补肾疏肝方对神经性厌食大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的调控机制研究

补肾疏肝方对神经性厌食大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的调控机制
研究
胡文晓
【摘要】目的探讨补肾疏肝方对神经性厌食(anorexia nervosa,AN)应激模型大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovarian axis,HPOA)的调控机制.方法按照隔离、限食、束缚的方法建立AN大鼠应激模型,设立正常对照组(以下简称正常组)、模型组、安慰剂组和补肾疏肝方组(以下简称中药组),测定下丘脑多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT).结果下丘脑DA水平:安慰剂组明显高于正常组(P＜0.05),模型组高于正常组,中药组低于安慰剂组,但无统计学差异.下丘脑NE水平:正常组明显高于模型组和安慰剂组(P＜0.05),中药组高于模型组和安慰剂组,但无统计学差异.下丘脑5-HT水平:各组之间无明显差异.结论补肾疏肝方可以调控AN应激模型大鼠的HPOA功能,可能是通过调控下丘脑DA、NE水平来实现的.
【期刊名称】《泰山医学院学报》
【年(卷),期】2016(037)001
【总页数】2页(P65-66)
【关键词】补肾疏肝方;神经性厌食;应激模型;下丘脑-垂体-卵巢轴
【作者】胡文晓
【作者单位】泰安市妇幼保健院,山东泰安271000
【正文语种】中文
【中图分类】R741.02
神经性厌食(anorexia nervosa, AN)是严重威胁女性青少年身心健康且伴有内分泌异常的心身疾病。

常由于特殊的精神心理变态而导致进食量减少，进而造成严重的营养不良、体重减轻及下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-
ovarian axis, HPOA)功能紊乱[1-2]。

AN在治疗方面尚无理想的方法，补肾疏肝
方临床治疗AN患者有较好的疗效。

本研究应用AN大鼠应激模型，从神经内分
泌方面探讨其可能的作用机制。

1.1 实验动物第一批：雌性Wistar大鼠50只，体重约160~180 g。

由第二军医大学实验动物中心提供，许可证号为SYXK(沪)2007-0003。

动物饲养于12h/12h 昼夜交替、室温(22±2)℃的环境中，自由摄食和饮水。

在实验环境适应1周后，
进行阴道脱落细胞涂片筛选，有连续两个以上正常动情周期的大鼠用于实验。

其余则被淘汰。

第二批：实验动物同第一批。

1.2 实验药物中药补肾疏肝方：由郁金、石菖蒲、枸杞子、桑椹、牡丹皮、炒山栀等组成，第二军医大学附属长海医院中药房提供；自制成浓度相当于生药
2.63 g/ml的溶液。

1.3 AN大鼠应激模型的制作参考Shimizu N[3]的方法。

1.3.1 隔离和限食实验大鼠放在各自的笼子里相互隔离，17：30将饲料和水移除，20：00再给予饲料和水。

7天后开始计算大鼠每天的饮食重量，20：00给
予提前称重的饮食，次日17：30移除饮食同时称重，计算出饮食重量，待饮食重量固定不变后进行下一步实验。

1.3.2 束缚Shimizu N采用“固定板”束缚，即用细绳、胶带将大鼠束缚在固定板上，实验操作中发现这种束缚方式的实施非常困难，难以保证大鼠每日束缚2
个小时的实验要求。

调整束缚方式，将大鼠装入自制固定器中，每日17：30~19：30持续束缚2个小时。

(自制固定器为一自制塑料瓶，大小切合大鼠身体，以大鼠
被束缚不能移动为度，前后有通气孔，避免大鼠因窒息死亡。

)
1.4 动物分组与给药方法第一批：实验大鼠按照随机数字表法进行随机分组，分
为正常对照组(以下简称正常组)、模型组、安慰剂组和补肾疏肝方组(以下简称中
药组)，每组10只。

药物剂量换算按照动物与人体表面积比换算法：人用药剂量(mg/kg)=0.16×大鼠用药剂量(mg/kg)，换算相应剂量。

从实验造模第一天开始，正常组按10 ml/kg体重灌服生理盐水，不予其它处理；模型组按上述造模方法建立AN应激模型，不予灌胃；安慰剂组在造模的同时按10 ml/kg体重灌服生理盐水；中药组在造模的同时按10 ml/kg体重灌服补肾疏肝方水煎浓缩剂。

每日早、晚各1次，持续整个实验过程。

实验过程中，正常组大鼠意外死亡1只，安慰剂
组和中药组因灌胃各死亡1只。

第二批：动物分组和给药同第一批，中药组因灌
胃死亡1只。

1.5 标本采集约灌胃第35天时、于动情间期进行标本采集。

下丘脑采集：在冰
台上迅速取出下丘脑，放入液氮固化，滤纸拭干后称重，放入玻璃匀浆管，用预冷的0.106 mol/L高氯酸1 ml匀浆2 min，静置2 h，4℃ 4000 r/min离心
30 min 2次，取上清液，置于-80℃低温冰箱中保存待测。

1.6 指标测定用酶联免疫法测定下丘脑多巴胺(dopamine, DA)、去甲肾上腺素(noradrenaline, NE)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)。

下丘脑DA、NE和5-HT试剂盒由上海端纳生物科技有限公司提供。

1.7 统计学方法用SPSS15.0统计软件进行统计学分析，实验数据以±s表示，经
方差齐性检验后，采用单因素方差分析；若方差不齐则用Tamhane’s T2检验。

各组大鼠下丘脑DA、NE和5-HT水平下丘脑DA水平：安慰剂组明显高于正常
组(P<0.05)，模型组高于正常组，中药组低于安慰剂组，但无统计学差异。

下丘
脑NE水平：正常组明显高于模型组和安慰剂组(P<0.05)，中药组高于模型组和安慰剂组，但无统计学差异。

下丘脑5-HT水平：各组之间无明显差异。

见表1。

中医古代文献中没有“神经性厌食”的病名，现代实验研究也未见中医中药对该病的相关研究报道。

根据AN患者的临床表现，可以归属于“闭经”、“虚劳”等
范畴。

中医理论认为，肝气郁结、疏泄失常是导致AN发生的主要因素，肾虚和
肝郁是本病的核心病机。

在此理论指导下创立的补肾疏肝方，临床应用取得了较好疗效。

本课题应用AN的大鼠应激模型来探讨补肾疏肝方对HPOA的调控机制。

文献报道AN应激动物模型的下丘脑单胺类神经递质(如DA、NE、5-HT)水平发
生变化，但其变化的机制尚不明确，甚至不同应激模型的变化趋势也不一样[4]。

我们的研究结果表明，模型组大鼠的下丘脑DA和5-HT高于正常组，但无统计学差异；下丘脑NE明显低于正常大鼠。

由此可见，补肾疏肝方可以调控AN应激模型大鼠的HPOA功能，可能是通过调控下丘脑DA、NE水平来实现的，具体有待于大样本证实。

目前中医药治疗AN的相关研究国内外尚属空白，本课题初步探
讨了补肾疏肝方对AN的HPOA可能的调控机制，其调控途径还有待于深入研究。

【相关文献】
[1] 赵朋,毛富强,李振涛.神经性厌食症的临床特点及精神科干预对策[J].国际中华神经精神医学杂志, 2005, 6(3):208.
[2] 吕朝晖,窦京涛,陆菊明.神经性厌食患者内分泌功能的改变[J]. 临床内科杂志, 2002, 19(6): 449-450.
[3] Shimizu N, Oomura Y, Kai Y. Stress-
induced anorexia in rats mediated by serotonergic mechanisms in the hypothalamus[J]. P hysiol Behav, 1989, 46(5), 835-841.
[4]
Siegfried Z, Berry EM, Hao S, et al. Animal models in the investigation of anorexia[J]. Physi
ol Behav, 2003, 79(1): 39-45.。