观察DNA和RNA在细胞中的分布实验教案

实验一观察DNA和RNA在真核细胞中的分布
一、教学目标
1、知识与技能：
（1）学生分析说明DNA和RNA在结构上的不同点
（2）学生回顾显微镜的使用方法
2、过程与方法：
（1）学生掌握制作装片的方法
（2）使用试剂对材料进行染色
3、情感态度和价值观：培养学生的动手能力，提升学生积极、乐观的学习态度。

二、教学重点、难点
1、教学重点：实验原理、显微镜的使用
2、教学难点：甲基绿使DNA呈绿色，吡罗红使RNA呈红色。

三、实验原理与解析
(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。

(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。

用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。

(3)盐酸的作用
①盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。

四、实验器材
1．材料人的口腔上皮细胞，洋葱表皮细胞，根尖细胞，蛙或蟾蜍的血细胞，果肉细胞。

2．用具400 mL烧杯，250 mL烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜。

3．试剂及配制方法
（1）试剂质量分数为0．9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。

如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按A液的第二种方法配制（见下文）。

（2）染色剂的配制
①染色剂A液的两种配制方法
第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。

第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。

取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。

②染色剂B液的配制方法B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。

先取乙酸钠16．4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。

取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4．8的B液（缓冲液）。

③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。

取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。

应该注意的是该试剂应现用现配。

五、主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)
1.取材
①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。

2.水解
①解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
②保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。

3.冲洗涂片
①冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
②吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。

4.染色
①染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
②吸：吸去多余染色剂；
③盖：盖上盖玻片。

5.观察
①低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
②高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。

六、注意事项
1.材料的选择
①选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；
②常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)
2.取材要点
①取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
②取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。

3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。

4.安全要点
①用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；
②烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。

5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。

七、实验相关知识
1.加入8％盐酸的目是：改变细胞膜通透性，加速染色剂进入细胞；使染色剂中的DNA与蛋白质分离；杀死细胞，有利于DNA与染色剂结合。

2.为什么要进行水解：甲基绿和吡罗红不是活细胞所需要的物质，正常情况下，无法穿过细胞膜进入细胞内，因此实验中使用盐酸破坏细胞膜，增加细胞膜的通透性，以方便染色剂进入细胞，同时，盐酸还能使细胞中染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与甲基绿染色剂结合。

3.将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在盛有30℃温水的大烧杯中保温五分钟。

水浴加热的目的时使小烧杯：水浴加热的目的是使小烧杯受热均匀。

解离的目的是改变膜的通透性，便于染色济进入，且使染色体中的蛋白质和DNA分开，便于染色。