高抗氧化活性鼠尾藻乙醇提取物的酪氨酸酶抑制活性

摘 要 ：以 ＤＰＰＨ 自由基 清 除活 性 为 指 标 ，比较 不 同 乙 醇浓 度 提 取 的 鼠尾 藻 提 取 液 之体 外 抗 氧 化 性 ，筛 选
出高 抗 氧 化 活 性 的 提 取 物 ．通过 酶动 力学 法 评 价筛 选 出 的 提 取 物 的 酪 氨 酸 酶 抑 制 作 用 ．结 果 显 示 ：体 积 分 数 为
第 ３６卷第 ２期 ２０１８年 ４月
泉 州师范 学 院学报
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｖ ｏｌ＿３６Ｎ Ｏ．２ Ａ ｐｒ．２０１８
高抗氧化活性 鼠尾藻 乙醇提取物 的酪氨酸酶抑制 活性
黄 晓 昆 ，黄 晓冬 ，朱 富 华 ，彭行 江。
（１．泉州 师范 学 院 教 育 科 学 学 学 院 ，福 建 泉 州 ３６２０００； ２．泉州 师范 学 院 福 建 省 海 洋 藻 类 活 性 物 质 制 备 与 功 能 开 发 重 点 实 验 室 ，福 建 泉州 ３６２０００；
３．泉 福 建 泉 州 ３６２０００）
自福 建省 围头半 岛高 潮带 岩礁 采得 鼠尾 藻．新 鲜海 藻除 杂洗净 ，再 以蒸 馏水 清 洗沥 干 ．冻 干后 粉碎 并 过 ３５目筛 （孔径 ０．５ ｍｍ）．按 料液 比为 １：１０（ｇ／ｍＬ）超 声波 （常 温 ，功 率为 ６００ ｗ ）处 理 １ ｈ后 ，分别用 ０， ２Ｏ，４Ｏ，６Ｏ，８０，１００ 乙醇溶 液 室温 下避 光 、以 ２００ ｒ／ｍｉｎ震 荡 提取 １２ ｈ，抽滤 后得 粗 提液 ，真 空旋 蒸后 冻 干 ，获得 相应提 取物 ． １．３ 鼠尾 藻 乙醇提 取物 多酚 含量及 清 除 ＤＰＰＨ 活 性的 测定
第 ２期
黄 晓 昆 ，等 ：高抗 氧化 活性 鼠尾 藻 乙醇提 取物 的酪氨 酸酶抑 制 活性
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提取 物 的抗 氧化 性 ，以筛选 高抗 氧 化活性 的提取 物． １．４ 鼠尾 藻 乙醇 提取 物抑 制 酪氨酸 酶 活性 的测定 １．４．１ 鼠尾 藻 乙醇提 取物 对 酪氨 酸酶 活力 的抑 制 采 用 酶标法 Ｉ】引，具体 操作 步骤 为 ：在 酶 活反应 测定 体 系 中 ，依 次加 入 １Ｏ Ｌ样 液 ，４Ｏ Ｌ １００ ｕ／ｍＬ酪氨 酸 酶 溶 液 ，４０ Ｌ５ ｍｍｏＬ／Ｌ Ｌ—ＤＯＰＡ，混匀 ，３７℃ 温 育 １０ ｒａｉｎ后 ，测 ４７５ ｎｍ 处 的吸光 值 ，记为 ＯＤ 以 １Ｏ Ｌ ５０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ６．８磷 酸 缓 冲液 （ＰＢＳ）代 替样 液作 为空 白对 照组 ，测 得 吸光度 值 ＯＤ ；同 时 以 ＰＢＳ代 替样 液 与 酪 氨酸 酶 溶 液 测 空 白对 照 组 背 景 吸光 度 值 ＯＤ ，ＰＢＳ代 替 酪氨酸 酶溶 液测 样液 组 背 景 吸光 度 值 ＯＤ ．提 取 物 对 酶 的抑 制 率 一［１一 （ＯＤ 一 ＯＤ ）／（ＯＤ 一ＯＤ ）］×１００ ．以槲 皮 素为 阳性 对 照 ，实 验重 复 ３次．测 定 不 同浓 度 样液 对 酪氨 酸酶 抑制 活 性 的影 响 ，以酶抑 制率 对样 液浓 度作 图 ，回归 方程 拟合 后计 算半 数抑 制浓 度 （ＩＣ 。）． １．４．２ 鼠尾 藻 乙醇提取 物 对不 同浓 度酪氨 酸 酶 活性 的抑 制 在 １．４．１的测定 体 系 中 ，改变 酪 氨 酸 酶浓 度 （使 其分 别 为 ０，２０，４０，６Ｏ，８０，１００ ｕ／ｍＬ），测 定样 液 对 不 同浓度 酪 氨 酸 酶抑 制 活 性 的影 响 ，进 而判 断 抑 制剂 的作 用类 型 ． １．４．３ 鼠尾 藻 乙醇提 取 物 对酪氨 酸酶 抑 制作 用 的动 力 学 测 定 在上 述 测 定 体 系 中 ，改 变 左 旋 多 巴浓 度 （使 其终 浓度 分 别为 ０．２０，０．２５，Ｏ．３３，０．５０，１．００和 ２．００ ｒ ｅｔ ｏｏｌ／Ｌ），测 定 与分 析样 液对 酪氨 酸酶 抑制作 用 的动力 学 ，采 用 Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ—Ｂｕｒｋ双倒 数法 ［１ 分 析． １．５ 数 据 分 析
１ 材 料 与方 法
１．１ 仪 器 与 试 剂 连 续波 长酶 标仪 （ＴＥｃＡＮ Ｆ５０）；ＦＤ一１Ａ一８０冷冻 干燥 机 （北 京 博 医康 实 验仪 器 有 限公 司）．酪氨 酸 酶
（１ ８００ ｕ／ｍｇ，美 国 Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ），１，卜二苯 基苦基 苯 肼 ＤＰＰＨ（Ｓｉｇｍａ公 司），槲皮 素 （中 国药 品 生物制 品 检定 所 ），左 旋多 巴（Ｓｉｇｍａ公 司 ）． １．２ 鼠尾 藻 乙醇提取 物 的提取
多 酚含量 以 Ｆｏｌｉｎ—ｃｉｏｃａｈｅｕ法 ¨ 测 定．以 ＤＰＰＨ 自由基 清除 活性 ¨ 为指 标 ，评 价不 同乙醇浓 度所得
收 稿 日期 ：２０１８—０１—２６ 作 者 简 介 ：黄 晓 昆 （１９７３一 ），女 ，福 建 南 安 人 ，副教 授 ，硕 士 ，从 事 资 源 生 物 学 研究 ． 基 金 项 目 ：泉 州 市 科技 计 划 项 目（２０１４Ｚ１２９）；福 建 省 大 学 生 创 新 创 业 计 划 项 目（２０１６１０３９９０３５）
４Ｏ 的 鼠尾 藻 乙醇 提 取 物 （ＳＥＥ 。）具 有 较 强 的 ＤＰＰＨ 清 除 活 性 ，对 酪 氨 酸 酶 活 性 有 显 著 的 抑 制 作 用 ，ＩＣｓｏ为
３９．５５ ｍｇ／ｍＬ；ＳＥＥ 。对 酪氨 酸酶 抑 制 机 制 为可 逆 的混 合 Ｉ型 抑 制 ，抑 制 常 数 （Ｋ ）为 １３．９０３ ｍｇ／ｍＬ．研 究 提 示
ＳＥＥ 。可作 为新 型 的酪 氨 酸 酶 抑 制 剂 ．
关 键 词 ：鼠尾 藻 ；乙醇 提 取 物 ；酪 氨 酸 酶 ；抑 制 作 用 ；动力 学
中 图 分 类 号 ：Ｒ９３１．７１
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００９—８２２４（２０１８）０２－００３２—０５
鼠尾 藻 （Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）为 褐藻 门马 尾藻科 马尾 藻属 植物 ，系北 太平 洋西部 特有 的 暖温带 性 海藻 ，是我 国沿 海常见 野 生海 藻 ，分 布 于南 起 雷 州 半 岛北 至 辽 东 半 岛＿１］．其 藻 体 长 ，生长 快 ，营养 价 值 较 高 ，藻胶 含量少 ，并且 具有 软坚散 结 、清 热化 痰 、利 尿 消 肿等 功 效 ，主要 用 于 甲状 腺 肿大 、淋 巴结 核 、心 绞 痛 、淋病 等症 的治疗 ］，在 医药 、保健 、食 品等行业 中极 具 开发 潜 力．研 究发 现 鼠尾 藻 中含有 褐 藻 多 酚＿３］、 多糖 、二 萜 、甾体 、脂 肪酸 等化 学成 分．在 生物 活性 方面 ，鼠尾 藻正 丁醇提 取 物及岩 藻 聚糖硫 酸酯 具有 降 脂作 用 ；鼠尾 藻多 酚类 物质具 有抗 氧化 、抑 菌 、抗肿 瘤 、抗 凝 血 活性 ［６。。。；鼠尾 藻 多糖 具 有 抗 氧化 、抗 凝 血 活性 ［１１－１２］．本研 究拟 以福建 省泉 州市 围头半 岛海域 中 、高 潮带 岩礁所 采集 到 的 鼠尾 藻为材 料 ，制备并 筛 选 出高抗 氧化 活性 的 鼠尾藻 乙醇提 取物 ，研究 该提 取物 对酪 氨 酸酶 的抑 制 作 用 ，为 鼠尾藻 乙醇提 取 物作 为新型 酪氨 酸酶抑 制剂 提供科 学依 据 ，挖 掘其 在祛 斑 、美 白化 妆 品等领 域上 的应 用价值 ．