黔产玄参的“发汗”方法研究

黔产玄参的“发汗”方法研究作者：邓莹刘杰魏学军夏朵马江蚕
来源：《中国民族民间医药·上半月》2022年第07期
【摘要】目的：优选黔产玄参的最佳“发汗”方法。

方法：采用不同“发汗”加工方法制备待测样品，利用高效液相色谱法（HPLC）测定哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸含量，综合评分法优选最佳“发汗”方法。

结果：6种发汗方法玄参样品中哈巴苷含量在0.98%～1.21%之间，哈巴俄苷含量在0.93%～1.73%之间，肉桂酸含量在0.73%～0.97%之间，三种成分综合评分均以烘至半干后“发汗”制品较晒至半干后“发汗”制品高。

综合评分最高的发汗制品为“蒸后发汗”烘干品，具体“发汗”方法为将洗净后的新鲜玄参于笼屉内隔水蒸30min（按“圆气”后计）后，60℃烘至半干，于阴凉通风处堆放3d，60℃烘30min后再堆放，反复发汗3次。

结论：建议黔产玄参“发汗”过程中干燥时采用烘干法，发汗样品的处理采用“蒸后发汗”法。

【关键词】玄参;“发汗”方法;指标成分;综合评分法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2022）13-0031-05 Study on the Suitable “Sweating” Method of Scrophularia Ningp oensis In Guizhou
DENG Ying LIU Jie WEI Xuejun* XIA Duo MA Jiangcan
Qiannan Medical College for Nationalities，Duyun 558000，China
Abstract：Objective To optimize the best “sweating” method of Scrophularia ningpoensisin Guizhou.Methods Use different “sweat ”processing methods to prepare samples to be tested and the content of harpagoside，harpagoside and cinnamic acid were determinged by high performance liquid chromatography （HPLC），andthe best “sweating” method was optimized by the com prehensive scoring method.Results The contents of harpagoside， harpagoside and cinnamic acid in the samples of six sweating methods are 0.98%-1.21%，0.93%-1.73% and 0.73%-0.97%. The comprehensive scores of the three components are that the amount of “sweating” products after drying to semi dry is higher than that after drying to semi dry.The sweating products with the highest comprehensive score are “sweating after steaming”. The specific “sweating”method is to steam the net fresh Scrophularia ningpoensis in the cage for 30 minutes （calculated according to the “round gas”）， bake it at 60℃to semi dry， stack it in a cool and ventilated place for 3 days， bake it at 60℃ for 30 minutes， and then stack it again to prevent recurrent sweating for 3 times.Conclusion It is suggested that the drying method should be used in the“sweating” process of Scrophularia ningpoensisin Guizhou，and the “sweating after steaming” method should be used for the treatment of sweating samples.
Key words：Scrophularia Ningpoensis;“Sweat” Method;Index Components;Comprehensive Scoring Method
玄參为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结的功能，临床常用于治疗热病热入营血、温毒发斑、热病伤阴、舌绛烦渴、津伤便秘、骨蒸劳嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬与痈肿疮毒等症候，主产浙江、贵州、四川与河北等省区[1]。

发汗作为中药材产地加工的一种特殊方法，是影响中药材质量的重要因素之一，它可使药材变色、变软、增加香味或减少刺激性，其加工方法为将药材用微火烘或晒至半干或微蒸（煮）后堆置起来，使其内部发热而析出水分[2]。

玄参的发汗方法在2020版《中华人民共和国药典》中规定为“冬季茎叶枯萎时采挖，除去根茎、幼芽、须根及泥沙，烘或晒至半干后堆放3～6d，反复操作，直至干燥”[1]。

但由于地域的差异性，目前在玄参的产地加工方法中，除了按照《中华人民共和国药典》规定的“发汗”方法加工之外，不同产地所采用的“发汗”方法各不相同[3]，已报道的文献中玄参“发汗”的质控指标仅局限于核苷类成分[4]，而玄参的主要化学成分有环烯醚萜类、苯丙素苷类、有机酸类等化学成分[5]，其中哈巴苷、哈巴俄苷具有抗炎作用[6-7]，肉桂酸具有泻下、抗细菌和真菌作用[8]，是玄参的主要生物活性成分。

因
此，本研究拟以哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸三种指标性成分的含量作为考察指标，比较“药典发汗”晒干品和烘干品、“蒸后发汗”晒干品和烘干品、“煮后发汗”晒干品和烘干品玄参中上述指标性成分含量，以综合评分法优选黔产玄参的“发汗”方法，以期为黔产玄参产地加工方法的建立提供实验性理论依据。

1 材料与仪器
1.1 材料试验用新鲜玄参购于贵州省遵义市道真县玄参种植基地，经黔南民族医学高等专科学校中药教研室李香教授鉴定为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.的根。

哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸对照品均购自成都克洛玛生物科技有限公司（批号：CHB-H-006，CHB190105，CHB190106），乙腈（色谱纯），水为娃哈哈纯净水，余试剂均为分析纯。

1.2 仪器高效液相色谱仪Agilent1260型（美国Agilent公司）;SG-4050C型数显恒温水浴锅（上海硕光公司）;AE240型电子分析天平（瑞士MettLer公司）;AS10200A 型超声波清洗机（杭州汇尔公司）;DHG-9240A型真空干燥箱（上海金山公司）。

2 方法与结果
2.1 样本的确定试验药材经高效液相色谱法测定玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的总量符合2020版《中国药典》规定（不少于0.45%）。

2.2 样品的制备
2.2.1 药典“发汗”晒干品（A1）[1] 按《药典》记载方法操作。

将新鲜玄参洗净后，晒至半干，于阴凉通风处堆放3d，取出，晒1d后再堆放，反复发汗6次即可干燥。

2.2.2 药典“发汗”烘干品（A2）[1] 按《药典》记载方法操作。

将新鲜玄参洗净后，于60℃烘至半干，于阴凉通风处堆放3d，取出，60℃烘30min后再堆放，反复发汗3次即可干燥。

2.2.3 蒸后“发汗”晒干品（A3）将新鲜玄参洗净后，于笼屉内隔水蒸30min（按“圆气”后计）后，取出，晒至半干，余步骤同“2.2.1”项。

2.2.4 蒸后“发汗”烘干品（A4）将新鲜玄参洗净后，于笼屉内隔水蒸30min（按“圆气”后计）后，取出，于60℃烘至半干，余步骤同“2.2.2”项。

2.2.5 煮后“发汗”晒干品（A5）将新鲜玄参洗净后，于沸水中煮30min后，捞出，晒至半干，余步骤同“2.2.1”项。

2.2.6 煮后“发汗”烘干品（A6）将新鲜玄参洗净后，于沸水中煮30min后，捞出，于60℃烘至半干，余步骤同“2.2.2”项。

2.3 哈巴苷、哈巴俄苷的测定方法[1]
2.3.1 色谱条件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相乙腈（A）-0.03%磷酸水（B），流动相梯度条件见表1。

流速1.0mL/min;进样量10μL;柱温20℃;检测波长210nm。

对照品溶液、供试品溶液HPLC色谱图如图1所示。

2.3.2 供试品溶液的制备精密称取A1～A6玄参样品粉末（过三号筛）各0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞称重，浸泡1h，超声提取（功率500W，频率
40KHZ）45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3.3 对照品溶液的制备精密称取哈巴苷对照品6.05mg、哈巴俄苷对照品2.32mg，置于100mL量瓶中，加30%甲醇稀释成含哈巴苷60.50μg/mL、哈巴俄苷23.20μg/mL的混合对照品溶液，冷藏备用。

2.4 肉桂酸的测定方法
2.4.1 色谱条件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相乙腈-0.1%磷酸水（40∶60）;流速1.0mL/min;进样量10μL;柱温25℃;检测波长285nm。

对照品溶液、供试品溶液HPLC色谱图如图2所示。

2.4.2 供试品溶液的制备精密称取A1～A6玄参样品粉末（过三号筛）各1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%甲醇20mL，密塞称重，浸泡1h，超声提取（功率500W，频率
40KHZ）30min，提取3次，合并滤液定容至100mL，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.4.3 对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对照品1.0mg，置于100mL量瓶中，加甲醇稀释成含肉桂酸10μg/mL的对照品溶液，冷藏备用。

2.5 线性关系考察精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合对照品溶液、肉桂酸对照品溶液1、5、10、15、20、25μL，按照“2.
3.1”项下哈巴苷、哈巴俄苷和“2.
4.1”项下肉桂酸色谱条件进样，以进样量（μg/mL）为横坐标X、峰面积Y为纵坐标进行回归。

结果见表2。

2.6 方法学考察精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合对照品溶液、肉桂酸对照品溶液各
10μL，按“2.3.1”项下哈巴苷、哈巴俄苷色谱条件和“2.4.1”项下肉桂酸色谱条件连续进样6次，结果哈巴苷峰面积RSD=0.76%，哈巴俄苷峰面积RSD=0.63%，肉桂酸峰面积RSD=1.3%，表明仪器精密度良好。

取A1样品粉末（过三号筛），6份，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备哈巴苷、哈巴俄苷供试品溶液，按“2.4.2”项下方法制备肉桂酸供试品溶液，分别依色谱条件测定并计算哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸含量，结果哈巴苷含量RSD=1.18%，哈巴俄苷含量
RSD=1.78%，肉桂酸含量RSD=1.82%，表明该方法重复性良好。

精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷对照品溶液、肉桂酸對照品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h按相应色谱条件进行测定，结果哈巴苷含量RSD=1.14%，哈巴俄苷含量RSD=1.88%，肉桂酸含量RSD=0.81%，表明哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸对照品在24h内保持稳定。

取0.25g哈巴苷含量为0.53mg、哈巴俄苷含量为0.73mg的A1样品6份，精密称定，按表3精密加入适量哈巴苷、哈巴俄苷对照品，按“2.3.2”项下方法制备哈巴苷和哈巴俄苷供试品溶液，在“2.3.1”项下色谱条件测定并计算加样回收率;另取0.5g肉桂酸含量为0.46mg的A1样品，6份，精密称定，按表3精密加入适量肉桂酸对照品，按“2.4.2”项下方法制备肉桂酸供试品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下测定并计算加样回收率。

试验结果见表3。

1 材料与仪器
1.1 材料试验用新鲜玄参购于贵州省遵义市道真县玄参种植基地，经黔南民族医学高等专科学校中药教研室李香教授鉴定为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.的根。

哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸对照品均购自成都克洛玛生物科技有限公司（批号：CHB-H-006，CHB190105，CHB190106），乙腈（色谱纯），水为娃哈哈纯净水，余试剂均为分析纯。

1.2 仪器高效液相色谱仪Agilent1260型（美国Agilent公司）;SG-4050C型数显恒温水浴锅（上海硕光公司）;AE240型电子分析天平（瑞士MettLer公司）;AS10200A 型超声波清洗机（杭州汇尔公司）;DHG-9240A型真空干燥箱（上海金山公司）。

2 方法与结果
2.1 样本的确定试验药材经高效液相色谱法测定玄参中哈巴苷和哈巴俄苷的总量符合2020版《中国药典》规定（不少于0.45%）。

2.2 样品的制备
2.2.1 药典“发汗”晒干品（A1）[1] 按《药典》记载方法操作。

将新鲜玄参洗净后，晒至半干，于阴凉通风处堆放3d，取出，晒1d后再堆放，反复发汗6次即可干燥。

2.2.2 药典“发汗”烘干品（A2）[1] 按《药典》记载方法操作。

将新鲜玄参洗净后，于60℃烘至半干，于阴凉通风处堆放3d，取出，60℃烘30min后再堆放，反复发汗3次即可干燥。

2.2.3 蒸后“发汗”晒干品（A3）将新鲜玄参洗净后，于笼屉内隔水蒸30min（按“圆气”后计）后，取出，晒至半干，余步骤同“2.2.1”项。

2.2.4 蒸后“发汗”烘干品（A4）将新鲜玄参洗净后，于笼屉内隔水蒸30min（按“圆气”后计）后，取出，于60℃烘至半干，余步骤同“2.2.2”项。

2.2.5 煮后“发汗”晒干品（A5）将新鲜玄参洗净后，于沸水中煮30min后，捞出，晒至半干，余步骤同“2.2.1”项。

2.2.6 煮后“发汗”烘干品（A6）将新鲜玄参洗净后，于沸水中煮30min后，捞出，于60℃烘至半干，余步骤同“2.2.2”项。

2.3 哈巴苷、哈巴俄苷的测定方法[1]
2.3.1 色谱条件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相乙腈（A）-0.03%磷酸水（B），流动相梯度条件见表1。

流速1.0mL/min;进样量10μL;柱温20℃;检测波长210nm。

对照品溶液、供试品溶液HPLC色谱图如图1所示。

2.3.2 供试品溶液的制备精密称取A1～A6玄参样品粉末（过三号筛）各0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞称重，浸泡1h，超声提取（功率500W，频率
40KHZ）45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3.3 对照品溶液的制备精密称取哈巴苷对照品6.05mg、哈巴俄苷对照品2.32mg，置于100mL量瓶中，加30%甲醇稀释成含哈巴苷60.50μg/mL、哈巴俄苷23.20μg/mL的混合对照品溶液，冷藏备用。

2.4 肉桂酸的测定方法
2.4.1 色谱条件 880975-902C18柱（250mm×4.6mm，5μm）;流动相乙腈-0.1%磷酸水（40∶60）;流速1.0mL/min;进样量10μL;柱温25℃;检测波长285nm。

对照品溶液、供试品溶液HPLC色谱图如图2所示。

2.4.2 供试品溶液的制备精密称取A1～A6玄参样品粉末（过三号筛）各1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%甲醇20mL，密塞称重，浸泡1h，超声提取（功率500W，频率
40KHZ）30min，提取3次，合并滤液定容至100mL，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.4.3 对照品溶液的制备精密称取肉桂酸对照品1.0mg，置于100mL量瓶中，加甲醇稀释成含肉桂酸10μg/mL的对照品溶液，冷藏备用。

2.5 线性关系考察精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合对照品溶液、肉桂酸对照品溶液1、5、10、15、20、25μL，按照“2.
3.1”项下哈巴苷、哈巴俄苷和“2.
4.1”项下肉桂酸色谱条件进样，以进样量（μg/mL）为横坐标X、峰面积Y为纵坐标进行回归。

结果见表2。

2.6 方法学考察精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷混合对照品溶液、肉桂酸对照品溶液各
10μL，按“2.3.1”项下哈巴苷、哈巴俄苷色谱条件和“2.4.1”项下肉桂酸色谱条件连续进样6次，结果哈巴苷峰面积RSD=0.76%，哈巴俄苷峰面积RSD=0.63%，肉桂酸峰面积RSD=1.3%，表明仪器精密度良好。

取A1样品粉末（过三号筛），6份，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备哈巴苷、哈巴俄苷供试品溶液，按“2.4.2”项下方法制备肉桂酸供试品溶液，分别依色谱条件测定并计算哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸含量，结果哈巴苷含量RSD=1.18%，哈巴俄苷含量
RSD=1.78%，肉桂酸含量RSD=1.82%，表明该方法重复性良好。

精密吸取哈巴苷和哈巴俄苷对照品溶液、肉桂酸对照品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h按相应色谱条件进行测定，结果哈巴苷含量RSD=1.14%，哈巴俄苷含量RSD=1.88%，肉桂酸含量RSD=0.81%，表明哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸对照品在24h内保持稳定。

取0.25g哈巴苷含量为0.53mg、哈巴俄苷含量为0.73mg的A1样品6份，精密称定，按表3精密加入适量哈巴苷、哈巴俄苷对照品，按“2.3.2”项下方法制备哈巴苷和哈巴俄苷供试品溶液，在“2.3.1”项下色谱条件測定并计算加样回收率;另取0.5g肉桂酸含量为0.46mg的A1样品，6份，精密称定，按表3精密加入适量肉桂酸对照品，按“2.4.2”项下方法制备肉桂酸供试品溶液，在“2.4.1”项下色谱条件下测定并计算加样回收率。

试验结果见表3。