基因枪轰击法转化单子叶植物

基因枪轰击法转化单子叶植物
将愈伤组织高渗处理约4-6h后，用PDS-1000/He 型基因枪进行轰击，每次轰击前，
在承载膜上样10ul。

基因枪轰击参数为：氦气压为1100 Psi，真空度为26-27cm 汞柱，承载膜与阻挡屏之间为距离为0.8 cm，可裂膜和承载膜间距离为2.5 cm，愈伤组织轰击距离为9.0 cm。

所有操作过程均在无菌条件下进行, 操作过程如下：
（1）用70 %的乙醇对基因枪内外进行消毒，将操做中用到的工具置于超净工作台里，打开紫外灯灭菌30min；
（2）用70 %的乙醇将阻挡网，固定器浸泡15 min，对可裂膜用70 %异丙醇浸泡一下，约2- 3 s，微弹载体上用70 %乙醇浸一下放在超净工作台上；
（3）打开氦气瓶总阀，并顺时针调节气压，因可裂膜压力为200 psi，调节标准应高于200 psi；
（4）打开基因枪面板左侧电源开关，每打完一枪均需将基因枪内所有部位用70 %酒精消过毒的卫生纸擦拭一遍；
（5）取微粒载体，，取DNA 与金粉混合物，用加样枪吸取10ul加于承载膜中央，用枪头轻轻将其匀开，防止金粉粒聚集成块状，干燥 2 min，待酒精挥发后，用与基因枪配套的嵌入工具将其固定在钢碗底部环内；
（6）安装可裂膜于其托座上，顺时针安装到加速器上，用厂家提供的专用扳手适当用力固定；
（7）将空间环，阻挡网，阻挡网托座，承载膜及固定环安装，慢慢旋紧插入枪体中；
（8）培养皿根据参数距离放入轰击室，放于中央位置，关好轰击室门；
（9）将基因枪上中间气流控制开关置于″VAC″位抽真空，待真空度达到26-27cm 汞柱时，快速按下此开关，按住″HOLD″键，保持不动，直到击发为止，右侧发射开关只有真空压力达到 5 英寸汞柱以上方才点亮。

向上压住发射键″FIRE″并保持不动，轰击结束时，松开″FIRE″键；
（10）将气流控制开关置于″VENT″位使其恢复压力值，待真空表到零的位置后将样品
取出；
（11）关机：把氦气瓶总开关旋紧，打一次空枪，待氦气表指针回零后，逆时针旋转氦气压
表调节阀至最小；B 关闭基因枪电源。