掌握鱼类血红蛋白测定的原理和方法
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Fra bibliotek 【动物与器材】
• 鱼，血红蛋白计（Shali氏）1套，0.1mol／L盐酸（或1％
盐酸）、蒸馏水、95％酒精，乙醚、滴管、小玻棒、棉球。
沙利氏血红蛋白计
• 沙利氏血红蛋白计主要有吸血管、比色计和比色管等部件（下图）。吸
血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有一20mm3（即20μl）的刻度，尾端膨 大，上面套上顶端有孔的橡皮帽或套上胶管，供吸血用。比色计的一侧 （或两侧），装有标准色玻璃管，比色管则可插在比色计中。与其一侧 （或两侧）的标准色进行比色。比色管的两侧有两行刻度，一行为血红 蛋白量的绝对值，表示每100ml血液中所含血红蛋白克数（g%），由2 至20为止；另一行为血红蛋白相对值，表示相当正常平均值的百分比 （%）。由20起至160止。人用的比色计是以100ml血液中含有血红蛋 白14.5g为100％。本实验以绝对值（g/%）来表示为宜。
3．反应。将吸血管迅速插入刻度比色管底的盐酸中，徐徐滴血于液体底 层，并利用上层的盐酸将吸血管洗涤多次（避免起泡），使管内壁血液 全部进入溶液中。取出吸血管后，轻轻摇动比色管，使血液与盐酸充分 混合，静置10分钟，使管内盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高 铁血红蛋白。
4．比色。用滴管将蒸馏水逐滴加入比色管中，每加一滴后 应摇匀或用小玻棒搅匀，常观察比色管内颜色，直到色度 与标准玻璃的色度相同位置（应在自然光下比色）。
图1 沙利氏血红蛋白计
【方法与步骤】
1．准备盐酸：用滴管吸取0.1mol/L盐酸，滴5～6滴入刻度比色管内 （约加到管下端刻度2处）。
2．采血。鱼类采血方法多种，可采用尾静脉采血法。必要时可从心脏直 接采血，但这种方法会使心脏受到损伤而不适宜继续的和多次取血样。 将抽出的血液放入经抗凝剂处理的凹玻片内，用吸血管吸取鱼血至 20mm3（即20μl）刻度处（要准确）。将管尖端外面的血液拭去。
5．记录。取出刻度比色管，观察并记录下管内溶液凹面最 低处的刻度数字，即为每100ml血液中血红蛋白的克数。
【注意事项】
1 ．采血操作要迅速、准确，不能凝血（必要时可用1%肝素钠 或其他抗凝剂处理注射器），也不能有气泡，否则须弃去重 采。
2．吸管使用后，必须立即洗涤，并晾干； 3．血红蛋白计的吸血管很容易损坏，应妥加爱护。管内有凝血
实验四 鱼类血红蛋白含量测定
【目的要求】 • 掌握鱼类血红蛋白测定的原理和方法。
【基本原理】 • 测定血红蛋白含量的方法有多种。最常用的是沙利氏比色法。其原理是
将少量稀盐酸加入一定量血液，使血红蛋白的亚铁血红素变为高铁血红 素，使溶液呈现稳定的棕黄色。用水稀释后与标准色管比较，即可直接 读出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。
时不可用金属丝疏通，可浸入1%氨水或45%尿素溶液中 （本实验采用的是氨水）； 4．血液与盐酸作用的时间不可过短，必须在10分钟后方可稀释 比色，否则血红蛋白不能充分转变成为高铁血红蛋白。
说明：
1 ．血红蛋白含量测定实验用的旧吸血管刻度为20CMM， 其含义为20MM3（20CMM，20 cubic mm）吸血时吸 至此刻度；
2 ．采血时从鱼的尾部体侧稍微偏向腹侧进针，方向指向脉 脊，并刺入脉棘下静脉中；
3 ．沙利氏血色素计的原理：在与标准色相同的情况下，溶 液的总体积与血红蛋白的含量成正比。
• 血细胞记数 • 稀释200倍 • 1mm3红血球数=N*10000 （N：5个中方格中红血球总数） • 1mm3白血球数=M*500 （M：4个大方格中红血球总数）
• 鱼，血红蛋白计（Shali氏）1套，0.1mol／L盐酸（或1％
盐酸）、蒸馏水、95％酒精，乙醚、滴管、小玻棒、棉球。
沙利氏血红蛋白计
• 沙利氏血红蛋白计主要有吸血管、比色计和比色管等部件（下图）。吸
血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有一20mm3（即20μl）的刻度，尾端膨 大，上面套上顶端有孔的橡皮帽或套上胶管，供吸血用。比色计的一侧 （或两侧），装有标准色玻璃管，比色管则可插在比色计中。与其一侧 （或两侧）的标准色进行比色。比色管的两侧有两行刻度，一行为血红 蛋白量的绝对值，表示每100ml血液中所含血红蛋白克数（g%），由2 至20为止；另一行为血红蛋白相对值，表示相当正常平均值的百分比 （%）。由20起至160止。人用的比色计是以100ml血液中含有血红蛋 白14.5g为100％。本实验以绝对值（g/%）来表示为宜。
3．反应。将吸血管迅速插入刻度比色管底的盐酸中，徐徐滴血于液体底 层，并利用上层的盐酸将吸血管洗涤多次（避免起泡），使管内壁血液 全部进入溶液中。取出吸血管后，轻轻摇动比色管，使血液与盐酸充分 混合，静置10分钟，使管内盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高 铁血红蛋白。
4．比色。用滴管将蒸馏水逐滴加入比色管中，每加一滴后 应摇匀或用小玻棒搅匀，常观察比色管内颜色，直到色度 与标准玻璃的色度相同位置（应在自然光下比色）。
图1 沙利氏血红蛋白计
【方法与步骤】
1．准备盐酸：用滴管吸取0.1mol/L盐酸，滴5～6滴入刻度比色管内 （约加到管下端刻度2处）。
2．采血。鱼类采血方法多种，可采用尾静脉采血法。必要时可从心脏直 接采血，但这种方法会使心脏受到损伤而不适宜继续的和多次取血样。 将抽出的血液放入经抗凝剂处理的凹玻片内，用吸血管吸取鱼血至 20mm3（即20μl）刻度处（要准确）。将管尖端外面的血液拭去。
5．记录。取出刻度比色管，观察并记录下管内溶液凹面最 低处的刻度数字，即为每100ml血液中血红蛋白的克数。
【注意事项】
1 ．采血操作要迅速、准确，不能凝血（必要时可用1%肝素钠 或其他抗凝剂处理注射器），也不能有气泡，否则须弃去重 采。
2．吸管使用后，必须立即洗涤，并晾干； 3．血红蛋白计的吸血管很容易损坏，应妥加爱护。管内有凝血
实验四 鱼类血红蛋白含量测定
【目的要求】 • 掌握鱼类血红蛋白测定的原理和方法。
【基本原理】 • 测定血红蛋白含量的方法有多种。最常用的是沙利氏比色法。其原理是
将少量稀盐酸加入一定量血液，使血红蛋白的亚铁血红素变为高铁血红 素，使溶液呈现稳定的棕黄色。用水稀释后与标准色管比较，即可直接 读出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。
时不可用金属丝疏通，可浸入1%氨水或45%尿素溶液中 （本实验采用的是氨水）； 4．血液与盐酸作用的时间不可过短，必须在10分钟后方可稀释 比色，否则血红蛋白不能充分转变成为高铁血红蛋白。
说明：
1 ．血红蛋白含量测定实验用的旧吸血管刻度为20CMM， 其含义为20MM3（20CMM，20 cubic mm）吸血时吸 至此刻度；
2 ．采血时从鱼的尾部体侧稍微偏向腹侧进针，方向指向脉 脊，并刺入脉棘下静脉中；
3 ．沙利氏血色素计的原理：在与标准色相同的情况下，溶 液的总体积与血红蛋白的含量成正比。
• 血细胞记数 • 稀释200倍 • 1mm3红血球数=N*10000 （N：5个中方格中红血球总数） • 1mm3白血球数=M*500 （M：4个大方格中红血球总数）