实验和数据处理，并且成本相对较高。
总的来说，大肠菌群测定方法包括传统的培养法、分子生物学方法和肠道菌群DNA测序等。
每种方法都有其优缺点，选择合适的方法需要根据具体的研究目的和经济条件来决定。
而随着科学技术的不断进步，相信未来还会有更多更先进的方法出现来帮助我们更好地测定大肠菌群。
大肠菌群测定注意事项
大肠菌群测定注意事项
1. 食物摄入：在进行大肠菌群测定前一天晚餐后，避免进食含有大量膳食纤维的食物，如豆类、水果、粗粮等，以免影响测定结果。
2. 药物使用：避免在测定前一周内使用抗生素、肠道清洁剂、益生菌等药物，这些药物可能会对大肠菌群的组成产生干扰。
3. 采样方法：在测定当天，使用专业的采样器具，如棉签或者便盆收集新鲜的大便样本。
避免将尿液、纸巾等杂质掺入样本中。
4. 保存条件：将采样后的样本尽快送至实验室进行检测，如无条件送达实验室，可将样本存放在4的冰箱中，并在24小时内送达实验室。
5. 个人卫生：在采样前，应保持个人卫生，特别是双手的清洁。
最好在采集大便样本前进行手部消毒。
6. 忌充气：在采集大便样本时，避免充气，以免影响大肠菌群的结构和数量。
7. 避免受到环境因素的干扰：在采样过程中，避免接触宠物、花草等可能带有大肠菌群的微生物的环境。
8. 参考值的解读：不同实验室可能有不同的参考值范围，请在报告解读时参考
具体实验室给出的参考范围。
大肠菌群测定检验标准
XXXXXXXXXXXXXXX文件编号3-Q C-TS-006 制定单位质检部页码1/7大肠菌群测定方法及标准版本 A 文件名称1.范围本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的测定。
2.引用标准以下标准所包含的条例，通过在本标准中引用而成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
全部标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用以下标准最版本的可能性。
GB/T4798.3-2023 食品卫生微生物学检验大肠菌群测定方法及标准GB/T4789.28-2023 食品卫生微生物学检验染色法、培育基和试剂3.术语和定义大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指数来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群系以 100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
4.设备和材料4.1 恒温培育箱：36℃±1℃4.2 冰箱：0℃--4℃4.3 恒温水浴锅：46℃±1℃4.4显微镜4.5均质器或乳钵4.6灭菌培育皿：直径为 90mm4.7 灭菌试管：16×1604.8灭菌吸管：1mL〔具 0.01mL 刻度〕、10mL〔具0.1mL 刻度〕4.9灭菌锥形瓶或三角瓶： 500mL4.10灭菌玻璃珠：直径约为 5mm4.11架盘药物天平：0g～100g 准确至 0.1g4.12灭菌剪子、镊子等。
5.培育基和试剂5.1乳糖胆盐发酵管：见附录一中 15.2伊红美蓝琼脂平板：见附录一中 25.3乳糖发酵管：见附录一中 35.4革兰氏染色液：见附录一中 4XXXXX文件编号3-QC-TS-006 制定单位质检部页码2/7 文件名称大肠菌群测定方法及标准版本 A5.50.85%灭菌生理盐水。
6.检验程序大肠菌群检验程序如下：检样稀释乳糖胆盐发酵管36±1℃，24±2h不产气产气伊红美蓝琼脂平板大肠菌群阴性36±1℃，24±2h报告革兰氏染色乳糖发酵管36±1℃，24±2h 革兰氏阳性革兰氏阴性无芽胞杆菌大肠菌群阴性产气不产气大肠菌群阴性报告7.操作步骤：7.1检样稀释大肠菌群阳性报告报告7.1.1以无菌操作，将检样25g(或 25mL)放于含有 225 mL 灭菌生理盐水或其它稀释液的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。
大肠菌群测定
大肠菌群测定（GB/T 4789.03-2003）大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
以100 mL(g)检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。
培养基和试剂：乳糖胆盐发酵管：【蛋白胨20 g；猪胆盐（或牛、羊胆盐）5 g；乳糖10 g；0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL；蒸馏水1000 mL；pH 7.4】将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15分钟。
双料乳糖胆盐发酵管：参照乳糖胆盐发酵管，除蒸馏水外，其他成分加倍。
乳糖发酵管：【蛋白胨20 g；乳糖10 g；0.04%溴甲酚紫水溶液25 mL；蒸馏水1000 mL；pH 7.4】将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30、10或3 mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15分钟。
灭菌生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15分钟。
革兰氏染色液：结晶紫染色液、革兰氏碘液、沙黄复染液伊红美蓝琼脂平板：【蛋白胨10 g；乳糖10 g；磷酸氢二钾2 g；琼脂17g；2%伊红Y溶液20 mL；0.65%美蓝溶液10 mL；蒸馏水1000 mL；pH7.1】将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15分钟备用。
临用时加入乳糖并加热融化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
操作步骤：1.以无菌操作将25 mL待测样品放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌锥形瓶中(瓶内预置玻璃珠)，充分震摇成1:10匀液。
2.接种3只双料乳糖胆盐发酵管，接种量：10mL原液。
3.接种3只单料乳糖胆盐发酵管，接种量：1mL原液。
4.接种3只单料乳糖胆盐发酵管，接种量：1mL的1:10稀释液。
5.36±1℃培养24±2h。
如果均无产气，报告为大肠菌群阴性。
大肠菌群的测定实验报告
大肠菌群的测定实验报告
《大肠菌群的测定实验报告》
实验目的：通过实验测定大肠菌群的数量，了解其在肠道中的分布情况，并探讨其与健康的关系。
实验方法：我们采集了一组健康人群的粪便样本，并使用培养基和平板计数法对大肠菌群进行测定。
首先，我们将粪便样本均匀涂抹在培养基上，然后将培养皿放入恒温箱中进行培养。
培养后，我们对培养皿上的菌落进行计数，并根据计数结果得出大肠菌群的数量。
实验结果：经过实验测定，我们发现健康人群的大肠菌群数量在正常范围内，平均值约为10^8 CFU/g。
同时，我们还发现不同个体之间的大肠菌群数量存在一定的差异，但总体上呈现出稳定的分布情况。
实验分析：大肠菌群在肠道中起着重要的作用，它能够帮助人体消化食物、产生维生素等。
同时，大肠菌群的数量与肠道健康密切相关，过多或过少都可能导致肠道问题。
因此，通过测定大肠菌群的数量，可以帮助我们了解肠道健康状况，及时采取相应的调节措施。
结论：通过本次实验测定，我们得出了健康人群大肠菌群数量的正常范围，并认识到了大肠菌群在肠道健康中的重要作用。
希望通过这一实验结果，能够为人们提供更多关于肠道健康的参考信息，促进人们更加关注和重视肠道健康。
大肠菌群的测定
大肠菌群的测定一、测定的标准：GB/T 4789.3—2003。
二、实验前的准备。
1、1ml吸管（至少6支）与10 ml（至少3支）、培养皿（10个）、试管（2）、剪刀、镊子、玻璃珠等，包裹好放进干燥器中160℃灭菌3小时，备用。
2、乳糖胆盐发酵管的配制：2.1 双料的3支：称3.5克乳糖胆盐发酵培养基加50ml蒸馏水，在电炉上搅拌加热煮沸至完全溶解；分装到三支试管中，每支约10ml，放入小倒管，盖上瓶塞。
2.2 单料的6支：3.5克乳糖胆盐发酵培养基加100ml蒸馏水，在电炉上搅拌加热煮沸至完全溶解；分装到三支试管中，每支约10ml，放入小倒管，盖上瓶塞。
（乳糖胆盐发酵管的颜色是紫蓝色的）2.3 空试管1支盖上瓶塞。
2.3 灭菌：将3支双料6支单料的乳糖胆盐发酵管、1支空试管分别包裹好后放置蒸汽灭菌器内115℃灭菌15分钟。
2.4 灭菌操作：加水高于发热管、排汽管插入管筒内、待有蒸汽排出时计时间排汽5分钟，关排汽阀，待温度达到115℃时开始计时间恒温15分钟，关电源、自然冷却至压力表归0时，打开排汽阀平衡压力，然后打开蒸汽灭菌器取出灭菌后的发酵管及空试管）。
3、生理盐水的配制：称4.25克氯化钠溶于500 ml的蒸馏水，分装于两个锥形瓶中每个225克，盖上瓶塞，包裹好后放置于蒸汽灭菌器121℃于中灭菌15分钟。
备用。
4、打开净化工作台的电源与室内的紫外线灯30分钟，两小时后开始做检验。
三、检验操作。
1、检验员洗手后吹干，然后用75%的酒精棉用于手部消毒。
2、将试样与生理盐水、发酵管、吸管、镊子、剪刀等通过传递窗口送入净化工作台室内，开启净化工作台，点燃酒精灯。
3、以无菌操作将25克剪碎的湿米粉（湿粉条）放于225ml灭菌生理盐水中，均质，配成1：10的均匀稀释液。
4、用10ml的灭菌吸管吸取9ml的灭菌生理盐水注入灭菌的空试管中，再用1ml的灭菌吸管吸取1：10的稀释液1ml,注入该试管中，振摇混匀，做成1：100的稀释液。
大肠菌群检测的实验报告
大肠菌群检测的实验报告大肠菌群检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过检测样品中的大肠菌群数量，评估其卫生质量，为食品安全和人类健康提供重要依据。
二、实验原理大肠菌群是指一群革兰氏阴性、无芽孢、兼性厌氧的细菌，主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠球菌属等。
这些细菌可在25-37℃的环境下生长，且在伊红美蓝培养基上形成典型的大肠菌群菌落。
本实验采用MPN（最大可能数）方法进行大肠菌群的检测。
通过在不同浓度的样品中接种不同体积的培养基，并按照MPN表进行统计分析，以获得样品中大肠菌群的数量。
三、实验步骤1.样品处理：将样品按照10倍递增的方式进行稀释，以适应不同浓度的大肠菌群检测。
2.接种培养：分别取0.1mL、0.01mL、0.001mL的样品稀释液，接种于伊红美蓝培养基中，每个稀释度接种三管。
轻轻摇匀，倒置培养。
3.培养观察：将培养基放入37℃的培养箱中，培养24小时。
观察每个稀释度的培养管中是否有典型的大肠菌群菌落形成。
4.结果统计：根据MPN表，统计每个稀释度下形成菌落的管数，并计算大肠菌群的数量。
5.结果报告：根据实验数据，得出样品中大肠菌群的数量，并评估其卫生质量。
四、实验结果与分析经过24小时的培养观察，我们发现样品稀释度为10倍和100倍的培养管中形成了典型的大肠菌群菌落。
根据MPN表进行统计分析，得出样品中大肠菌群的数量为9.0×10²CFU/mL。
根据国家相关标准，该样品的大肠菌群数量超过了安全阈值（<10³CFU/mL），因此该样品的卫生质量不达标。
五、结论与建议通过本实验的检测和分析，我们得出样品中大肠菌群的数量超出了安全阈值，说明该样品的卫生质量不符合要求。
这可能是由于生产过程中的污染、储存条件不当或运输环节不卫生等原因导致的。
为了确保食品安全和人类健康，建议相关部门加强对食品生产和流通环节的监管力度，提高食品产业的卫生质量标准，并采取有效的措施确保食品的安全性。
大肠菌群测定
• 大肠菌群：一群在37℃，经24h能发 酵乳糖，并产酸产气，需氧或兼性厌氧生 长的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 其中包括有大肠杆菌（也称大肠埃希氏 菌）、肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯氏 菌属中的一部分和沙门氏菌属的第Ⅲ亚属。
P139
•
大肠杆菌的定义
• 大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、 IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为 ++--或-+--的细菌。 • 大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归 属于埃希氏菌属。 • 与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五 种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌 （EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠 杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。
实验步骤：复发酵与结果
2. 准备BGLB肉汤发酵管（分装、灭菌等）
3. 用接种环接一环产气的LTS发酵管至BGLB发酵 管中，并记号 4. 放进培养箱培养48h 5. 取出观察倒管是否产气，如果两种发酵管均产 气则证实为大肠菌群阳性，并根据管数查MPN 检测表（P142-143），得出MPN值
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
• MPN检索表： MPN 为最大可能数(Most Probable Number) 的简称。这种方法，对样品进行连续系列稀释， 加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管 数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近 似的数值。MPN检索表只给了三个稀释度，如 改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或 增加10倍。
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
• 初发酵和证实试验： 1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养 基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在 37℃分解乳糖产酸产气”。 LST中提供了磷酸盐缓冲体系，氯化钠可 维持渗透压，月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群的生长，这个缓冲蛋白 胨乳糖肉汤允许“缓慢乳糖发酵（Slow lactose fermentations）” 来促进菌体产气。BGLB中胆盐和煌绿可以抑制革兰氏阳性细菌和除了 大肠菌群的很多革兰氏阴性细菌。
大肠菌群测定操作步骤
大肠菌群测定操作步骤咱今天就来说说这大肠菌群测定的操作步骤哈！这可真是个有意思的事儿呢。
首先呢，你得准备好各种各样的玩意儿，就像战士上战场得带好武器一样。
什么培养基啦、无菌吸管啦、培养皿啦，都得准备得妥妥当当的。
然后呢，就是取样啦！这就好比去果园里摘果子，你得挑那些看着就不错的来。
样品可得有代表性，不能随便瞎搞。
接下来，把取好的样放到合适的容器里，加上一些试剂，就像是给它来个特别的“洗礼”。
这一步可不能马虎，得认真对待。
之后呢，就把处理好的样品接种到培养基上。
这就像是给种子找个合适的土壤，让它能好好地生长发芽。
接种的时候可得小心点，别弄得到处都是。
再然后，把培养皿放到合适的温度下培养。
这就像是给小宝贝们找了个温暖的小窝，让它们能舒舒服服地长大。
在培养的过程中，你可得时刻关注着，就像妈妈关注着孩子的成长一样。
看看有没有什么变化，有没有那些让人惊喜的小现象出现。
过了一段时间后，你就能看到培养基上的情况啦！如果有大肠菌群，那它们就会显现出来，就像是舞台上的主角一样闪亮登场。
哎呀，你说这是不是很神奇呀！就通过这么一系列的操作，就能把那些看不见摸不着的大肠菌群给找出来。
这就好像是一场侦探游戏，我们就是那个聪明的侦探，通过各种线索和方法，找出隐藏在其中的“凶手”。
而且这可不是随便玩玩的，这关系到食品安全呢！要是没做好，那可不得了。
所以啊，每一步都得认真仔细，不能有一点差错。
就像建房子一样，一砖一瓦都得放好，不然房子可就不结实啦！咱做这个大肠菌群测定，不就是为了让大家吃得放心、喝得安心嘛！这是多么重要的事情呀。
大家可别小瞧了这些操作步骤，每一个细节都可能影响到最后的结果呢。
总之呢，大肠菌群测定的操作步骤虽然看起来有点麻烦，但只要我们用心去做，肯定能做好的。
就像那句话说的：“世上无难事，只怕有心人。
”咱可都是有心人，肯定能把这事儿干得漂漂亮亮的！你们说是不是呀！。
菌落总数和大肠菌群测定方法
菌落总数和大肠菌群测定方法菌落总数和大肠菌群的测定方法如下：一、菌落总数的测定方法菌落总数是指食品样品在一定条件下培养后，得到的1克或1毫升样品中所含的活菌个数。
它反映了食品在生产过程中的卫生状况，是判定食品质量的重要指标之一。
1.样品处理：根据样品是固体或液体，采用不同的处理方法。
对于固体样品，先进行均质化处理，将其粉碎并混匀。
对于液体样品，直接进行摇匀。
2.稀释：根据样品的污染程度，将样品稀释至适当浓度。
通常采用系列稀释的方法，即先将样品稀释10倍，再稀释10倍，直到适合接种。
3.接种：将稀释后的样品接种到培养基上，可以采用倾注法或涂布法。
倾注法是将稀释后的样品倒入培养皿中，摇匀后倾注培养基；涂布法是将稀释后的样品均匀涂布在培养基表面。
4.培养：将接种后的培养皿放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的菌落总数。
二、大肠菌群的测定方法大肠菌群是指一群能在30℃-37℃的伊红美蓝琼脂平板上生长并产生深紫色素的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
它主要来源于肠道，是人类肠道中的主要菌群之一。
大肠菌群的测定对于食品卫生质量的控制具有重要意义。
1.样品处理：与菌落总数测定类似，将固体或液体样品进行均质化处理和稀释。
2.接种：将稀释后的样品接种到伊红美蓝琼脂平板上，可以采用倾注法或涂布法。
3.培养：将接种后的平板放在适宜的温度和湿度下培养，一般培养时间为24-48小时。
在培养过程中，大肠菌群会在伊红美蓝琼脂平板上形成深紫色的菌落。
4.验证试验：为了确保结果的准确性，需要进行验证试验。
可以采用革兰氏染色法对可疑菌落进行染色，以便确认是否为大肠菌群。
5.计数：观察培养后的菌落数量，并计算每克或每毫升样品中的大肠菌群数。
需要注意的是，上述方法仅供参考，具体操作步骤可能会因不同的检测机构或标准而有所差异。
在实际操作中，应根据具体情况进行调整和修改。
另外，为了保证检测结果的准确性和可靠性，需要注意实验室的卫生条件、仪器的校准、试剂的质量以及操作人员的专业素质等方面的因素。
大肠菌群测定专业知识
C：柠檬•酸盐利用试验：能利用枸橼酸盐（即柠檬酸）作为唯一探员的细菌如产气肠杆菌，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时
分性。解培养基的I铵M盐V生i成C氨，试使培验养基（呈碱靛性是基，使质指示、剂溴M麝R香、草酚V蓝-（PB、TB）柠由淡檬绿转酸为深盐蓝，试此为验枸橼）酸盐为利用试验阳
• 准备试剂:
• 配制: LST肉汤（1000ml）和BGLB肉汤
•
生理盐水（500ml）
•
相关配方
相关配方
• 生理盐水: 8.5g+1000ml蒸馏水（一锥形瓶瓶装 225ml, 剩下装在另外一个锥形瓶中）
试验步骤: 前期准备
1. 将相关玻璃仪器进行灭菌前包装 2. 将配制好LST肉汤加入试管中（注意1）
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
• MPN检索表:
•
MPN 为最大可能数(Most Probable
Number)简称。这种方法, 对样品进行连续系
列稀释, 加入培养基进行培养, 从要求反应呈
阳性管数出现率, 用概率论来推算样品中菌数
最近似数值。MPN检索表只给了三个稀释度, 如
改用不一样稀释度, 则表内数字应对应降低
或增加10倍。
大肠菌群测定——MPN法检验几点说明
• 初发酵和证实试验:
•
1）两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实试验所用培
养基不一样, 但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群定义, 即“在
37℃分解乳糖产酸产气”。 LST中提供了磷酸盐缓冲体系, 氯化钠可
维持渗透压, 月桂基硫酸钠可抑制非大肠菌群生长, 这个缓冲蛋白胨
大肠菌群的测定实验报告
一、实验目的1. 了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。
2. 学习并掌握大肠菌群的检验原理和方法。
3. 通过实验，判断食品的卫生质量。
二、实验原理大肠菌群是指一群能在37℃经24小时发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，因此常作为粪便污染的指标来评价食品的卫生质量。
大肠菌群的存在反映了食品是否被粪便污染，同时也间接指出了食品是否有肠道致病菌污染的可能性。
食品中大肠菌群数以每100g检样内大肠菌群最近似数表示。
最近似数法是一种将样品多次稀释至无菌的计数方法。
将3个稀释梯度的检样稀释液接种于9支或15支试管培养基中，每个稀释度接种3支或5支。
经培养后，根据结果查阅MPN检索表，就可得到原样品中微生物的估计数量。
MPN测定方法尤其适用于带菌量极少、其他方法不能检测的食品，如水、乳制品及其他食品中大肠菌群的计数。
三、实验材料1. 样品：乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。
2. 菌种：大肠埃希氏菌、产气肠杆菌。
3. 培养基及试剂：单料乳糖胆盐发酵管、双料乳糖胆盐发酵管、乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、革兰氏染色液、蛋白陈水、靛基质试剂、麦康凯(MA)。
4. 其他设备和材料：温室、高压湿热灭菌器、显微镜、载玻片、灭菌培养皿、灭菌吸管、试管、三角瓶、接种环。
四、实验方法1. 样品处理：取适量样品，加入适量生理盐水，充分振荡，制成均匀的悬液。
2. 稀释：将悬液进行系列稀释，分别取一定量的稀释液进行接种。
3. 接种：将稀释后的样品接种于乳糖胆盐发酵管中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
4. 观察结果：观察发酵管中的气泡和颜色变化，判断是否存在大肠菌群。
5. 平板分离：将发酵管中的阳性菌液进行平板分离，观察菌落特征。
6. 鉴定：对分离得到的菌落进行革兰氏染色和生化实验，鉴定菌种。
五、实验结果与分析1. 样品处理：将样品制成均匀的悬液。
2. 稀释：将悬液进行系列稀释，分别取一定量的稀释液进行接种。
大肠菌群测定实验报告
大肠菌群测定实验报告大肠菌群测定实验报告引言：大肠菌群是人体肠道中的一类重要菌群，对人体健康起着至关重要的作用。
本实验旨在通过测定大肠菌群的数量和种类，了解其在人体健康中的重要性，并探讨不同因素对大肠菌群的影响。
实验方法：1. 实验材料准备：收集参与实验者的粪便样本，标记编号。
2. 样本处理：将粪便样本均匀取样，并加入适量的生理盐水进行稀释。
3. 菌落计数：将稀释后的样本分别均匀涂布在含有营养物质的琼脂平板上，进行培养。
4. 菌落观察：观察培养后的琼脂平板上的菌落形态，记录不同形态的菌落数量。
5. 菌种鉴定：通过形态学特征和生化试验等方法，对菌落进行鉴定，确定大肠菌群的种类。
实验结果：经过菌落计数和菌种鉴定，我们得到了以下实验结果：1. 大肠菌群数量：参与实验者的大肠菌群数量在不同个体间有所差异，平均菌落计数为X CFU/g。
2. 大肠菌群种类：通过菌种鉴定，我们确定了参与实验者大肠菌群的主要种类，包括大肠埃希菌、肠球菌等。
讨论：1. 大肠菌群与人体健康：大肠菌群在人体健康中起着至关重要的作用。
它们参与食物消化、维持肠道黏膜屏障功能、合成维生素等多种生理过程。
因此，大肠菌群的数量和种类的稳定与人体健康密切相关。
2. 影响大肠菌群的因素：大肠菌群的数量和种类受到多种因素的影响，包括饮食习惯、生活环境、抗生素使用等。
不良的饮食习惯、环境污染以及滥用抗生素可能会导致大肠菌群失衡，从而引发肠道疾病。
3. 维护大肠菌群健康的方法：保持均衡的饮食，摄入足够的膳食纤维和益生菌，避免滥用抗生素，定期进行大肠菌群检测等，都是维护大肠菌群健康的重要方法。
结论：通过本次实验，我们了解到大肠菌群在人体健康中的重要性，并明确了影响大肠菌群的因素。
为了维护大肠菌群的健康，我们需要注意饮食习惯、生活环境以及合理使用抗生素等。
进一步研究大肠菌群与人体健康的关系，有助于预防和治疗肠道相关疾病，提高人体健康水平。
参考文献：1. Sekirov, I., Russell, S. L., Antunes, L. C., & Finlay, B. B. (2010). Gut microbiota in health and disease. Physiological reviews, 90(3), 859-904.2. Qin, J., Li, R., Raes, J., Arumugam, M., Burgdorf, K. S., Manichanh, C., ... & Wang, J. (2010). A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing. Nature, 464(7285), 59-65.。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
４４ 天平。 ． ４５ 显微镜。 ． ４６ 均质器或乳钵。 ． 车了 平皿： 直径为 ９ ｍ ０ ｍ． ４８ 试管。 ． ４ ９ 吸管。 ． ４１ 广口 ．０ 瓶或三角烧瓶： 容量为 ５０ ｏ ０ｍ Ｌ ４们 玻璃珠： ． 直径约 ５ ｍ ｍ， ４１ 载玻片。 ．２ ４１ 酒精灯。 ．３ ４ １ 试管架。 ．４
（ ００ ｍ （ 砂，．１ 目和。０１ （ Ｌ ．０ ｍ 妒时， Ｌ 则表内数字应相应增加１倍。其余可类推。 ０
附加说明： 本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由 卫生部食品卫生监督检验所负责起草。 本标准主要起草人刘宏道． 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。
菌吸管 。
７１４ 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计， ．． 选择三个稀释度， 每个稀释度接种 ３ 管。 了２ 乳糖发酵试验 ． 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内， 接种量在 １ ｍ Ｌ以上者， 用双料乳糖胆盐发酵管＞ １ ｍ Ｌ及 １ 以下者， ｍ ｌ 用单料乳糖胆盐发酵管。 每一稀释度接种３ 置３士１ 温箱内， 管， ６ ＇ Ｃ 培养２士２ ， ４ ｈ如所有乳 糖胆盐发酵管都不产气， 则可报告为大肠菌群阴性， 如有产气者， 则按下列程序进行。 了３ 分离培养 ． 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上， ６ ０温箱内， １＾２ ｈ然后取出， 置３１１ Ｃ 培养 ８ － ， ４ 观 察菌落形态， 并做革兰氏 染色和证实试验。 ７４ 证实试验 ． 在上述平板上， 挑取可疑大肠菌群菌落 １ ＂个进行革兰氏染色， ＾２ 同时接种乳糖发酵管， ３士１ 置 ６ ０ Ｃ 温箱内 培养２士２ 、 ４ ｈ观察产气情况。 凡乳糖管产气、 革兰氏染色为阴 性的无芽胞杆菌， 即可报告为大肠
阳 性 １ （） ｍ ｇ Ｘ３ Ｌ
０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
管
数 ００ －Ｌ ｇ Ｘ３ ．１ （）
０ １
ＭＰ Ｎ
９％可信限 ６
下 限 上 限
０１ （） ． ｍＬ ｇ Ｘ３
２ ２ ２ ２ ３ ３ ３ ３
０ ０ ０ ０
１０ （） ０－ ｇ Ｌ
６ ０
９ ０
２ ３
０
１０ ２ １０ ６
１ １ ４ ５ ７ ０ ０
２ ２ ３
３
２ ３
０
１ ２ ３
０
３
３ ０ ０ ０ ０
５０ ３ ２０ ３
３ ０ ９ ４ ０ ７ ０
１ ０ ２ ０ １ ０ ３ ０
３ ０ ８ ０
１
２
３
３ ３
６０ ４ ９０ ５
４ ０ ３
１０ ５
３
０
１
７ ０
２ ０ １０ ２ ０ ３ ０
３ ３ ３
３
１
１
１ ２ ３
０ １
中华人民共和国卫生部 １ ９ 一 ３ １ 批准 ９ ４０一８
１ ９ 一 ９ ０ 实施 ９４０一１
Ｇ ４ ８ ．一９ Ｂ ７ ９ ３ ４
５ 培养墓和试荆 ５１ 乳搪胆盐发酵管： Ｇ ４８． ４９ ． 按 Ｂ ９２ 中 ． 规定。 ７ ８ ５２ 伊红美蓝琼脂平板： Ｇ ４８． ．５ ． 按 Ｂ ９２ 中４２ 规定。 ７ ８ ５３ 乳糖发醉管： Ｂ ８． ．０ ． 按Ｇ ４ ９２ 中４１ 规定。 ７ ８ ５４ Ｃ肉汤： Ｇ ４８．８ ４１ 规定。 ． Ｅ 按 Ｂ ９２ 中 ．１ ７ ５５ 磷酸盐缓冲稀释液： Ｇ ４８． ．２ ． 按 Ｂ ９２ 中３２ 规定。 ７ ８ ５６ 生理盐水。 ．
７０ ５ １ ０ ２ ０ １ ０ ６ ０
９ ３０
１０ ４ ３０ ０
３ ０ ８ ０
１
２
１０ ５ ３０ ０
３ ０ ５
３ ０ ８０ ４ ０ ４０ ４ ０ ７０
３ ３ ３
３ ３ ３ ３
２ ２ ２ ３
３
１ ０ ５ ０ ２ ０ １ ０ ２ ０ ９ ０ ２ ０ ０ ４ ４ ０ ０ ６ １ ００ ０ １
２ ２ ２ ３ ３ ３ ３
０ ０ ０ ０
２
３ ０
１ １ １
１
１ ２
３ ０
２０ ０ ２０ ４ ２０ ９
９ ０ １ ０ ４ ２ ０ ０
２ ２ ２ ２ ２ ２ ２
２
１
２ ３ ０
； ：
： ：
： ： ：
； ： ：
２０ ６ １０ ５ ２０ ０ ２０ ７ ３０ ４
１ １ １ １
１ ２ ３
４ ０ ６
Ｇ ４ ８ ． 一９ ｓ ７ ９ ３ ４
５７ 革兰氏染色液： Ｇ ４８． ． 规定。 ． 按 Ｂ ９２ 中２２ ７ ８
６ 检验程序
大肠菌群检验程序如下：
７ 操作步骏 了１ 检样稀释 ．
７１１ 以无菌操作将检样 ２ ｍ （ ） ．． ５ 或９放于含有２５ 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 Ｌ ２ｍ Ｌ
Ｇ ４ ８ ． 一９ Ｂ ７ ９ ３ ４
９ ０
１ ２ ３
０
１０ ３ １０ ６ １０ ９ ４ ０ ７ ０ １０ １ １０ ５
７ ０
１ １ １ １ １
１ １ １
１ ２ ３
０
Ｇ １ ０ ５
： ：
３ ０
： ： ：
： ： ：
３０ ６
１
１
１ １
１ ２
３ ０ １
１０ １ １０ ５ １０ ９ １０ １ １０ ５ ２０ ０
２ ４０ １ ０ ６
１ １ １
１
２
中华 人民 共 和 国国 家标 准
食品卫生微生物学检验
大肠菌群测 定
Ｍｉ ｏ ｉｌ ｉ ｅａ ｉａｉｎ ｆｏ ｈｇ ｎ ｃ ｂｏ ｇ ｌ ｍ ｎｔ ｏ ｏｄ ｉ ｅ ｒ ｏｃ ｘ ｏ ｆ ｙ ｅ Ｄ ｔｃｉｎ ｏＪ ｒ ｂ ｔｒ Ｃ ｌ ｏｍ ｃｅｉ ｅｅｔ ｏ ｏ ｆ ｉ ａ ａ
水浴箱内（ 水浴箱内的水面应高于 Ｅ Ｃ肉汤液面）培养 ２ 士２ 经培养后， 。 ４ ｈ ， 如所有 Ｅ Ｃ肉汤管均不产 气， 则可报告为阴性； 如有产气者， 则将所有产气的Ｅ Ｃ肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上， ６ 置３士 １ ℃培养 １ ２ ｈ凡平板上有典型菌落者， ８ ４ ， 则证实为粪大肠菌群阳性。 ８２ 结果报告 ．
能。
பைடு நூலகம்
食品中大肠菌群数系以１０ （） ０ ｍ ｇ检样内 Ｌ 大肠菌群最可能数（ Ｐ ） Ｍ Ｎ 表示。
３ １ ３ 用标准
Ｇ ４８． 食品卫生微生物学检验 染色法、 Ｂ ９２ ７ ８ 培养基和试剂
４ 设备和材料
４１ 温箱：６ ０ ． ３士１ Ｃ。 ４２ 冰箱 。 ＇ ． －４ Ｃ．
４３ 恒温水浴： ．士。５ ． ４５ ４ ℃。
（ 瓶内予置适当数量的玻璃珠） 或灭菌乳钵内， 经充分振摇或研磨做成 １ １ 的均匀稀释液。 ：０ 固体检样最 好用均质器， ００ － ００ ｉ 的速度处理 １ ， １ １ 的均匀稀释液。 以８ ＾１ ０ ｒｍｎ ０ ０ ／ ｍｎ做成 ： ０ ｉ ７１２ 用１ ．． ｍ Ｌ灭菌吸管吸取 １ １ 稀释液 １ ， ：０ ｍ 注入含有９ Ｌ ｍ Ｌ灭菌生理盐水或其他稀释液的试管 内， 振摇试管混匀， １ １０ 做成 ： ０ 的稀释液。 ７１３ 另取 １ ．． ｍ Ｌ灭菌吸管， 按上条操作依次做 １ 倍递增稀释液， ０ 每递增稀释一次， 换用 １ １ 支 ｍ Ｌ灭
根据证实为粪大肠菌群的阳 性管数， 查ＭＰ Ｎ检索表， 报告每１０ （） ０ ｍ ｇ粪大肠菌群的Ｍ Ｎ值。 Ｌ Ｐ 大肠菌群最可能数（ Ｎ） ＭＰ 检索表
阳 性 管 数 １ （） ｍ ｇ Ｘ３ Ｌ
０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
ＧＢ ７ ９ ３ ９ ４ ８ ． 一 ４
代替 Ｇ ４８． ４ Ｂ ９３ ７ －８
１ 主题内容与适用范围
本标准规定了食品中大肠菌群的测定方法 。
本标准适用于食品中大肠菌群的测定。
２ 术语
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、 产酸产气、 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来 源于人畜粪便， 故以此作为粪便污染指标来评价食品的 卫生质量， 推断食品中 有否污染肠道致病菌的可
菌群阳性 。
了５ 报告 ．
根据证实为大肠菌群阳性的管数， Ｐ 查Ｍ Ｎ检索表， 报告每１０ Ｌ 大肠菌群的ＭＰ ０ｍ （） ｇ Ｎ值。 ８ 龚大肠菌群（ ｅ ｌ ｆ ｍ ｆ ｃ ｃ ｉｒ ） ａａ ｏ ｏ ｌ ８， 用接种环将所有产气的乳搪胆盐发酵管培养物（ ． 转种于Ｅ ． 见７２ 条） Ｃ肉汤管内， ４． ． 置 ４５ ２ 士。 ＂ Ｃ
２
３ ０
３０ ６ ７０ １ １ ０ ５ ０
１ ００ ３ ０
１ ２ ３
２ ００ ４ ０ ４ ００ ８ ０
３ ３
〕 ２ ００ ４ ０
注 ① 本表采用 ３ 个稀释度Ｃ － （）０１ （） ００ ｍ （）， ｌ ｇ ，． ｍ ｇ和 ．１ ｇ）每稀释度 ３ Ｌ Ｌ Ｌ 管． ② 表内所列检样ｆ如改用１ ｍ （）１ （） 。１ （） 表内数字应相应降低 １ 倍； ０ ｇ ， ｍ ｇ和 ． ｍ ｇ 时， Ｌ Ｌ Ｌ ０ 如改用 。１ ，ｍ Ｌ
Ｍ ＰＮ
９％可信限 ５
下 限 上 限
０ １ （ ） ． ｍＬ ｇ Ｘ３
０ ０ ０ ０
００ －Ｌ ｇ Ｘ３ ．１ （）
０
１０ （） ０ｍ ｇ Ｌ
＜３ ０
３ ０ ６ ０ ９ ０ ３ ０ ６ ０
１ ２ ３
０
＜５
９ ０
１
１
＜５
１０ ３
Ｉ ２
３
１ １
９ ０ １０ ２
Ｇ ４ ８ ． 一９ Ｂ ７ ９ ３ ４ 续表
续表
阳 性 １ （） ｍ ｇ Ｘ３ Ｌ
２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ３
３
管
数
Ｍ ＰＮ
９％可信限 ５
下 限
上 限