灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠肾脏损伤保护作用的研究

作者：肖宫，熊军，罗崇岱，杨可达，张平肖桂林
【摘要】目的探讨灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠肾脏的保护作用。

方法用sd 大鼠20只，随机分为4组，分别为：空白组，采用生理盐水灌胃对照；模型组ⅰ，采用亚稀褶黑菇毒素灌胃造模；模型组ⅱ，采用亚稀褶黑菇毒素灌胃造模后，用灵芝煎剂灌胃治疗；灵芝组，采用灵芝煎剂灌胃对照。

观察大鼠的存活情况、活动情况、尿颜色、尿量、尿红细胞、尿白细胞、尿蛋白、血液生化（尿素氮、肌酐）、nag酶以及肾脏病理检查等指标。

结果实验所观测的指标包括实验动物的存活情况、活动情况、尿颜色、尿量、尿红细胞、尿白细胞、尿蛋白、血液生化（尿素氮、肌酐）、nag酶等，模型组ⅱ与模型组ⅰ各项指标分别比较，有非常显著差异（p<0.01）；病理形态学检查结果提示，模型组ⅱ的肾脏组织结构损害较模型组ⅰ明显减轻。

结论灵芝煎剂对亚稀褶黑菇中毒大鼠肾脏有明显的保护作用。

【关键词】灵芝煎剂；亚稀褶黑菇；sd大鼠；急性中毒；肾脏保护
protective efficacy of lingzhi decoction on acute renal injury caused by russula subnigricans in rats
xiao gong, xiong jun, luo chong-dai, yang ke-da, zhang ping, xiao gui-lin
(xiangya medical college, central south university, changsha, hunan 410008, china) 〔ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 lingzhi decoction; russula subnigricans; sd rats; acute poisoning ; protecting kidney
在指导老师临床治疗的基础上[1，2]，为进一步探索灵芝对亚稀褶黑菇中毒肾脏的保护作用，采用亚稀褶黑菇模拟人中毒过程，用大鼠制造中毒动物模型，然后用灵芝煎剂灌胃进行治疗，观察肾脏功能及病理变化情况，以了解灵芝煎剂对亚稀褶黑菇中毒大鼠肾脏的保护作用，验证灵芝对亚稀褶黑菇中毒病人临床解毒作用。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物健康sd大鼠20只，由中南大学动物学部提供，合格证号：scxk(湘)2006-0004，均为雌性，体质量（200±11）g。

1.1.2 亚稀褶黑菇干亚稀褶黑菇子实体15 g（由湖南师范大学毒蕈研究所提供）。

1.1.3 药物赤灵芝饮片200 g（由中南大学湘雅医院中药房提供）。

1.2 方法
1.2.1 动物分组 sd大鼠20只随机分为4组：空白组、模型组ⅰ、模型组ⅱ、灵芝组，每组各5只。

1.2.2 灵芝煎剂制备取赤灵芝饮片200 g浸湿，加蒸馏水至300 ml，煎煮30 min，浓缩至100 ml，即每毫升含生药2 g的灵芝液，冷藏备用。

1.2.3 亚稀褶黑菇毒素制备将干亚稀褶黑菇子实体15 g，粉碎加少量蒸馏水浸润，再加蒸馏水15 ml，煮沸3 min，离心5 000 r/min 10 min，取全部上清液；其沉渣再加蒸馏水至15 ml，煮沸3 min，以相同转速和时间离心，取全部上清液。

将两次上清液混合一起，浓缩至10 ml，即得每毫升含1.5 g干亚稀褶黑菇实体的毒素液体，冷藏备用。

1.2.4 动物活动、食量、尿颜色情况观察采用积分法评估实验动物的活动、食量及尿颜色情况。

①活动情况将动物活动情况积分定为3级：轻度3分，活动如常，主动活泼；中度2分，主动活动，但不活泼；重度1分，不主动活动，有被动活动。

②食量情况根据所剩食物量计算积分，并定为3级：食量轻度减少3分，所剩食物少于10 g；中度减少2分，所剩食物10~20 g；重度减少1分，所剩食物多于20 g 。

③小便颜色根据小便颜色计算积分，亦定为3级：浅黄或不黄3分，明显黄色至红黄色2分，红黄至红色1分。

计算方法：按每天观察情况，得出每天每1项分值，再将每1项3 d分值相加除以3得均值，再将3 d的均值相加用统计学处理得出均数±标准差（ｘ±ｓ）。

1.2.5 动物喂养每只动物单笼（代谢笼）饲养，供应食物量为每只动物每天50 g，水不限。

供食方法：每日20∶00清洗代谢笼并禁食，次日上午8∶30给食。

1.2.6 造模方法①空白组：每天上午8∶００～９∶００用生理盐水４ ml灌胃；②模型组ⅰ：第1天上午8∶００～９∶００用亚稀褶黑菇毒素1 ml+生理盐水３ ml灌胃，以后每天于同一时间用生理盐水４ ml灌胃；③模型组ⅱ：第1天上午8∶００～９∶００用亚稀褶黑菇毒素1 ml灌胃，２ h后用灵芝液４ ml灌胃，以后每天于同一时间用灵芝煎剂４ ml灌胃；
④灵芝组：每天上午8∶００～９∶００用灵芝煎剂４ ml灌胃。

总疗程为3 d。

1.2.7 尿标本收集与处置每日20∶00清洗代谢笼并禁食，用清洁尿液收集瓶收集尿液，次日上午8∶00将尿液收集瓶取出，测定总尿量，分装送检。

1.2.8 血标本收集与处置实验结束时，心脏取血2 ml离心取血浆送检。

1.2.9 病理标本收集与处置实验结束，处死动物，取肾脏按光镜检查要求用福尔马林液固定标本，24 h后用梯度脱水，透明腊块包埋。

标本石蜡包埋冷冻24 h后用石蜡切片机连续冠状切片，厚度为4~5 μm，贴于明胶载玻片。

1.3 观测指标
1.3.1 动物一般情况动物活动、饮食情况、小便颜色。

1.3.2 动物小便情况尿量、尿蛋白、尿中红细胞、白细胞、尿n-乙酰-β-d葡萄糖酐酶（nag 酶）。

1.3.3 血液生化指标尿素氮，肌酐。

1.3.4 病理指标肾脏组织切片用he染色，光镜检查。

1.4 统计学分析
数据采用spss11.5统计软件分析处理，计量资料用均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，多组间比较用方差分析。

2 结果
2.1 灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠存活的影响
模型组ⅰ于实验48 h 以后死亡2只，其余所有实验动物至实验结束。

2.2 灵芝煎剂对亚稀褶黑菇急性中毒大鼠食量、活动、小便颜色积分的影响
食量、活动、小便颜色积分模型组ⅰ，模型组ⅱ与空白组差异均有统计学意义（p<0.01），模型组ⅰ与模型组ⅱ比较差异亦有统计学意义（p<0.01），而灵芝组与空白组比较无统计学差异（p&0.05），见表1。