健脾益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子β1mRNA表达的影响

健脾益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子
β1mRNA表达的影响
摘要】目的研究健脾益肾方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中TGF-β1mRNA
表达的影响。

方法将大鼠随机分为4组，正常组、假手术组、模型组和健脾益肾
方治疗组。

术后第14天处死大鼠，取梗阻侧肾组织行RT-PCR 检测。

结果各组肾
组织均有TGF﹣β1mRNA表达，模型组大鼠表达较正常组及假手术组显著增加
(P<0.01)，治疗组表达较正常组及假手术组增加，但差异无显著性(P>0.05)，治疗
组表达较模型组明显减少(P<0.01)。

结论健脾益肾方可能通过抑制大鼠肾组织
TGF﹣β1mRNA的表达，延缓肾纤维化的进展，达到保护肾功能的目的。

【关键词】慢性肾衰竭肾纤维化 TGF﹣β1 健脾益肾方
【中图分类号】R289 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）21-0020-02
梗阻性肾病(Obstructive nephropathy)是由于泌尿道结构和/或功能改变，阻碍
了尿液的排出，最终导致肾功能衰竭的一种疾病[1]。

泌尿系结石是我国南方地区
常见、多发疾病，不少患者因为结石导致尿路梗阻时间过长，最终引起梗阻性肾病。

手术治疗虽是解除梗阻的首选方法，但部分患者因种种原因不能及时手术治
疗或术后肾脏间质继续纤维变性导致肾萎缩，最终导致慢性肾功能衰竭（CRF）。

健脾益肾方是我院李顺民教授根据多年临床治疗慢性肾功能衰竭总结的经验方，根据已完成的动物实验和临床观察表明，健脾益肾方能改善肾功能和脂质代谢，延缓肾纤维化的形成，从而延缓CRF病进程[2-6]。

因此，基于前期的研究，
我们进一步探讨健脾益肾方治疗梗阻性肾病的机制，为临床泌尿结石围手术期运
用保护肾功能提供依据。

1 材料与方法
1.1 实验动物及分组清洁级Wistar雄性大鼠24只（体重180～220g，购自广
东省医学实验动物中心），适应性喂养1周，随机分为4组：Ⅰ组对照组，Ⅱ组
假手术组，Ⅲ组模型组，Ⅳ组健脾益肾方组，各6只，供给清洁大鼠饲料，自由
饮水、进食，保持笼内清洁。

1.2 健脾益肾方组成及制备由黄芪、丹参、山药、生白术、肉苁蓉、白豆蔻、生大黄、炙甘草等八味组成，来源于深圳市中医院中药库，由深圳市中医院制剂
室制成煎剂，浓缩后高温消毒封装备用，浓度为每毫升含生药2.81g。

1.3 造模及给药方法大鼠自由饮水和进食一周以适应环境，术前禁食12h，不禁水。

造模大鼠腹腔注射10%水合氯醛(35mg/100 g体重)麻醉，取俯卧位固定于
手术台上，背部手术区备皮、消毒皮肤，铺无菌洞巾，在肋脊角左下lcm处做一
2cm左右切口，逐层切开皮下组织和筋膜，分离肾周脂肪囊，暴露肾脏，在其下
方找到并游离输尿管，4-0丝线结扎大鼠左输尿管，逐层缝合筋膜及皮肤。

假手
术组术中仅游离左输尿管,不作结扎。

手术后1天开始干预，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组每天生
理盐水3ml灌胃，Ⅳ组每天健脾益肾方浓缩液3ml (相当于生药11.24 g)灌胃。

每
组大鼠干预14天后处死，留取梗阻侧肾脏组织。

1.4 RT-PCR:按照TRIzol试剂说明提取组织总RNA，cDNA的合成参照逆转录扩
增试剂盒（MBI，美国）操作程序进行。

利用Primer5软件设计目的基因引物（见表1)。

反应体系50μl，反应条件：94℃预变性5分钟，94℃变性45s，52℃退火
30s，72℃延伸45s，经35个循环后充分延伸10分钟。

PCR产物经1.2%琼脂糖凝
胶电泳和凝胶成像系统分析后，计算待测指标与内参GAPDH吸光度A的比值。

表1 目的基因片段和内参物的引物序列及碱基数目
1.5 统计学处理所有数据均以x-±s表示。

采用SPSS13.0计算机软件对所得数
据进行分析，计量资料的比较采用单因素方差分析；计数资料采用卡方检验。

P>0.05为差异无统计学意义，P<0.05视为差异有统计学意义。

2 结果
正常组及假手术组大鼠肾组织TGF﹣β1mRNA少量表达，模型组大鼠表达较
正常组及假手术组显著增加(P<0.01)，治疗组表达较模型组明显减少(P<0.01)，治
疗组表达较正常组及假手术组增加，但差异无显著性(P>0.05)。

见图1，表2。

图1 各组大鼠肾脏组织TGF﹣β1mRNA表达
表2 各组大鼠肾脏组织TGF﹣β1mRNA表达水平
3讨论
动物实验表明，鼠肾完全梗阻24小时，就可出现15%的皮质肾单位和近髓单位丧失。

完全梗阻超过4周，肾小管浓缩功能出现永久的明显损害。

TGF﹣β1是一种功能复杂的多肽类生长因子，具有一定的组织特异性，在肾
组织中TGF﹣β1表达最多[7]。

在众多促纤维化的因子中，TGF﹣β1被认为是最重
要的促纤维化因子之一，它在肾小球硬化和肾间质纤维化中扮演着极为重要的角色。

有效切断TGF﹣β1的信号转导，是终止和减轻肾纤维化的关键。

健脾益肾方由黄芪、丹参、山药、白术、肉苁蓉、白豆蔻、大黄、(炙)甘草8
味组成，以黄芪、山药、白术益气健脾除湿，白豆蔻温中化湿行气，丹参活血化瘀，大黄通腑泻浊，肉苁蓉补肾壮阳、润肠通便，甘草调和诸药。

现代药理研究
证实，黄芪能清除氧自由基，通过抑制TGF﹣β1产生，减少细胞外基质生成，调
节细胞免疫及体液免疫，降低尿蛋白，保护肾功能。

丹参抑制肾成纤维细胞增生，改善肾间质纤维化，降低血黏度，抑制血小板聚集及黏附，防止和减少肾瘢痕形成，延缓尿毒症发生。

山药对慢性肾炎、肾功能不全、肾结核都有治疗作用，增
强机体免疫功能。

白术有显著而持久的利尿作用，能增强网状内皮系统的吞噬功能，促进细胞免疫功能。

肉苁蓉对肾功能有一定的保护作用，对内分泌系统有调
节作用，促进排便。

白豆蔻挥发油有健胃、祛风、止吐等作用。

大黄对多种细胞
因子和多肽生长因子均有抑制作用，使细胞外基质合成减少，细胞外基质降解增加，大黄鞣质对血管紧张素转换酶有明显特异性抑制作用，能降低血压，减少毛
细血管通透性，减轻尿蛋白，减轻肾硬化，延缓肾衰发生。

临床运用该方，健脾
益肾、通腑化浊，由此降低各种尿毒症毒素，改善临床症状，延缓CRF进展。

其
机制可能是通过增加有效肾单位，提高肌酐清除率，提高机体清除毒素的能力以
达到祛邪的目的。

本实验结果表明：健脾益肾方能有效降低UUO致CRF大鼠肾组织中TGF﹣
β1mRNA的表达，从而抑制纤维化进展，延缓CRF的发生。

充分说明健脾益肾方
具有良好的抗肾纤维化作用，值得进一步研究开发和临床推广应用。

参考文献
[1]吴阶平主编.《吴阶平泌尿外科学》.山东科学技术出版社，2004，05：535-543.
[2]周小梅，李顺民，周小舟，等.健脾益肾方对慢性肾功能衰竭大鼠脂调素及其基因表达的影
响[J].中国中医药科技，2004，11(3)：138—140.
[3]易无庸，杨曙东，李顺民，等.健脾益肾方治疗维持性血透患者营养不良的临床研究[J].新
中医，2004，36(11)：16—17.
[4]杨曙东，易无庸，唐新征，等.健脾益肾方治疗慢性肾功能衰竭营养不良40例临床研究[J].湖南中医药导报，2004，10(7)：3—5.
[5]李顺民，周小舟，郑义侯，等.健脾益肾方对慢性肾功能衰竭大鼠营养状态的影响[J].广州中医药大学学报，2003，20(3)：230—232.
[6]易铁钢，祁爱蓉，易无庸.健脾益肾方治疗慢性肾衰竭62例临床观察[J].中国中西医结合肾病杂志，2004，5(3)：149—151.
[7]Tangiguchi Y，Yorika K，Masaki T，et a1.Role of transforming growth factor-beta in glomerulonephritis[J].Int Med Res，1997，25(1)：71—80.
注：*广东省中医药局科研课题（2009043）。