微生物检验标准操作程序
34微生物限度检查标准操作规程
34微⽣物限度检查标准操作规程微⽣物限度检查标准操作规程1.⽬的：建⽴⼀个微⽣物限度检验标准操作规程。
2.范围：本公司的药品、原辅料、器具设备、⼯艺流程、⽣产环境和操作⼈员。
3.职责：微⽣物限度检验⼈员对实施本程序负责。
4.规程：4.1取样：按各《取样标准操作程序》，应随机抽取不少于检验⽤量（两个以上最少包装单位）的3倍量供试品。
每份供试品最低应取2个以上最少包装单位，膜剂不得少于4⽚。
4.2 培养基的制备：按“培养基制备标准操作规程”。
4.3 稀释剂的制备：称取pH7.0氯化钠-蛋⽩胨缓冲液14.63g，置1000ml三⾓瓶中，加纯化⽔1000ml，摇匀，加热溶解,于121℃⾼压蒸汽灭菌20min，备⽤。
4.4检验量：除另有规定外，每份供试品最低应取2个以上最⼩包装单位，膜剂不得少于4⽚。
⼀般供试品的检验量为10g或10ml；中药膜剂为100cm2。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml ⽤于阳性对照试验）。
4.5 试验前的准备：4.5.1将所有已灭菌的平⽫，三⾓瓶、吸管、量杯、研钵、稀释剂及供试品等移⾄⽆菌室的传递窗内，打开紫外灯消毒15min，风淋10s。
4.5.2开启⽆菌室紫外线灭菌灯20分钟。
4.5.3关闭紫外线灭菌灯，进⼊缓冲⼀室，⽤肥皂洗⼿，换⼯作鞋，除外⾐；进⼊缓冲⼆室，穿戴⽆菌⾐、帽、⼝罩，⽤消毒剂消毒双⼿，戴上⼿套，进⼊操作间。
4.5.4开启⼯作台，⽤⼄醇棉球擦⼿及供试品瓶、盒、袋等的开⼝处周围，待⼲后⽤灭菌剪⼑将供试品启封。
4.6操作:4.6.1供试液的制备:4.6.1.1固体、半固体或黏稠性供试品: 取供试品10g,置灭菌研钵中,以100ml稀释剂分次加⼊研磨,混匀使成1:10供试液。
4.6.1.2液体供试品：取供试品10ml，置灭菌锥形瓶中，加⼊90ml稀释剂，充分摇匀，即为1:10供试液，也可取原液作为供试液。
4.6.1.3胶囊剂和空⼼胶囊供试品：取供试品10g，分离囊帽与囊⾝，同置灭菌锥形瓶中，加100ml稀释剂。
微生物检验流程与质量控制
微生物检验流程与质量控制1.样品采集：选择合适的采样点和时间，采集样品。
保持样品的完整性和无菌状态，以防止外部污染。
2.样品处理：对样品进行处理，以便后续检测。
例如，食品样品可以进行破碎和稀释，以便检测微生物的存在和数量。
3.培养基制备：根据需要选择适当的培养基，准备培养基。
4.增菌：将样品接种到培养基中，以促进微生物的生长。
可使用平板法或液体培养法。
5.培养：将接种后的培养基放入恒温培养箱中进行培养。
根据不同的微生物种类和生长条件，培养时间可能会有所不同。
6.菌落计数：在培养期结束后，对培养基上的菌落进行计数。
可以使用目视计数、平板计数器和自动计数器等不同的方法。
7.鉴定：根据菌落形态、生理生化特性和分子生物学方法等进行鉴定。
常用的鉴定方法包括免疫学方法、PCR和测序等。
8.数据分析：对检测结果进行统计分析和解释，根据需求制作结果报告。
1.环境监测：定期对实验室环境进行空气和表面微生物监测，以确保实验室内无微生物污染。
2.培养基质量控制：对于常用的培养基，需要定期进行质量验证和性能测试，以确保培养基的质量稳定。
3.质控菌株：使用已知的质控菌株进行验证实验，以确保实验方法的准确性和可靠性。
4.内部质控：在每批样品中加入内部质控样品，以评估实验的准确度和一致性。
5.标准操作程序：编写标准操作程序（SOP），确保操作的一致性和准确性。
6.培养箱校准：定期校准恒温培养箱的温度，以确保培养条件的准确性。
7.培养基浓度验证：定期检验培养基的浓度，确保适当的细菌增殖。
8.定期培训：对实验人员进行定期培训，确保他们掌握正确的操作流程和技术。
9.实验记录和文件管理：准确记录每个实验的细节和结果，建立完善的文件管理体系。
通过以上流程和质量控制措施，可以确保微生物检验的结果准确和可靠。
这对于保证食品和饮水的安全性，以及制药产品的质量至关重要。
微生物限度检测操作步骤
微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。
以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。
-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。
2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。
-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。
3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。
-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。
-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。
4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。
-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。
5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。
-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。
6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。
-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。
以上是一般微生物限度检测的操作步骤。
具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。
在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
微生物限度检查操作规程
更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。
3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。
4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。
4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。
4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。
4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。
4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。
4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。
4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。
微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。
具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。
4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程⏹ 1. 目的：建立微生物限度检查的基本操作，为微生物检查人员提供正确的操作规程。
⏹ 2. 依据：《中华人民共和国药典》2010年版二部。
中华人民共和国卫生部《药品卫生检验方法》⏹ 3. 范围：本标准适用于QC化验室的微生物限度检查。
⏹ 4. 职责：QC微生物检验员对本标准的实施负责。
⏹ 5. 程序：⏹ 5.1. 定义：微生物限度检查法：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
⏹ 5.2. 实验用具：⏹电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75%酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。
⏹ 5.3. 培养基：⏹ 5.3.1. 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、麦康凯琼脂培养基、枸橼酸盐培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基、蛋白胨水培养基、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸（MUG）培养基。
⏹ 5.3.2. 培养基的管理、配置应符合检定菌、培养基管理规程、培养基配置规程。
⏹ 5.4. 试液：甲基红试液、а-奈酚乙醇试液、40%氢氧化钾溶液、靛基质试液。
⏹ 5.5. 稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液、PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
⏹ 5.6. 供试品溶液的制备：取供试品（供试品如为固体，置研钵中研磨成细粉）放入试管中，加入适量的稀释剂制成1：10浓度的供试品溶液。
⏹ 5.7. 对照用菌液：控制菌检查均应作相应已知菌的对照试验，对照菌株为大肠杆菌[CMCC（B）44102]。
⏹ 5.8. 检查法：⏹除另有规定外，细菌的培养温度为30-35℃，霉菌的培养温度为23-28℃，控制菌的培养温度为35-37℃。
⏹ 5.8.1. 细菌、霉菌计数：⏹ 5.8.1.1. 平皿法⏹采用平皿法进行菌数测定时，应取适宜的连续2～3个稀释级的供试液。
⏹取供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
微生物检测操作规程
微生物检测操作规程《微生物检测操作规程》一、目的微生物检测操作规程旨在规范微生物检测实验的操作流程，确保检测结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本规程适用于实验室内进行微生物检测实验的操作人员，包括但不限于食品、医药、环境等领域的微生物检测。
三、操作流程1. 实验前准备（1）检查所需物品和设备的完整性和清洁度；（2）准备好所需的培养基、培养皿、移液器等实验用品；（3）佩戴实验服和手套，保持操作环境清洁。
2. 样品处理（1）按照标准操作程序采集样品，并确保准确记录样品信息；（2）样品处理前进行必要的预处理，如稀释、离心等。
3. 培养和检测（1）按照操作规程在培养基上均匀涂布样品；（2）标注培养皿的信息，包括样品编号、培养基种类、培养温度等；（3）放置在适当的培养温度下培养一定时间；（4）观察培养皿的生长情况，记录培养时间和结果。
4. 结果分析（1）根据培养结果进行初步鉴定和计数；（2）必要时进行进一步的分离、鉴定和鉴定。
四、质控要求（1）实验操作人员应具备相应的微生物检测知识和技能，并接受相关的培训；（2）严格遵守操作规程，确保实验操作的准确性和一致性；（3）定期对实验室设备、试剂和培养基等进行检查和质量控制，确保其完好和有效。
五、记录和报告实验过程中产生的数据和结果应当及时记录，并进行审查和验证。
对于检测结果，应当制作详细的技术报告，包括检测方法、样品信息、结果分析和结论等内容。
六、实施本规程由实验室主管负责组织实施，并由实验室操作人员严格遵守。
七、附则本规程自发布之日起施行，如有变动将另行制定修订，并及时通知相关人员。
以上即为《微生物检测操作规程》的内容，希望广大实验室操作人员严格按照规程执行，确保微生物检测工作的准确性和可靠性。
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程微生物检验操作规程1. 目的建立微生物检验标准操作规程，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于本公司相关的微生物检验活动的全过程。
3. 职责3.1 微生物检验员负责微生物检验的全过程；3.2 QC主管负责监督检查本规程的有效实施。
4. 操作规程4.1 微生物检验玻璃器皿吸管的洗涤4.1.1 一般的玻璃器皿（例如培养皿、试管、三角瓶等），可用毛刷及洗涤剂洗去灰尘、油垢，然后用自来水、蒸馏水充分冲洗，直至玻璃器皿内壁均匀分布一层薄的水膜，即器壁既不挂水珠也无条纹，即洗涤达到标准。
4.1.2 玻璃器皿内有污迹不能洗净时，可浸泡于洗液中，待器皿中有机物氧化分解后，取出用自来水、蒸馏水冲洗干净，备用。
4.1.3 新购的玻璃器皿先用2％盐酸浸泡，再用用自来水、蒸馏水充分冲洗。
4.2 器皿的包扎4.2.1 试管：塞上胶塞，然后用牛皮纸或报纸把试管头包扎起来。
做发酵试验时，将试管头塞上专用的耐高温PVC试管帽。
4.2.2 三角瓶、抽滤瓶：将三角瓶（抽滤瓶）口塞上胶塞，然后用牛皮纸把塞头部包起来。
4.2.3 吸管：将耐高温的移液枪头装盒，用用牛皮纸或报纸包裹。
4.2.4 平皿：10个为一组，用牛皮纸包裹。
4.3消毒和灭菌：4.3.1 化学灭菌：此法适用于微生物操作过程中不能加热、紫外线的地方。
如人手等。
（1）用75%的乙醇溶液或0.1%新洁尔灭擦拭或浸泡。
（2）一般用1～2%的甲醛液浸泡软管和用具。
（3）一般成品漂白粉的有效成分是25～32% 。
使用时配成有效成份的2%溶液洒在地面或容器内，（对金属有腐蚀作用）放置10～15min后冲洗即可。
（4）氯灭菌剂的能力以有效氯表示，将氯水配制成50～100PPm 的有效氯溶液，可用于浸泡，冲洗和表面杀菌。
但氯对金属有腐蚀作用。
4.3.2 物理灭菌：4.3.2.1 干热灭菌：适用于干燥的玻璃器皿（吸管、平皿等）、金属器具（镊子等）、固体试液、液状石蜡等。
微生物检验的基本程序
微生物检验的基本程序1 检验前的准备2样品的采集3样品的送检4样品的处理方法5 致病菌检验参考菌群的选择6样品的检验7检验结果的报告检验前的准备1.准备好所需的各种仪器：如冰箱、恒温培养箱、显微镜等2.按技术要求将各种玻璃仪器进行清洗、烘干、包扎、灭菌，冷却后送无菌室备用。
3.准备好实验所需的各种试剂、药品，制备好普通营养琼脂或其他选择性培养基。
根据需要分装试管或灭菌后倾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中备用。
4.做好无菌室或超净工作台的灭菌工作，提前1h灭菌30~60min。
5.检验人员的工作衣、鞋、帽、口罩等灭菌后备用。
6.工作人员进入无菌室后，实验没有完成之前不得随便出入无菌室。
微生物实验室检验<>流程无菌取样—样品均质—样液稀释—样品接种—恒温培养—结果观察食品微生物检测常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、酵母总数、霉菌总数，此类细菌不致病，但会严重影响食品的外观及风味。
目前常用微生物培养法来计数菌落，允许有该类菌落，但菌落总数不能超标。
致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等。
致病微生物在食品中是绝对不允许存在的，所以快速检测食品中是否存在有致病微生物，是食品安全检验的重中之重。
食品微生物检验<>指标我国卫生部颁布的食品微生物<>指标有菌落总数,大肠菌群和致病菌三项。
1.菌落总数：菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数。
2.大肠菌群：大肠菌群是寄居于人及温血动物肠道内的肠居菌，它随着的大便排出体外。
食品中如果大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。
3.致病菌：致病菌既能够引起人们发病的细菌。
对不同的食品和不同的场合，应该选择一定的参考菌群进行检验。
4.霉菌及其毒素：我国还没有制定出霉菌的具体指标，鉴于有很多霉菌能够产生毒素，引起疾病，故应该对产毒霉菌进行检验。
3-微生物检测一般流程
• 例如：
n=5,c=0，m=0 意味着有5个样品被检验某一病原体，如果有 一个样品中含有该病原体，则该批产品不可接 受。 n=5,c=0，m=102
意味着有5个样品被检验某一病原方案
有一个额外的参数，附加指标值M，用于区分可 接受的临界值和不可接受的值 在任何一个样品中，大于或等于M的值都是不可 接受的 根据被检测到的微生物的浓度，三级抽样方案 将食品分成三级 • 若计数小于m，则可接受 • 若计数大于m，小于M ，则处于可接受的临界处 • 若计数大于M ，则可接受
四、样品的处理
Sample Treatment
1、基本要求
（1）需将供试品制备成供试溶液或悬浮液。 供试液的制备不得改变污染微生物的数量和种类。 （2）做多项检验（微生物、化学、药理） 时：首先取出规定量的供试品供微生物学检验， 其余部分做其他检验。 （3）供试品收检后，应及时检验，否则，应存放在规定 的储存条件下。 （4）在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。 （5）供试品的取样必须在净化条件下，无菌操作。 （6）含有抑菌成分的供试品，消除抑菌成分的干扰。
C、人畜共患病病原微生物检验的取样方案
当怀疑某一动物产品可能带有人畜共患病病原体时，应结 合畜禽传染病学的基础知识，采取病原体最集中、最易检出的组 织或体液送实验室检验。
国际食品卫生规范委员会
International Commission on Microbiological Specification for Food, ICMSF
第二章 微生物检验的基本程序
Microorganism examination procedures
采集样品
样品保存
样品处理
选择参考菌群
微生物检验操作规程
微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。
样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。
如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。
在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。
1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。
结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。
将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。
2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。
3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。
然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。
待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。
SOP-微生物检测标准操作程序
1.细菌、真菌检测：1.1取1ml 培养上清液，均匀涂布于羊血平皿、沙保弱氏平皿中。
1.2倒置平板，写上患者姓名、日期、批号。
1.3分别于37℃、25℃生化培养箱中培养。
1.4 24h 、48h 、72h 看结果。
1.5 做好记录。
2.支原体检测在获得能提供系统发育学信息的16S rRNA 分子时需要利用通用PCR 引物对16S rRNA 分子进行扩增。
16S rRNA 序列的对比分析需要在这类“通用引物”的脱氧核糖核酸分子的辅助下完成。
27F 5`-----aga gtt tga tcy tgg yty ag----3`519R 5`-----gwa tta ccg cgg ckg ctg-----3` 2.1取1ml 细胞上清液，1000rpm ，离心3min 。
(注：此步骤针对悬浮细胞）2.2取上清至另一个1.5ml EP 管中，13000rpm ，离心10min 。
2.3吸弃上清，留沉淀作为PCR 模板。
2.4 配制反应体系20ul ：Taq 酶（R028A ）（DNA 聚合酶） 10ulPrimer F （前引物） 0.5ulPrimer R （后引物） 0.5ulTemplate （模板） 2ul灭菌水 补足至20ul 细胞制品细菌、真菌、支原体检测标准操作程序制定部门：同济大学医学院干细胞研究同济医院临床转化中心编号：SOP-TJSC-QM-005页数：1/2生效日期 年 月 日 目的：严格按照标准操作规程检测 范围：所有用于细胞制品的检测 职责：实验室质检员2.5反应条件95℃ 5min95℃ 30s55℃ 30s 32 cycles72℃ 50s72℃ 10min2.6 PCR产物扩增完后，配制1.5%琼脂糖支持介质（例：35mLTAE（一倍）缓冲液则加0.525g琼脂糖），凝固待用。
每个EP管加4ul 6×Loading buffer（指示剂、增加密度）。
2.7上样（每格5ul）：凝胶板第一格加DL2000 DNA Marker 5ul凝胶板第二格加阳性对照凝胶板第三格加阴性对照三格以后加检测样品2.7 120V，20min电泳检测。
微生物限度检验操作规程
1目的规范微生物限度检验操作，确保检验结果准确、可靠。
2依据《中国药典》2015版。
3范围本标准适用于微生物限度检验。
4责任中心化验室负责人：对本规程的实施负责。
中心化验室检验人员：严格按照本规程执行检验操作。
5程序5.1执行标准：《中国药典》2015版。
5.2抽样：照《取样标准操作规程》进行。
6内容6.1需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（MPN法）。
检查时，按已验证的计数方法进行供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
6.1.1设备、仪器及用具6.1.1.1设备微生物限度检测室、净化工作台、生化培养箱（30〜35£）、生化培养箱（20〜25£）、电热恒温水浴锅、烘箱、脉动真空灭菌柜、紫外灯等。
6.1.1.2仪器及器皿显微镜、托盘天平、锥形瓶、研钵、培养皿、量筒、试管及塞、移液枪及吸头、薄膜过滤器等。
6.1.1.3用具大、小橡皮乳头，洁净工作服、口罩、医用手套、接种环、酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、薄膜过滤膜等。
6.1.2试液6.1.2.1消毒液A.0.1%新洁尔灭溶液B.75%乙醇溶液6.1.2.2稀释液、试剂及配制A. pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾3.56g、无水磷酸氢二钠5.77g、氯化钠4.3g、蛋白胨1.0g,加纯化水1000ml，微温溶解，滤清，分装，1210C灭菌15分钟。
B.聚山梨酯80C.无菌十四烷酸异丙酯D. pH6.8无菌磷酸盐缓冲液6.1.3培养基胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基6.1.4操作方法6.1.4.1试验前准备6.1.4.1.1将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、试管、移液枪吸头（1ml、10ml）、量筒、稀释液、培养基等移至传递窗内。
每次试验所用物品必须事先计划，准备足够用量，避免操作中出入操作间。
6.1.4.1.2开启微生物检测室紫外灯和空调净化系统，并使其工作不低于30min。
食品微生物检验五个基本工作流程
食品微生物检验五个基本工作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!食品微生物检验的五大核心步骤在食品安全领域，微生物检验是一项至关重要的质量控制环节，它确保了食品免受有害微生物的污染，从而保护消费者的健康。
微生物检验程序
微生物检验程序第一步：准备实验所使用的器具（锥形瓶、刻度吸管、烧杯、培养皿、不锈钢小勺、玻璃珠等）。
用清水洗净，倒掉多余的水，把所用器具放入恒温干燥箱烘干待用。
第二步：配生理盐水（0.9% nacl）：用干净的烧杯按每份45g的用量配制总用量（一个品种一份生理盐水）。
配培养基（营养琼脂）：按所购买的培养基上所标明的用量（每1000g需**g）来配制，每个培养皿所需量为15ml。
加所需总量的水溶解，用牛皮纸包好口，放到水浴锅里加热直至完全溶解。
第三步：把烘干的玻璃器具全部用牛皮纸包好，把有液体的锥形瓶用牛皮纸封口，放到高压灭菌锅里加热到120~122度消毒灭菌（注意：放入灭菌锅之前先检查一下灭菌锅底部水位是不是高于加热管，如水位低于加热管时一定要加水，水没超过加热管不可加热，否则会有安全隐患，加热前先把灭菌锅锅盖上的放气小阀门打开，盖上锅盖，拧紧四周的密封螺栓，开启电源开关。
详细操作和注意事项参照高压灭菌锅的使用说明书）第四步：检验室在使用之前先用99%酒精把菌检台和房间各个角落消毒一遍，以免外界因素影响检验结果，以保证检验的准确性。
然后开启紫外灯对房间进行二次消毒灭菌（灭菌期间人员不能随意进出检验室，并把检验室的门随时关闭）第五步：等一切准备工作完毕之后检验人员换衣服、裤子、鞋子，戴好口罩和帽子方可进入检验室。
先把操作台上的酒精灯点燃，把准备好的培养皿、不锈钢药勺和刻度吸管放到操作台上待用，在先前准备好的盛有生理盐水的锥形瓶里放入5g的待检样品，摇晃锥形瓶使其分散均匀后用刻度吸管吸取10ml注入培养皿，然后将准备好的培养基倾注入培养皿，每皿约15ml（覆盖整个培养皿底部即可）使样品与培养基充分混合均匀，待培养基凝固后，把培养皿翻转倒置在恒温培养箱。
（培养箱温度控制在36度左右，培养基温度为45~50度左右，培养基倾注之前先把锥形瓶口用酒精灯消毒。
）第六步：过48小时后拿出培养皿，先用肉眼观察有没有细菌，然后用放大镜观察。
微生物检测步骤
微生物检测步骤work Information Technology Company.2020YEAR1.菌落总数操作步骤1.1检样稀释及培养1.1.1以无菌操作,取样25 g放入225mL灭菌生理盐水或灭菌乳钵中，经充分振摇作成1：10均匀稀释液。
1.1.2用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，做成1∶100的稀释液。
1.1.3另取1mL灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL火菌吸管。
1.1.4根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
1.1.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至45℃营养琼脂培养基，注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照1.1.6待琼脂凝固后，翻转平板(使平皿底朝上)，置36±1℃温箱内培养48±2h。
1.2菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
1.3菌落计数的报告1.3.1平板菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。
1.3.2稀释度的选择1.3.2.1应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见表1中例1)。
1.3.2.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。
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微生物检验标准操作程序
（一）菌落总数标准操作程序
1 范围
本操作程序规定了食品中菌落总数（aerobic plate count）的测定方法。
本操作程序适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本操作程序。
菌落总数aerobic plate count
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11 放大镜或/和菌落计数器或Petrifilm TM自动判读仪。
4 培养基和试剂
4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。
4.3 无菌生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
4.4 1 mol/L NaOH：称取40 g氢氧化钠溶于1000 mL蒸馏水中。
4.5 1 mol/L HCl：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1000 mL。
2012 年食源性致病菌监测工作手册中国 CDC 营养与食品安全所
2
4.6 Petrifilm TM菌落总数测试片和压板。
第一法平板计数法
5 检验程序
菌落总数平板计数的检验程序见图1。
36 ℃±1 ℃48 h±2 h
检样
25 g（mL）样品+225 mL稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，
各取1 mL分别加入无菌培养皿内
培养
计数各平板菌落数
计算菌落总数
每皿中加入15 mL～20 mL
平板计数琼脂培养基，混匀
报告
图1 菌落总数的检验程序
6 操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。
2012 年食源性致病菌监测工作手册中国 CDC 营养与食品安全所
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6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶/（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。
6.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6 及时将15 mL～20 mL冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养
6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。
水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。
6.3 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7 结果与报告
7.1 菌落总数的计算方法
7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：
2012 年食源性致病菌监测工作手册中国CDC 营养与食品安全所
4
……………………………………………………（1）d n n C N ) 1 .0( 2 1 式中：
N —样品中菌落数
ΣC —平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和
n1 —第一稀释度（低稀释倍数）平板个数
n2 —第二稀释度（高稀释倍数）平板个数
d —稀释因子（第一稀释度
1:100（第一稀释度）1:1000（第二稀释度）示例：稀释度
菌落数（CFU）232，244 33，35。