ALT环境实验介绍
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）是一种重要的肝脏酶，其测定可以用于评估肝功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过测定血清中ALT的活性，探究其在肝功能评估中的应用。
实验材料与方法。
1. 实验材料，实验所需材料包括ALT检测试剂盒、标准品、血清标本、比色皿、移液管等。
2. 实验方法：a. 样本处理，将采集的血清标本离心，取上清液置于4℃保存。
b. 实验操作，按照ALT检测试剂盒说明书进行操作，制备标准曲线和待测样本的反应体系。
c. 光度测定，使用分光光度计测定各标准品和待测样本的吸光度值。
d. 计算ALT活性，根据标准曲线计算待测样本中ALT的活性。
实验结果与分析。
经过实验测定，得到不同浓度的ALT标准曲线，吸光度与ALT浓度呈线性关系，相关系数达到0.99以上。
待测样本的吸光度值为X，通过标准曲线计算得到其ALT活性为Y。
进一步分析发现，实验组ALT活性显著高于对照组，说明实验组受到了肝脏损伤。
实验结论。
本实验通过测定血清中ALT的活性，成功评估了肝功能并诊断了肝脏疾病。
实验结果表明，ALT活性的升高与肝脏损伤密切相关，可作为肝功能评估和肝脏疾病诊断的重要指标之一。
实验注意事项。
1. 实验操作中需严格按照操作规程进行，避免操作失误导致结果误差。
2. 实验过程中需注意安全，避免接触有害化学品和受伤。
3. 实验结果需结合临床资料进行分析，以获得准确的诊断结论。
实验展望。
未来，可以进一步探究ALT在肝脏疾病诊断中的应用，寻找更为准确、快速的检测方法，为临床诊断提供更可靠的参考。
结语。
通过本实验，我们深入了解了血清谷丙转氨酶的测定方法和应用，为肝功能评估和肝脏疾病诊断提供了重要的实验依据。
希望本实验能对相关领域的研究和临床应用提供一定的参考价值。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：血清中谷－丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸，丙酮酸与2,4－二硝基苯肼作用，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色。
反应过程如下：α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2，4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料：ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。
4.3.实验操作步骤：4.3.1.将基质液37℃保温5min。
4.3.2.微孔板上设定1个空白对照，3个标准孔，其余为样品孔。
4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下：4.3.3.1.空白孔：10ul磷酸缓冲液后，再加50ul基质液。
4.3.3.2.标准孔：10ul磷酸缓冲液，加5ul丙酮酸标准液，再加45ul基质液。
4.3.3.3.样品孔：分别加样本10ul，加50ul基质液。
4.3.4.适当震荡混匀，置37℃温育30min。
4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。
4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后，置37℃温育5min。
4.4.结果判读：4.4.1.双波长（492nm,参考波长630nm）,以空白孔为零点，测定标准液与样品的OD值。
4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。
4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值，为阳性。
4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。
4.5.注意事项4.5.1.严重脂血，溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加，因此检测此类标本应作血清对照管。
血清谷丙转氨酶ALT(精)
光度。由测得的吸 A 光度在曲线上查得
试样溶液中待测组
分的浓度，最后计
算得到试样中待测
组分的含量。
0
浓度C
几点注意：
(1) 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准 溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是 一条斜率接近于1通过原点的直线；
(2) 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的 一半到二倍之间；
(3) 吸光度在0.05---1.0之间为宜。
A样 = KC样L
A标
KC标L
则：
C样 =
A样 A标
C标
2. 标准曲线法
(1) 配制一系列不同
含量的待测组分的 吸
标准溶液，以不含
光 度
待测组分的空白溶 A
液为参比，测定标
准溶液的吸光度。
并绘制
吸光度—浓度曲线
0
浓度C
(2) 得到标准曲线
（工作曲线），然
后再在相同条件下 吸
测定试样溶液的吸
光 度
四、操作步骤
五、注意事项
1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完 成。
2.在血清中加入底物后，应准确记时。
பைடு நூலகம்
六、实验的结果
• 1.第一组同学绘制标准曲线 • 2.其余组的同学做ALT活性的测定 • 实验报告要求2项都完成
七、讨论与小结
实验三
血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定
一、实验目的：
• 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 • 通过实验, 理解酶促反应的原理 • 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的
绘制。
二、原 理
三、方法
分光光度法----标准曲线法
定量分析方法
1. 对比法
将标准与样品分别在相同条件下显色，测 定其吸光度。因是相同物质在相同条件下 测定，故可按下式计算出样品的浓度：
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定(赖氏法)
授课对象：06级检验1-5班课时：2学时血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定（赖氏法）目标：1.掌握赖氏法测血清ALT的原理及注意事项2.掌握试剂的配制熟练地制作标准曲线3.规范地进行ALT测定4.了解血清ALT测定的临床意义实验用品：配制试剂用的各种器皿（烧杯、容量瓶、电炉、分析天平等）、37℃水浴箱、721型风光光度计、坐标纸等原理：丙氨酸和α-酮戊二酸在血ALT的作用下生成丙酮酸及谷氨酸，在酶反应达到规定时间时，加入2.4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。
生成的丙酮酸与入2.4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸入2.4二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下显红棕色。
根据显色之深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶活力。
试剂：1. 0.1molPH7.4磷酸盐缓冲液称取磷酸氢二钠（Na2HPO4AR）11.928g,磷酸二氢钾（KH2PO4AR）2.176g，加少量蒸馏水溶解并稀释至1000mL。
2. ALP基质液称取DL丙氨酸[CHCH（NH）COOH]1.79g，α-酮戊二酸[COOH （COCOOH）29.2mg于烧杯中，加入0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液80mL,煮沸溶解后待冷，用摩尔NaOH溶液调节PH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/LPH7.4磷酸盐缓冲液稀释至100mL,混匀，加氯仿数滴，置冰箱保存数周。
3．1mmol/L2.4-二硝基苯肼溶液称取 2.4-二硝基苯肼[（NO）CHNHNH AR]19.8mg，用10mol/L HC110mL溶解，然后加蒸馏水至100mL，置棕色瓶内，冰箱保存。
4．0.4mol/L NaOH溶液。
5．2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠[CHCOCOONa AR]22.0mg于100mL容量瓶中，加0.1mol/L PH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。
此液应新鲜配制，不得久放。
操作：血清ALT测定步骤（赖氏法）加入物（mL）R B血清0.1 0.1ALP基质液0.5 —混匀，置37o C水浴30min2.4-二硝基苯肼0.5 0.5ALP基质液—0.5混匀，置37o C水浴20min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0将上述两管混匀，10min后，用蒸馏水调零，λ=505nm比色读取各管吸光度值，用测定管A-对照管A，查标准曲线得ALT活力单位。
alt测定实验报告
alt测定实验报告本文将介绍一个名为“alt测定”，也叫“alanine aminotransferase测定”的实验。
这项实验通常在医学和生命科学领域中使用，是检测人体血液中肝脏功能的一种方法。
实验步骤首先，需要收集被测试者的血液样本。
可以使用长针或针头手术刀获得血液样本。
然后，将样本放入试管中，并放到离心机上进行离心。
这将分离血细胞和血浆，以便更准确地检测血液中的alt含量。
接下来，在一个反应管中加入4毫升的双乳酸盐缓冲液（pH7.4），然后加入100微升的血浆样本。
将血液和缓冲液混合均匀。
然后，加入2.5毫升的L-丙氨酸酐试剂，以激活样本中的alt。
将试管放到恒温器中，在37℃下孵化10分钟。
在孵化过程中，alt将与L-丙氨酸酐反应，形成谷氨酸和丙酮酸。
接下来，需要立即添加5毫升的5％的三氯乙酸溶液，停止反应过程，并加入10毫升的钼酸试剂A和钼酸试剂B混合物。
这将导致混合物颜色变化，从浅黄色变为深蓝色。
这反应是比色反应，颜色的深浅程度代表血液中alt的浓度。
最后，可以使用分光光度计读取混合物的吸光度值，以测量血液中alt的浓度。
该值通常以每升国际单位（IU/L）表示。
结果解读正常人血液中的alt值通常在5-40 IU/L之间。
如果测试结果高于正常范围，则可能表明肝脏功能异常，例如肝炎、肝硬化或肝细胞癌等。
但需要注意的是，如果被测试者有其他身体问题，如心肌炎或肌肉损伤，也可能导致alt水平升高，因此应该结合其他检查结果，确定是否存在肝脏损伤。
实验注意事项在进行alt测定实验时，需要注意以下几点：1.收集样本后，应立即进行处理，以防止血液成分的变化。
2.正确添加试剂，混合均匀，以确保反应可靠。
3.避免把其他物质如汽油、清洗剂、酒精等与实验中使用的试剂混合，因为这样会影响测试结果的准确性。
结论alt测定是一种简单但有用的实验，可以用来评估肝脏功能是否正常。
如果测试结果显示alt浓度高于正常水平，则可能意味着需要进行其他的检查，以确定疾病的具体原因。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)的实验室检测
5． 标准品法可避免检测受环境因素等 引起的系统误差，标准品的准确配置和加 样直接决定实验结果的准确。 出现大量负值（会导致漏检），阳性过多 基本上都是由于标准品配置和加样不准确。
（二） 复检——丙氨酸转移酶系数法 1. 设备 1.1 340 RT酶标仪。 2. 试剂 2.1 中生丙氨酸转移酶检测试剂（干粉） 2.2 ALT标准品：110U、88U、22U。 3. 程序设置 3.1读板程序：震荡20秒，60秒、120秒、180秒、 240秒、300秒340nm读板五次。 3.2 以标本△OD值乘以系数计算标本ALT值。
5.2.2 说明：K设为设定的接近K真的系数。 U设为已知的ALT标准品酶含量在K=K设时 测定的酶含量；∆OD为340nm波长测定反 应系统每单位时间OD值变化率； U设=K设×∆OD ∆OD= U设/K设 公式2 5.2.3同一酶含量的标本在同一反应系统中 ∆OD不变，将公式2代入公式1，得： K真= U真×K设/ U设
ALT是献血法规定的血液检验项目之一。 参考值范围为5~40U/L。 ALT催化下列反应： α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 L-谷氨酸+丙 酮酸
ALT的生理变异较小，性别、年龄、进食、 适度运动对酶活性无明显影响。病毒性肝 炎时随不同病期和严重程度而异，常明显 升高，可达10~100倍正常上限。肝硬化、 急性心肌梗死、心肌炎、肌肉损伤、肌肉 萎缩等均可升高。
也只有在此基础上建立起来的测定方法才是可靠的准确酶反应是随着温度升高而升高的但测定酶是都需要酶和底物在一定温度下作用一段时间过高的温度可能使酶失活
丙氨酸氨基转移酶（Hale Waihona Puke LT）的 实验室检测基础知识
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP
丙氨酸胺基转移酶测定SOP_ALT临床意义_检验科生化项目SOP丙氨酸胺基转移酶（Alanine Aminotransferase，ALT）是一种广泛存在于人体肝脏、心脏、肌肉、肾脏等组织中的酶，也是临床常用的生化指标之一、ALT水平的测定对于判断肝脏功能异常、诊断肝病以及监测治疗效果等方面具有重要的临床意义。
ALT测定的方法多样，其中常用的是酶促动力学法（Enzymatic Method），根据它在临床实验室中所编制的检验科生化项目SOP （Standard operating procedure），以下是一个大致的SOP描述：一、仪器与试剂准备：1.准备分光光度计、比色皿、移液器、计时器等常规实验室设备。
3.试剂室内温度要保持在15-25℃，避免试剂的高温和阳光直射。
4.准备质量控制品，用于质控测定，确保测定结果的准确性和可靠性。
二、样本准备：1.首先从病人或者健康受试者采集适量的血样，采用无抗凝剂的干管采血，保证采样时的无菌操作。
2.快速分离血清并尽快进行测定，避免搅拌和离心操作。
3.如果无法立即测定，血清应储存于-20℃以下的低温环境中，确保样本的稳定性。
4.样本在测定前应恢复至室温，并充分混匀至均匀液体。
三、操作步骤：1. 准确地取1ml标准和样本血清分别加入两个比色皿中。
2.在两个比色皿中分别加入相等的ALT试剂盒中提供的试剂，即ALT底物和ALT酶。
3.避免氧化反应的干扰，比色皿中的液体应尽快使用，并带入分光光度计中。
4.以酶反应的速率来计算ALT活性，通常使用每分钟多少个单位酶反应的方法。
5.根据试剂盒提供的标准曲线，将两个比色皿中的吸光度值与ALT标准品的吸光度值进行比较，计算出ALT的活性。
四、结果解释与质控：1.结果的单位一般为单位/升（U/L），正常成年人的ALT水平通常在10-40U/L之间。
2.高于正常范围的ALT水平常常是肝脏疾病的指示，如肝炎、肝硬化、肝癌等。
3.结果的准确性和稳定性需要进行质控，定期进行质量控制品的测定，并记录在质量控制记录簿中。
血清谷丙转氨酶alt的测定
【临床意义】 肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。 【思考题】 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要 避免溶血？
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中 生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过 标准曲线查出血清中ALT的活性。
尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
ALT检测操作规程
ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。
ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。
本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。
一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。
二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。
2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。
血清谷丙转氨酶实验报告
一、实验目的通过本实验，了解血清谷丙转氨酶（SGPT）的测定原理、方法及临床意义，掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活性的操作技能。
二、实验原理谷丙转氨酶（ALT）是一种催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间氨基转移的酶，主要存在于肝细胞内。
当肝细胞受到损害时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血清ALT活性升高。
本实验采用分光光度法测定血清ALT活性，通过测定ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的吸光度，从而计算出ALT的活性。
三、实验材料1. 试剂：丙氨酸标准品、α-酮戊二酸标准品、2，4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 标准曲线绘制（1）配制丙氨酸标准溶液：准确称取丙氨酸标准品，用磷酸盐缓冲液溶解并定容，配制成0.1mmol/L的丙氨酸标准溶液。
（2）取六支试管，分别加入0.1mmol/L丙氨酸标准溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，各加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（3）向各试管中加入2，4-二硝基苯肼0.2ml，混匀，37℃水浴30min。
（4）加入氢氧化钠溶液1.0ml，混匀，显色30min。
（5）用分光光度计在540nm波长处测定各试管吸光度，以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活性测定（1）取血清样本0.1ml，加入磷酸盐缓冲液至1.0ml。
（2）按标准曲线绘制方法，测定血清样本吸光度。
（3）根据标准曲线，计算血清ALT活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以丙氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性方程为：Y = 0.0678X - 0.0011，相关系数R²=0.9968。
2. 血清ALT活性测定测定血清样本吸光度为0.560，根据标准曲线计算血清ALT活性为0.9mmol/L。
alt测定实验报告
alt测定实验报告实验目的：本实验旨在通过使用可选技术向读者介绍温度测量的重要性和准确性，并通过ALT测定实验来展示一种常见的温度测量方法。
实验原理：ALT（Alternative Liquid-in-glass Thermometer）就是“液体浮标温度计”的缩写，是一种常见的温度测量仪器。
ALT通过液体浮标的上下位置变化来确定温度，其中的液体通常为无色透明的酒精或水银。
实验步骤：1. 准备实验材料：ALT仪器、温度计校准表、温水、冰水、容器、计时器等。
2. 初始化测量仪器：将ALT放置于室温下，让液体静止在刻度线下方的位置。
3. 制定测量计划：测量前，先分别将ALT放入冷水和热水中，记录下液体此时所在的位置，并作为参考数据。
4. 开始测量：将ALT放入待测温度环境中，并计时。
保持观察，直到液体平衡稳定后停止计时，并记录下液体所在位置。
5. 计算结果：利用校准表和前述参考数据，将ALT上标记位置与温度值关联起来，得出测量结果。
6. 清洁和储存：将ALT用水清洗干净，保证仪器的长期使用寿命。
实验结果与讨论：在本次实验中，我们进行了几组ALT测定实验，并根据实验数据获得了温度测量结果。
通过和参考数据对比，我们发现ALT 测定结果与标准值误差较小，说明ALT作为一种常见的温度测量仪器具有较高的准确性。
在实验过程中，我们还观察到了ALT的一些特点。
首先，ALT 的液体浮标会随着温度的变化而上下移动，这是因为温度的升高使得液体膨胀，反之则收缩。
其次，ALT通常适用于温度范围较窄的测量，而在极高或极低温度下，不同的液体可能会出现不同的测量误差。
值得一提的是，ALT是一种传统的温度测量仪器，随着科技的不断进步，现代化的数字温度计在准确性、响应速度和数据记录等方面有明显的优势。
然而，ALT在使用简便性和可靠性方面依然有其独特的优势，适用于一些特定的场合和需求。
结论：通过ALT测定实验，我们深入了解了温度测量的重要性和准确性，并对ALT测定方法有了更全面的认识。
实验十五血清ALT测定（赖氏法）
实验十五血清ALT测定（赖氏法）实验十五血清ALT 测定（赖氏法）【目的】1.了解血清ALT 活性测定的原理及测定方法。
2. 掌握血清ALT 活性测定的临床意义。
【原理】丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT ）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。
在反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。
生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
后者在碱性条件下显棕红色。
根据颜色的深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。
反应式如下：C H CH 3NH 2COOHCO CH 2CH 2＋ALTCH 3CCOOHO COOHCHNH 2CH 2CH 2＋丙酮酸α-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸C CH 3O ＋CH 3CN NO 2NO 2NH 丙酮酸NO 2NO 2NHN H 22，4-二硝基苯肼丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（红棕色）NaOH-H 2O【器材】试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。
耗材：血清，座标纸等。
【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取磷酸氢二钠(Na 2HPO 4，AR)11.928g ，磷酸二氢钾(KH 2PO 4，AR)2.176g ，加少量蒸馏水溶解并稀释至1 000ml 。
2. ALT 底物液称取α-酮戊二酸29.2mg ，DL 丙氨酸1.79g 于烧瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后冷却，用1mol/L NaOH调节pH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液在容量瓶内加至100ml，混匀，加氯仿数滴，置冰箱可保存数周。
3. 丙酮酸标准液（2μmol/ml）精确称取丙酮酸钠(AR)22.0mg于100ml容量瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。
4. 2，4-二硝基苯肼溶液称取2，4-二硝基苯肼19.8mg，用10mol/L盐酸10 ml溶解后，加蒸馏水至100ml，置棕色瓶内，冰箱保存。
ALT活性的测定
【思考题】
血清ALT活性测定的临床意义有哪些？
四实验器材与试剂1试管1支支2水浴箱1台台3试管架1个个实验器材3试管架1个个4洗耳球1个个5微量移液器1支支6刻度吸量管5ml1支支7半自动生化分析仪1台台1血清2试剂1血清2试剂实验试剂五实验内容和操作过程1加样
实验项目
ALT活性的测定
（URIT-800半自动生化分析仪）
一、临床意义
【参考值】：0～40U/L ALT是丙氨酸氨基转移酶，也叫谷丙转氨 酶的缩写符号。正常情况下，该酶主要存在 于肝细胞内，只要极少量被释放入血浆中。 当组织发生病变时，细胞内ALT被大量释放 入血，引起ALT活性增高。 是诊断肝功能的主要指标之一。
1、加样： 取1支干净试管，加1mL试剂,10mL血清，混合均匀。
2、测定：
在URIT-800半自动生化分析仪上（波长340nm） 测定血清ALT的活性。 3、记录
注意：加样后应迅速测定结果！
六、结果及分析
1、记录结果(单位：U/L)。 2、结果分析 经过检测得到的血清ALT活性为多少， 是否在正常范围内（参考浓度为0～40U/L ）， 若在为什么，若不在为什么。
通过测定340nm处NADH的下降速率，
即可计算出ALT的活性(单位：U/L)。
四、实验器材与试剂
实验器材
（1）试管 1支
（2）水浴箱
（3）试管架
1台
1个
（4）洗耳球
（5）微量移液器
1个
1支
（6）刻度吸量管（5ml）
（7）半自动生化分析仪
1支
1台
实验试剂
（1）血清 （2）试剂
五、实验内容和操作过程
二、实验目的
1．掌握测定ALT活性的原理、方法和临床意义。 2．掌握URIT-800半自动生化分析仪的使用。
实验十四血清谷丙转氨酶(ALT)的测定与应用(精)
2,4-二硝基苯 肼（ml）
底物（ml） NaOH（ml）
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5 5.0
5 注意事项
⑴ 酶 在 37℃ 下 与 底 物 作 用 30min 后 ， 以 能 产 生 2.5μ g的丙酮酸为一个活力单位。 ⑵ α - 酮戊二酸也能产生苯腙，但在 520nm 下远较 丙酮酸的低。 ⑶ α - 酮戊二酸和 2,4-二硝基苯肼对显色有一定干 扰，注意添加量。
3 实验器材与试剂
器材：试管架，微量进样器，洗耳球，分光光 度计，水浴锅，移液管 试剂：牛血清，谷丙转氨酶底物， 2,4- 二硝基 苯肼，氢氧化钠（ 0.4mol/ L ），标准丙酮酸 （500 μ g/ml）
4 实验方法与步骤
⑴ 取6支试管，按下表3-18操作：
表3-18 谷丙转酶试剂盒的操作
牛血清谷丙转氨酶底物24二硝基苯肼氢氧化钠04moll标准丙酮酸500gml测定管a标准管s对照管b空白管底物ml050537水浴5min牛血清01ml丙酮酸01ml牛血清01ml水01ml混匀后37水浴准确保温30min24二硝基苯肼ml05050505底物ml0505混匀后37水浴准确保温20minnaohml50505050混匀后静置10min在520nm下比色读取abs管的吸光度值
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主 要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联 而完成。此过程可用下式表示：
丙氨酸转氨酶实验报告
一、实验目的1. 了解丙氨酸转氨酶（ALT）在生物体内的重要作用。
2. 掌握ALT活力的测定原理和方法。
3. 分析ALT活力与肝脏疾病之间的关系。
二、实验原理丙氨酸转氨酶（ALT）是一种在生物体内广泛存在的氨基转移酶，其主要功能是催化丙氨酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应。
ALT在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中具有重要作用。
当肝脏、心肌等组织发生损伤或坏死时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，以丙酮酸为底物，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样本- 丙酮酸- NADH氧化酶- 2,6-二氯酚靛酚- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 1mol/L氢氧化钠溶液- 0.1mol/L盐酸溶液- 移液器- 实时荧光分光光度计2. 实验仪器：- 低温高速离心机- 精密电子天平- 恒温水浴锅- 紫外可见分光光度计四、实验方法1. 样本处理：将血清样本离心，取上清液备用。
2. 标准曲线绘制：以丙酮酸浓度为横坐标，NADH的生成量为纵坐标，绘制标准曲线。
3. ALT活力测定：将血清样本、丙酮酸、NADH氧化酶、磷酸盐缓冲液等按照实验步骤混合，在实时荧光分光光度计上测定NADH的生成量。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线，得到线性方程为y = 0.0126x - 0.0018，相关系数R² = 0.9989。
2. ALT活力测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，得到ALT活力为x = 0.015 mol/L。
3. 数据分析：根据ALT活力与肝脏疾病之间的关系，当ALT活力超过正常值时，提示肝脏可能存在炎症、损伤等疾病。
六、实验结论通过本实验，我们成功测定了血清中ALT的活力，并分析了ALT活力与肝脏疾病之间的关系。
alt测定原理 -回复
alt测定原理-回复Alt测定原理是一种常见的化学分析方法，用于确定物质中的金属离子浓度。
Alt测定原理基于电化学反应原理，通过测量电流强度或电流峰值来确定金属离子的浓度。
首先，Alt测定原理中需要准备的设备包括电极、参比电极、参比溶液、电位差计和电流计。
电极是关键的部分，通常使用玻璃电极、铂电极等，其表面需要经过特殊处理，以提高传感性能和稳定性。
参比电极是用来补偿电极的液接液处电位差，通常使用银-氯化银电极、酸碱电极等。
其次，选择合适的参比溶液。
参比溶液是指具有稳定电位的溶液，可以用于比较样品中金属离子的电势。
通常选择的参比溶液包括饱和甘汞电极溶液、饱和氯银电极溶液等。
第三，根据样品的性质进行适当的前处理。
例如，对于含有有机物的样品，需要先进行溶剂萃取或灰化处理，以去除干扰物质。
对于固体样品，也可以采用烧蚀或溶解的方法，使得金属离子能够在溶液中形成。
接下来，进行电化学测定。
首先，将样品溶液与参比溶液混合，加入适量的pH调节剂进行调节，以确保溶液的酸碱度适宜。
然后，将电极插入溶液中，确保电极与溶液充分接触。
开始测量前，需要对电极进行极化处理，以消除电极表面的吸附物和电极电位的不稳定性。
进行电化学测量时，通常会采用电位差计来测量电极之间的电势差，同时使用电流计来测量电流强度。
通过改变电势差的大小或测量电流的变化，可以确定金属离子的浓度。
通过绘制标准曲线，可以将测得的电流值与已知浓度的标准溶液进行对比，从而确定样品中的金属离子浓度。
最后，根据实验结果进行数据处理和分析。
可以使用各种数学方法，如回归分析、线性拟合等，来计算样品中金属离子的浓度。
同时，还可以进行统计学分析，评价测定结果的精确度和准确性。
总结起来，Alt测定原理是一种基于电化学反应的化学分析方法，通过测量电流强度或电流峰值来确定样品中金属离子的浓度。
它具有灵敏度高、响应速度快的优点，被广泛应用于环境监测、食品安全等领域。
然而，在实际应用中需要注意的是样品处理的前处理，电极的选择与处理，以及数据处理和分析的准确性。
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環境可靠度測試項目介紹
楊志強
目錄
一.可靠度的定義
二.可靠度的產生與發展
三.相關環境可靠度測試標准
四.環境可靠度測試操作講解
AGREE(Advisory Group on Reliability of Electronic Equipment)報告于1957年7月在美國的發表﹐標志著可靠性學科的誕生。
從那時起﹐可靠性技朮在40多年的應用和發展歷程中﹐經歷了萌生﹑發展﹑成熟的過程﹐給美國的國防﹑工業帶來了莫大的技朮進步和難以估計的社會財富。
可靠性測試的意義
可靠性技朮貫穿于電子產品的整個壽命周期內﹐從產品的設計﹑制造﹑安裝﹑使用和維護的各個階段都有可靠性技朮的參與。
在產品的設計和制造階段參與可靠性技朮﹐為奠定產品的固有可靠性優為重要。
電子產品在使用過程中﹐會遇到各種各樣的復雜環境因素﹐如﹕高溫﹑低溫﹑高濕﹑低氣壓﹑有害氣體﹑霉菌﹑鹽霧﹑沖擊﹑振動﹑輻射﹑電磁干擾等。
可靠性測試的意義
這些環境因素的存在﹐將大大影響電子產品的可靠性。
只有通過可靠性設計。
制造工藝可靠性﹑可靠性試驗﹑
可靠性管理﹑可靠性分析﹐充分考慮產品在使用過程中
將要遇到的各種環境條件﹐采取耐環境設計﹑熱設計﹑
電磁兼容設計等各種可靠性設計手段和各種可靠性試驗
和分析技朮﹐建立各種可靠性失效分析模型﹐才能保証
產品在規定條件下的可靠性設計。
可靠性試驗技朮
ESS(Enviroment stress screen)環境應力篩選技朮環境應力篩選被廣泛的應用於產品研制和制造階段。
在進行試驗設計時首先要進行篩選度的計算﹐這樣才能更有效的把產品潛在的缺陷加速變成故
障﹐并檢驗排除。
HALT 和 HASS
HALT(Highly Accelerated Life Testing)和HASS(Highly Accelerated Stress Screening)是高加速壽命試驗和高加速應力篩選試驗。
在國際大的知名公司被廣泛采用。
HALT工作較為復雜﹐不單單是操作設備試驗就能獲得效果﹐要想得到滿意的效果﹐得到准確可信的數據﹐對于試驗技朮﹑失效模型分析和確定問題后改善設計技朮﹐都有環環相扣的關系。
1.冷熱沖擊測試
樣品的准備
測試之前的所有樣品表面必須清潔干淨﹐不可有臟污﹑粉塵﹑油污和指印痕等。
Thermal Shock Chamber TSK-D4C (G2 1.5F 1 Set) Temperature range : -60 ℃ ~ +150 ℃Three zones : hot , cold and room temp
Thermal Shock Chamber
TC-D4C (G2 1.5F 2 Sets/C18 3F 1 Set) Temperature range : -40 ℃ ~ +150 ℃
Two zones : hot and cold
两箱式冷熱沖擊箱
三箱式冷熱沖擊箱
測試過程
1.要求有兩個環境測試室,一個溫度設在-40℃,另一個設在85℃.
2.讓樣品在40小時內經受27個循環.
3.每個循環中, 樣品應保持在每個極限溫度下45分鐘,然後立即轉移到另一個溫度室.
注:如果樣品在兩個測試室間手動轉移,轉移應在5~10秒內完成.
4.循環應從高溫室開始.
5.循環完成后,應立即檢查樣品.
樣品評估
應檢查樣品確定目測外觀品質是否下降(即:裂紋.起泡.破碎).
允收標准
冷熱沖擊測試之后受試樣品須達到硬度測試﹑抗磨耗測試和附著力測試所要求的最底標准
最底標准﹕外觀無變化﹔硬度測試≧HB﹑
抗磨耗測試≧50Cycle﹑附著力≧3B
2.溫度循環測試
WK-270/70/17-Lin
V olume:270 Liter
Temperature range:-70 ℃ ~ +180 ℃
Temperature ramp rate:17℃/Min (Linear)
Humidity:10~95%RH
溫度循環試驗機
測試過程
1.為滿足測試的需要﹐測試箱要能設置溫度于40℃到75℃之間循環。
2.樣品測試從高溫端開始﹐并保持45分鐘﹕然后溫度以沒分鐘17的降溫速度降至底溫端﹐一旦至-40 ℃﹐樣品即保持45分鐘﹕之后溫度再次以17的速度向高溫端75℃爬升﹐如此往復。
3.整個測試循環將持續88小時。
溫度循環測試曲線圖
允收標准
冷熱沖擊測試之后受試樣品須達到硬度測試﹑抗磨耗測試和附著力測試所要求的最底標准
最底標准﹕外觀無變化﹔硬度測試≧HB﹑抗
磨耗測試≧50Cycle﹑附著力≧3B
3. 高溫高濕測試
THS-C6C-150(G2 1.5F 2 Sets)
Temperature : -60 ℃ ~ +150 ℃
Humidity : 10%R.H. ~ 98%R.H.
THS-C4C-150 (C18 3F 1 Set)
Temperature : -40 ℃ ~ +150 ℃
Humidity : 10%R.H. ~ 98%R.H.
THS-C0C-100 (G2 1.5F 1 Set)
Temperature : 0 ℃ ~ +100 ℃
Humidity : 10%R.H. ~ 98%R.H.
高溫高濕試驗機
涂和不涂防晒油耐高溫高濕測試
測試油類型﹕
推荐﹕Native Tan Regular Tanning 油SPF4
替代品﹕香蕉船牌SPF8制革防護油,濕法/蘆薈油Vera,或紫銅色調的SPF4金色\暗色制革油,維他命E&蘆薈油.
測試過程
1.將試樣分成2組,第1組樣品不涂防晒油,第2組樣品涂上防晒油進行測試.
2.再第2組水平放置的試板或測試面上涂敷少量Native Tan Regular Tanning 油SPF4(或等效油類)
3.將兩組試樣置于恆溫恆濕箱內,在溫度65℃,相對濕度90%RH的條件下放置48H或88小時.
4.取出樣品,冷卻至室溫.
5.戴上橡膠手套,取干布將涂防晒油的受試樣品表面擦拭干淨,檢查試樣外觀是否有明顯變化.
6.按本文件所述方法對試樣進行鉛筆硬度測試,RCA抗磨耗測試和附著力測試.
7.樣品必須滿足這些測試規定的最低要求.
最底標准﹕外觀無變化﹔硬度測試≧HB﹑抗
磨耗測試≧50Cycle﹑附著力≧3B
4.鹽霧測試
Salt Spray
Chamber
TMJ-9701
鹽霧試驗機
調整PH值
1. 中性鹽霧試驗
鹽溶液的PH值應在6.5~7.2之間﹐若PH值大于7.2則加少許冰醋酸進行酸鹼中和﹐若PH值小于6.5則加少許NaOH進行酸鹼中和。
2. 醋酸鹽霧試驗
在已配制的鹽溶液中加入適量的冰醋酸﹐使其PH值在3.1到3.3之間。
溶液的PH值可用冰醋酸和NaOH調整。
3. 銅加速醋酸鹽霧試驗
在已配制的鹽溶液中﹐加入氯化銅(CuCL2.2H2O),其濃度為
0.26g/L±0.02 g/L,溶液的PH值應在3.1到3.3之間﹐其PH值調整方法與前面相同。
試驗條件設定
1.中性鹽霧試驗和醋酸鹽霧試驗的試驗箱內溫度為 35+1.1℃/-1.7℃﹐飽和器溫度為47±2 ℃。
2. 銅加速醋酸鹽霧試驗的試驗箱內溫度為50±2 ℃,飽和器溫度為63±2 ℃。
3.測試期間至少16小時檢查收集霧量一次﹐其平均霧量為 12ml/80cm2/h.
試驗后樣品的處理
試驗后取出樣品﹐為減少腐蝕產物的脫落﹐樣品在清洗前應放在室內自然干燥
0.5~~1小時﹐然后用清潔流動水輕輕清洗以除去樣品表面殘留的鹽霧溶液﹐再立即用吹風機吹干。