叶绿素的超声波辅助提取及组成分析

《叶绿素的超声波辅助提取及组成分析》个人实验方案设计报告及小组实验报告

实验小组人员

学院生物与化学工程学院专业化工

实验指导教师

开课学期2017 至2018 学年二学期

填报时间2018 年 6 月22 日

第二部分小组实验报告

一、实验部分

1、实验原料

名称规格产地

竹叶干燥、剪碎—

无水乙醇分析纯—

氧化铝颗粒—

石油醚分析纯—

丙酮分析纯—

2、实验仪器与装置（含装置图）

主要实验仪器：

仪器名称型号产地

超声波清洗仪——

真空泵——

烘箱——

电热炉——

布氏漏斗——

紫外分光光度计——

层析柱——

比色皿——

容量瓶25.00ml—另有烧杯、烧瓶、玻璃棒等。

装置图：

萃取瓶层析柱

蒸馏装置

过滤装置

3、竹叶中叶绿素提取实验步骤

1)开启超声波清洗器电源。加入适量水，调节温度50℃，调节功率200W，调节

超声频率28kHz。等待温度稳定。

2)准确称取2.00g毛竹叶粉末放入于玻璃瓶中，加入40ml乙醇使其完全浸没。盖

紧瓶盖。放入超声波清洗器中进行超声萃取。同时用手轻晃瓶子。

3)40min后，关闭超声波清洗器并取出瓶子。

4)将萃取液连同竹叶一并转入布氏漏斗进行真空抽滤。用适量乙醇洗涤瓶子及竹

叶。

5)将萃取液完全转移至烧瓶中，加入毛细管（防止暴沸），蒸馏浓缩。

6)待烧瓶中溶液冷却至室温。将烧瓶中溶液完全转移至25ml棕色容量瓶中，用乙

醇定容。

4、总叶绿素含量测定实验步骤

测定吸光度：采用紫外-可见分光光度计对它们的含量进行测定。叶绿素a和b的吸收光谱相互重叠，相互重叠的曲线在波长652 nm处，用这一波长可测定叶绿素的总含量。根据朗伯-比尔定律，取一定量的叶绿素提取液，经稀释后测定波长652 nm处的吸光度可用来计算叶绿素含量。

5、叶绿素各组分分离纯化实验步

叶绿素的柱层析分离：

1）湿法装柱：以石油醚为初始洗脱液，用湿法装柱的方法将适量中性氧化铝装入一洗净的、干燥的层析柱，排除气泡，保证装填紧密，放出石油醚，直到距柱表面仅1-2 mm 高，无论如何不能使液面低于柱表面。

2）上样：用长滴管将浓缩的叶绿素提取液沿柱壁小心的加到柱顶部。加完后，稍稍打开柱下部活塞，使液面下降至柱表面约1 mm处，关闭活塞，用少量石油醚冲洗柱壁，使液面下降至原高度。

3）洗脱：在柱顶装一储液器，先加入适量洗脱剂石油醚，打开柱下部活塞，让洗脱剂逐滴放出，层析开始，用锥型瓶收集流出液。注意观察流出液颜色，当橙黄色色带（胡

萝卜素）流出时，可改用石油醚—丙酮混合溶液（体积比可为1:1）作洗脱剂，洗脱第二个黄色带（叶黄素），再根据实验情况增加洗脱剂中丙酮比例分别洗脱叶绿素a（蓝绿色）和b（黄绿色）。将各组分分别收集保存。

二、实验结果与讨论

1、实验数据及结果处理（可列表）

注：超声功率（100%）为200W。

计算示例：（以第1组为示例）

C(mg/ml)=A652×1000

34.5

=

1.028

34.5

=29.80(mg/ml)

叶绿素含量=C×V T

W×1000×n=29.80×25.00

2.00×1000

=0.3725(mg/g)

式中，C：叶绿体色素的浓度(mg·L-1)；W：竹叶重(g)；V T：提取液总体积(mL)；

n：稀释倍数。

2、讨论

容易从上表得出，超声利于叶绿素的提取；通过第2、4、5三组对比，可以看出在此液固比范围内，对叶绿素提取没有太大影响。又11、12组对比发现，液固比越大，对叶绿素提取有利。造成两者区别可能的原因是有无超声；通过1、2、3和8、9、10组分别比较可发现温度升高对叶绿素萃取有利；通过2、6、7组对比发现延长超声萃取时间有利于叶绿素提取。

三、心得体会