培养基的制备、器具包扎和灭菌

实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌
一、实验目的
1、了解培养基的配制原理和方法,掌握其配制过程。

2、了解几种灭菌方法,掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。

二、实验原理
①培养基分类:
据组成成分可分为:
1.合成培养基:由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

2.半合成培养基:有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

3.天然培养基:利用天然来源的有机物配制而成。

据用途可分为
1.选择培养基:用来从环境中筛选微生物的培养基
加富培养基:加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质,使其快速生长,便于分离
抑制性培养基:加入某种物质抑制其他微生物生长,使目标微生物得到富集,便于分离
2.鉴别培养基:用来检测微生物的某些代谢特性,以便鉴别。

据培养基的物理状态可分为:
1.液体培养基:不加凝固剂的液体状态培养基。

2.固体培养基:在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。

3.半固体培养基:在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。

②配置好的培养基必须立即进行灭菌
③实验室常用加压蒸汽灭菌法
三、实验材料
药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖;可溶性淀粉、
K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O等。

高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱。

其它:天平、牛角匙、电磁炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带塞子的无菌试管、培养皿、枪头、枪头盒、标签等。

四、实验步骤
1、培养基的配制
2、分离培养微生物常用器皿的准备
3、培养基和玻璃器材的灭菌
培养基的配制方法和步骤:
1.称量:按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。

2.溶化:在搪瓷杯中加入所需水量,玻棒搅匀,加热溶解。

3.调pH值:用NaOH或HCl调pH,用pH试纸对照。

4.加琼脂溶化:加热过程中要不断搅拌,可适当补水。

5.分装。

6.包扎,挂上标签(最好用铅笔写),注明何种培养基。

7.灭菌备用:培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h,确定无菌生长,方可使用。

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
(用于分离和培养细菌,是一种天然培养基)
牛肉膏3g
蛋白胨5g
氯化钠5g
琼脂20g
自来水1000mL
pH 7.0~7.2
灭菌: 1.05kg/cm2 20min
马铃薯蔗糖琼脂培养基
(用于分离和培养真菌之用,是一种半合成培养基)
去皮马铃薯(或鲜豆芽)200g
(去皮,切成小块,放水中煮沸,保持20min,用双层纱布过滤取汁) 蔗糖20g
自来水1000mL
琼脂20g
pH 自然
灭菌:(含蔗糖)1.05kg/cm2 20min
高氏一号培养基
(用于分离和培养放线菌,是一种合成培养基)
可溶性淀粉20.0g
KNO3 1.0g
K2HPO4 0.5g
MgSO4?7H2O 0.5g
NaCl 0.5g
FeSO4?7H2O 0.01g
pH 7.4~7.6
琼脂20g
自来水1000mL
灭菌: 1.05kg/cm2 30min
制备无菌水:
无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。

250mL三角烧瓶(装有玻璃珠),装自来水90mL,试管中装9.0mL自来水,塞上塞子,包
扎、灭菌备用。

物品的准备:
三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等的包扎准备。

每组配制1种培养基
1000ml。

包扎平板5包,6个/包;
1ml枪头置于枪头盒中,包扎好(用镊子捏取); 1瓶加玻珠无菌水90ml;
9ml无菌水试管10根。