实验三 种子生活力测定
三种常用检测种子生活力方法比较(1)
三种常用检测种子生活力方法比较(1)随着种子在种植中所占的重要地位，各种检测种子生活力的方法也应运而生。
常用的检测种子生活力的方法有三种，分别是发芽率法、荧光法和电导率法。
本文将对这三种方法进行详细介绍，并进行比较。
一、发芽率法发芽率法是最常用的检测种子生活力的方法之一。
其主要原理是把一定数量的种子在一定的条件下进行发芽，然后通过计算发芽率来推断种子的生活力。
条件包括温度、湿度、光照和通风等，不同的作物和品种有不同的最适条件。
发芽率法检测种子主要有以下几个优点：一是操作简单；二是可大批量检测；三是检测结果真实可靠。
但是同时也存在着一些缺点，如检测时间长、结果受环境因素的影响等。
二、荧光法荧光法是一种新兴的检测种子生活力的方法。
荧光法主要利用了种子的细胞色素氧化酶体系在氧化还原体系下发生反应而使荧光物质荧光素产生荧光。
通过测定产生的荧光的强度来判断种子的生活力。
三、电导率法电导率法是一种利用种子中质量和导电能力的变化来测定种子生活力的方法。
其主要原理是将一定数量的种子放入导电液中，通过测定电导率的变化来判断种子的生活力。
导电液可以是盐水、糖水、电导液等。
三种方法比较从上述的介绍可以看出，每种方法都有其优点和缺点，没有一种方法是完美的。
所以在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。
一般来说，发芽率法适用于大批量检测，荧光法适用于单个种子检测，电导率法适用于不同品种间的比较。
除此之外，也可以选择不同的方法相互协作，如发芽率法和荧光法或者电导率法和发芽率法组合使用。
种子生活力的测定
欢迎阅读种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1gTTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供式粒数的%【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
种子生活力快速测定——教案
种子生活力快速测定------红墨水染色法一、教学目标：知识与能力熟悉红墨水染色法测定种子生活力的原理和方法及其计算过程与方法通过实验，培养学生动手操作的能力情感态度与价值观通过观察和实验等教学活动，培养学生科学的思维方法，实事求是的科学态度以及协作精神。
二、教学重点和难点显色过程既是重点又是难点三、教学准备（一）教师准备1.仪器设备、材料和试剂（1）仪器：培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切种子用)1块；烧杯1个；搪瓷盘1个；（2）试剂：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）做为染色剂。
（3）材料：玉米或小麦2.实验操作准备浸种实验组将待测种子在30～35℃温水中浸泡(大麦、小麦、籼谷6～8h , 玉米5h左右,梗谷2h), 以增强种胚的呼吸强度,使显色迅速。
对照组取充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，3．学生分好组（二）、学生准备学生课前认真的自学，自己查找相关资料，了解与弄清所需实验用具或用品的用途和用法，做好预习案及实验前的一切准备。
四、教学方法、教学手段：1、教学方法：实验探究。
2、教学手段：本节课以学生亲自动手实践为主，教师演示与辅导为辅的教学手段。
五、教学设计：（一）创设情景，导入新课：教师讲述：种子生活力就是种子发芽的潜在能力，通过对种子生活力的测定可以快速预测种子的发芽能力，为我们的播种选种提供理论依据，本节课我们就是学习怎样动手快速测定种子生活力。
（二）讲授新课1.将在预习过程中遇到的疑惑，带到课堂师生共同解决，师生共同回顾种子生活力的相关知识。
2.红墨水染色法测种子生活力（1）教师示范操作（同时讲解操作要点）步骤：①. 显色取吸胀的种子和死种子各50粒,用刀片沿种胚中央纵切为两半, 其中一半放入培养皿中，加适量红墨水溶液（以浸没种子为度），染色10-20min后倒去红墨水溶液,用水反复冲洗多次,至冲洗液无色为止。
②.观察对比观察冲洗后两组种子胚部着色情况。
种子活力的测定
种子活力的测定【实验目的】学习掌握TTC法和红墨水染色法快速测定种子活力的原理和方法【实验原理】TTC法：活种子的胚在呼吸作用过程中能进行氧化还原反应，而死种子则无此反应。
当TTC渗入活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC转变为红色的三苯基甲腙（TTF）；如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力。
红墨水染色法：活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%TTC法：活种子百分率（%）=（染成红色的种子粒数/实验种子的总粒数)×100%红墨水法：活种子百分率（%）=(不着色或着色很浅的种子粒数占实验种子/实验种子的总粒数) ×100%【实验材料、试剂】玉米、小麦种子0.3%(w/v)TTC5%红墨水（红墨水5ml+95ml自来水)【实验步骤】TTC法1. 将玉米、小麦种子用温水(30~35℃)浸泡3~6h，使种子充分吸胀。
2. 随机取种子30粒，沿种胚中央准确切开，其中一半置于培养皿中，加入0.3%TTC，以覆盖种子为宜，置于30 ℃观察培养箱中培养30min ；另30半粒玉米置于沸水中2min以杀死胚，同样加入0.5%TTC置于30 ℃培养箱中染色处理作为对照观察。
3. 倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗2次，观察种胚被染色的情况。
4.观察：种胚为红色为活种子，而不能染色或染色较浅的为死种子。
5%红墨水显色1.同样将吸胀的玉米、小麦种子30粒用单面刀沿种子胚的中心线纵切为两半；2.其中一半置于培养皿中，加入5%红墨水，以覆盖种子为宜，置于30 ℃培养箱中培养10min.染色后倒去红墨水并用水冲洗多次至冲洗液无色为止。
另30半粒玉米置于沸水中2min以杀死胚，同样加入5%红墨水置于30℃培养箱中染色处理作为对照观察；3.观察：凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。
种子生活力测定
二、四唑测定法
(一)四唑染色的测定原理
四唑（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）是一种可渗 透进种子组织中的无色溶液。它在种子组织里参与活 细胞的还原反应，从脱氢酶上接受氢离子，自身被还 原成红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替， 沉积在活组织处使其显红色，而死种子或种胚的某一 部位无生活力时，则不显红色。 DPNH2 + TTC—— DPN + TTCH + HCl (辅酶ⅠH2) (四唑) (辅酶I) (甲替) (氯化氢) 据此，可鉴别种子有无生活力及无生活力种子死 组织的部位。
（四）四唑测定程序
1.配制溶液
常用的四唑溶液浓度为0.1%~1.0%。0.1%和 0.5%的溶液常用于切开种胚种子的测定，而1%的 溶液常用于不切开种胚种子的测定。
2.试验样品的数取
每次至少测定200粒种子，从经净度分析后并 充分混合的净种子中，随机数取，每重复100粒或 少于100数的若干副重复。 如是测定发芽末期休眠种子的生活力，则只 用试验末期的休眠种子。
4.染色前的样品准备
（1）目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子 的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚 的主要构造，必须按其胚的营养组织的位置 和特性，采用适当的方法使胚的主要构造和 活的营养组织暴露出来。
（2）方法：准备方法因种子构造和胚的位置 不同而异（详见《农作物种子四唑染色技术 规定》）。
5.四唑染色
快速预测种子的发芽能力，以便在短期内 了解种子发芽状况。
（三）种子生活力测定的方法
根据测定原理，种子生活力测定方法可分 为生物化学法、组织化学法、软X射线法和荧 光分析法四类。 具体的方法有四唑染色法、溴麝香草酚兰 法、中性红法、二硝基苯法、红墨水染色法、 软X射线法等。
种子活力快速测定
• 【实验步骤】
• TTC法
• 1. 将玉米、小麦种子用温水(30~35℃)浸泡3~6h，使种子 充分吸胀。 • 2. 随机取种子30粒，沿种胚中央准确切开，其中一半置于 培养皿中，加入0.3%TTC，以覆盖种子为宜，置于30 ℃ 观察培养箱中培养30min ；另30半粒玉米置于沸水中 2min以杀死胚，同样加入0.5%TTC置于30 ℃培养箱中染 色处理作为对照观察。 • 3. 倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗2次，观察种胚被 染色的情况。 • 4.观察：种胚为红色为活种子，而不能染色或染色较浅的 为死种子。
种子活力是种子发芽和出苗 率、幼苗生长的潜势、植株抗 逆能力和生产潜力的总和，是 种子品质的重要指标。
•
长期以来都 用发芽试验检验 种子的质量，生 产实践表明，实 验室的发芽率与 田间的出苗率之 间往往存在很大 差距。
• 【实验原理】
• TTC法：活种子的胚在呼吸作用过程中能进行氧 化还原反应，而死种子则无此反应。当TTC渗入 活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶 (NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC 转变为红色的三苯基甲腙（TTF）；如果种胚死 亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅， 因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程 度来鉴定种子的生活力。
• TTC法：
• 活种子百分率（%）=（染成红色的种子粒 数/实验种子的总粒数)×100% • 红墨水法： • 活种子百分率（%）=(不着色或着色很浅的 种子粒数占实验种子/实验种子的总粒数) ×100%
• 红墨水染色法：活种子细胞的原生质膜具 有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚 细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进 入死细胞而染色。 • 种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总 数×100%
实验三种子生活力测定
进行实验操作
种子处理
对种子进行适当的处理，如消毒、催芽等，以准备进行生活力测定。
实验操作
按照实验要求，对种子进行染色、培养等操作，观察种子的萌发情况。
记录实验数据
数据记录
详细记录每个种子样本的萌发情况， 包括萌发时间、萌发率等。
数据整理
对实验数据进行整理和分析，得出种 子生活力的结论。
04
实验结果与分析
实验收获与体会
实验收获
通过实验三，我们学会了使用染色法测定种子的生活力，掌握了种子萌发的原理和影响因素，了解了种子质量对 农业生产的重要性。
实验体会
实验过程中，我们深刻体会到了科学研究的严谨性和细致性，明白了种子生活力测定的实际意义和应用价值，增 强了我们对农业科学研究的兴趣和信心。
对实验的改进建议
掌握测定种子生活力的方法
01
常用的测定方法有：染 色法、发芽试验法和电 导率法等。
02
染色法是通过染色剂对 种子进行染色，根据染 色结果判断种子是否具 有生活力。
03
发芽试验法是将种子置 于适宜的发芽条件下， 观察其发芽情况，计算 子的电导率来间接反映 种子的生活力。
实验结论总结
实验结论
根据实验结果和分析，得出种子生活力的测定结论，包括发芽率、 发芽速度、幼苗生长状况等方面的评价。
实验意义
阐述实验对于农业生产的重要意义，如指导种子选择、提高种植效 益等。
实验不足与展望
指出实验存在的不足之处，并提出改进和进一步研究的方向，为后 续研究提供参考和借鉴。
05
实验总结与展望
实验三种子生活力测 定
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验总结与展望
种子生活力测定原理及方法讲课讲稿
2012/03/10
种科092 雷红琴
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• 3、种子活力就是指高发芽率种子批间在田间 表现的差异。
• 种子活力是比发芽率更敏感的指标，在高发芽 率的种子批中，
• 仍然表现出活力的差异（高低）。通常发芽率 高的种子具有较高的活力，但两者不存在正相 关。
• 四、种子活力测定方法分类 种子活力测定方法达数十种，其分类方法
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出苗（如陈种子发芽率虽正常，但早春播种出苗 率低）。
• 二、种子活力测定的重要意义（同读本；颜启 传）
• 1、高活力种子的生产优越性 • 高活力种子具有明显的生长优势和生产潜力。 • (1)提高田间出苗率：高活力种子播到田间后
出苗迅速，均匀一致，保证苗全苗壮和作物的 田间密度，为增产打下良好的基础。
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活力测定有助于育种工作者在选择抗寒、抗病、 抗逆、早熟、丰产的作物新品种。
• 三、活力、生活力和发芽力的区别与联系 衡量种子生理质量有发芽力、生活力和活
力三个指标，三者有密切的关系，却有完全不 同的含义： • 1、种子生活力：是指种子发芽的潜在能力或 种胚具有的生命力。 • 通常用供检样品中活种子数占样品总数的百分 率。
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2、种子发芽力：是指种子在适宜条件下(实验室 控制条件下)长成
• 正常植株的能力。通常用供检样品中长成正常 幼苗数占样品总数的百分率，即发芽率表示。
• 在下列情况下，如果鉴定正确，生活力测定与 发芽率测定结果
• 基本是一致的： • ①无休眠、无硬实或破除了休眠和硬实。 • ②没有感染病害。
种子生活力测定PPT课件
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8
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少2次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗，不 要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情况 （可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活力 的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生活 力的种子。
有
无生活力的种子
生活Leabharlann 力的种子
.
9
任务5 计算： 种子生活力（%）=（有生活力的种子数／检测种子数）
模块三 快速测定种子生活力
➢ 红墨水染色法
.
1
种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生 命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。
.
2
项目一. 实验目的 ➢ 掌握快速测定种子发芽率的方法。 ➢ 能正确计算发芽率。
项目二. 实验方法 ➢ 红墨水染色法。
.
3
项目三. 实验原理
➢有生活力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸 收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不 染色。
×100%（保留整数） 先计算每份实验的种子生活力。再计算其平均生活力。
.
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项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称
种子生活力测定的记载表
产地 送检样品重（g）
品种名称
重复
Ⅰ
Ⅱ
检验粒数
种子 生活 力测 定
有生活力种子数 种子生活力
Ⅲ
Ⅳ
平均种子生活力
. 填表日期：
年月日
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项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中； 3）染色时间不足或太长，否则不易区分； 4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
实验3种子生活力的测定
实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。
特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。
通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC 还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。
【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。
药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
种子生活力测定原理及方法
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• (2)抵御不良环境条件： • 高活力种子由于生命力较强，对田间逆境具有 较强的抵抗能力。如干旱地区，高活力种子可 适当深播，并有足够能量顶出土面；而低活力 种子在深播情况下无力顶出土面。 (3)抗寒力强，适于早播： • 春天种糯玉米，为了及早上市，一般提早播种 （4/5～10覆膜），高活力种子对早春低温条 件具有抵抗能力。蔬菜早种可早上市，提高经
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• • • •
（1）种子发芽、幼苗生长速率和整齐度； （2）种子在不利环境条件下的出苗能力； （3）贮藏后，特别是能保持发芽力的性能。 高活力种子批即使在不适宜的环境条件下，仍 具有良好性能的潜力。 • 高活力种子发芽、出苗整齐、迅速，对不良环 境抵抗力强。 • 低活力种子，在适宜条件下虽能发芽，但发芽 缓慢，在不良环境条件下出苗不整齐，甚至不
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GI为发芽指数。 (5)简易活力指数测定：适用于发芽快速的作 物种子，如油菜等。 简易活力指数（SVI）＝G×S
式中：G为发芽率，S为幼苗长度(cm)或重量(g)。 (6)平均发芽天数(MLIT)测定： 平均发芽天数＝∑(Gt×Dt)/∑Gt 式中：Gt、Dt与发芽指数公式中相同。
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相应的发芽日数。∑为总和。 测定结果GI值与活力成正相关关系。 如玉米60/3+20/4+10/5=27; 60/3+30/4=27.5。数值越大：天数越少。 • （4）活力指数测定：发芽指数(GI)与幼苗长 度（cm）或重量（g）之积。 • 活力指数(VI)＝GI×S 式中：S为一定时期内幼苗长度(cm)或 幼苗重量(g)
8、种子生活力的快速测定(TTC法)
华南农业大学实验报告专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定（TTC法）姓名梁志雄日期2012-11-21一、实验原理有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF，如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力二、实验材料与实验器材水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯三、实验步骤1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热，将水稻种子用温水（30~35℃）浸泡2~6h，使种子充分吸涨2、随机抽取30粒水稻种子，小心剥去种皮，千万不要伤害种胚，然后把处理好的种子置于小白瓷碗中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为度，与恒温箱中（30~35℃）中保温0.5-1h。
3、染色结束后要立即进行鉴定，因放置太久会褪色。
倒出TTC溶液，再用清水将种子清洗1~2次，观察种胚染色的情况。
凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。
四、数据记录记录本实验测得染色种子25粒，无色种子5粒，其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的，说明其生长活性物质多，生命力强。
根据以下公式种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%可以知道种子活力=25/30*100%=83.3%六、实验总结有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF，且代谢物质越多，颜色越深，代谢强度越大。
从本实验结果来看，种子生命力总体上时比较强的，且其中的19粒染色较深的那些则更高。
另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。
三种常用检测种子生活力方法比较
植物生理学小论文三种常用检测种子生活力方法的比较班级：09级生物技术2班学号：系别：化学与生命科学系:雪婷日期：2012年5月15日浅谈三种常用检测种子生活力的方法雪婷（师学院化学与生命科学系675000）［摘要］种子活力是种子最重要的生理及生产指标之一，近年来，无论在育种选种方面还是植物生理实验方面都得到广泛关注。
本文基于对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的最新研究进展为基准，对TTC法、BTB法及红墨水染色法三种常见种子活力快速检测方法进行了简要综述。
结论：四氮呢染色法是蔓荆子种子生活力测定的最佳方法，生活力与发芽率呈显著的正相关。
关键词：种子活力；TTC法；BTB法；红墨水染色法；研究进展The discussion on three kinds of methods todetect seed vigorSUN-xueting（Chuxiong normal university, chuxiong, yunnan675000f China）Abstracts： The seed vigor is the most important physiological and seed production indexes・ In recent years♦ No matter in selecting seeds breeding or in plant physiology experiments・ The seedvigor is widely mentioned This paper based on the concept of the seed vigor influence factors of the seed vigor and the seed vigor rapid determ in at ion of the latest research progress Compari tion of three kinds of methods to determine seed vigor・Keywords： seed vigor ； Triphenyl Tetrazol ium Chloride method； Bromo— thymol blue method；red ink method；research progress种子生活力是检测种子质量最重要的指标之一，它对于种子的发育，萌发，成熟以及成长为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。
种子生活力测定
项目六. 结果报告
姓名：
送检单位 作物名称
种子生活力测定的记载 表
产地 送检样品重（g）
品种名称
重复 检验粒数
Ⅰ
Ⅱ
种子 生活 力测 定
有生活力种子数 种子生活力
Ⅲ
Ⅳ
平均种子生活力
填表日期：
年月日
项目七. 注意事项
1）切取时，一定要沿胚的中线切开； 2）染色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中； 3）染色时间不足或太长，否则不易区分； 4）冲洗次数不够，冲洗时把麦粒冲到废液杯中； 5）鉴别错误，把活种子看着死种子，把死种子看着活种子； 6）计算结果4组平均生活力保留整数。
任务1 浸泡：将种子用温水（约30--35℃）浸泡5h左右，使种 子充分吸胀，便于染色（一般用先泡好的种子）。
任务2 试样数取与切取：随机数取4份，每份50粒种子。沿种 胚中线纵向切成两半，取其中的一半（一定要带胚并且要 完整的暴露在切面上），置于编号的培养皿中备用。
任务3 样品染色：向上述4个培养皿中加入 5%的红墨水溶液，将切好的种子浸没，室 温下浸10min染色。
模块三 快速测定种子生活力
➢ 红墨水染色法
种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生 命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。
项目一. 实验目的 ➢ 掌握快速测定种子发芽率的方法。 ➢ 能正确计算发芽率。
项目二. 实验方法 ➢ 红墨水染色法。
项目三. 实验原理
➢有生活力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸 收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不 染色。
任务4 冲洗与观察鉴定：染色后的种子用清水冲洗种子 至少2次，直至洗液无红色为止（注意要缓慢冲洗， 不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情 况（可借助放大镜查看），凡种胚不着色的为有生活 力的种子，种胚和胚乳都被染成相同红色的就是无生 活力的种子。
种子活力测定—种子活力发芽与幼苗生长测定方法
幼苗生长测定和幼苗评定试验
Байду номын сангаас
一、幼苗生长测定（标准发芽试验）
1、适用于测定禾谷类或蔬菜种子的苗长和直根作物的幼根长。 如玉米、大豆种子的测定，采用纸巾卷直立发芽法，黑暗下 25±1℃发芽7天， 鉴别出正常幼苗。
一、幼苗生长测定
2、方法步骤 以小麦为例 （1）不同活力种子样品取样，每批数取种子25粒，2～4次重 复。 （2）取30 cm× 45 cm发芽纸1张，与长边平行在纸张中心划 一条直线，再在其上下每隔2 cm划平行线各5条，在中心线上画上 25点，隔距1 cm。 （3）将纸湿润，在每一点上播一粒种子，上盖相同大小的湿润 发芽纸，然后纸的基部向上折叠2 cm，再横卷成约4 cm直径的卷筒， 用橡皮圈固定，直立于保湿盒中。
二、幼苗评定试验：标准发芽试验 幼苗评定试验示意图
一、幼苗生长测定 如幼苗生长测定示意图
莴苣试验
一、幼苗生长测定 如幼苗生长测定示意图
二、幼苗评定试验（标准发芽试验）
1、适用于大粒豆类种子 豌豆或大豆种子 2、方法步骤 （1）从不同活力种子样品取试样4份（4次重复），各50粒。
二、幼苗评定试验（标准发芽试验）
2、方法步骤 （2）将1～2mm的粗沙清洗消毒后加水，使保持最大持水力约 15％（W/W），放入4个容积为15cm×20cm×10cm的聚乙烯盒中， 将种子播入砂中，再盖上湿砂3 cm，盒子装入聚乙烯袋中。 （3）在温度20℃、相对湿度95％～98％、光照12h、光强度 12000lx培养。 （4）6 d后取出幼苗洗净，统计健壮幼苗百分率，然后进行幼 苗评定。 健壮幼苗百分率高，则表明该批种子活力强。
二、幼苗评定试验（标准发芽试验）
再加湿砂3cm 先加湿砂2cm
实验三 种子生活力测定
衰弱和死亡部分的差异显现出来，判断种子生活力。 染色方法：将经过样品准备或不须准备的规定数量种子 分别放入四唑溶液（0.1%）里染色。 将不同重复的样品分别放在小烧杯中，加入四唑溶液， 以淹没种子为宜；
移置在30℃的黑暗恒温箱内或弱光下进行染色2小时。因 为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效 果。
实验方法和步骤
观察鉴定 凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的 鲜红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。
凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和 光泽，并且活营养组织不染色部分已超过1/2，或超 过允许范围，以及组织软化的，为不正常种子。
凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色， 且组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种 子。
实验方法和步骤
结果表示与报告
计算各个重复中有生活力的种子数，重复
间最大容许差距不得超过规定值；
平均百分率计算到最近似的整数。
实验三 种子生活力的测定
一、实验目的和要求
1、实验目的
了解四唑法测定种子生活力的原理
掌握主要农作物种子四唑染色测定种子生
活力的方法步骤和判别有无生活力的鉴定 标准。
一、实验目的和要求
2、实验要求
要求每组同学独立完成同一材料的生活力 测定。
二、实验原理
2、四唑染色法测定种子生活力的基本原理 利用四唑的无色溶液作为一种指示剂，以显示活 细胞中所发生的还原反应。 有生活力的种子胚部细胞具有脱氢酶，被种子吸 收的四唑盐类的无色溶液，参与了活细胞的还原 反应，从脱氢酶脱氢，被还原为红色而稳定的、 不扩散的、不溶于水的三苯基化合物。 无生活力的种子则无此反应。 借此可鉴别有生活力种子和无生活力种子。
实验三十九种子生活力的快速测定
实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。
但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。
本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。
Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。
二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。
种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。
当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。
三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。
2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。
3. 试剂：0.1﹪升汞。
四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。
1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。
1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。
1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。
1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。
1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。
2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。
植物种子生活力
种子生活力测定简介
种子发芽率是指在适宜的条件下、在规
定的时间内种子发芽的百分数。
它是衡量种子品质的主要依据，在确定
播种量及种子生理研究方面具有重要的作 用。
用直接发芽的方法测定种子发芽率所需时间
长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎 难以应用。 而利用快速测定的方法，则能在较短的时间 内测得种胚的生活力，以了解种子是否具有发芽 的潜力。
实验目的
学习三种快速测定种子生活力的方法： Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） Ⅲ.红墨水染色法
实验原理
Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 TTC还原反应
H N N C N N
TTC（无色）
N N Cl
+
+ 2H
C N N
TPF（红色）
+ HCl
凡有生命活力的种胚，在呼吸过程中都有氧化还原反应 TTC还原反应 种胚红色 由染色程度推 知种子的生活 力强弱
方法
注意事项
Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
（1）TTC溶液最好现用现配，如要贮藏则必须放在棕色瓶中， 并放在阴凉黑暗处，用完之后要回收。 （2）显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中。 （3）显色温度一般以25～35℃为宜，提高温度至40 ℃ ，可加 快反应速度。 （4）显色结束后要立即进行鉴定，放久会褪色。 （5）不同作物种子发芽率的测定，所用试剂的浓度、染色时 间、浸泡时间均不同。
BTB的变色范围为pH6.0～7.6
活种子 死种子或
生活力较 弱的种子
BTB呈黄色（6.0≤ pH＜7.1） BTB呈绿色（pH=7.1） BTB呈蓝色（7.1≤ pH力的细胞其原生质膜均具有选
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实验方法和步骤
四唑染色 目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的健壮、衰
弱和死亡部分的差异显现出来，判断种子生活力。 染色方法：将经过样品准备或不须准备的规定数量种子分
别放入四唑溶液（0.1%）里染色。 将不同重复的样品分别放在小烧杯中，加入四唑溶液，以
淹没种子为宜； 移置在30℃的黑暗恒温箱内或弱光下进行染色2小时。因
为光线可能使四唑盐类还原而降低其浓度，影响染色效果。
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实验方法和步骤
观察鉴定 凡是胚的主要构造及有关活营养组织染成有光泽的鲜
红色，且组织状态正常的，为有生活力种子。 凡是胚的主要构造局部不染色或染成异常的颜色和光
泽，并且活营养组织不染色部分已超过1/2，或超过 允许范围，以及组织软化的，为不正常种子。 凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色，且 组织已软腐或异常、虫蛀、损伤、腐烂的为死种子。
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实验方法和步骤
结果表示与报告 计算各个重复中有生活力的种子数，重复
间最大容许差距不得超过规定值； 平均百分率计算到最近似的整数。
实验三 种子生活力的测定
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一、实验目的和要求
1、实验目的
了解四唑法测定种子生活力的原理 掌握主要农作物种子四唑染色测定种子生
活力的方法步骤和判别有无生活力的鉴定 标准。
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一学独立完成同一材料的生活力 测定。
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二、实验原理
2、四唑染色法测定种子生活力的基本原理 利用四唑的无色溶液作为一种指示剂，以显示活
细胞中所发生的还原反应。 有生活力的种子胚部细胞具有脱氢酶，被种子吸
收的四唑盐类的无色溶液，参与了活细胞的还原 反应，从脱氢酶脱氢，被还原为红色而稳定的、 不扩散的、不溶于水的三苯基化合物。 无生活力的种子则无此反应。 借此可鉴别有生活力种子和无生活力种子。
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实验仪器设备
材料：玉米、大豆种子。 设备和药品 设备：冰箱、培养箱、镊子、解剖刀、刀
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片、吸水纸等。 药品：2，3，5-三苯氯化四氮唑。
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实验方法和步骤
样品准备 大豆：采用缓慢预湿后不须样品准备，但
在染色后观察鉴定前也需剥去种皮，以便 观察得更为清楚，鉴定更为可靠。 每组同学数取大豆种子300粒，每100粒为 1次重复，共3次重复。
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实验方法和步骤
样品准备 玉米：沿胚纵切。通过胚中轴和胚乳，纵向切开，