吡虫啉的残留分析方法研究进展

Ｙｏｉｃｈｉ等“１曾尝试用不同的固定相柱及不同的流动相进行分析，最后得出利用固定相为 ＲＰ一８ｅ的柱子及体积比为８０ ｔ ２０的水和乙腈的混合液作为洗脱液可以得到较好的洗脱效果。 当检测波长在２７０ ｎｍ处，在１～２０ ｎｇ具有较好的线性关系，相关系数达０．９９９ ９。Ｂａｓｋａｒａｎ Ｓ． 等“”也曾报道，以ＯＤＳ。一Ｃｓ为固定相，体积比为８０ ｔ ２０的水和乙腈的混合液作为流动相，在 ２５℃下，以１．５ ｍＬ／ｍｉｎ速度进行洗脱，２７０ ｎｍ处测定时，该法最低检出限为０．５ ｍｇ／ｋｇ。
曾日希等０７１曾报道，用乙腈和水（６０；４０ ｖ／ｖ）的混合液作为流动相对吡虫啉原药进行液相 分析，可以得到较好的蜂型和较短的保留时间（２．４４ ｍｉｎ）。朱亚红““采用美国ＨＰＯＤＳ５色谱 柱，同样以乙腩＋水（４０ ｔ ６０ ｖ／ｖ）为流动相对吡虫啉进行分离测定，结果样品出峰时间推迟 了４．４ ｒａｉｎ，这与戴华０７］的增加乙腈含量将会使吡虫啉的保留时间变小的结论相符合。同时， 也有人用不同体积比的甲醇和水的混合液作为流动相对吡虫啉进行分析，结果表明峰型和分 离性都较好“”…。这种流动相组分相同而得到的截然不同的研究结果很可能是由于组分配比 不同或其他条件不同所造成的。 ２·２·２正相高效液相色谱 目前，吡虫啉的ＨＰＬＣ多以反相高效液相色谱法为主，且从试剂
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农药与环境安全国际会议论文集
吡虫啉的残留分析方法研究进展
夏晓明 王开运。 姜兴印 仪美芹
（山东农业大学植物保护学院，泰安２７１０１８）
摘要本文对吡虫啉及其残留的各种分析方法进行了论述。因吡虫啉自身的强极性和热不 稳定性，不宜用ＧＣ法进行分析测定。ＨＰＬＣ法是目前检测吡虫啉最为广泛的一种方法，且以反相
农药合成、加Ｉ、分析与毒理
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成本、来源及使用广泛性等几个方面来看，反相色谱法更易普及。但是该法在液谱柱柱效降低 和流动相调整、粘度增大后，分离效能很低。正相色谱法一般采用三元混合流动相作为洗脱液， 所以试剂成本较高。不过，王雪娟等０２ ３曾采用廉价的国产硅胶柱以正相高效液相色谱法对吡 虫啉的含量进行了分析测定，并与反相色谱法进行了比较。结果表明在分离效率方面，正相高 效液相色谱更具优越性。由于正相色谱中所用的硅胶柱易再生处理，且能达到同样甚至更高的 分离效率，亦可弥补其使用试剂成本高的不足，只是出峰时间相对较慢。该方法采用正己烷＋ 二氯甲烷＋甲醇（６５ ｔ ２５ ｔ １０ ｖ／ｖ）为流动相，在Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒｂ ＳｉＯｚ柱上对吡虫啉进行分离测 定，洗脱液流速为１．２ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５４ ｎｍ，进样量ｌｏ ｐＬ，上述条件下吡虫啉的保留 时间为１０．６ｍｉｎ。 ２．３薄层放射色谱法（Ｔｈｉｎ—ｌａｙｅｒ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＲＣ）
（３）弗罗墼硅土十整辑疆链炭桂：将＝氯零娩提取菠绶葶取液浓缩后转移嚣食蠢１０ ｇ龚 罗里硅土十层析活性炭柱（２０ ｚ １ Ｗ／Ｗ）的玻璃层析柱中．用二氯甲烷和乙酸乙酯洗脱，净化 效果较好。 １．２．４圈籀萃取（ＳＰＥ）法霹穗萃取（ＳＰＥ）燕谶年薪发震静一种样品净纯努法。ＳＰＥ原理与 高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）的工作原理相同，也是利用样品在两相（固定相和流动相）中分配系 数的差异逃；｜亍分离净纯，薯爱华“”鹅蹋ＳＰＥ－Ｃ，。小拄对扶烟草帮ｉ壤中提取麴憨虫秣进舞净 化。依次需１０ｒａＬ市醇和无离子水预淋至干后，将浓缩的提取液倒入柱中，然后立即用１０ｍＬ 石油醚淋洗，弃去淋洗液后，用石油醚／己酸乙酯（３：７ ｖ／ｖ）洗脱净化，收集２０ ｍＬ左右的洗 戴渡嚣霉。寒亚荭等黯８在研究礁蛊辩在承程孛懿残蟹时，采搏嗣襻的柱子秘洗魏液辩获承疆 和土壤中摄取的吡虫啉进行了净化。裁华等口。将ＬＣ—Ａｌｕｍｉｎａ Ｎ固相小柱与抽滤装嚣串联， 采用抽真燮法对从稻谷中提取的毗虫啉进行了净化。具体做法是先用２ ｍＬ己骑洗涤小桂，并 撩粪空３ ｒａｉｎ，然君纛接将撵取渡过挂（谪节洗聪速度为１游／ｓ），收集洗脱渡即可。
ＴＬＲＣ法实际上是薄层色谱法（ＴＬＣ）的扩展。ＴＬＲＣ通常包括刮板和液体闪烁计数器，由 反射显影法现场测定放射活性色区或用放射性扫描器，例如碱性分析仪进行测定。ＴＬＲＣ现已 广泛应用于农药在动植物体内的代谢作用、农药被植物从土壤中摄取以及农药在环境中的归 宿和降解的研究。Ｓｃｈｏｌｚｃ“曾用ＴＬＲＣ法研究了吡虫啉在番茄叶表面的光降解作用及降解机 理。事先用“ｃ对吡虫啉进行标记，然后再喷洒在番茄叶表面。样品经水和甲醇依次提取后，将 混合后的提取液点在硅胶板上或ＲＰ一１８板上，并点上标准品作为对照。点样后的硅胶板在 ２０℃下以乙酸乙酯＋甲苯＋甲醇＋乙酸（８０ ｚ ２０ ｔ ２０：１ Ｖ／Ｖ）作为洗脱液；ＲＰ一１８板以乙腈 ＋甲醇＋水＋乙酸（４０ ｔ ３０，１０ ｔ １ Ｖ／Ｖ）作为洗脱液进行洗脱展开，风干后显影扫描测定。 Ｃｌａｒｋ”１也曾采用ＴＬＲＣ法对用［１４Ｃ］标记的吡虫啉及其代谢产物进行了定量分析。点样后的 硅胶板在流动相氯仿＋甲醇＋乙酸＋水（２５：２５：３．５。３．５ Ｖ／Ｖ）和丁醇＋乙酸＋水（８０ ｒ ２０ ：２０ Ｖ／Ｖ）或者乙酸乙酯＋甲苯＋甲醇＋乙酸（８０：２０ ｔ ２０；１ ｖ／ｖ）和乙酸乙酯＋丙二酯＋ 水（６５·２３ ｔ １２ ｖ／ｖ）中依次进行洗脱，吹干后先在２５４ ｎｍ紫外光下进行显影观察，然后进行 放射性扫描检测。
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农药与环境安全国际会议论文集
中吡虫啉的光降解产物，间接地测定了在一定光强下吡虫啉在水中的半衰期。Ｎａｖａｌｏｎｅ等”“ 也采用ＧＣ—ＭＳ法测定了蔬菜中吡虫啉的含量。但该方法也不是直接对吡虫啉进行测定，而是 先将不易挥发的吡虫啉在碱性介质中水解成稳定且又易挥发的１一（６一氯一３一吡啶甲基）眯唑啉一 ２酮，过滤后不经净化直接进行ＧＣ—ＭＳ分析，并以［２Ｈ。。］葸作为内标物进行定量。王静等。”曾 用气相色谱法，以１０％ＯＶ一１０１／Ｃｈｒｏｍｏｓｏｒｂ Ｗ ＡＷ ＤＭＣＳ为固定液，用ＦＩＤ检测器，采用程 序升温的办法分离测定了吡虫啉的３个重要中间体。吴重言等ｏ”采用玻璃填充柱为色谱柱， 固定相为５％ＯＶ一１０１／Ｇａｓ ＣｈｒｏｍＷ—ＨＰ（８０～１００目），在柱温、检测器和进样口温度分别为 １６０＂（７、１８０ ０｜Ｃ和１８０＂（２的条件下，用ＦＩＤ检测器测定了吡虫啉最主要的中间体２一氯一５一氯甲基
（１）砖胶柱：将浓缩后的＝氯甲烷莽取液或提取液转穆到装有１０ ｇ硅胶（含有１０％水分） 的玻璃层析柱中，先用正己烷朔乙酸乙酯（１：１ ｖ／ｖ）淋洗，然后立即用乙酸艺酯洗脱，弃去淋 洗渡和最秘静２０ ｒａＬ左右蝰洗脱渡，收集戮矗的６０ ｒａＬ左右懿洗耱渡鄂可。该法霞收率可达
７５％～１０９％。
（２）氧他锯柱：将二氯孕烧提取渡或萃取渡，浓缩后囊接转移到装有中牲氧让铝或氧让铝 与粒状活性炭混合的层析柱巾。先厢体税比为１０，１的乙醚与石油醚的混合液淋洗去杂，最后 用己腈洗脱下毗虫啉。
高效液相色谱法为主。同时，电些兰莹也不失为检测吡虫啉的一个发展方向，但未见使用生化法检
测该药剂的报道。 关ｔ词吡虫啉分析进展
吡虫啉（ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ）又名眯蚜胺、灭虫精和一遍净等，是由日本特殊农药公司和Ｂａｙｅｒ Ａ．Ｇ．于１９９１年开发。它是一种新型超高效，强内吸，广谱、低毒的硝基亚甲基类杀虫剂，选择 性抑制昆虫神经系统中的烟酸乙酰胆碱酯酶受体，破坏昆虫中枢神经的正常传导，使之神经麻 痹后死亡。吡虫啉对稻飞虱、蚜虫、叶蝉、蓟马等刺吸式口器害虫及稻纵卷叶螟具有特效““ｏ， 对地下害虫亦有较好的防治效果。由于其优良的内吸性，特别适于种子处理和以颗粒剂施用。 该杀虫剂自投放市场以来，被广泛应用于７０多个国家和地区，近年来，引起各国政府和公众的 关注。加强对吡虫啉农药分析方法的研究，对于正确指导制剂的加工和使用，保护环境，延缓抗 药性的发生和发展，避免和减少不必要的农业损失等具有重要的现实意义。２０世纪９０年代至 今，国内外就吡虫啉的分析方法做了不少工作，本文就关于吡虫啉的分析方法研究进展作一 综述。
吡啶。
２．２高效液相色谱法（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）
目前，ＨＰＬＣ在农药残留及农药分析中的应用越来越广泛，该方法适合分析热不稳定和强 极性的农药及其代谢产物，且可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和ＭＳ等联用，同 时，一些新型检测器的问世也在一定程度上提高了ＨＰＬＣ的检测灵敏度。吡虫啉是一个强极 性的热不稳定性农药，另外其结构中的Ｎ一硝基生色团中的ｎ一Ⅱ跃迁，使得它在２７０ ｎｍ左右 处有一个很强的吸收峰。所以，带有紫外检测器的ＨＰＬＣ法在各方面都优于ＧＣ。 ２．２．１反相高效液相色谱法 目前，国内外主要以反相高效液相色谱法对吡虫啉进行分析测 定。色谱柱多数为各种型号的ｃ，ｓ或ｃ。小柱，以甲醇和水或乙腈和水及甲醇、乙腈和水的不同 体积比的混合溶液为流动相。柱温为室温或３０℃，流量为０．７～１．５ ｍＬ／ｍｉｎ，紫外检测器，检 测波长为２７０、２５４、２６９、２４５及２４０ ｎｍ不等，进样量５～２０ ｐＬ。
１．２净化方法
１．２．１ 液一液萃取法（ＬＬＥ） 液一液分配通常是样品净化的第一个步骤，一般不单独使用，而 与其他净化方法配合应用，该法的目的主要是去除提取液中的大部分水分。用乙腈或甲醇对含 有吡虫啉的样本进行粗提后，将粗提液转入５００ ｍＬ分液漏斗中，用环己醇和碱液或石油醚和
５％氯化钠溶液洗涤萃毫安除油脂和脂肪酸等杂质。然后将水相转入另一５００ ｍＬ分液漏斗 群叉 。通讯联系人
２分析方法
２ｔ １气稆愁潜法（ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＧＣ）
气相色谱法是一种传统的测定农药残留的分析方法。最初，国外曾经有人利用气相色谱法 对蛾虫啭妻接进行分橱，但是努凝结果袭龌班虫啦在正誉气摆色谶黪条箨下婿凼越蟓为碎片 峰“３，效果极不理想，这很可靛与该化含物的热不稳定性和极性的Ｎ一硝基弧部分有关。于是试 图采用衍生法，先将吡虫啉三氟乙酰化，再用气一液色谱（ＧＩ，ｃ）分析［ｉ８，ｉ９］，但结果也不理想，因 其撵捧寒蔟，敬稷少浆震｝Ｉｓｈｉｉ Ｙ。”氇罄涯实，遴过对淮囊释迸嚣己酰铯或攀基纯焉，篷接进 行气相色谱测定，由于不够稳定，所以无足够强的色谱图。Ｍｏｚａ一［２０３曾用ＧＣ—ＭＳ法测定了水
农药合成、加工、分析与壤理
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审，焉二氰攀烷萃取３次，并避无采硫酸铺屡。淡二氯荦婉作为提敢溶裁的撵取滚可以不递舒 液一液分配。 １．２．２离心法Ｂａｓｋａｒａｎ Ｓ．【１。３舞乙麟期求（８０：２０ ｖ／ｖ）对毗虫秣震荡提取后，将提取渡在 离心机上鞋８ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心２０ ｍｉｎ詹取上清液，将上清液用普通漏斗过滤精待柱净化。该溶 尤其适合予土壤中吡虫啉的提取净化。 ｌ。２。３棱怨羲法
实际上，在吡虫啉的净化方法中，液～液分配ｊ塞（ＬＬＥ）翔离心法一般不单独使用，而是与柱 屡辑法和霹撩葶取法（ＳＰＥ）绺会应用，或者是单独使瑶接攥辑法或鲤耀葶取法（ＳＰＥ）。另龄戴 华在对稻谷中吡虫啉净化方法研究中畿现，稻谷样品中的毗虫啉用乙腈提取可以很好地去除 蛋白质，但禽有色素和少量脂潘性物质。同时还发现，乙腈提取液过活性炭、中性氧化铝、硅酸 镁簸薅（ｆｔｏｒｉｓｉｌ）桂霹不产生缓辩，显数主各乖争载诼帮嚣趁翔楚样豹潦纯效栗。
郑魏等ｏ”在进行吡虫啉原药的液相色谱分析时，曾选择了多种流动相，发现用乙腈和水
时，色谱峰分离较好，但出峰时间太慢；用甲醇和水作为流动相时，出峰时间较快，但分离不好。
而选择甲醇＋乙腈＋水（２０ ｔ ２寸ｔ ８０ ｖ／ｖ）的混合液作流动相时，可以得到较理想的色谱峰， 不仅分离完全，峰型好，而且出峰时间也较快。当流动相为中性时，吡虫啉会出现肩膀峰，滴加 磷酸调节ｐＨ为４，则可以消除该现象。如果将甲醇＋乙腈＋水的体积比改为３０一２０：５０或者 ｌＯ ｔ ６０·３０后作为流动相ｏ“２“，以Ｃ”小柱为固定相，同样也可以获得理想的峰型。
１样品的提取和净化
１．１提取技术 提取的目的是从样品中分离出欲测的吡虫啉。提取溶剂的好坏对吡虫啉的回收率有着一
定的影响。国外主要以体积比为８０：２０的乙腈和水的混合液作为提取溶剂”。９“…，用超声波提 取３～４次，可以达到比较满意的提取效果。由于乙腈价格比较昂贵，所以国内主要用二氯甲 烷…“”和甲醇‘Ⅲ或体积比为３：１的甲醇和水的混合液作为提取溶剂…］，机械震荡或超声波 提取，提取效果也十分理想。另外采用体积比为１ ｔ １的丙酮和水的混合液对土壤中的毗虫啉 进行浸提，效果亦佳ｏ“。