多参数流式细胞术检测急性髓系白血病微小残留病的研究

多参数流式细胞术检测急性髓系白血病微小残留病的研究
目的探讨多参数流式细胞术检测急性髓系白血病微小残留病的研究进展。

方法采用多参数流式细胞术检测微小残留病，其优势在于MFC通过对白血病相关免疫表型检测，比RQ-PCR技术更广泛、直观地对残留白血病细胞进行准确定量。

目前MRD已经可用于大于90%以上的急性髓系白血病的免疫表型检测。

结果MFC在急性髓系白血病MRD的检测中是最有前景的一种方法。

结论MFC 检测MRD对急性髓系白血病的治疗具有重要的指导意义。

但目前MRD的检测由于不同的实验室所采用的化疗方案不统一，故在抗体组合方案、阈值的界定、检测时间点的有所不同，故建立MFC检测MRD的标准化是今后发展方向。

标签：急性白血病；多参数流式细胞术；微小残留病；研究进展
急性白血病一种进展迅速的血液系统恶性肿瘤，近年来随着新的化疗药物的出现、造血干细胞移植技术的进步，急性白血病在治疗方面取得进展。

急性髓系白血病在诱导缓解治疗后有60～80%的患者可以达到完全缓解（CR），但仍有部分患者达到完全缓解后复发，从而影响患者的长期生存率。

目前大多数研究认为其主要原因是来自患者体内的残留白血病细胞。

微小残留病（MRD）是白血病患者经诱导化疗或骨髓移植治疗后达到临床和血液学完全缓解后体内仍残存微量白血病细胞的一种状态，MRD逐渐成为急性白血病评价预后的独立指标。

我院对此进行了研究，现将其进展报告如下：
1多参数流式细胞术（MFC）检测MRD的优势
MFC是对处于快速直线流动状态中的单个细胞进行形态、大小及荧光特征的识别，从而区分白血病细胞和正常细胞的一种技术方法，其每秒可检测成千甚至上万个细胞，并对检测的细胞进行快速多参数定量分析，灵敏度达10-4～10-5。

MFC通过对白血病相关免疫表型检测，比RQ-PCR技术更广泛、直观地对残留白血病细胞进行准确定量，目前MRD已经可用于大于90%以上的急性髓系白血病的免疫表型检测[1～3]。

故MFC在急性髓系白血病MRD的检测中最有前景的一种方法。

2 MFC检测MRD的策略
①通过多色方案鉴别患者特异性的白血病相关免疫表型（LAIPs）；②在完全缓解时和缓解后治疗中用患者特异性的LAIPs追踪MRD；③将MRD与患者的复发，长期无复发/无病生存，总生存等预后和治疗关联，以更好地指导治疗。

3 MFC检测MRD的临床意义
3.1危险度分层实践提示，根据MRD水平对患者危险度分层就十分必要。

San Miguel JF[4]等根据MFC检测的MRD水平对诱导缓解后的患者进行危险度分层，分别是极低风险组（10-2），3年复发率分别为0%、14%、50%和84%，
因此早期对急性白血病进行危险度分层具有重要的临床指导意义。

3.2判断预后及复发急性白血病患者在初次诊断是体内的白血病细胞数大约有1012个，经过诱导缓解达完全缓解时体内的白血病细胞仍残留108-109个。

体内残留白血病细胞数的不同提示预后不同。

路萍[5]的研究结果提示MRD预测白血病复发是早于形态学检查的，是判断预后和预测复发的一个敏感指标，高水平的MRD是预后不良的一个独立危险因素。

3.3指导个體化治疗治疗期间动态监测患者白血病细胞的MRD水平直接反映体内白血病细胞的负荷量，根据体内白血病细胞的负荷决定下一步的治疗方案。

对于MRD为低水平的患者可以选择化疗强度弱的方案，避免过度治疗。

对于MRD为高水平的患者，则应给予化疗强度大的化疗方案或造血干细胞移植，这样可以做到有的放矢，以延长患者的生存期，提高生活质量。

3.4在造血干细胞移植中的应用造血干细胞移植明显改善了急性白血病患者的预后，然而移植后复发仍是治疗失败的主要原因。

施晓兰等[6]研究结果提示：根据AL患者HSCT移植前后的MRD水平，采取及时适当的干预治疗，可降低移植后复发率，这对临床的治疗有很大的指导意义。

4 MFC检测MRD研究方向
4.1抗体组合方案的标准化常规的MRD监测方法是在初发时确定急性白血病类型，筛选出LAIPs，并在缓解后以该LAIPs监测残留的白血病细胞。

然而由于AML细胞异常抗原表达特异性较差，化疗后相当一部分患者抗原会有丢失或获得，还有更多抗原表达强度发生改变，尤其是复发病例。

San Miguel JF[4]等筛查了89个诊断AML的患者并最终确定53位适合做MRD追踪。

结果发现44例（83%）病例中出现不同步抗原表达；16例（30%）中出现跨系抗原表达；5例（9%）中有抗原的过度表达；18例（34%）中存在异常的SSC信号。

不同实验室之间由于抗体组合应用的不同所得到的MRD种类、频率不同，能否找到特异性高的残留白血病细胞的敏感度也是有差别的。

这就使得抗体组合的标准化变得越来越重要。

4.2阈值的界定由于不同的实验室界定MRD阴阳性的阈值不同，因此很难对不同实验室的研究结果做比较。

MRD阈值的界定是今后的研究方向。

4.3检测时间点的选择在MRD的检测治疗中一些特定的时间点是判断疗效和预后的独立危险因素，可指导下一步治疗。

但由于不同的研究组的治疗方案不同，因此各自确立的检测时间一点也不相同。

尽管检测时间点的选择有待进一步研究，但治疗早期MRD的高水平不仅反映了药物清除白血病的效果不佳，也与复发风险密切相关，所以治疗早期是重要的检测时机。

5结论
MFC检测MRD对急性髓系白血病的治疗具有重要的指导意义。

根据初次
诱导缓解治疗后MRD值的水平可以对急性髓系白血病患者进行危险度分层、预后评估、指导个体化治疗，以使患者能从中受益，延长患者的生存期，提高生活质量。

目前MRD的检测由于不同的实验室所采用的化疗方案不统一，故在抗体组合方案、阈值的界定、检测时间点的有所不同，故建立MFC检测MRD的标准化是今后发展方向。

参考文献：
[1]饶若，金丽华，王述文，姚红霞.CD117在急性髓系白血病病程中的表达分析[J].现代预防医学，2012年06期.
[2]徐瑞荣，王敬毅，崔兴等.免疫磁珠分选系统在急性髓系白血病干细胞分离中的应用[J].浙江中西医结合杂志，2008年10期.
[3]万岁桂，贾建国，徐娟.FCS Express V3软件在流式细胞术课程教学中的作用[J].中国医学教育技术，2011年03期.
[4]San Miguel JF，Martínez A，Macedo A，et al.Immunophenotyping Investigation of Minimal Residual Disease Is a Useful Approach for Predicting Relapse in Acute Myeloid[J].Leukemia Patients Blood，1997，90（6）：2465-2470.
[5]路萍.急性白血病完全缓解微小残留病检测的意义[J].昆明医科大学学报，2013，（11）：108-110.
[6]施晓兰，唐晓文，吴德沛等.流式细胞术检测微小残留病变在急性白血病造血干细胞移植中得应用[J].苏州大学学报，2010，30（3）：517-520.。