细菌涂片制备及革兰氏染色

实验内容：
1、 单菌革兰氏染色 2、 三区混合染色
A菌
A、B混合区
B菌
五、实验结果
记录所观察到的三种细菌革兰氏染色结 果
绘出显微镜下三种细菌的形态
六、问题与讨论
要得到正确的革兰氏染色结果必须注意 哪些操作？哪一步是关键？Why?
思考题：
P84：2（1）（2）（4）
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请值日同学留下值日 下周再见！
铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的卢戈氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约15－20秒，后立即 用流水冲洗。
5. 复染：滴加番红染色液，染3－5 分钟，水洗后用吸水纸吸干。
6. 镜检：观察染色结果并绘图。
革兰氏染色
丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构
G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。
G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色。
实验二步掌握细菌的革兰氏染色 法。
了解革兰氏染色法的原理及其在细 菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等。
三、实验材料
大肠杆菌（E.coli） 、金黄色葡萄球菌 StapHylococcus aureus） 、枯草芽孢杆菌 （Bacillus subtilis ）（16-24h培养物）
革兰氏染色液一套:包括草酸铵结晶紫、卢戈氏 碘液、95%乙醇、番红液
四、实验步骤
革兰氏（Gram）染色法
1. 涂片、固定 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸