气相色谱法测定头孢米诺钠中有机溶剂残留

２００７年１１月第４卷第３１期
・药物研究・
ＣＨＩＮＡＭＥＤＩＣＡＬＨＥＲＡＬＤ
中国医药导报头孢米诺钠是广州市白云山制药厂生产的第三代头孢类抗生素，对革兰阳性菌和革兰阴性菌有广谱抗菌活性，特别对大肠杆菌、克雷伯杆菌属、流感嗜血杆菌、变形杆菌属及脆弱拟杆菌有很强的抗菌作用。

在生产过程中，常用甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷作为溶媒，因此在头孢米诺钠中残留有机溶剂是不可避免的。

经对头孢米诺钠各项指标的检测发现，溶剂残留量的大小直接与药物的理化常数相关，如残留量过大则会造成头孢米诺钠的吸收系数、比旋度等指标不符合标准。

留样观察实验也发现，溶剂残留量大小直接和药物的稳定性有关，残留量越大，则稳定性越低，造成头孢米诺钠在室温放置过程中发生溶液颜色变深、浊度升高等现象，直接影响产品的质量。

ＩＣＨ（人用药品注册技术要求国际协会）对药物中的残留溶剂也作了具体的规定［１］。

为了生产出优质的产
品，有必要对头孢米诺钠中的甲醇、
乙醇、乙腈、二氯甲烷的残留量进行测定，并在生产中严加控制。

药物中残留有机溶剂的测定，大多采用气相色谱法［２］，而原操作方法是采用两个不同的操作系统，运用溶液直接进样的分析方法，操作很烦琐，而且对色谱系统有损害，检测的灵敏度很低，影响溶剂残
留的检测。

现采用该法测定，实验证明本法准确、
重现性好，对生产中有机溶剂的残留起到了控制作用。

１仪器和试药１．１仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ６８９０Ｎ气相色谱仪；ＤＡＮＩＨＳＳ８６．５０顶空进样器。

１．２试药
头孢米诺钠（广州白云山化学制药厂，批号为：０６１１３００１０、
０６１１３００２０、０６１１３００３０）；甲醇、
乙醇、乙腈、二氯甲烷对照品（色谱纯，天津康科德科技有限公司）；水为纯化水，经气相色谱检测对测定无干扰。

２方法与结果２．１色谱条件
２．１．１顶空进样器条件平衡温度：６０℃；进样系统操作温度：１２０℃；传输管温度：１２０℃；进样间隔时间：１０ｍｉｎ；样品平衡时间：３０ｍｉｎ。

２．１．２气相色谱条件色谱柱：ＤＢ－６２４；柱温：３５℃；进样口温度：２００℃；检测器温度：２５０℃；柱前压：２．５ｐｓｉ；分流比：１０∶１。

２．２溶液的制备
２．２．１空白溶液的制备取２２ｍｌ顶空瓶，加水２ｍｌ，加盖，即得。

２．２．２供试品溶液的制备精密称取头孢米诺钠２００ｍｇ，置于２２ｍｌ顶空瓶中，加水２ｍｌ，加盖，超声波溶解，即得。

２．２．３标准溶液的制备精密称取甲醇１００ｍｇ、
乙醇１００ｍｇ、二氯甲烷２００ｍｇ、乙腈１００ｍｇ置５０ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，从中取２ｍｌ置５０ｍｌ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，
即得标准溶液。

２．３系统适用性试验
精密称取２００ｍｇ甲醇，２００ｍｇ乙醇，１００ｍｇ乙腈，１００ｍｇ二氯甲烷，置于同一１００ｍｌ容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，作为标准储备液。

取１ｍｌ对照品储备液到５０ｍｌ容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，作为对照测试液。

取２ｍｌ对照测试液置于２２ｍｌ顶空瓶中，加盖，６０℃平衡３０ｍｉｎ，作气相色谱分析，各峰分离良好。

色谱图见图１。

气相色谱法测定头孢米诺钠中有机溶剂残留
吴昭怡１，陆碧梅１，王洁梅２
（１．中山大学附属第一医院，广东广州５１００８０；２．广州白云山制药股份有限公司，广东广州
５１０５１５）
［摘要］目的：用气相色谱法测定头孢米诺钠中甲醇、
乙醇、乙腈、二氯甲烷四种有机溶剂的残留量。

方法：采用毛细管气相色谱法，色谱柱为ＤＢ－６２４；载气为氮气；检测器为ＦＩＤ；按外标法计算含量。

结果：在该色谱条件下，测得甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷残留溶剂均有良好的线性关系（ｒ＝０．９９８０￣０．９９９６）；各平均回收率分别为９５．３％、９８．６％、９８．９％、９６．９％；各精密度的ＲＳＤ分别为６．８％、２．７％、１．２％、２．２％；最低检测限分别为７．８、６．２、７．０、１．１μｇ／ｍｌ。

三批样品中上述有机溶剂残留量均符合要求。

结论：该毛细管气相色谱法灵敏、准确、可靠，可用于该制剂中残留有机溶剂的测定。

［关键词］头孢米诺钠；气相色谱法；有机溶剂残留［中图分类号］Ｒ９１７［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７３－７２１０（２００７）１１（ａ）－０９３－０３Ａ．空白对照图谱
Ｂ．对照品图谱
Ｃ．样品图谱图１空白对照（Ａ）、
对照品（Ｂ）、样品（Ｃ）的ＧＣ图谱９３
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２．４标准曲线的绘制
取标准储备液配成甲醇的质量浓度分别为２０、４０、８０、
２００、４００μｇ／ｍｌ的标准系列溶液。

取不同浓度的标准系列溶液２ｍｌ到２２ｍｌ顶空瓶中，加盖，做气相色谱分析，测定各自峰面积（Ｙ）。

以浓度（Ｘ）对其峰面积（Ｙ）作线性回归，回归方程分别为：甲醇：Ｙ＝２２１．６９０６１Ｘ－１．３０５４７，ｒ＝０．９９９１；乙醇：Ｙ＝４１１．４５８１７Ｘ－４．５６６５７，ｒ＝０．９９８９；乙腈：Ｙ＝７５９．３５６４２Ｘ－２．７７８４４，ｒ＝０．９９９６；二氯甲烷：Ｙ＝３３５６．７２５２５Ｘ＋７．１７５０３，ｒ＝
０．９９８０。

结果表明：甲醇、
乙醇在２￣４０μｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系，乙腈、二氯甲烷在１￣２０μｇ／ｍｌ范围内呈良好的
线性关系。

２．５精密度试验
精密称取２００ｍｇ甲醇、２００ｍｇ乙醇、１００ｍｇ乙腈、１００ｍｇ二氯甲烷于同一１００ｍｌ容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀。

取１ｍｌ至１００ｍｌ容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，作为精密度测试溶液。

取２ｍｌ精密度测试溶液置于２２ｍｌ顶空瓶中，加盖，６０℃平衡３０ｍｉｎ，作气相色谱分析，平衡试验５次。

残留的甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷的ＲＳＤ分别为６．８％、２．７％、１．２％、２．２％。

见表１。

表１精密度试验
溶剂峰面积
平均值ＲＳＤ（％）１
２３４５甲醇７．１７．７６．８７．４８．１７．４６．８乙醇１２．４１２．２１１．９１２．４１２．８１２．３２．７乙腈９．９１０．０９．７９．８９．９９．９１．２二氯甲烷
３０．５３０．１３１．２３０．４２９．４
３０．３
２．２
２．６检测限试验
取１ｍｌ精密度测试溶液置于２５ｍｌ容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，作为检测限测试溶液。

取２ｍｌ检测限测试溶液置于２２ｍｌ顶空瓶中，加盖，６０℃平衡３０ｍｉｎ，作气相色谱分析。

调节检测灵敏度和进样量，信噪比为３∶１，使峰高为基
线噪声的３倍左右。

残留的甲醇、
乙醇、乙腈、二氯甲烷的检测限分别为７．８、６．２、７．０、１．１μｇ／ｍｌ。

２．７回收率试验
精密称取批号为０６１１３００１０的头孢米诺钠２００ｍｇ，共５份，分别置于２２ｍｌ顶空瓶中，向瓶中分别加入２０、４０、８０、２００、４００μｇ／ｍｌ的标准溶液２ｍｌ，加盖溶解后做气相色谱分析，甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷的平均回收率分别为９５．３％、
９８．６％、９８．９％、９６．９％，见表２￣５。

此方法各溶剂的回收率都在规定范围内，证明本法具有较好的准确度。

表２甲醇回收率试验
序号
样品称样量（ｍｇ）
样品中甲醇的量（ｍｇ）
加入甲醇的量（ｍｇ）
测定值（ｍｇ）
理论值（ｍｇ）
回收率（％）
平均回收率（％）
１
２００．８０．０５２０８０．０４６２２０．０９３３３０．０９８３０９４．９９５．３
２２０１．７０．０５２３１０．０９２４３０．１３７５２０．１４４７４９５．０３１９９．６０．０５１７７０．１８４８７０．２３２９００．２３６６４９８．４４２０２．２０．０５２４４０．４６２１７０．４７４６９０．５１４６１９２．２５２０１．４０．０５２２４０．９２４３４０．９３８７２０．９７６５８９６．１
表３乙醇回收率试验
序号
样品称样量（ｍｇ）
样品中乙醇的量（ｍｇ）
加入乙醇的量（ｍｇ）
测定值（ｍｇ）
理论值（ｍｇ）
回收率（％）
平均回收率（％）
１２００．８００．０４００２０．０４２９４０．０４００２１０７．３９８．６
２２０１．７００．０８００４０．０７７９４０．０８００４９７．４３１９９．６００．１６００８０．１５５４７０．１６００８９７．１４２０２．２００．４００２００．３７４４００．４００２０９３．６５２０１．４００．８００３９０．７８０３１０．８００３９９７．５
表４乙腈回收率试验
序号
样品称样量（ｍｇ）
样品中乙腈的量（ｍｇ）
加入乙腈的量（ｍｇ）
测定值（ｍｇ）
理论值（ｍｇ）
回收率（％）
平均回收率（％）
１２００．８００．０２４７７０．０２５３４０．０２４７７１０２．３９８．９
２２０１．７００．０４９５４０．０４７４９０．０４９５４９５．９３１９９．６００．０９９０７０．０９８８３０．０９９０７９９．８４２０２．２００．２４７６８０．２４４０００．２４７６８９８．５５２０１．４００．４９５３５０．４８５１２０．４９５３５９７．９
表５二氯甲烷回收率试验
序号
样品称样量（ｍｇ）
样品中二氯甲烷的量（ｍｇ）
加入二氯甲烷的量（ｍｇ）
测定值（ｍｇ）
理论值（ｍｇ）
回收率（％）
平均回收率（％）
１２００．８００．０２７７２０．０２７２７０．０２７７２９８．４９６．９
２２０１．７００．０５５４４０．０４１４６０．０５５４４７４．８３１９９．６００．１１０８８０．１１１９２０．１１０８８１００．９４２０２．２００．２７７２１０．３０３０１０．２７７２１１０９．３５２０１．４００．５５４４１０．５６１２００．５５４４１１０１．２
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中国医药导报复合维生素Ｂ片是由烟酰胺、维生素Ｂ６、维生素Ｂ１、维生素Ｂ２四种成分组成的复方制剂。

主要用于营养不良、脚气
病、厌食、癞皮病和各种维生素Ｂ缺乏所致的疾病。

该药品的质量标准收载于卫生部药品标准，其中对维生素Ｂ１、维生素Ｂ２、
烟酰胺采用不同方法进行质量控制，操作烦琐且耗时。

为此，我们建立了用ＨＰＬＣ法同时分离测定这四种成分的方
法，结果显示该方法简便、
快速、准确、可靠。

１仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１１００型高效液相色谱仪；己烷磺酸钠、
冰醋酸均为分析纯；甲醇为色谱纯；烟酰胺、维生素Ｂ６、维生素Ｂ１、维生素Ｂ２对照品均购自中国药品生物制品检定所；复合维生素Ｂ片（中美合资上海辛帕斯制药有限公司）。

２方法与结果
２．１色谱条件
色谱柱：ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＣ１８（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：０．００５ｍｏｌ／Ｌ己烷磺酸钠－甲醇－冰醋酸（７０∶３０∶０．５）；流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２７８ｎｍ；进样量１０μｌ；柱温３０℃。

ＨＰＬＣ法测定复合维生素Ｂ片中四种成分的含量
吴芳，徐红艳
（上海市松江食品药品检验所，上海
２０１６００）
［摘要］目的：建立高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定复合维生素Ｂ片中烟酰胺、
维生素Ｂ６、维生素Ｂ１、维生素Ｂ２四种成分的含量。

方法：采用Ｃ１８色谱柱（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相为０．００５ｍｏｌ／Ｌ己烷磺酸钠－甲醇－冰醋酸（７０∶３０∶
０．５）；流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：２７８ｎｍ；柱温３０℃。

结果：烟酰胺、维生素Ｂ６、维生素Ｂ１、维生素Ｂ２分别在１００．９２￣６０５．５２、２１．２４￣１２７．４４、９７．８８￣５８７．２０，４２．１３￣１２６．３８μｇ／ｍｌ范围内呈良好的线性关系。

结论：本方法简便、
快速，可用于复合维生素Ｂ片的质量控制。

［关键词］高效液相色谱法；复合维生素Ｂ片；烟酰胺；维生素Ｂ６；维生素Ｂ１；维生素Ｂ２；含量［中图分类号］Ｒ９１７［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７３－７２１０（２００７）１１（ａ）－０９５－０２
ＣｏｎｔｅｎｔｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｕｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＶｉｔａｍｉｎＢＴａｂｌｅｔｓｂｙＨＰＬＣ
ＷＵＦａｎｇ，ＸＵＨｏｎｇ－ｙａｎ
（ＳｈａｎｇｈａｉＳｏｎｇｊｉａｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１６００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｃｏｎｔｅｎｔｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｕｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＶｉｔａ－
ｍｉｎＢＴａｂｌｅｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＨＰＬＣｓｙｓｔｅｍｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（１５０ｍｍ×
４．６ｍｍ，５μｍ），０．００５ｍｏｌ／Ｌｓｏｄｉｕｍｈｅｘａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ－ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｇｌａｃｉａｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（７０∶３０∶０．５）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗｉｔｈｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１．０ｍｌ／ｍｉｎ，ａｎｄ２７８ｎｍａｓｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｌｅｎｇｔｈ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｓｏｆｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ｖｉｔａｍｉｎＢ６，ｖｉｔａｍｉｎＢ１ａｎｄｖｉｔａｍｉｎＢ２ｗｅｒｅ１００．９２￣
６０５．５２，２１．２４￣１２７．４４，９７．８８￣５８７．２０，４２．１３￣１２６．３８μ
ｇ／ｍｌｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＣｏｍｐｏｕｎｄＶｉｔａｍｉｎＢＴａｂｌｅｔｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＨＰＬＣ；ＣｏｍｐｏｕｎｄＶｉｔａｍｉｎＢＴａｂｌｅｔｓ；Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ；ＶｉｔａｍｉｎＢ６；ＶｉｔａｍｉｎＢ１；ＶｉｔａｍｉｎＢ２；Ｃｏｎｔｅｎｔｓ
２．８样品的测定
精密称取头孢米诺钠样品２００ｍｇ，置于２２ｍｌ顶空瓶中，加水２ｍｌ，加盖，超声溶解后，做气相色谱处理。

测出各批次残留情况见表６。

表６样品有机溶剂残留情况（％）
０６１１３００１０
０６１１３００２０
０６１１３００３０
甲醇０．０３０．０２０．０２乙醇未检出０．０１未检出乙腈未检出
未检出
未检出
二氯甲烷
０．０００．０００．００
３讨论
本方法用顶空进样技术分析头孢米诺钠中的残留溶剂，包括甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷，由于采用了顶空进样器，使分析准确、方便、重复性高。

实验过程中对各色谱条件进行了优化，考虑到样品的热稳定性问题，设置样品的平衡温度为６０℃，并且为了更好地分离丙酮、异丙醇和乙腈，把柱温设为３５℃，柱前压为２．５ｐｓｉ。

《中国药典》２００５年版二部对有机挥发性杂质的检查作出了规定，要求精密度ＲＳＤ≤１０％［３］。

本方法连续进样５针，各对照品峰的ＲＳＤ均小于７．０％，说明方法精密度符合《中国药典》的要求。

最低检测限均＜１０μｇ，回收率也能满足要求。

故本方法适用于头孢米诺钠四种有机溶剂的检测。

［参考文献］
［１］周海钧，陈镇生，郑竹莲，等．ＩＣＨ药品注册的国际技术要求（质量部分）
［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２０００．８２．
［２］陈日南．药物中有机溶剂残留量测定法评述［Ｊ］．中国医药工业杂志，
１９９７，２８（６）：２７５．
［３］中华人民共和国国家药典委员会．中国药典［Ｓ］．二部．北京：化学工业出
版社，２００５．附录５９．
（收稿日期：２００７－０９－０３）
９５。