实验十一 DNA的纯化与鉴定
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8. 取10 ul DNA, 在 0.8％琼脂糖凝胶120 伏，1-2小时电泳，
9. 在凝胶成像系统上记录和分析结果。
四．结果与分析
1．计算ＤＮＡ的得率和纯度 2．记录电泳结果，并估算所提ＤＮＡ的
分子量。
四．结果分析
1. 为了获得较为完整的基因组ＤＮＡ在 实验中应注意什么问题？
实验七 DNA的纯化与鉴定
一．实验目的及背景
在生物技术实验中，我们粗提取的ＤＮＡ需分离纯化 去处蛋白质等杂质，我们都需要将最终的结果在琼脂 糖凝胶， 或ＰＡＧＥ凝胶上走电泳观察，以判断我们 实验的正确性以及DNA片段的完整性。同时通过紫外 分光光度计测定OD260,OD280的吸收值，以确定DNA 的浓度和纯度。
二. 实验试剂及器材
酚：氯仿：异戊醇（25：２４：１） ７０％乙醇 ＴＥ buffer RNase 琼脂糖 TBE电泳缓冲液 电泳设备 紫外分光光度计 凝胶成像系统
Hale Waihona Puke 三．实验方法1. 加入RNase至终浓度１０μg/ul ３７℃反应１ 小时。
2. 加入酚：氯仿：异戊醇（２５：２４：１） 等体积各抽提2-3次，取上清。
核酸经凝胶电泳后，在ＥＢ（溴化乙锭）中浸染，核 酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300-360mm波长的 紫外光，同时诱发出液长为５９０nm的红橙色荧光， 从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。 DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。 根据经验1OD260=0.05ug/ul DNA。DNA纯度的判断根 据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化 DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明 蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
3. 加入１/10倍体积３M NaAc(pH5.2)，２倍体 积无水乙醇混匀，－２０℃下10min-30min。
4. 15000rpm，离心10分钟。 5. ＤＮＡ沉淀用 ７０％乙醇洗２次， ３７℃
烘干ＤＮＡ（无乙醇）。 6. １００μl TE buffer溶解沉淀。
7 取20ul DNA母液稀释至1000μl，在紫 外分光光度计上测OD260,OD280。
9. 在凝胶成像系统上记录和分析结果。
四．结果与分析
1．计算ＤＮＡ的得率和纯度 2．记录电泳结果，并估算所提ＤＮＡ的
分子量。
四．结果分析
1. 为了获得较为完整的基因组ＤＮＡ在 实验中应注意什么问题？
实验七 DNA的纯化与鉴定
一．实验目的及背景
在生物技术实验中，我们粗提取的ＤＮＡ需分离纯化 去处蛋白质等杂质，我们都需要将最终的结果在琼脂 糖凝胶， 或ＰＡＧＥ凝胶上走电泳观察，以判断我们 实验的正确性以及DNA片段的完整性。同时通过紫外 分光光度计测定OD260,OD280的吸收值，以确定DNA 的浓度和纯度。
二. 实验试剂及器材
酚：氯仿：异戊醇（25：２４：１） ７０％乙醇 ＴＥ buffer RNase 琼脂糖 TBE电泳缓冲液 电泳设备 紫外分光光度计 凝胶成像系统
Hale Waihona Puke 三．实验方法1. 加入RNase至终浓度１０μg/ul ３７℃反应１ 小时。
2. 加入酚：氯仿：异戊醇（２５：２４：１） 等体积各抽提2-3次，取上清。
核酸经凝胶电泳后，在ＥＢ（溴化乙锭）中浸染，核 酸分子与溴化乙锭结合后， 能吸收300-360mm波长的 紫外光，同时诱发出液长为５９０nm的红橙色荧光， 从而可通过照像机摄影，凝胶成像系统记录实验结果。 DNA浓度的计算根据郎伯-比尔定理（E=abc）计算。 根据经验1OD260=0.05ug/ul DNA。DNA纯度的判断根 据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化 DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明 蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。
3. 加入１/10倍体积３M NaAc(pH5.2)，２倍体 积无水乙醇混匀，－２０℃下10min-30min。
4. 15000rpm，离心10分钟。 5. ＤＮＡ沉淀用 ７０％乙醇洗２次， ３７℃
烘干ＤＮＡ（无乙醇）。 6. １００μl TE buffer溶解沉淀。
7 取20ul DNA母液稀释至1000μl，在紫 外分光光度计上测OD260,OD280。