对药品研发影响及原始记录常见问题讨论PPT课件

USP34
按干燥品计算，每 1mg中效价不得少 于180USP 肝素单 位
JP15
每1mg的效价 不得少于110 单位。
性状
白色或类白色的粉 白色或类白色的粉 白色或几乎白色的粉
末，有引湿性
末，极具引湿性 末，有适度的引湿性
白色到灰棕 色的粉末或 颗粒
溶解度 在水中易溶
在水中易溶，在乙 醚中不溶
在水中易溶
增设有效项目指标-甲氧基苯胺值
– 含有不饱和脂肪酸的药物在生产和贮藏过程
中易被氧化，初级氧化产物一般不稳定，又可
进一步生成醛类等化合物，而甲氧基苯胺值（
也称p-茴香胺值）就是ISO推荐的一种对此类 降解产物进行评价的手段，欧洲药典附录 2.5.36收载了此测定方法。药物的甲氧基苯胺 值越高，说明其劣变程度越严重。
给药后
增设有效项目指标加强安全性监控
结合药品的制法和工艺特点，以及杂质的特殊性设 立特色有针对性检测项目，最大限度解决安全隐 患。 – 人尿制品增加乙肝表面抗原检查：如尿激酶、尿 促性素、绒促性素、乌司他丁等 – 重组品种增加菌体蛋白残留量、外源性DNA残 留量如重组人生长激素、重组人胰岛素等。 – 含不饱和脂肪酸的品种增加甲氧基苯胺值检查： 如多烯酸乙酯（P272）等。
常见研究误区以及供参 考的经验和体会
研发原始记录中常见问题 及改进建议
供C注li射ck用to杂原e质料di谱质t t的控it比变le较化st重yle点提示
杂质控制 微粒控制
安全性 控制
标准 增项
注射剂所用的原辅料应从来源及 工艺等生产环节进行严格控制并 应符合注射用的质量要求。
杂质控制力度大幅度提高
• 对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质 的总的描述。
名词解释
已鉴定杂质
Identified Impurity
特定杂质
Specified Impurity
潜在杂质 Potential Impurity
杂质谱
Impurity Profile
已确证了 结构特征 的杂质
在质量标准 中规定检查 并有自己限 度标准的杂 质。已鉴定 或未鉴定
优点：
– 杂质用量少 – 无需知道杂质结构 – 实验周期短 （3－4天一个周期）
药物耳毒性检测
利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的 存活状态，来判断检测物的耳毒性。
下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给 药后1神经丘消失。
系统对照组 （正常幼体）
原料 头孢唑肟钠 头孢替唑钠 头孢尼西钠 头孢噻吩钠 磺苄西林钠 阿洛西林钠 美洛西林钠 氯唑西林钠 苯唑西林钠 普鲁卡因青霉素
制剂 注射用头孢唑肟钠 注射用头孢替唑钠 注射用头孢尼西钠 注射用头孢噻吩钠 注射用磺苄西林钠 注射用阿洛西林钠 注射用美洛西林钠 注射用氯唑西林钠 注射用苯唑西林钠
高聚物
2-乙基己酸
• β -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己
酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方 法增订为附录－2010年版药典二部（附录Ⅶ L）；
如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西
林钠等。
2-乙基己酸
勘误：
• β -内酰胺类抗生素对生产工艺过程中使用2-乙基己
酸的原料，增加此项检查，采用气相色谱法测定；方 法增订为附录－2010年版药典二部（附录Ⅶ L）；
到10ml水）
到10ml水）
10ml水）
5.0～7.5（0.10g 到10ml水）
6.0～8.0
杂质谱的比较－多种互补
• 不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长） • 不同检测器（uv、DAD） • 不同原理的方法 • -分离或检测
杂质谱的比较－多种互补
– 柱串联技术 – 适用于溶解度无明显差异但电荷上有明显差异的难分离物质
对药品研发影响及原始记录常见问题讨 论
原料药研究的特点
1 特性研究-理化、稳定性 2 杂质研究-工艺、残留溶剂
3 对照品研究-标化、校正因子 4 方法研究-建立、验证
建立标准主时要要考讨虑论的问内题容
2 0 0 8
2002 2001
2 20050 20040 20037
2 0 0 6
2000
新版药典动态对化学原 料药质量研究的影响
–《中国药典》2010版中，原料药要求在各论项下根据 其生产工艺制定残留溶剂检查方法
–抗生素原料药几乎所有品种均在各论项下增订了详细 的残留溶剂检查方法
从附录走向各论
残留溶剂
如：头孢泊肟酯
残留溶剂 照残留溶剂测定法（附录Ⅷ P）测定。
甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、异丙醇、丁酮、乙酸乙酯 、四氢呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸异丙酯、苯、四 氯化碳、环己烷、二氧六环、甲基异丁基酮、吡啶、甲苯 色谱条件与系统适用性试验 略 内标溶液的制备 取正丙醇适量，用二甲基亚砜稀释制成每 1ml中约含200μ g的溶液，作为内标溶液。
4.降解产物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮红霉素、红霉素8， 9-脱水-6，9-半缩酮、红霉素6，9：9，12-螺缩酮
结构确证常用的方法
红外
紫外
质谱
元素pany Logo
模拟色谱图 实际色谱图
毒性快速评价平台
• 斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚 胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评 价。
按照理论推 测在生产或 贮藏过程中 可能产生的 杂质，实际 产品中不一 定存在
存在于药 品中的杂 质组成或 模式

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Click to杂e质di谱t t的it比le较style
选择最优 多种互补 结构确证
杂质谱 比较
比较杂质的数与量，一致或基本一致， 物质基础相同决定可否桥接已上市药品 的安全有效性结果
– 供试品溶液中加入0.25％的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后 应注意避光，在350nm波长处的吸光度随时间的延长缓 慢增加，需准确放置10分钟后测定，尽量减小误差。
– 本试验受水分影响较大，样品及试剂中水分的存在会导 致反应不完全，测定值偏低，当样品中水分含量超过 0.1%时，可按10g样品加1～2 g无水硫酸钠的比例脱除 水分后测定。另外，应取用新开启包装的供试品。
杂质谱分析的基本途经
杂质
挥发性杂质
有机杂质
无机杂质
残留溶剂
其它
RP-HPLC
互补方法
ICP-MS 离子色谱
HS-GC
GC- MS
不同检测器
HPCE
梯度洗脱
HPTLC
HPGPC
颜色控制
新杂质的研究 －药物杂质的可能来源
阿奇霉素中可能存在的杂质：37种
1.原料：红霉素 A、红霉素 B、红霉素 C、红霉素D、红霉素 E、红霉素 F、 阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F 2.中间体：红霉素A肟（Z）、6，9-亚胺醚、氮红霉素A、红霉素A肟（E）、红 霉素 C肟（E）、9，11-亚胺醚、红霉素C 6，9-亚胺醚、红霉素A内酰胺 3.副产物：红霉素-N-氧化物、N-去甲基红霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、 氨基阿奇霉素A、N-甲酰基-N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇 霉素、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基）- 3’,4’-去氢阿奇霉素、 O-甲苯 磺酰基红霉素肟、红霉素Z肟重排物、氮红霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去 二甲基N-甲酰基阿奇霉素A、丙基阿奇霉素、3’-N， N-去二甲基氨基-酮 基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯
有关物质 （常规）
增项 增指标 严限度
改方法
TLC→HPLC 等度 →梯度 理未论修板订数品→种分离度
特定杂质 增订单列项
盐酸阿糖胞苷
项目
2005年版
2010年版
含量限度 鉴别
97.0％～103.0％ 3项
干燥失重
98.0%～102.0% 3+1项（+HPLC）
干燥失重
----
溶液的澄清度与颜色
检查
残留溶剂检查方法及验证
！
除正文已明确列有“残留溶剂”检查的 品种必须依法进行检查外，其他未在 “残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂 与未在正文中列有此项的品种，如生产 过程中引入或产品中残留有机溶剂，均 应按附录“残留溶剂测定法”检查并应 符合相应溶剂的规定
残留溶剂
检测方法进行了相应的调整：
• 顶空进样甲烷气体，记录死时间(t0)
如:头孢地嗪钠、头孢呋辛钠、头孢孟多酯钠、氨苄西
林钠等。
勘误：
残留溶剂
目前中国不仅接受了ICH对化学药品中残留溶 剂控制的理念，而且结合中国国情，建立了具 有中国特色的残留溶剂检查方法。
–《中国药典》2005版中，对残留溶剂的分类及限度标 准已经与ICH的要求完全一致，但仅在附录中作为原 则性统一要求。
残留溶剂方法建立、验证与常见问题
检测方法选择：
• 直接进样？顶空进样？限度比较？对照品法？标准 加入法？内标？外标？
• 验证项目确定：
• 回收试验？最低定量限？最低检测限？线性？耐用 性试验？
• 原始记录较常发现的问题 • 连带问题：按无水无溶剂计算
高聚物 凝胶色谱法（2010年版新增的19个标准）
– 测定原理：甲氧基苯胺与醛反应生成醇胺， 醇胺脱水生成的醛亚胺可采用紫外-可见分光
光度法在350nm波长处测定。
增设有效项目指标-甲氧基苯胺值
注意：
– 甲氧基苯胺试剂为无色结晶，具有一定毒性，使用时应 避免接触皮肤，一旦失误，需用水冲洗15分钟以上。甲 氧基苯胺的冰醋酸溶液不稳定，需当天配制使用。以异 辛烷作空白做基线校正时，如果测得的甲氧基苯胺冰醋 酸溶液的吸光度超过了0.2，则需重新配制试剂。
原方法
在对各国药典方法比较的 基础上确定分析方法 新方法
分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）
中国抗生素杂志，2009，34：734
项目
含量限度
原研厂标准
按干燥品计算，每 1mg的效价不得少 于150单位
拟定标准
按干燥品计算，每 1mg的效价不得少 于150单位
EP7.0
按干燥品计算，每1mg 效价不得少于150I.U. （非口服制剂），每 1mg效价不得少于 120I.U.（口服制剂
• 顶空进样供试品溶液，记录色谱图，按公式计算诸色谱峰的保 留时间( tR )相对于参考物质保留时间( t’R )的相对调整保留时 间( Relative adjustment retention time，RART)法替代
RRT法
RARTttR R' － tt00
• tR为组分的保留时间;t’R为参比物的保留时间。 • t0为甲烷保留时间。
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含氯量
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有关物质
梯度、校正、3个特定杂质
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残留溶剂
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炽灼残渣和重金属
含量测定
UV吸收系数法
*
性状项下还有熔点和比旋度项，
HPLC外标法
有关物质的研究
纯度控制 杂质控制
杂质谱 控制
－杂质质控理念的变迁
第一次飞跃 第二次飞跃
杂质谱的定义
• Impurity Profile （杂质谱）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance.
2010版：品种增加,方法多元化
1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝胶G-10（Sephadex G 10）；短柱子的使用，减少分离时间
2、 商品凝胶柱TSK-GEL G2000SWXL ：头孢地嗪（北京所） 3、ODS柱，聚合物-氨苄西林钠舒巴坦钠（浙江所)
，通过将一根SCX（阳离子交换）短柱与一根MGⅡ C18长 柱串联就可以简单达到将其分离的目的。 – 原理：有电荷差异的被分离物质进入色谱柱串联系统后，带 正电荷的物质（通常是碱性物质）会由于SCX短柱的离子交 换作用而被保留在短柱中，而带负电荷的物质（通常为酸性 物质）与中性物质则会毫无阻碍的通过短柱进入C18长柱中 ，从而成功分离；然后由于MGⅡC18长柱中疏水性基团间 的相互作用而对中性物质有强保留作用，但对带负电荷物质 无强保留作用，这样带负电荷物质与中性物质也简单被分开 了 – 如果为了让峰形更好，各峰间分离更开，还可在阳离子交换 短柱与C18长柱前接一根NH2短柱（它可与阴离子发生交换 作用），进行三根串联，也可以使带负电荷的酸性物质与中 性物质达到更好的分离效果。
在水中溶解 ，在乙醚中 不溶
比旋度
不小于
应不小于
+35°(40mg/ml,水 +50°(40mg/ml,水
)
)
鉴别
1、电泳法 2、钠盐
1、电泳法 2、钠盐
A、具有抗凝血作用
B、比旋度 C、电泳法： D. 钠盐
A、H-NMR B、IC法
C、抗Xa/抗IIa： D、钠盐
酸碱度 5.0～7.5（0.10g 5.0～7.5（0.10g 5.5～8.0（0.10g到