新月弯孢霉KA-91转化异羟基洋地黄毒苷元的研究
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中图 分 类 号 ： Ｑ ９ ０ Ｒ ２ ４ Ｔ ２ ８ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２ ４ ５ ２ １ ） ４ ０ ７ ４ １ ７ —５ ２ （ ０ Ｏ ０ —０ ５ —０
强心 苷是 一类 对心 脏具 有显 著生 物 活性 的 甾体 皂
苷类 化合 物 ， 有增 强 心肌 收缩力 等作 用 ， 具 是临 床上 用
新 月 弯孢 霉 ＫＡ ９ 对 地 高辛 不具 有 转 化 能 力 ， 异 羟基 洋地 黄 毒 苷 元 转 化 产 生 一 个 产 物 ， 结构 鉴 定 产 物 为 ３羰 基一 羟 －１ 对 经 一 异 基 洋地 黄 毒 苷元 。确 定 了转化 异 羟 基 洋 地黄 毒 苷 元 反 应 的 最优 工 艺参 数 为 ： 酵培 养基 的初 始 ｐ 值 ６０ 装 液 量 ５ 发 Ｈ ．， Ｏ ｍＬ・ （５ ） 。底 物 浓度 ０ ６ ｏ ・ ＿ ， 化 温 度 ２ ℃ ，１０ｒ ｍｉ 振 荡 培 养 ２ ， 化 ５ 。此 时 ， ２ ０ｍＬ － ， ． ０ｍｍ ｌ Ｌ 转 ８ ８ ・ ｎ ４ｈ 转 ４ｈ 转化 率 为 ４ 。 ０ 关键词 ： 羟基洋地黄毒苷元 ； 月弯孢霉 ； 异 新 生物 转化 ； 件 优 化 条
用 的强 心苷 类 药 物 ， 由异 羟基 洋 地 黄 毒 苷 元 在 Ｃ ３位 连接 三个洋 地黄 毒糖 构成 。
新 月弯孢 霉 ＫＡ一１， 津科 技大 学微 生物 制 药研 ９ 天 究室 保存 。
１ １ ２ 培养 基 ．．
采用 微 生物 转化 法对强 心 苷类 药物进 行结 构 修饰 已成为 强心 苷类药 物研 究 的 热点 领域 之 一 ］ 。有 文
膏 ５ ｐ 值 ６ ５ ，Ｈ ．。 １ １３ 药 品 、 ．． 试剂 和仪 器 地 高 辛 （ 度 ９ ） 西 安 山 川 生 物 技 术 有 限公 纯 ８ ，
ｐ ｒ ｉｌ ｓ ｒ ｚ ｅ 、 枝 根 霉 （ ｈ ｚｐ ｓｓ ｌｎｆ ｒ ｅｇ ｌ ｕ ｙ ａ ） 匍 ｉ ｏ Ｒ ｉｏ ｕ ｔ ｏ ｉ ｅ ） ｏ
ＨＹ Ⅱ 回旋式恒 温调 速摇 瓶柜 ； Ｊ８ ５ 型 Ｙ －７Ｓ型 医用 净化 台 ； ２１４７ ＷＳ —３ ～５型电热 恒温 培养 箱 ； ２ ４型 电子 ＧＢ ０
分析 天平 ； ｉ ｏ Ｇ ｌ ｎ型微 量取 样 器 ； 用 紫外 分析 仪 ； ｉ ｓ 三 Ａｇ — ｌ ｔ１ ０型高 效 液 相 色谱 分 析 仪 ； ｒｋ ｒＡ ６ ０型核 ｅ １０ ｎ Ｂ ｕ ｅ Ｖ一０
献 报道蓝 色 犁头霉 （ ｓ ｉ ｏｒ ｌａ） 雅 致 放 射 毛霉 Ａｂｉ ａｃｅｕｅ 、 ｄ （ ｔｎ ｍｕｏ ｌｇ ｎ ）ＡＴＣ ４ ６ Ａｃｉｏ ｃｒ ｅｅ ａ ｓ Ｃ ６ ７ 、米 曲 霉 （ Ａ —
斜 面培养 基 ： Ｄ 培 养基 。 ＰＡ 发酵 培养基 （ ｇ・Ｌ １ ：葡萄糖 ２ ， －） ２ 酵母 膏 ４ 牛 肉 ，
化 学 与 生 物 互 狸 ２１，ｏ２ Ｎ＿ ００ＶＩ７ ｏ４ ．
Ｃ ｈ ｍ ｉｔｙ ＆ Ｂｉ ｅ ｇｉｅ ｒ ｇ ｅ ｓｒ ｏ ｎ ｎ ｅｉ ｎ
国
新 月 弯 孢 霉 ＫＡ一 化 异 羟 基 洋 地 ９ １转 黄毒 苷 元 的研 究
刘增 兵 。 孙 华， 和朝 军 ， 玉婉 ， 付 王 敏
Ｐ５ ４ ０酶 系 ， 广 泛 用 于 甾体 化 合 物 的 羟 基 化 过 程 Ｅ８。 被 ￣３ ，
司 ； 羟基 洋 地 黄 毒 苷 元 （ 度 ９ ） 自制 ； 仿 、 异 纯 ８ ， 氯 乙 酸 乙酯 、 水 乙醇 等均 为市 售 分 析 纯 ； 无 甲醇 为 色谱 纯 ； 薄 层硅 胶板 ＧＦ ５ ， 国默 克公 司 。 ２４ 德
（ 津科 技 大 学生物 工程 学 院 工业微 生物教 育部 重点 实验 室 ， 津 ３ ０ ５ ） 天 天 ０ ４ ７
摘
要 ： 察 了新 月弯 孢 霉 （ ｕ＇ ｌｒ ｕａａ Ｋ ＿１ 地 高 辛 和 异 羟 基 洋地 黄 毒 苷 元 的 生 物 转 化 反 应 。结 果 发 现 ， 考 Ｃ ｒｕａｉ ｎ ｔ） Ａ ９ 对 ｖ ａｌ
１ 实 验
１ １ 材 料 ．
于治疗 心力 衰竭 等疾 病 的一线 辅助 药 物［ 。但 由于其 １ ］
排泄缓 慢 、 容易 在体 内蓄 积 、 治疗剂 量 与 中毒 剂量 非 常
１ １ １ 菌 种 ． ．
接近 等缺点 ， 限制 了其 应 用口 。地 高 辛 是 一 种 临床 常 ］
ＡＴＣ ２ ７ 洋地 黄毒 苷 元 的 １ 、 ７ Ｃ ６２ 在 ５ 、卢位 点 上 具 有 羟基 化 能 力 。球 毛 壳 霉 菌 （ ｈ ｅｏ ｕ ｌｂ ｓｍ） Ｃ ａｔｍｉｍ ｇ ｏ ｏｕ ＭＮ ２ １ 化洋 地黄 毒苷 得到 ７ 一１ 转 羟基 化 产 物 ； 卷 霉 蝇 （ ｉ ｉｅｌ ｓａ ） Ｃ ｒ ｎ ｌ ｍ￣ ｃｅ ＭＮ １ ０转 化 洋 地 黄 毒 苷 得 到 ｃ ａ －２ １／羟基 化产 物 。 ２－ ？ ］ 新 月 弯 孢 霉 （ ｕ ｖ ｌｒａ ｌｎ ｔ 细 胞 内 含 有 Ｃ ｒ ｕａ ｉ ｕ ａａ）
磁共振仪 ； 立 叶变换 离子 回旋 共振质谱 Ｆ － Ｒ ＭＳ 傅 ＴＩ － 。 Ｃ
１ ２ 方 法 ．
异 羟基 洋地 黄毒 苷元在 分 子结构 上 与洋地 黄 毒苷元 的
结构 相似 。作 者在 此 以地高 辛和 异羟 基洋 地黄 毒苷 元 为底 物 ， 利用新 月 弯孢 霉 ＫＡ一１对 其 进 行 转 化 ， 对 ９ 并
Байду номын сангаас转化 工艺 进行 了初 步优 化研究 。
１ ２ １ 异 羟基 洋地 黄毒 苷元 的制 备 ．．
采 用稀 盐 酸 水 解 地 高 辛 制 备 异 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 元 。用 含 ０ ０ ｏ ・ ＨＣ 的 ８ 乙醇 溶 液 水 解 ． ２ｔ ｌ Ｌ ｏ ］ ｏ
强心 苷是 一类 对心 脏具 有显 著生 物 活性 的 甾体 皂
苷类 化合 物 ， 有增 强 心肌 收缩力 等作 用 ， 具 是临 床上 用
新 月 弯孢 霉 ＫＡ ９ 对 地 高辛 不具 有 转 化 能 力 ， 异 羟基 洋地 黄 毒 苷 元 转 化 产 生 一 个 产 物 ， 结构 鉴 定 产 物 为 ３羰 基一 羟 －１ 对 经 一 异 基 洋地 黄 毒 苷元 。确 定 了转化 异 羟 基 洋 地黄 毒 苷 元 反 应 的 最优 工 艺参 数 为 ： 酵培 养基 的初 始 ｐ 值 ６０ 装 液 量 ５ 发 Ｈ ．， Ｏ ｍＬ・ （５ ） 。底 物 浓度 ０ ６ ｏ ・ ＿ ， 化 温 度 ２ ℃ ，１０ｒ ｍｉ 振 荡 培 养 ２ ， 化 ５ 。此 时 ， ２ ０ｍＬ － ， ． ０ｍｍ ｌ Ｌ 转 ８ ８ ・ ｎ ４ｈ 转 ４ｈ 转化 率 为 ４ 。 ０ 关键词 ： 羟基洋地黄毒苷元 ； 月弯孢霉 ； 异 新 生物 转化 ； 件 优 化 条
用 的强 心苷 类 药 物 ， 由异 羟基 洋 地 黄 毒 苷 元 在 Ｃ ３位 连接 三个洋 地黄 毒糖 构成 。
新 月弯孢 霉 ＫＡ一１， 津科 技大 学微 生物 制 药研 ９ 天 究室 保存 。
１ １ ２ 培养 基 ．．
采用 微 生物 转化 法对强 心 苷类 药物进 行结 构 修饰 已成为 强心 苷类药 物研 究 的 热点 领域 之 一 ］ 。有 文
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ＨＹ Ⅱ 回旋式恒 温调 速摇 瓶柜 ； Ｊ８ ５ 型 Ｙ －７Ｓ型 医用 净化 台 ； ２１４７ ＷＳ —３ ～５型电热 恒温 培养 箱 ； ２ ４型 电子 ＧＢ ０
分析 天平 ； ｉ ｏ Ｇ ｌ ｎ型微 量取 样 器 ； 用 紫外 分析 仪 ； ｉ ｓ 三 Ａｇ — ｌ ｔ１ ０型高 效 液 相 色谱 分 析 仪 ； ｒｋ ｒＡ ６ ０型核 ｅ １０ ｎ Ｂ ｕ ｅ Ｖ一０
献 报道蓝 色 犁头霉 （ ｓ ｉ ｏｒ ｌａ） 雅 致 放 射 毛霉 Ａｂｉ ａｃｅｕｅ 、 ｄ （ ｔｎ ｍｕｏ ｌｇ ｎ ）ＡＴＣ ４ ６ Ａｃｉｏ ｃｒ ｅｅ ａ ｓ Ｃ ６ ７ 、米 曲 霉 （ Ａ —
斜 面培养 基 ： Ｄ 培 养基 。 ＰＡ 发酵 培养基 （ ｇ・Ｌ １ ：葡萄糖 ２ ， －） ２ 酵母 膏 ４ 牛 肉 ，
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司 ； 羟基 洋 地 黄 毒 苷 元 （ 度 ９ ） 自制 ； 仿 、 异 纯 ８ ， 氯 乙 酸 乙酯 、 水 乙醇 等均 为市 售 分 析 纯 ； 无 甲醇 为 色谱 纯 ； 薄 层硅 胶板 ＧＦ ５ ， 国默 克公 司 。 ２４ 德
（ 津科 技 大 学生物 工程 学 院 工业微 生物教 育部 重点 实验 室 ， 津 ３ ０ ５ ） 天 天 ０ ４ ７
摘
要 ： 察 了新 月弯 孢 霉 （ ｕ＇ ｌｒ ｕａａ Ｋ ＿１ 地 高 辛 和 异 羟 基 洋地 黄 毒 苷 元 的 生 物 转 化 反 应 。结 果 发 现 ， 考 Ｃ ｒｕａｉ ｎ ｔ） Ａ ９ 对 ｖ ａｌ
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１ １ 材 料 ．
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接近 等缺点 ， 限制 了其 应 用口 。地 高 辛 是 一 种 临床 常 ］
ＡＴＣ ２ ７ 洋地 黄毒 苷 元 的 １ 、 ７ Ｃ ６２ 在 ５ 、卢位 点 上 具 有 羟基 化 能 力 。球 毛 壳 霉 菌 （ ｈ ｅｏ ｕ ｌｂ ｓｍ） Ｃ ａｔｍｉｍ ｇ ｏ ｏｕ ＭＮ ２ １ 化洋 地黄 毒苷 得到 ７ 一１ 转 羟基 化 产 物 ； 卷 霉 蝇 （ ｉ ｉｅｌ ｓａ ） Ｃ ｒ ｎ ｌ ｍ￣ ｃｅ ＭＮ １ ０转 化 洋 地 黄 毒 苷 得 到 ｃ ａ －２ １／羟基 化产 物 。 ２－ ？ ］ 新 月 弯 孢 霉 （ ｕ ｖ ｌｒａ ｌｎ ｔ 细 胞 内 含 有 Ｃ ｒ ｕａ ｉ ｕ ａａ）
磁共振仪 ； 立 叶变换 离子 回旋 共振质谱 Ｆ － Ｒ ＭＳ 傅 ＴＩ － 。 Ｃ
１ ２ 方 法 ．
异 羟基 洋地 黄毒 苷元在 分 子结构 上 与洋地 黄 毒苷元 的
结构 相似 。作 者在 此 以地高 辛和 异羟 基洋 地黄 毒苷 元 为底 物 ， 利用新 月 弯孢 霉 ＫＡ一１对 其 进 行 转 化 ， 对 ９ 并
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１ ２ １ 异 羟基 洋地 黄毒 苷元 的制 备 ．．
采 用稀 盐 酸 水 解 地 高 辛 制 备 异 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 元 。用 含 ０ ０ ｏ ・ ＨＣ 的 ８ 乙醇 溶 液 水 解 ． ２ｔ ｌ Ｌ ｏ ］ ｏ