实验动物染毒途径和方法(染毒技术)

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(一) 实验动物染毒途径和方法(染毒技术) 染毒的途径和方法多种多样，可根据实验目的、动物种类和药物剂型等情况确定。

当研究外来化学物的毒性时，实验动物接触化学物途径的选择，应以人类在生产和生活环境中接触该化学物的途径为依据。

通常使用以下四种染毒方法，即经口，经呼吸道，经皮肤，注射染毒。

1、经口染毒目的：
研究外来化学物能否经胃肠道吸收及求出经口接触的致死剂量(LD50)。

由于外来化学物可以污染饮水及食物，因此，此种染毒方式在卫生毒理学研究中占有重要地位。

经胃肠道接触又因实验动物的种属不同，外源化学物理化性质不同，分为以下几种具体的接触方式。

(1)、灌胃在急性毒性试验中，经口染毒多用灌胃法，此法剂量准确，适用于小鼠、大鼠、家兔等动物。

灌胃法是将外源化学物用灌胃器灌到实验动物胃内。

灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。

小鼠的灌胃针长约 4～5 cm，直径为1 mm，大鼠的灌胃针长约 6～8 cm，直径约 1.2 mm。

灌胃针的尖端焊有一小圆形中空的金属球。

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焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道。

针头金属球端弯曲成 20左右的角度，以适应口腔、食道的生理弯曲度走向。

图 11 灌胃针食道食道气管气管By LASCOBy LASCO面向自己,沿着门牙左边滑入边滑入面向自己,沿着门牙左图 12 鼠类灌胃、腹腔注射① 剂量：
在每一实验系列中，同种实验动物的灌胃体积最好一致，即以单位体重计算所给予的毫升数应该一致，即 ml/kg 或 ml/g 计。

因为成年动物胃容积与体重之间有一定的比例，按单位体重计算灌胃量，受试化学物的吸收速度相对稳定。

A、鼠类的灌胃法：
用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的一侧嘴角插入，压迫鼠的头部，使口腔与食道成一直线，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。

一般灌胃针插入小鼠深度为 3～4 cm，大鼠或豚鼠为 4～6 cm。

常用灌胃量小鼠为 0.2～1 ml，大鼠 1～4 ml，豚鼠 1～5 ml。

B、兔的灌胃法：
先将动物固定，再将开口器的小孔插入动物口中，再慢慢沿上腭壁插入食道，将灌胃管的外端浸入水中，如有气泡逸出，则说明灌胃管误入气管，需拔出重插。

插好后，将注射器连于灌胃管将药液推入。

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 灌胃结束后，先拔出灌胃管，再拿出开口器。

一次灌胃能耐受的最大容积兔为 80～100ml，狗为 200 ～250ml。

图 13 兔耳缘静脉采血、注射及灌胃法② 注意事项：
为了防止化学物与食物之间的反应，灌胃前应禁食 4 小时，灌胃后禁食 2 小时，但不禁水。

③ 优点：
剂量准确；缺点：
工作量大，易伤及消化道或误入气管而造成动物死亡。

(2)、喂饲将受试化学物拌入饲料或饮水中，由动物自行摄入。

为了准确掌握每只动物摄入化学物的剂量，需单笼喂养动物，计算每日的摄食量和饮水量，以折算摄入化学物的剂量。

优点：
符合人类接触化学物的实际情况。

缺点：
因为外源化学物暴露在空气中，非一次进入消化道，干扰因素较多。

异味动物拒食；挥发摄入量下降，有经呼吸道吸入的可能；化学物易水解或与食物中某些成分起化学反应，则摄入量不准确并有改变化学物毒性或毒效应的可能(一般急性毒性试验少用此法)。

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(3)、吞咽胶囊将一定剂量的受试化学物装入胶囊内，强制放到动物的舌后咽部强迫动物吞下；主要适用于家兔，猫，狗，羊等较大动物；此种方法剂量准确，尤其适用于易挥发，易水解，有异味的化学物。

2、呼吸道染毒有些化学物，常温常压下为气态，或在生产生活中以粉尘、气体、蒸气或雾等状态存在的药物或毒气，需通过呼吸道染毒，目的是研究化学物能否经呼吸道吸入，吸入过程对呼吸道有无损伤及求出 LD50(半数致死浓度)等参数。

接触方式有两种：
(1)、吸入接触：
将实验动物置于含有一定浓度的外来化学物的染毒柜或其它容器中，动物自然吸入化学物。

① 静式吸入：
将实验动物置于一定体积的密闭容器中，加入一定量易挥发的液态化学物或一定体积的气态化学物，在容器内形成所需受试物浓度的空气环境。

优点：
设备简单，操作方便，消耗少，适用于小型动物。

缺点：
a、实验期间无氧气补充，容器中氧分压逐渐降低， CO2分压，温度，湿度逐渐升高，影响毒作用。

b、随着染毒时间的延长，染毒柜内化学物浓度渐渐降低，由
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 于动物被毛，排泄物，壁柜等可能会对化学物有一定程度的吸收(吸附)，故难以维持恒定的浓度。

此外，动物的体表暴露在该环境中，若该化学物可经皮吸收，还会造成交叉吸收的情况。

② 动式吸入：
指动物置于空气流动的染毒柜中，染毒柜配有新鲜空气补给系统，有受试化学物空气排出的动力系统和随时补充受试物的配气系统， O2、CO2分压恒定，温度、湿度恒定，受试物浓度恒定，明显由于静式染毒。

优点：
符合人类接触化学物的实际情况。

缺点：
设备复杂，受试物消耗量大，易污染工作环境。

(2)、气管注入接触：
在动物被麻醉的情况下，将已消毒灭菌的受试物(粉尘混选液或液体)注入气管，使之分布在左右肺内。

该染毒方式多用于制作急性中毒模型，而不同于急性毒性试验。

3、皮肤染毒为了鉴定化学物质经皮肤的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，需采用经皮肤染毒方法。

(1)、斑贴法(家兔)：
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在脱毛区(一般 l cm2即可)贴敷浸有受试化学物的多层纱布(应低于致死刑量)，再盖上一层油纸或塑料薄膜，贴牢固定。

于 12～24 小时后解开敷料，用温水清洗皮肤，观察皮肤反应。

(2)、浸尾法(小鼠及大鼠)：
目的是定性地判定受试物的经皮吸收作用。

染毒前先将鼠放入特制的固定盒内，并使其尾巴通过固定盒底部的软木塞的圆孔露出管外。

继之将尾巴通过小试管软木塞小孔，插人装有受试物液体的试管内，浸泡2～6 小时，观察中毒症状。

4、注射染毒 (1)、皮下注射注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有针头的注射器刺入皮下。

注射部位一般在大腿外侧、内侧、背部、耳根部、腹部。

一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或侧下腹部；豚鼠在后大腿内侧、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外侧注射，拔针时，轻按针孔片刻，防药液逸出。

放在铁盖上, 右手抓尾巴,左手抓皮肤右手抓尾巴,左手抓皮肤沿着拇指.食指中间插入,可感觉针穿过皮层入,可感觉针穿过皮层回抽, 打入, 完成回抽, 打入, 完成放在布上, 右手抓尾巴,左手抓皮肤左手抓皮肤沿着拇指.食指中间插入,可感觉针穿过皮肤入,可感觉针穿过皮肤回抽, 打入, 完成回抽, 打入, 完
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 成放在铁盖上, 沿着拇指.食指中间插放在布上, 右手抓尾巴,沿着拇指.食指中间插图 14 皮下注射 (2)、皮内注射皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，将连有针头的注射器紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起再稍刺入，即可注射药物，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。

(3)、肌内注射肌内注射应选肌肉发达、没有大血管通过的部位，一般多选臀部。

注射时垂直迅速刺入肌肉，回抽针拴如无回血，即可进行注射。

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