实验5+细菌的芽孢染色法
微生物革兰氏染色法和芽孢染色法
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革兰氏染色法
实验器材
1）菌种： 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 2）染色剂：结晶紫，番红 3）器材：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、
双层瓶、擦镜纸等
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革兰氏染色法
实验步骤
混合涂片法涂片、干燥、固定 结晶紫初染1min， 水洗 碘液媒染1min，水洗 用滤纸吸去残水后， 将玻片倾斜，在白色背景下，用95%乙醇脱色，直至 流出的乙醇无色时，立即水洗 番红复染2min，水 洗 干燥后，镜检
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芽孢染色法原理
用弱碱性染料孔雀绿在加热条件下染色，使染料 不仅进入菌体，也可进入芽孢内。进入菌体的染 料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色后难以被水 洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保 留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色， 使芽孢和菌体易于区分。
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细菌芽孢染色法
实验器材 1）菌种：枯草芽孢杆菌 2）染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番 红水溶液 3）器材：显微镜、滴管、酒精灯、载玻 片、接种环等
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细菌芽孢染色法
实验步骤
1）改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 制备菌悬液 孔雀绿染液(2滴)水浴加热染色15-20 min 取1小滴，涂片，固定 水洗 番红染液复染23min，倾去染液，水洗 镜检 2）Schaeffer-Fulton氏染色法 涂片固定 孔雀绿染液在微火上加热染色5min 水洗 番红染液复染2min 水洗 镜检
第一步：初染:结晶紫使菌体着上蓝紫色； 第二步：媒染:碘和结晶紫形成大分子复 合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三 步：酒精脱色:细胞壁成分和构造不同， 出现不同的反应——G+菌：细胞不能被 酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将 细胞脱色，细胞无色；第四步:番红复染， G-菌呈红色， G+菌呈紫蓝色。
水产微生物实验—细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察
实验六细菌特殊构造的染色法及活细菌运动性的观察一、基础知识荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。
由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。
所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。
由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。
实验中介绍3种荚膜染色法，其中湿墨水法较简便、并适用于各种有荚膜的细菌。
芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。
由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，当用石炭酸复红、结晶紫等进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色，游离的芽孢呈淡红或淡蓝紫色的圆或椭圆形的圈。
为了使芽孢着色便于观察，可用芽孢染色法。
芽孢染色法的基本原理是：用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。
鞭毛是细菌的运动“器官”细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。
细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01—0.021xm，所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。
要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的Leifson氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。
实验四.细菌芽孢染色
实验四.细菌芽孢染色一. 目的要求：目的：掌握细菌芽孢染色方法内容：１．学习并掌握芽孢染色法２．初步了解芽孢杆菌的形态特征二. 基本原理：芽孢壁厚，透性低，着色脱色较困难。
因此先用着色力较强的孔雀绿，在加热的条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体内的染料经水洗脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂（如沙黄、番红、碱性复红）染色后，芽孢仍保留初染色剂的颜色，此时菌体被染成红色，芽孢呈绿色。
三. 器材1.菌种：培养了16-20小时左右的枯草杆菌（37℃）2.染色剂：5%的孔雀绿水溶液.0.5%番红水溶液石炭酸复红染液0.05%碱性复红蒸馏水3.仪器或其他用品：小试管.滴管.烧杯.试管架.载玻片.木夹子.显微镜等二甲苯.香柏油四. 操作步骤：一）方法1：1.取37℃培养了18-24小时的枯草杆菌作涂片，并干燥固定。
2.于载玻片上滴入3-5滴5%孔雀绿水溶液3.用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时约5min ,加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料4.倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
5.用0.5%的番红溶液（或0.5%沙黄水溶液或0.05%碱性复红）复染2分钟，水洗.6.制片干燥后用油镜观察。
芽孢呈绿色，菌体呈红色。
二）方法2：1.加1-2滴自来水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环培养16—20小时的枯草杆菌于试管中，充分混匀打散，制成弄的菌悬液。
2.加5%的孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。
3.将此试管浸于沸水浴中，加热20-30min .4.用接种环从试管底部挑取数环欲洁净的载玻片上，并涂布均匀，将玻片通过微火3次固定。
5.水洗至流出的水中无孔雀绿颜色为止。
6.加复染液染2-3分钟，水洗。
7.干燥后用油镜观察，芽孢绿色，菌体红色。
五.实验报告：1.绘图：枯草杆菌的芽孢形态，芽孢的着色位置。
革兰氏染色试验步骤
三、实验器材
1 、菌种：大肠埃希氏菌（Escherichia coli） 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 或巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）。
2 、试剂：革兰氏染液:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏典液、 95%乙醇、番红复染液； 芽孢染液:5%孔雀绿染色液、 0.5%番红水溶 液。
染色结果：阴性细菌（G-）： 染成红色
2 、芽孢染色原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着 色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦着色后 又难以脱色这一特点，用着色力强的染色剂孔雀绿 或石炭酸，在加热条件下，延长染色时间，使染料 不仅进入菌体也进入芽孢内，进入菌体的染料经水 洗后被脱色，而芽孢一经着色就难以被水洗脱，当 用对比度大的复染剂番红复染后，芽孢仍保留初染 剂的绿色，而菌体则被染成复染剂的红色。
内 （扦在接种线上） 培养：倒置平板，28℃培养5-7天。
镜检：拔出盖玻片，擦去背面培养物，将有菌的一 面放在载玻片上，直接镜检或将有菌的一面 朝下，放在滴有0.1%美蓝染色液载玻片中 镜检。
1 盖玻片 2 培养基
酵母菌形态观察方法（美蓝浸片法）
载玻片中央加一滴0.1%美蓝染色液。 挑取酵母菌苔少许，置美蓝染色液中混合均匀。 用镊子取盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢 将盖玻片放下，以免产生气泡影响观察。 用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况。
氏阳性菌。 典型放线菌的菌丝体分化产生各种形 态特征：
基内丝菌（较细、透明）
菌丝体 气生菌丝（较粗颜色较深）有无气生菌丝
孢子丝（直、波曲、各种螺旋或轮生）等，是分类鉴定的重要依据 孢子：分生孢子（球形，椭圆，杆状或柱状）、孢囊孢子、游动孢子
微生物检验技术项目七微生物染色及显微形态观察技术
二、染色技术
【报告内容】 1.简述普通光学显微镜的构造及工作原理； 2.简述普通光学显微镜的使用过程及保养方法； 3.分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的 金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的状态，包括在三 种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和 总放大率。
二、染色技术
任务7-2细菌的染色及形态结构观察
Thank you
二、染色技术
任务7-3 酵母菌、霉菌的染色及形态结构观察
7-3-1酵母菌的形态观察 【任务验收标准】 1.了解自然存在的酵母菌及其形态结构、出芽生殖方式 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。
二、染色技术
【任务完成条件】 1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝 酵母(Candida tropicalis)斜面菌种； 2.PDA培养基 3. 0.05％美蓝染色液(以pH 6.0的0.02mol/L磷酸缓冲 液配制)、碘液、0.04％的中性红染色液； 4.显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环等。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌 的活体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任 务。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活 体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任务。
二、染色技术
【工作任务】 1.细菌荚膜染色制片的制作及观察； 2.细菌芽孢染色制片的制作及观察。
二、染色技术
【任务指导】 （一）细菌的荚膜染色 1.负染色法 2.湿墨水法 3.干墨水法
芽孢染色法实验报告
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告一、引言芽孢染色法是一种常用的细菌染色方法，它可以用来观察和鉴定细菌中的芽孢。
芽孢是细菌在逆境条件下形成的一种耐受性结构，具有较强的抵抗力和存活能力。
通过芽孢染色法，我们可以更好地了解细菌的生物学特性和生存机制。
本实验旨在探究芽孢染色法的原理和操作方法，并通过观察染色后的细菌样本，对细菌的芽孢形成进行分析。
二、实验材料和方法1. 实验材料：- 细菌培养物（含有芽孢的细菌）- 甲苯- 碘酒- 茴香醛- 无水乙醇- 碱性苏木精溶液- 0.5% 还原石蕊溶液2. 实验方法：1) 取一支无菌的铂丝，沾取细菌培养物，均匀涂抹在玻璃片上。
2) 将玻璃片放置在火焰上烘烤，使细菌固定在玻璃片上。
3) 在固定的细菌上滴加甲苯，静置片刻，使甲苯渗透细菌。
4) 用吸纸吸去多余的甲苯。
5) 滴加碘酒，静置片刻，使细菌芽孢固定。
6) 用吸纸吸去多余的碘酒。
7) 滴加茴香醛，静置片刻，使细菌芽孢显色。
8) 用吸纸吸去多余的茴香醛。
9) 用无水乙醇洗去茴香醛。
10) 滴加碱性苏木精溶液，静置片刻，使细菌细胞显色。
11) 用吸纸吸去多余的碱性苏木精溶液。
12) 用0.5% 还原石蕊溶液洗去碱性苏木精溶液。
13) 用吸纸吸去多余的还原石蕊溶液。
14) 将玻璃片放在显微镜下观察。
三、实验结果与分析经过芽孢染色法处理后，我们观察到细菌样本中出现了芽孢结构。
芽孢呈现为圆形或椭圆形，较小的细胞内包裹着较大的芽孢结构。
芽孢在染色后呈现出深紫色或棕色，而细菌细胞则呈现出浅红色。
这种染色方式使得芽孢与细菌细胞形成鲜明的对比，便于观察和分析。
通过观察芽孢的形态和分布情况，我们可以进一步了解细菌的生物学特性。
芽孢的形成通常与环境中的营养物质不足、温度变化等逆境条件有关。
细菌通过形成芽孢结构，可以在不利的环境中存活，并在条件适宜时再次发芽繁殖。
芽孢的形成是细菌的一种适应策略，它们可以在恶劣的环境中存活较长时间，等待适宜的时机再次生长和繁殖。
实验五 细菌芽孢染色
实验五——细菌芽孢染色山东大学生命科学学院09级四班张行润200900140177 摘要细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。
所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。
关键词芽孢（gemma of a fungus）芽孢染色法（Spore staining）复染（counterstain）前言细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。
芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。
在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。
芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。
在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。
此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。
一、实验目的1.学习并掌握芽孢染色法2.了解芽孢杆菌的形态特征3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，液被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。
细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。
与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。
利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。
芽孢染色法实验报告
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告引言：芽孢染色法是一种常用的微生物实验方法，用于鉴定和观察细菌的芽孢形态和结构。
本实验通过对芽孢的染色和显微镜观察，旨在了解芽孢的特征和鉴定微生物。
实验材料和方法：材料：培养基、细菌液、石蜡刀、石蜡、石蜡刷、显微镜等。
方法：1. 取一片培养基，加入细菌液并充分混合。
2. 将混合液倒入培养皿中，并在培养皿中心划出一条刀口。
3. 将培养皿置于恒温箱中，在适当的温度下培养一段时间，使菌落生长并形成芽孢。
4. 取一片玻片，将石蜡刀预热至适当温度，刮取培养皿中的芽孢。
5. 将刮取的芽孢涂在玻片上，并用石蜡刷均匀涂抹。
6. 将玻片放入石蜡中，使其固定。
7. 将固定的玻片放入显微镜下观察和拍摄。
结果与讨论：通过芽孢染色法，我们观察到了芽孢的形态和结构，并进行了鉴定。
芽孢的形态：芽孢是一种细菌的生殖结构，通常呈椭圆形或圆柱形。
在显微镜下观察，芽孢的外部有一个坚硬的壳，内部则是细胞质和核酸物质。
芽孢的大小和形状可能因不同的细菌而异。
芽孢的结构：芽孢的结构包括中心小体、核心区、内外壳等部分。
中心小体是芽孢的核心，含有DNA和其他重要的细胞质成分。
核心区是由中心小体周围的细胞质组成，其中包含了细胞的各种酶和营养物质。
内外壳是芽孢的保护层，能够抵抗外界环境的压力和不良条件。
鉴定微生物：通过观察芽孢的形态和结构，可以初步鉴定微生物的种类。
不同种类的微生物芽孢在形态和结构上可能存在差异，因此可以通过对比已知的芽孢特征，来判断未知微生物的种类。
此外，芽孢染色法还可以帮助鉴定微生物的生长条件和适应性。
实验中的注意事项：在进行芽孢染色实验时，需要注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，以避免外界细菌的污染。
2. 实验过程中要注意安全，避免接触有害物质和高温设备。
3. 实验前要熟悉显微镜的使用方法，并保持显微镜的清洁和调试。
4. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，以防止细菌的传播和感染。
芽孢染色法,实验报告(共4篇)
芽孢染色法,实验报告(共4篇)第一篇：芽孢染色法的介绍芽孢染色法是一种常见的微生物学实验方法，用来鉴定芽孢菌属的微生物。
芽孢是一种耐热、抗干燥的微生物，具有高度的抵抗力。
芽孢染色法是通过对芽孢进行特定的染色方法，将其区分出来。
整个过程需要一定的技术和经验，但是准确性较高，具有广泛的应用价值。
芽孢染色法通常采用的是后盖玫瑰染色法，这种方法可以使芽孢显现为紫色或红色，而其他细胞则呈现粉红色。
这种异染色效应可以清晰地区分出芽孢与其他微生物。
整个实验流程需要先将样品制备，然后进行固定、染色、脱色和显微观察等过程。
其中，脱色工作至关重要，需要根据样品类型和染色结果进行不同程度的脱色处理。
芽孢染色法在微生物学研究、食品卫生监测、化学工业、制药、农业等领域都有广泛的应用，并被广泛视为一种可靠的检测手段。
芽孢染色法是鉴定芽孢菌的常用方法之一，样品制备是整个实验流程的关键步骤之一。
样品采集需要注意无菌操作，以免在采集、贮存、传递过程中造成样品的污染。
通常采集的样品包括饮用水、土壤、食品、医院等具有可能存在芽孢菌属的环境。
样品制备主要分为前处理和后处理两个环节。
前处理通常包括样品的筛选、洗涤和杀菌处理。
样品筛选的过程中需要去除杂质和不易筛选的部分。
洗涤过程是为了去除样品表面的污垢、腐殖质和防止其他细菌的污染。
杀菌处理时，要选择合适的杀菌方法，同时对杀菌剂的用量和时间进行控制。
后处理通常包括提取和处理芽孢。
提取芽孢的方法通常采用加热和化学处理的方法，让其他微生物死亡，而芽孢则不受影响。
具体的处理方法根据实验需要和样品类型进行定制。
整个样品制备过程需要注意的是，要保持严谨的无菌操作，避免在制备过程中引入其他细菌，影响实验结果。
芽孢染色法是一种特殊的染色方法，需要严格控制每一个步骤。
对于不同的样品类型和设备要求，具体的操作步骤可能会有所不同。
一般而言，芽孢染色法的操作流程包括：准备工作、固定样品、染色、脱色和显微观察。
准备工作：包括准备好所需试剂和设备，做好垃圾清理和无菌操作。
实验5 细菌的芽孢染色法
材料
菌种:
苏云金芽孢杆菌 蜡样芽孢杆菌
染色剂：
5%孔雀绿水溶液 0.5%番红水溶液
仪器或其他用具：
Eppendorf管 Eppendorf管架 载玻片 显微镜 电磁炉 搪瓷烧杯
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方法
Schaeffer-Fulton氏染色法(P78)
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
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细菌芽孢染色原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色， 若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不 着色(芽孢呈无色透明状)。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一 旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。
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细菌芽孢染色原理
所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除 了用着色力强的染料外，还需要加热，以 促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上 的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色， 然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌 体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明 显地衬托出芽孢，便于观察。
染
2、水洗
滴加数滴 番红染液 在菌膜上， 染色 2min
不要直接冲菌膜
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镜
1、干燥 室温自然晾干
检
2、镜检 显微镜操作
或电吹风吹干
油镜使用
或吸水纸吸干
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制备菌悬液
1、滴生理盐水 生理盐水 2、制备菌悬液 挑取2-3环菌苔
与生理盐水混匀 均匀 在EP管中滴2 滴生理盐水
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染色
1、滴加孔雀绿染液 2、加热染色
或电吹风吹干
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染
1、滴孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
色
2、加热染色 用木夹夹住载 玻片一端，在 微火上加热
沸腾：菌体或芽孢囊破裂；
微生物实验预习报告 细菌革兰氏染色法及芽孢染色法实验
细菌革兰氏染色法及芽孢染色法实验一、实验目的1. 初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色的步骤；2. 掌握细菌芽孢染色的方法。
二、实验内容1. 制作细菌染色装片。
2. 进行革兰氏染色法操作。
三、实验材料和用具大肠杆菌(E．coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)菌液，枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)的斜面菌种。
革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、石炭酸复红液等)、香柏油、二甲苯和5％孔雀绿水溶液。
显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、吸水纸、试管、小滴管、酒精灯和烧杯。
四、操作步骤(一) 革兰氏染色1．涂菌用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，用接种环在洁净无脂的载玻片上做一薄而匀、直径约1cm的菌膜。
涂菌后将接种环火焰灭菌。
2. 干燥于空气中自然干燥。
亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥(温度不宜过高)。
3．固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常用加热法．即将细菌涂片向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止茵体烧焦、变形。
此制片可用于染色。
4. 初染于制片上滴加结晶紫染液，染1min后，用水洗去剩余染料。
5. 媒染滴加卢戈氏碘液，1min后水洗。
6. 脱色滴加95％乙醇脱色，摇动玻片至紫色不再为乙醇脱退为止(根据涂片之厚薄需时30s至1min水洗。
7. 复染滴加石炭酸复红液复染1min，水洗。
8．用滤纸吸干,油镜镜检。
(二)芽孢染色法1．方法1(1) 取37℃培养18-24h的枯草芽孢杆菌作涂片，并干燥，固定(参见“细胞单染色法”) 。
(2) 于载片上滴人3—5滴5％孔雀绿水溶液。
(3) 用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，自载玻片上出现蒸汽时开始计算时间约4-5min。
加热过程中切勿使染料蒸干，必要时可添加少许染料。
(4) 倾去染液，待玻片冷却后，用自来水冲洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5) 用0.5％沙黄水溶液(或o．05％碱性复红)复染1min，水洗。
芽孢染色法实验报告
芽孢染色法实验报告
实验目的：
通过芽孢染色法观察芽孢的形态和结构，了解芽孢在细菌中的
作用和意义。
实验原理：
芽孢染色法是一种特殊的染色方法，常用于观察芽孢的形态和
结构。
菌落中的芽孢外层被环绕着角质层保护，因此一般的染色
方法难以有效地染色芽孢。
芽孢染色法则通过将芽孢煮热，使芽
孢角质层溶解，使染色剂浸透芽孢内层，从而实现芽孢的染色。
实验步骤：
1.准备好菌落涂片，将其煮沸10分钟。
2.待涂片冷却至室温后，加入孢子绿，静置5分钟。
3.倒掉孢子绿，用自来水清洗涂片。
4.涂片再次煮沸5分钟，取出晾干。
5.涂片点少量石蜡油，装片，显微镜下观察孢子的形态和结构。
实验结果：
在显微镜下观察到了圆形芽孢，其直径约为1μm。
芽孢表面有着一层亮白色的角质层，角质层稳定且保护了孢子内层。
在通过芽孢染色法染色的时候，染料能够在芽孢内层有效地染色，从而明显地展现出芽孢的内部结构。
芽孢内层由细胞壁、细胞膜和细胞质组成，芽孢内部还一般会有一条小的附属结构，称为芽管。
实验结论：
通过此次芽孢染色法实验，我们观察到了芽孢的形态和结构，同时了解到了芽孢在细菌生命周期及其繁殖过程中的重要性。
此外，此实验也向我们介绍了一种特殊的细胞染色方法，为我们今后的实验研究提供了有力的手段。
实验3细菌芽孢染色
学习并掌握细菌的芽孢染色方法； 初步了解芽孢杆菌的形态特征。
二、基本原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不
易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽孢
不着色，但是一旦染色后又很难脱色。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的
亲和力不同，用不同的染料进行染色使芽孢
和菌体呈现不同的颜色而便于区别。
二、基本原理
所有的芽孢染色法都基于同一个原则：
除了用着色力强的染料外，还需要加热，
促进芽孢着色。染芽孢时，菌体也会着色,
然后水洗，芽孢的颜色难以渗出，菌体会
脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染,
菌体和芽孢呈现出不同的颜色，便于观察
三、实验器材
菌种 35-37℃培养20-24h的枯草芽孢杆菌 试剂 生理盐水、5%孔雀绿水溶液、蕃红染液 其他器材
干燥 过程中及时补充染液，切勿干涸 直至流出的水无色为止。 镜检
芽孢呈绿色，营养体为红色
作业
1.绘图标识枯草芽孢杆菌及芽孢形态，芽孢的着 生位置。 2.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪
些环节？
3.为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体
能染成不同的颜色?
4.如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题? 如果加热温度过高、 时间太长，又会怎么样呢？
(5)水洗，至流出的水中无孔雀绿颜色 为止。
(6)加番红染液，染2～3min后，倾去染液，不用水洗。
(7)干燥后用油镜观察。芽孢绿色，菌体红色。
2、方法三
(1)取斜面试管一支，另取9mL无菌 水的试管一支加无菌水于斜面试 管中，并用接种环充分均匀搅散 ，制成浓稠的菌液。 (2)加5％孔雀绿水溶液2～3滴于小 试管中．用接种环搅拌使染料与 菌液充分混合。
实验四_芽孢染色
实验四_芽孢染色一、实验目的1. 了解芽孢的特点和结构。
2. 掌握芽孢染色的方法，学会观察和区分芽孢的形态和位置。
二、实验原理芽孢是一种染色体紧密螺旋缩合形成的结构，由细胞内罕见的一部分原生质通过一系列特殊的步骤般，被包含在一层较厚的壳内形成。
芽孢外壳特固，能有效保护芽孢不受化学、物理和生物因素的损害，使它能在不利环境条件下存活并保持高度的代谢活性。
芽孢主要存在于革兰氏阳性菌中，包括厌氧和好氧菌，如芽孢杆菌属、枯草杆菌属、盘尼西林杆菌属、单胞菌属等。
芽孢染色的基本原理是利用芽孢囊膜的特殊性质和营养成分的变化。
芽孢囊壳的主要成分为卵白质和钙盐。
在染色之前可对芽孢进行加热，利用钙盐的昇华可以使芽孢囊壳变得更加透明，便于染色剂进入，从而增加染色效果。
芽孢染色方法主要有以下两种：1. 热染色法：将芽孢制备后直接在烧杀灭菌过程中染色。
2. 非热染色法（缩氢检法）：将制备好的菌液直接涂片，然后使用墨汁等染料溶液染色。
本实验主要采用非热染色法（缩氢检法）。
三、实验步骤1. 取一株芽孢形态清晰、大小适中、生长状态好的菌落（如芽孢杆菌）。
2. 在清洁无菌试管中加入适量无菌生理盐水，在摇匀胶状菌膜后，用吸管收集芽孢杆菌菌液，将菌液滴于无菌载玻片上（涂片），使其均匀收散。
3. 将载玻片放入干燥器中烘干（不必加热）。
4. 取一支已经确保无菌的簪子，将其每一端分别点入苏木精颜色较深的点墨汁（或其他合适的染色剂，如吲哚靛或碘溶液等），轻轻振动去除多余的染料。
5. 在载玻片上倒入适量的缩氢液（即1%硝酸酒石溶液，或其他适宜的试剂），待其渗入全部载玻片后倾倒出来。
6. 用清水将玻片冲洗干净，然后风干。
7. 利用显微镜进行观察和记录。
四、实验结果从图像中可以看到，芽孢囊在细胞内的位置不同，制备的菌落中的芽孢在染色后会呈现出不同的颜色。
一些芽孢囊壳相对较薄，颜色较浅，而一些芽孢囊壳相对较厚，颜色较深。
此外，一些菌种如枯草杆菌属的细胞内芽孢囊位置偏靠中心，此时需要使用比较高倍数的显微镜观察，才能清楚观察到其存在。
实验 细菌的革兰氏染色及芽孢染色法
（三）实验器材
1.活材料：
2.染色液和试剂：
革兰氏染色：培养12h-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis）和培养24h大肠杆菌（Escherichia coli） 芽孢染色：培养36 小时 的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis）
（7）水洗：用水洗去碘液。 （8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇 脱色20—25s至流出液无色，立即水洗。 （9）复染：滴加蕃红复染2min。 （10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。 （11）干燥：将染好的涂片放空气中晾干或者 用吸水纸吸干。 （12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最 后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
2.芽孢染色法原理：
Байду номын сангаас
细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着 色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着 色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据 芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一 特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个 原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热， 以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色， 然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会 脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌 体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬 托出芽孢，便于观察。
（五）实验报告
1.给出Bacillus thuringiensis和 Escherichia coli的形态图，并注明两菌的革 兰氏染色的反应性。 2. 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样 能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？ 3.绘图说明你所观察的枯草芽孢杆菌菌体形态， 芽孢的形态及着生位置。它们各呈什么颜色。 4.若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看 到芽孢囊和营养细胞，你认为这是什么原因？
芽孢染色
芽孢、荚膜和鞭毛染色，都是利用细菌细胞不同的构造部分与染料的亲和力不同，用各种特殊染色法使之显示出不同的颜色，籍以显微观察。
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别，芽孢壁厚，透性低，着色，脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料—孔雀石绿在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色；而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（沙黄）进行复染色，此时菌体即被染成红色，而芽孢难着色，仍呈绿色。
使之显示出不同的颜色，籍以显微镜观察。
荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成份是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景染色而把不着色透明的荚膜衬托出来，荚膜很薄，易变形，因此制片时一般不用热固定。
细菌的鞭毛极为纤细，直径在0.1微米以下，因此在普通光学显微镜下不能见到，只有用特殊的染色方法，才能把鞭毛显示出来，鞭毛的染色方法很多，但主要的原理都是采用不稳定的胶体溶液作媒染剂，在鞭毛上生成沉淀，加大鞭毛的直径，然后再进行染色，同时，培养稍久的菌，鞭毛易脱落，所以要用新鲜的菌体，一般是用经3~5代（每代培养时间16~20小时）的斜面，最后一代接到含0.8~1.2%琼脂的软琼脂培养基（带有冷凝水）经12~16小时培养的菌体为佳。
三、实验材料和用具：1．菌种：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）园褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）普通变形杆菌（Proteus vulgaris）萤光假单胞菌（Pseudomonas fluoroscens）丙酮丁醇梭状芽孢杆菌（Clostridium acetobutylicum）苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）北京棒状杆菌Asl.299（Corynebacterium pekinense）2．染液：（配方见附录Ⅰ）（1）芽孢染液：A、5%孔雀石绿水溶液B、0.5%沙黄水溶液（2）荚膜染液：34A、石碳酸复红染液B、5%黑色素水溶液（或用墨汁）（3）鞭毛染液：硝酸银染色：A液：鞭毛染色媒染剂B液：硝酸银溶液美蓝染色：媒染剂：同硝酸银染色A液美蓝染色液3．用具：显微镜、载玻片、玻片架、滤纸、接种环、无菌水、酒精灯、香柏油、二甲苯、火柴、擦镜纸等。
细菌的简单染色法和革兰氏染色法
实验一细菌的简单染色法和革兰氏染色法一、目的要求1.学习微生物涂片、染色的基本技术，并掌握革兰氏染色的方法。
2.初步认识细菌的形态特征，掌握无菌操作技术。
3.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
二、基本原理1. 简单染色法：用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
2. 革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
它是1884年由丹麦医生Gram创立的。
革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态特征而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏染色阴性细菌，用G-表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫－碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫－碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液(counterstain) 。
碱性染料的作用象在细菌的简单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。
芽孢染色液(Scharffer-Fulton 法)说明书
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介：
又称芽胞染色液,观察菌体芽孢结构染色后菌体为红色，芽孢为绿色。
细菌是否有芽孢以及芽孢的形状和位置都是细菌的重要特征，细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂、致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。
芽孢有很强的抗热和抗化学物质的特性，当采用碱性染料并加热或延长染色时间时，使菌体和芽孢都能着色，再用蒸馏水冲洗脱去菌体颜色，但芽孢的颜色仍然可以保留，可以在显微镜下明显区分芽孢和营养体的形态。
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细菌芽孢染色原理
细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色 ， 细菌的芽孢 具有厚而致密的壁不易着色， 具有厚而致密的壁不易着色 若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不 着色(芽孢呈无色透明状) 着色(芽孢呈无色透明状)。 芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一 旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。 旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。
细菌芽孢的基本特性
芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力， 芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力， 尤其耐高温。有的芽胞可耐100℃ 100℃沸水煮沸 尤其耐高温。有的芽胞可耐100℃沸水煮沸 数小时。在一定条件下， 数小时。在一定条件下，芽孢保持活力数 年至数十年之久。高温灭菌的判断标准就 年至数十年之久。 是细菌的芽孢是否被杀灭。 是细菌的芽孢是否被杀灭。
细菌芽孢染色原理
所有的芽孢染色法都基于同一个原则： 所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除 了用着色力强的染料外，还需要加热， 了用着色力强的染料外，还需要加热， 以 促进芽孢着色，再使菌体脱色， 促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上 的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色， 的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色， 然后用对比度强的染料对菌体复染， 然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌 体和芽孢呈现出不同的颜色， 体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明 显地衬托出芽孢，便于观察。 显地衬托出芽孢，便于观察。
细菌芽孢的基本特性
芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、 芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、 乳酸和水分，会发芽形成菌体， 乳酸和水分，会发芽形成菌体，但细菌 的数量并未增加， 的数量并未增加，所以芽胞不是一种繁 殖方式。 殖方式。
芽胞抵抗力强的原因
1.芽胞含水量少，蛋白质受热后不易变性； 芽胞含水量少，蛋白质受热后不易变性； 芽胞含水量少 2.芽胞具有多层致密的厚膜，理化因素不 芽胞具有多层致密的厚膜， 芽胞具有多层致密的厚膜 易透入； 易透入； 3.芽胞中含有一种特有的化学组分吡啶二 芽胞中含有一种特有的化学组分吡啶二 羧酸（ ），DPA与钙结合生成的钙盐 羧酸（DPA）， ）， 与钙结合生成的钙盐 能提高芽胞中各种酶的热稳定性。 能提高芽胞中各种酶的热稳定性。
细菌芽孢染色的意义
芽孢又称内生孢子， 芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到 一定阶段在菌体内形成的休眠体， 一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常 呈圆形或椭圆形。 呈圆形或椭圆形。 细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、 细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽 孢在芽孢囊内的位置、 孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大 等特征是鉴定细菌的依据之一。 等特征是鉴定细菌的依据之一。
片
3、干燥 、 室温自然晾干
与生理盐水混匀 均匀涂布 滴半滴生理 盐水在载玻 片中央
或电吹风吹干
染
1、滴孔雀绿染液 、 5%孔雀绿染液 孔雀绿染液
色
2、加热染色 、 用木夹夹住载 玻片一端， 玻片一端，在 微火上加热
沸腾：菌体或芽孢囊破裂； 沸腾：菌体或芽孢囊破裂； 加热不够： 加热不够：芽孢难以着色。
细菌芽孢的基本特性
形成芽孢需要一定的外界条件， 形成芽孢需要一定的外界条件，这些条件 因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O 因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2)条 件下才能形成芽孢， 件下才能形成芽孢，而破伤风芽孢杆菌则 在无氧条件下形成芽孢。 在无氧条件下形成芽孢。通常细菌在营养 不足时形成芽胞， 不足时形成芽胞，但苏云金芽孢杆菌是例 外。
材料
菌种: 菌种
苏云金芽孢杆菌 蜡样芽孢杆菌
染色剂： 染色剂：
5%孔雀绿水溶液 孔雀绿水溶液 0.5%番红水溶液 番红水溶液
仪器或其他用具： 仪器或其他用具：
Eppendorf管 管 Eppendorf管架 管架 载玻片 显微镜 电磁炉 搪瓷烧杯
方法
Schaeffer-Fulton氏染色法(P78) Schaeffer-Fulton氏染法(P78) 氏染色法 改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 Schaeffer
至冒蒸汽开始计 维持5min 时，维持 注意补充染液， 注意补充染液， 以免涂片干涸
滴加数滴孔 雀绿染液在 菌膜上
脱色
待玻片冷却后， 待玻片冷却后，水洗脱色
不要直接冲菌膜
复
1、滴番红水溶液 、 0.5%番红水溶液 番红水溶液
染
2、水洗 、
滴加数滴 番红染液 在菌膜上， 在菌膜上， 染色 2min
实验五、细菌的芽孢染色法 实验五、
实验的目的要求
学习并掌握芽孢染色法 进一步了解芽孢杆菌的形态特征
细菌芽孢的基本构造
孢外壁 芽孢衣 皮层 芽孢壁 芽孢质膜 芽孢质 芽孢核区
芽胞具有多层厚而 致密的胞膜， 致密的胞膜，由内向 外依次为核心、内膜、 外依次为核心、内膜、 芽胞壁、皮质、外膜、 芽胞壁、皮质、外膜、 芽胞壳和芽胞外衣 .
管中滴2-3 在EP管中滴 管中滴 滴孔雀绿染液 沸水浴加热 15-20min
涂片固定
1、滴菌悬液 、 经孔雀绿染 色细菌悬液 2、涂片 、 用接种环 均匀涂布 3、干燥 、 室温自然晾干 通过酒精灯 火焰3次固定 火焰 次固定 或电吹风吹干 滴半滴菌悬液 在载玻片中央 4、固定 、
Schaeffer-Fulton氏染色法 Schaeffer-Fulton氏染色法
制片 染色 脱色 复染 镜检
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 改良的Schaeffer-Fulton氏染色法 Schaeffer
制备菌悬液 染色 涂片固定 脱色 复染 镜检
制
1、滴生理盐水 、 生理盐水 2、涂片 、 挑取少量菌苔
不要直接冲菌膜
镜
1、干燥 、 室温自然晾干
检
2、镜检 、 显微镜操作
或电吹风吹干
油镜使用
或吸水纸吸干
制备菌悬液
1、滴生理盐水 、 生理盐水 2、制备菌悬液 、 挑取2-3环菌苔 挑取 环菌苔
与生理盐水混匀 均匀 管中滴2 在EP管中滴 管中滴 滴生理盐水
染色
1、滴加孔雀绿染液 、 5%孔雀绿染液 孔雀绿染液 2、加热染色 、