不同产地和生长年限三七花蕾中总皂苷及单体皂苷的含量测定

表 ２ 标准曲线
对照品 人参皂苷 Ｒｂ１ 人参皂苷 Ｒｂ３
回归方程 Ｙ＝４６１．９５ｘ－ １４．８４６ Ｙ＝５６２．４ｘ＋８．５６５４
ｒ ０．９９９９ ０．９９９９
线性范围（μｇ） ０．３４８－ ４．３５ １．２６－ １５．７５
２．２．５ 精密度 精密量取 ２．２．３ 项下的对照品溶液 １０ μｌ， 连续进样 ６ 次，测得人参皂苷 Ｒｂ１ 和人参皂苷 Ｒｂ３ 对 照品溶液的峰面积平均值分别为 １３５５．１２ 和 ２４６９．３２， ＲＳＤ 分别为 ０．１２％和 ０．４８％。 ２．２．６ 重现性实验 取同一批样品 ６ 份，精密称定，按 ２．２．１、２．２．２ 项操作，测定含量，结果人参皂苷 Ｒｂ１ 和人 参皂苷 Ｒｂ３ 的含量分别为 １．６４％、５．１１％，ＲＳＤ 分别为 ０．３３％和 ０．４７％。 ２．２．７ 稳定性实验 取供试品溶液按 ２．２．１ 项下的方法 每隔一定时间测定一次，结果人参皂苷 Ｒｂ１ 和人参皂 苷 Ｒｂ３ 的峰面积的 ＲＳＤ 分别为 ０．９６％和 １．０５％，表明样 品在 ４８ ｈ 内基本稳定。 ２．２．８ 回收率试验 精密称取一定量的人参皂苷 Ｒｂ１ 和人参皂苷 Ｒｂ３ 对照品加入到已测定含量的样品中， 按 ２．２．２ 项操作制备，测定含量，计算加样回收率，结果 平均回收率为 ９７．８１％、１００．９６％，ＲＳＤ 分别为 ２．６９％、 １．０５％。
Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄ； ｈａｂｉｔａｔｓ； ｇｒｏｗｔｈ ａｇｅ； ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ； ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｂ１； ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｂ３
三七花蕾是五加科植物三七 （Ｐａｎａｘ Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ （Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ） 的干燥花蕾 （Ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄｓ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ （Ｂｕｒｋ）Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）。主产于云南文山壮族苗 族自治州。研究发现，三七地上部分与地下部分所含皂 苷成分不同，三七花是三七全株中人参皂苷含量最高的 部位，达 １３％以上，以人参二醇型皂苷，即 Ｒｂ 族皂苷为 主［ １－ ２］ 。本文对三七主产区云南文山不同产地、生长年限 三七花蕾中总皂苷和单体皂苷 Ｒｂ１、Ｒｂ３ 的含量进行了 测定，为三七花的质量评价及开发利用提供依据。
ＷＥＩ Ｌｉ ＤＵ Ｙｉ ＺＨＯＵ Ｈａｏ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ ａｎｄ ｍｏｎｏｍｅｒ ｓａｐｏｎｉｎ Ｒｂ１ ａｎｄ Ｒｂ３ ｏｆ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄ ｉｎ
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方药揽胜
不同产地和生长年限三七花蕾中总皂苷及单体皂苷的含量测定
魏 莉 杜 奕 周 浩 上海中医药大学中药学院 （上海 ２０１２０３）
【摘 要】 目的 测定三七主产区云南文山不同产地、生长年限三七花蕾中总皂苷和单体皂苷 Ｒｂ１、Ｒｂ３ 的含量。方法 采用比色法测定总皂苷含量，用高效液相色谱法测定单体皂苷含量。结果 不同产地、生长年限三七花蕾中总皂苷和单体皂 苷含量差异较大，三年生含量高于二年生。结论 本法可用于对三七花蕾的质量控制，为三七花的质量评价及开发利用提供 实验依据。
１８ 柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ μｍ），以乙腈、水为流动相按下 表进行梯度洗脱，检测波长为 ２０３ ｎｍ，柱温：２５℃，进样 量为１０ μｌ。
表 １ 色谱条件
时间（ｍｉｎ） ０～１０ １０～５５
乙腈（％） ２８
２８～３２
水（％） ７２
７２～６８
２．２．２ 供试品溶液的制备 取药材粗粉 ０．１ ｇ，精密称 定，置于索氏提取器中，加 ６０ ｍｌ 甲醇，提取 ６ ｈ，提取液 浓缩至 １０ ｍｌ。加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀， 用微孔滤膜（０．４５ μｍ）滤过，取续滤液，备用。 ２．２．３ 对照品溶液的制备 取人参皂苷 Ｒｂ１ 和人参皂 苷 Ｒｂ３ 对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 １ ｍｌ 含人 参皂苷 Ｒｂ１ ０． ６ ｍｇ 和人参皂苷 Ｒｂ３ ２．０ ｍｇ 的溶液。 ２．２．４ 标准曲线 分别精密量取对照品溶液 ０．５、１．０、 ２．０、３．０、４．０、５．０ ｍｌ，置 １０ ｍｌ 容量瓶中，甲醇稀释至刻 度，取 １０ μｌ 进样，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐 标，样品量为横坐标，作线性回归，得回归方程（表 ２）。
【关键词】 三七花蕾；产地；生长年限；含量测定；总皂苷；人参皂苷 Ｒｂ１；人参皂苷 Ｒｂ３ 【中图分类号】 Ｒ２８４．１ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００７－ １３３４（２００８）０４－ ００７６－ ０３
Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｅｔｅｒ ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎ ａｎｄ Ｍｏｎｏｍｅｒ Ｓａｐｏｎｉｎ ｏｆ Ｐａｎａｘ Ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ Ｆｌｏｗｅｒ Ｂｕｄ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒ ｅｎｔ Ｈａｂｉｔａｔｓ ａｎｄ Ｇｒ ｏｗｔｈ Ａｇｅｓ
［基金项目］ 上海市高新技术产业科技开发基金资助项目 （沪创 新 Ｊ－ ５８） ［作者简介］ 魏莉（１９７０－），女，陕西商洛人，博士，副研究员，主要 从事中药制药教学与科研工作。
为二次蒸馏水。 紫外－可见分光光度计（ＵＶ ８４５３ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；
Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ 高 效 液 相 色 谱 仪 （ 配 有 在 线 脱 气 机 ＪＰ１３２１３７５２， 四 元 泵 ＤＥ４０５２５８４１， 自 动 进 样 器 ＰＥ３３２２４７４３， 柱 温 箱 ＤＥ４０５３７８１９，ＤＡＤ 检 测 器 ＤＥ４０５２１０５６）；旋转蒸发仪 （上海中生科技有限公司）； ＨＨＳ 型电热恒温水浴锅；ＦＡ１００４Ｎ 分析天平 （上海精 密科学仪器有限公司）；ＡＧ１３５ 分析天平 （Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏ ｌｅｄｏ）。
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２．１．９ 样品测定（表 ３，图 １）
表 ３ 三七花蕾中总皂苷和单体皂苷的含量测定结果（ｎ＝３）
样品号 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３
文山
产地
马塘
结果表明，人参二醇对照品溶液和三七花蕾皂苷样
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品溶液显色后于 ５４８ ｎｍ 处有一明显吸收峰，芦丁对照 品溶液、葡萄糖对照品溶液显色后在此波长下无吸收， 说明三七花中黄酮类和糖类成分无干扰，因此选择 ５４８ ｎｍ 为三七花蕾总皂苷的吸收波长。 ２．１．２ 测定方法 香草醛－ 冰醋酸显色法：精密吸取样 品液至磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加 ５％香草 醛冰醋酸溶液（新配置）０．２ ｍｌ，高氯酸 ０．８ ｍｌ，于 ６０℃恒温 水浴 １５ ｍｉｎ，立即取出置冰水浴内冷却，加冰醋酸 ５．０ ｍｌ 摇匀，以相应试剂为空白，紫外分光光度仪 ５４８ ｎｍ 处测 定吸光度，计算总皂苷含量。 ２．１．３ 供试品溶液的制备 取三七花蕾粉碎成粗粉，取 ０．１ ｇ， 精密称定，置于索氏提取器中， 加 ６０ ｍｌ 甲醇，提取 ６ ｈ，提取液水浴浓缩，甲醇定容至 １０ ｍｌ，备用。 ２．１．４ 标 准 曲 线 的 制 备 取人参二醇对照品适量，精 密称定，置 ５ ｍｌ 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，精密量取 ２５ μｌ、５０ μｌ、７５ μｌ、１００ μｌ、１２５ μｌ，分别置 ２０ ｍｌ 磨口具塞试管中，热水浴挥干溶剂，加 ５％香草醛 冰醋酸溶液（新配置）０．２ ｍｌ，高氯酸 ０．８ ｍｌ，于 ６０℃恒温 水浴 １５ ｍｉｎ，立即取出置冰水浴内冷却，加冰醋酸 ５．０ ｍｌ 摇匀，以相应试剂为空白，在 ５４８ ｎｍ 波长处测定吸收 度，以总皂苷含量为横坐标，吸光度（ＡＢＳ）为纵坐标作 图，得标准曲线：ｙ＝０．００９２ｘ／２．０＋０．０３２９（其中 ２．０ 为 Ｒｂ 族 ２０（Ｓ）－ 原人参二醇型皂苷与 ２０（Ｓ）－ 原人参二醇的 转换系数），ｒ ＝０．９９８，结果表明人参二醇在 ２６．５～１３２．５ μｇ 范围内线性关系良好。 ２．１．５ 精 密 度 考 察 精密量取人参二醇对照品溶液 （１．０６ ｍｇ／ｍｌ）４０ μｌ，按 ２．１．２ 项下所述方法进行香草醛－ 冰醋酸显色，紫外分光光度仪 ５４８ ｎｍ 处连续测定 ６ 次， 测得吸光度 ＲＳＤ 值为 ０．６４％，表明精密度良好。 ２．１．６ 重现性考察 取同一批样品 ６ 份，精密称定，按 ２．１．２ 项操作，测定含量，结果总皂苷含量平均值为 １４．６９％，ＲＳＤ＝０．２４％。 ２．１．７ 稳定性实验 取供试品溶液按 ２．１．２．项下的方法 每隔一定时间测定一次，结果 ＲＳＤ＝０．１６％，表明三七花 总皂苷在显色 ６ ｈ 内吸收值基本稳定。 ２．１．８ 回收率试验 精密称取一定量的人参二醇对照 品加入到已测定含量的样品中，按 ２．１．３ 项操作制备，按 ２．１．２ 项测定含量，计算加样回收率，结果平均回收率为 １００．００％，ＲＳＤ＝０．１３％。 ２．１．９ 样品测定 结果见表 ３。 ２．２ 单体皂苷的含量测定 ２．２．１ 色谱条件与系统适用性 色谱柱为 Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ－
１ 仪器与材料
三七花（分别采自文山县、砚山县、麻栗坡县、邱北 县）；人参二醇对照品（批号 １１０７０１－ ２００４１２）、人参皂苷 Ｒｂ１ 对照品（批号 １１０７０４－ ２００３１９）、人参皂苷 Ｒｂ３ 对照 品（批号 １１１６８６－ ２００５０１），均由中国药品生物制品检定 所提供。甲醇、乙腈为色谱醇，其余试剂均为分析纯，水
老回龙
岘山 麻粟坡Biblioteka 文山县 砚山县 ＧＡＰ 基地
者腊乡公革 干河乡马鞍山基地 盘龙乡 ＧＡＰ 基地
大坪镇
邱北
腻脚
云南特安呐制药厂
生长年限（年） ２ ３ ２ ３ ３ ３ ２ ３ ３ ２ ３ ３ ３
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｒｅａ ｏｆ Ｗｅｎｓｈａｎ，Ｙｕｎｎａｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ ａｎｄ ｍｏｎｍｅｒ ｓａｐｏｎｉｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ） ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎ ａｎｄ ｍｏｎｏｍｅｒ ｓａｐｏｎｉｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈａｂｉｔａｔｓ ａｎｄ ａｇｅｓ ｖａｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ． Ｔｈｅ ｔｈｅｉｒ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｒｅｅ－ ｙｅａｒ Ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ａｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｗｏ－ ｙｅａｒ ｏｎｅ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｎａｘ ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ ｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄ． Ｋｅｙ Ｗｏｒ ｄｓ：
２ 方法与结果
２．１ 总皂苷的含量测定［３］ ２．１．１ 吸收波长的确定 分别精密吸取适量人参二醇 对照品溶液、芦丁对照品溶液、葡萄糖对照品溶液、三七 花蕾总皂苷样品溶液，至磨口具塞试管中，热水浴挥干 溶剂，加 ５％香草醛冰醋酸溶液（新配置）０．２ ｍｌ，高氯酸 ０．８ ｍｌ，于 ６０℃恒温水浴 １５ ｍｉｎ，立即取出置冰水浴内 冷却，加冰醋酸 ５．０ ｍｌ 摇匀，以相应试剂为空白，紫外分 光光度仪上扫描。