流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护
流式细胞仪的使用与维护
Ｅ ｓＣ ｔ Ｍｉｉ ｕｖ 流式细胞仪， ａｙ ｙｅ ｎ Ｇ ａａ 适用 于各种流式
细胞 学 检 测 分 析， 动物 、 昆虫 、酵 母 、原 代 培 养 、转 如 化 细胞 、悬 浮 和 贴 壁 细 胞 以及 荧 光 微 球 等 。采 用 固态 蓝 色 或 绿 色 激 光， 四色 、 三 色 或 两 色 荧 光 检 测 ， 向散 前 射 检 测 ， 选 配 侧 向 散射 ； 有 自冲 洗 系 统 ， 证 流 动 通 可 保 路畅 通 。Ｅ ｓＣ ｔ Ｍｉｉ ｕ ｖ流 式 细胞 仪 采 用 微毛 细 ａｙ ｙｅ ｎ Ｇ ａ ａ 管流 动 技 术 ， 需 鞘 液 ， 别 适 合 于 传 染 性 危 险 生 物 样 无 特 品 的分 析， 山东 农业 大 学 动 物 疫病 防 治重 点 实验 室主 要 用 于 细 胞 绝对 计数 ， Ｄ ／ Ｄ８ 胞 计 数 ， 细 胞 分 析 ， Ｃ ４Ｃ 细 免疫 细 胞 标 记 蛋 白表 达 检 测 如 ＧＦ 等 。结 合 笔 者 多 年 使 用 Ｐ 该 仪 器 的工 作 经验 ， 流式 细 胞 仪 的 工作 原理 、使 用 与 对
维护 介 绍 如 下 ：
学 、 分 子生 物 学等 学 科 广泛 应 用 。
ｆ） １流式细胞 仪主要 由５ 部分构成 ：流动室及液流
驱 动 系 统 ； 激 光 光 源及 光 束 形 成 系统 ；光 学 系 统 ；信 号检 测 与 存 储 、显 示 、 分析 系 统 ；细 胞 分 选 系统 。 （） 式细 胞 仪 工 作原 理 （ 图 １ 示 ）。 ２流 如 所
Ｗａ ｇＳ ｕｉ ， ｏ ｉ ｍ ｎ Ｂ ａｊ ， ｈｎ ｈ ｎ ｌ Ｃ ｉ ａｓｕ ｎ ｈｊ ｇ Ｈａ ａ ｉ， ｉｉ ｉ Ｃ ａｇ ｏ ｇｅ ｕ ｎｈ ｎ ｎ Ｊｎ Ｊｎｅ Ｚ ， Ｙ
流式细胞仪的保养和常见故障的排除
流式细胞仪的保养和常见故障的排除流式细胞仪是一种应用广泛的生物技术设备，该设备通过检测细胞的运动状态和特征，可以快速准确地对细胞进行分析，用于检测病毒、细菌、真菌、血球等的性状，以及细胞的凋亡和突变状态。
为了确保细胞的正常工作，流式细胞仪的正确保养和正确应对故障是必不可少的。
一、流式细胞仪的保养1、定期进行清洁和消毒：流式细胞仪使用后，应定期清洁和消毒仪器外壳和控制台，以确保设备的整洁卫生及其对样品的准确性。
清洁：使用软布、湿纱布擦拭仪器外壳，避免使用锋利的金属刷以及溶剂，以免损坏仪器外壳及其涂层和标记。
消毒：使用75%的乙醇进行消毒，并让其标示完全挥发，以免损坏仪器外壳及其涂层和标记。
2、精密部件保养：为了确保流式细胞仪精密部件工作正常，应定期保护，切实避免污浊物质污染，擦拭时只采用纱布就可以。
3、定期检查仪器功能：应定期检查仪器的性能，测试检定仪器的灵敏度、能量分辨率，分析仪的概率束流管以及能否正常运转。
4、保持室温：使用流式细胞仪时，应保持定室温，在正常温度范围内使用，以确保设备的正常工作。
二、常见故障的排除1、异常停机：当电脑检测系统出现故障，系统数据出现错误，管制器失灵时，都有可能导致系统停机，应及时检查各个部件，并重新启动仪器。
2、电源故障：电源故障是常见的故障，如仪器不能正常启动，甚至断电，可能是由于过载、接触不良以及其他不可预见的情况造成的，可以重新检查接线，合适的更换保险丝等分析解决。
3、能谱偏移：可能是由于管制器的损坏、失灵或参数被修改等，都可能导致仪器能谱出现偏移，应及时检查和调整管制器的参数，恢复仪器的正常工作。
4、仪器时常出现故障原因：可能是由于仪器使用不当，造成系统比较脆弱，容易出现故障，应加强仪器的正确使用，并定期进行维护和保养，以确保仪器的正常使用。
正确的使用和正确的流式细胞仪的保养是仪器使用的关键，同时，仪器的故障也要及时的分析和处理，才能有效地防止其造成更大的损失。
流式细胞仪的临床应用
流式细胞仪的原理及其临床应用流式细胞技术(FCM)是70 年代发展起来得一种快速对单细胞定量分析的新技术, 它借簦了荧光显微镜技术, 同时利用与荧光染料, 激光技术, 单抗技术以及计算机技术的发展, 将荧光显微镜的激发光源改为激光, 使之具有更好的单色性与激发效率, 因而大大提高了检测灵敏度, 同时将固定的标本台改为流动的单细胞悬液, 用计算机进行数据处理, 因而大大提高了检测速度与统计精确性, 而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数, 为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段. 目前, 该技术已经广泛用于基础研究与临床应用, 在免疫学, 遗传学, 血液学, 肿瘤学等领域内发挥前重要的作用. 本文着重介绍流式细胞仪基本原理及其在临床上的应用.一. 基本原理流式细胞仪的主要结构可以大致分为这样几个组成部分: 激光系统, 流式系统, 信号处理及放大, 计算机系统. 图一, 图二概括了流式细胞仪的基本原理, 当待测标本被制务成单细胞悬液, 经染色后进入流动室, 流动室内充满流动的鞘液, 鞘液压力与样品流压力是不同的, 当二者的压力差异达到一定程度时, 鞘液裹挟着的样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区. 如果我们将细胞中感兴趣的部分特异性地标上荧光染料, 那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激发出特定波长的荧光, 通过一些波长选择通逶性的滤色片, 我们可以将不同波长的散射光, 荧光信号区分开来, 并送到不同的光电配增管中, 经过一系列信号转换, 放大, 数字化处理, 我们就可以在计算机上直观地统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率. 选择不同的单克隆抗体及荧光染料, 我们可以利用流式细胞仪同时测定一个细胞上的多个不同的特征, 如果对具有某种特征的细胞有兴趣, 我们还可以利用流式的分选功能将其分选出来, 以便于进一步培养, 研究二. 流式细胞仪在免疫学中的应用1. 淋巴细胞亚群分析淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群, 在免疫应答过程中, 未梢血淋巴细胞发育成为功能不同的亚群. 各亚群的数量和功能了生异常时, 就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化.FCM可以同时检测一种或几种淋巴细胞细胞表面抗原, 将不同的淋巴细胞亚群数量的测定来监控病人的免疫状态, 指导治疗.2. 感染及其治疗效果观察由于T 淋巴细胞在人体免疫系统中承担着重要的功能, 因此, 当感染发生时,T 淋巴细胞各亚群的变化往往能很敏感地反映感染的状态与程度. 例如, 细胞膜外CD4分子有HIV 识别部位, 因此CD4细胞是HIV 病毒受体,AIDS 病人CD4+T细胞明显减少, 该指标是诊断AIDS的重要标志. 当病毒感染发生时( 如乙型肝炎,EB 病毒和巨细胞包涵体病毒),CD8+T 细胞增多, 对CD8细胞的测定有助于对感染的诊断, 治疗效果的动态观察.利用流式细胞仪可对器官或骨髓移植后病人进行监控. 当病人CD3+,CD25持+续增加提示已经开始发生排异,CD4/CD8持续下降表明有感染发生, 当其比值小于0.2 时必须停用免疫抑制剂.由于流式细胞仪将静态的, 显微镜下肉眼观察改为动态的, 计算机信号处理, 因此, 在流式细胞仪上T 细胞亚群统计方式已从传统的荧光显微镜下计数200个细胞成为几秒钟内计数上万个, 因此结果更真实, 更具有统计意义.3. 其他免疫功能性疾病分析流式细胞仪便捷, 准确的特点可以用来对自身免疫性疾病进行检测与疗效观察. SLE病人的淋巴细胞变化可以反映该病的活动情况和器官侵犯程度. 活动或非活动性SLE伴有多系统疾病但无肾脏损害的病人可出现CD4/CD8比值升高, 伴有严重肾脏损害的SLE病人可出现低CD4+,高CD8+的现象.有证据表明外周血HLAB27的表达及其表达程度与强直性脊髓炎的发生有很大程度的相关性, 利用流式细胞仪可以进行HLA-B27./HLA-B7 双标记来检测HLA-B27 阳性细胞, 同时排除交叉反应. 另外,CD23 表达的增加与变态反应性疾病, 自身免疫性疾病, 肾病综合症有关, 而且阳性率与病情严重程度呈正相关, 治疗有效后CD23+细胞减少.利用流式细胞仪检测PNH血细胞的细胞膜所缺乏的糖化肌醇磷脂(GPI) 锚连接的蛋白如DAF(CD55.)与MIRI(CD59..) 来确诊阵发性睡眠性血红蛋白尿传统的血清溶血试验具有更高的特异性与灵敏度.一. 流式细胞仪在血小板功能评价方面的应用血小板膜糖蛋白(GP)是参与止血, 血栓形成的重要分子基础, 这些膜糖蛋白是一类重要得黏附分子. 用搞GP.. 的单克隆抗体对血小板进行免疫荧光标记, 用FCM 分析单个血小板或血小板亚群GP是血小板膜糖蛋白检测分析方法的重大发展,方法简便, 快速, 标本用量少, 灵敏度高, 结果准确.与血小板有关的抗原的临床意义有:1. 诊断遗传性血小板功能缺陷疾病巨血小板综合症(BSS)患者血小板CD42 A\CD42B复合物先天缺陷,FCM中表现CD42A与CD42B不仅严重缺乏, 而且其平均荧光强度显著低于阴性对照,CD61代偿性增加.血小板无力症(GT) 患者FCM表现血小板GPIIB,IIIA(CD41,CD61) 明显缺乏,CD42A 和CD42B基本正常或稍高, 并可出现异常血小板亚群.3. 血栓性疾病和血栓前状态由于活化血小板是血栓的主要成分之一, 也是引起血栓形成的主要原因, 所以血小板活化程度增高与疾病发生发展有关.CD62P.. 和CD63是活化血小板最特异和灵敏的分子标志物, 正常人血小板只有低水平活化, 外周血CD62P只有3-5%.有文献报导糖尿病伴有微血管病变, 冠心病, 高血压病. 高血脂病, 脑血栓形成, 脑动脉硬化患者活化血小板百分率和绝对数显著高于正常人, 而糖尿病无微血管病变, 周围血管病以及深静脉血栓形成患者活化血小板水平与正常人无显著差异.PTCA后24 小时发展成急性血管闭塞或高度再狭窄的患者CD62P..和CD63增多,FCM可用于测PTCA后急性缺血再发作的危险性.四, 流式细胞仪在白血病中的应用血液病多种为肿瘤性免疫性和遗传性疾病, 但恶性血液病约占一半以上.FCM在血液病的发病机制, 诊断, 分类, 治疗和预后判断方面都有广阔的应用前景.1. 白血病的分类研究2. 微小残病变检出(MRD)M R D是白血病复发的主要根源,..FCM 其高特异性与敏感性可以在患者缓解期检避免复发.测是否有残存病变细胞, 早期探测MRD以,五FCM在肿瘤学上的应用1. DNA含量测定及细胞周期分析FMC在肿瘤学上的应用主要是利用DNA含量测定进行包括癌前病变及早期癌变的检出, 化疗指导以及预后评估等工作.大量工作表明, 癌前病变的癌变率与病变的增生程度一致, 而增生程度与DNA含量的异常改变又呈平行关系.FCM通过精确定量DNA含量, 能对癌前病变的性质和了展趋势作出判断, 有助于癌变的早期诊断.DNA非整倍体的出现可能是恶变细胞的重要标志, 目前病理学尚无法从癌前病变中发现癌变和即将癌变的细胞, 而FCM检测中DNA非整倍体细胞的出现可作为一个有价值的参数.DNA倍体分析有助于临界性肿瘤的诊断, 如卵巢的交界性肿瘤, 异倍体的出现与病变的恶性发展有关.细胞异常增殖和分化障碍是肿瘤细胞的特性,DNA含量不仅能非常敏感地反映细胞代谢的异常, 而且能通过DNA倍体分析, 细胞周期各时相的细胞比例分析并结合细胞抗原的表达多参数分析, 全面了解细胞的生物学行为, 从而帮助肿瘤的诊断, 选择治疗方案和预后判断.DNA异倍体, 高S_PHASE细胞比值和高增殖细胞核抗原(PCNA)表达与细胞增殖能力, 恶性程度和不良预后呈正相关.2. 为治疗方案和药理学研究提供依据不同类型的肿瘤对化疗药物的敏感程度是不同的. 可以利用FCM进行细胞期分析, 适当选用周期特异性药物或非周期特异性药物.MDR是由多药耐药基因编的P糖蛋白(PGP)是亲脂化合物, 包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性排出泵. 从人淋巴细胞排出荧光染料与细胞内P-GP的含量直接相关. 当淋巴细胞出现M D R阳性细胞时, 病人对化疗药物开始出现耐药性, 需要考虑其他治疗方式.六, 活细胞内活性酶的检测法( 如FLUOROMETR及ICCOLORIMDTRIC_ASSAY都S是), 测定总体细胞的总酶活性而非测定单一细胞的酶活性. 若要测定单一细胞的酶活性, 通常都是涉及固定后的死细胞. 近来COULTE公R司推出最新的技术及试剂CELLPROBE_REAGE由N于T,每一个特定的酶都有其专一的受质, 而受质本身是由特别的化学品与荧光染料FLOURENSCE或IN RHODAMINEN共O价结合的, 能迅速进入活细胞, 当其遇到特异性酶时, 会被酶破坏其共价结构而释放其荧光染料, 从而能够被FCM检测到, 因此, 活细胞酶探针能够用来测量单一活体细胞内酶的活性.七. 凋亡细胞检测凋亡最初是作为形态学概念被提出来的. 细胞有两种不同的死亡方式. 即坏死(MECROSIS和) 凋亡(APOPTOISI). 凋亡典型的形态特征是核染色质固缩并分离, 细胞质浓缩, 细胞膜和核膜皱曲, 核断裂形成片断, 最后形成数量不等的凋亡小体. 利用FCM可以进行DNA断裂点标记检测.DNA片断可以从细胞内漏出, 导致DNA含量减少, 利用F C M进行DNA含量分析, 通过二倍体细胞G0/G1期峰前的亚二倍体峰来确定.在凋亡早期, 一些与膜通透性改变及凋亡有关的蛋白在细胞膜表面有特定表达, 例如FAS基因蛋白(CD95), 线粒体膜蛋白(AP027), 磷脂酰丝氨酸(ANNEXIN_V),FCM结合单克隆抗体可以检测表达这些蛋白的细胞, 从而确定细胞的凋亡情况.自70 年代流式细胞仪成型以来, 历经20 多年的发展, 流式细胞仪应用意义越来越得以体现, 尤其是1982 年以后, 随着白细胞分化抗原意义的确认以及单克隆抗体技术的发展, 给流式细胞仪的应用发展提供了强大的推动力. 在我国, 不仅许多科研单位早在80 年代已经开始使用流式细胞仪作为其科研工具, 进入90 年代后, 以库尔特原理及其相关血细胞分析产品闻名的美国库尔特公司以其在流式领域研究, 应用近二十年的积累, 在其五代流式细胞仪的基础上推出了以单激光同时激发四色荧光的新一代临床型流式细胞仪, 并为其配套了临床标本制备仪, 使临床标本制备标准化, 简单化, 开创了流式应用的新领域. 从而, 不少大中型医院也逐步引进流式细胞仪作为临床诊断的辅助工具, 随着单抗技术, 计算机技术及其它相关技术的不断发展, 流式细胞仪将会在应用领域得到不断的开拓, 成为科研与临床不可或缺的重要手段.。
流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪（Flow Cytometry）之老阳三干创作1 流式细胞仪的概念及其发展历史1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry,FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器,主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术,计算机对数据的收集和分析技术等.流式细胞仪以流式细胞术为理论基础,是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶.流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术.其特点是：丈量速度快、被测群体年夜、可进行多参数丈量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数丈量,且在统计学上有效.1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形出生于1934年,Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置丈量的设想.1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室.其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不竭改进,设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用.近20年来,随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标识表记标帜、软件开发等方面的工作,以扩年夜FCM的应用领域和使用效果.宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术论述的最为详尽和透彻的中文著作.这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等,例举了其在医学和生物工程中的应用,非常适合从事此方面专业研究的人.由于这本书是13年前出书的,所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术.另外对只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说,这本书太复杂太深奥.谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用.杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理,简单提及了流式细胞仪的应用.本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后,用比力通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必需了解的一些原理,并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括.2 流式细胞仪的工作原理和技术指标2．1 流式细胞仪工作原理除电源外,流式细胞仪主要由四部份组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统,其中流动室是仪器的核心部件.这四年夜部件共同完成了信号的发生、转换和传输的任务.流动室和液流系统流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成,经常使用光学玻璃、石英等透明、稳定的资料制作.设计和制作均很精细,是液流系统的心脏.样品管贮放样品,单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出.为了保证液流是稳液,一般限制液流速度υ<10m/s.由于鞘液的作用,被检测细胞被限制在液流的轴线上.流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振动.激光源和光学系统经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才华发出荧光供收集检测.经常使用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍,也有配和氪离子激光器或染料激光器.光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定.汞灯是最经常使用的弧光灯,其发射光谱年夜部份集中于300～400nm,很适合需要用紫外光激发的场所.氩离子激光器的发射光谱中,绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强,约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部份,以647nm较强.免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上,可使用染料激光器.将有机染料做为激光器泵浦的一种成分,可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器.例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激光器,则可获得550～650nm连续可调的激光,尤在590nm处转换效率最高,约可占到一半.为使细胞获得均匀照射,并提高分辨率,照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近.因此需将激光光束经透镜会聚.光斑直径d可由下式确定：d=4λf/πD.λ为激光波长；f为透镜焦距；D为激光束直径.色散棱镜用来选择激光的波长,调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ.为了进一步使检测的发射荧光更强,并提高荧光讯号的信噪比,在光路中还使用了多种滤片.带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的光线滤除或通过.例如使用525nm带通滤片只允许FITC（Fluoresceinisothiocyanate,异硫氰荧光素）发射的525nm绿光通过.长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射.在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号,就采纳二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开. 光电管和检测系统经荧光染色的细胞受合适的光激发后所发生的荧光是通过光电转换器转酿成电信号而进行丈量的.光电倍增管（PMT）最为经常使用.PMT的响应时间短,仅为ns数量级；光谱响应特性好,在200～900nm的光谱区,光量子产额都比力高.光电倍增管的增益从10到10可连续调节,因此对弱光丈量十分有利.光电管运行时特别要注意稳定性问题,工作电压要十分稳定,工作电流及功率不能太年夜.一般功耗低于0.5W；最年夜阳极电流在几个毫安.另外要注意对光电管进行暗适应处置,并注意良好的磁屏蔽.在使用中还要注意装置位置分歧的PMT,因为光谱响应特性分歧,不宜互换.也有用硅光电二极管的,它在强光下稳定性比PMT好.从PMT输出的电信号仍然较弱,需要经过放年夜后才华输入分析仪器.流式细胞计中一般备有两类放年夜器.一类是输出信号辐度与输入信号成线性关系,称为线性放年夜器.线性放年夜器适用于在较小范围内变动的信号以及代表生物学线性过程的信号,例DNA丈量等.另一类是对数放年夜器,输出信号和输入信号之间成经常使用对数关系.在免疫学丈量中常使用对数放年夜器.因为在免疫分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群,它们的荧光强度相差1～2个数量级；而且在多色免疫荧光丈量中,用对数放年夜器收集数据易于解释.另外还有调节便利、细胞群体分布形状不容易受外界工作条件影响等优点.计算机和分析系统经放年夜后的电信号被送往计算机分析器.多道的道数是和电信号的脉冲高度相对应的,也是和光信号的强弱相关的.对应道数年纵坐标通常代表发出该信号的细胞相对数目.多道分析器出来的信号再经模-数转换器输往微机处置器编成数据文件,或存贮于计算机的硬盘和软盘上,或存于仪器内以备调用.计算机的存贮容量较年夜,可存贮同一细胞的6～8个参数.存贮于计算机内的数据可以在实测后脱机重现,进行数据处置和分析,最后给出结果.除上述四个主要部份外,还备有电源及压缩气体等附加装置.2．1．1 信号的发生、转换和传输在压力作用下,鞘液管中的鞘液被继续不竭地压入流动室,形成一股稳定地连续的液流,保证了样本液稳定地处于鞘液液流的轴线上,并以单个细胞形式直线通过激光照射区.激光照射区又称丈量区,是指液流与激光束垂直相交的点.当细胞携带荧光素标识表记标帜物（每种物质携带的标识表记标帜物分歧吗?）通过激光照射区时,发生代表细胞内部份歧物质、分歧波长的荧光信号,这些信号以细胞为中心,向空间360°立体角发射,发生散射光和荧光信号.散射光不依赖任何细胞样品的制备技术,因此被称为细胞的物理参数或固有参数.散射光又包括前向角散射和测向角散射.前向角散射与被测细胞直径的平方密切相关,测向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更敏感,可提供有关细胞内精细结构和颗粒性质的信息.荧光信号也有二种；一种是细胞自身在激光照射下发出的微弱荧光信号,另一种是经过特异荧光素标识表记标帜后的细胞受激发照射后获得的荧光信号.在免疫分析中常要同时探测两种以上波长的荧光信号,就采纳二向色性反射镜,或二向色性分光器,来有效地将各种荧光分开.经荧光染色的细胞受到适合的光激发后发生的荧光是通过光电转换器转酿成电信号而进行丈量的.最经常使用的光电转换器是光电倍增管（PMT）.从PMT输出的电信号需要经过放年夜后才华输入分析仪器.流式细胞仪中一般备有两类放年夜器.一类是线性放年夜器,其输出信号与输入信号成线性关系.线性放年夜器适用于在较小范围内变动的信号以及代表生物学线性过程的信号,如DNA丈量等.另一类是对数放年夜器,其输出信号和输入信号之间成经常使用对数关系.在免疫学丈量中常使用对数放年夜器.放年夜后的电信号被传送到计算机,再经模一数转换器传输到微机处置器形成数据文件,保管在计算机上.保管在计算机上的数据可在脱机后再进行数据处置和分析.参数（例如：细胞的年夜小、形态、质膜和细胞内部结构）丈量原理流式细胞仪可同时进行多参数丈量,信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号.丈量是在丈量区进行的,所谓丈量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点.液流中央的单个细胞通过丈量区时,受到激光照射会向立体角为2π（360°）的整个空间散射光线,散射光的波长和入射光的波长相同.散射光的强度及其空间分布与细胞的年夜小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关,因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关.未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射,因此可利用分歧的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选.经过固定的和染色处置的细胞由于光学性质的改变,其散射光信号固然分歧于活细胞.散射光不单与作为散射中心的细胞的参数相关,还跟散射角、及收集散射光线的立体角等非生物因素有关.在流式细胞术丈量中,经常使用的是两种散射方向的散射光丈量：①前向角（即0角）散射（FSC）；②侧向散射（SSC）,又称90角散射.这时所说的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间年夜致所成的角度.一般说来,前向角散射光的强度与细胞的年夜小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增年夜而增年夜；对球形活细胞经实验标明在小立体角范围内基本上和截面积年夜小成线性关系；对形状复杂具有取向性的细胞则可能不同很年夜,尤其需要注意.侧向散射光的丈量主要用来获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的有关信息.侧向散射光虽然也与细胞的形状和年夜小有关,但它对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,也能对细胞质内较年夜颗粒给出灵敏反映.在实际使用中,仪器首先要对光散射信号进行丈量.当光散射分析与荧光探针联合使用时,可鉴别出样品中被染色和未被染色细胞.光散射丈量最有效的用途是从非均一的群体中鉴别出某些亚群.荧光信号主要包括两部份：①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光；②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光分歧.自发荧光信号为噪声信号,在大都情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和丈量.在免疫细胞化学等丈量中,对结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键.一般说来,细胞成分中能够发生的自发荧光的分子（例核黄素、细胞色素等）的含量越高,自发荧光越强；培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强.减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要办法是：①尽量选用较亮的荧光染料；②选用适宜的激光和滤片光学系统；③采纳电子赔偿电路,将自发荧光的本底贡献予以赔偿.2．1．2 流式细胞仪分选原理其实不是所有的流式细胞仪都具有分选功能.流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的.由喷嘴射出的液流柱在电信号作用下发生振动,断裂形成均匀的小液滴.根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选,而后由充电电路对选定细胞液滴充电,带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转,落入收集器中.使用分歧孔径的喷孔及改变液流速度,可能会改变分选效果.从参数测定经逻辑选择再到脉冲充电需要一段延迟时间.精确测定延迟时间是决定分选质量的关键,可根据具体要求进行适当调整.2．1．3 数据的显示和分析数据处置主要包括数据的显示和分析.单参数直方图是使用最多的图形显示形式,既可用于定性分析,又可用于定量分析.单参数直方图是由X、Y二方向组成的二维平面图.横座标X是所测的荧光或散射光的强度,用“道数”（Channel No．）来暗示.选择的放年夜器类型分歧,标度分歧.纵座标Y通常暗示被测细胞的绝对数目.正常情况下,数据分析获得的图形为具有一个或若干个峰的曲线图.对曲线图的解释应该具体问题具体分析.除直方图外,数据显示方式还包括二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等.二维点图也是比力经常使用的数据显示类型.它显示两个自力参数与细胞相对数之间的关系,也是二维平面图,横纵坐标可以根据自己选定的被测参数自行决定,点的位置标明了细胞和颗粒具有的二个被测参数的数值.二维点图所提供的信息量要年夜于单参数直方图.数据分析的方法年夜体可分为参数法和非参数法两年夜类.当被检测的生物学系统能够用某种数学模型时则多使用参数方法.非参数分析法不用对显示的图像做任何假设,也不采纳数学模型,分析法式可以很简单,也可能很复杂.临床医学较常使用非参数分析法. 2．2 流式细胞仪性能的技术指标流式细胞仪性能的技术指标主要有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度等.荧光分辨率是指分辨两个相邻峰的最小距离,通经常使用变异系数（CV 值）来暗示.现在市场上主流型号出厂时的荧光分辨率应该小于2.0%.荧光灵敏度反映了仪器探测最小荧光光强的能力.一般用荧光微球上可测出的FITC的最少分子数来暗示.目前仪器均可到达1000左右.仪器工作时样品浓度一般在105～107细胞/ml.分析速度/分选速度是指流式细胞仪每秒种可分析或分选的颗粒数目.一般分析速度为5000～10000,分选速度控制在1000以下.流式细胞仪丈量的数据是相对值,因此需要在使用前对系统进行校准或标定.流式细胞仪的校准有二个目的,即仪器的准直调整和定量标度.通常使用标准微球作为非生物学标准样品,鸡血红细胞做为生物学标准样品.3 主流流式细胞仪型号及其特性介绍目前拥有市场较年夜份额的公司是美国的BD（Becton-Dickinson）公司、Beckman-Coulter公司（原名称Coulter）和德国的Partec公司.3．1 BD公司流式细胞仪介绍BD公司生产的流式细胞仪都冠以FACs（fluorescence activated cell sorter）,即荧光激活细胞分选器.其型号种类比力齐全,如早期的FACSort、FACS Canto、FACSean.现在市场上供应的型号有五种：FACSCount（小型流式细胞仪）、FACS CAlibur（流式细胞仪）、FACSA ria（流式细胞分选仪）、FACSV antage SETM（多色分析和高速分选流式细胞仪）、LSR II（数字化分析型流式细胞仪）.FACSCount为精确计数淋巴细胞CD3,CD4,CD8绝对数而设计的.FACSCalibur是全自动多色流式系统,偏重于临床,其整体设计帮手临床医生快速实现惯例免疫表型、CD4T细胞计数、DNA、网织红细胞、血小板等临床分析,兼具分选功能.配备有二根激光管,可同时检测4个荧光参数.可识别粘联细胞.BD FACSA ria流式细胞分选仪为台式高速细胞分选仪,获取速度达70,000细胞/s,分析速度达50,000/s.使用石英杯流动检测池固定光路校准技术.使用三种激光,多色分析,分析参数可达15色.两管或四管分选,可以使用多种规格的收集管.液流监测系统白动监测液流断点,检查梗塞,实现了细胞分选的无人把持.配件BDACDU装置,可以在微孔板或载波片上定量分选细胞.FACSV antage SETM是在FACSV antage的细胞分选功能基础上推出的分选增强型流式细胞仪.六色荧光分析系统,点对点分选,配置FACS Diva数字化系统,提供全面的配套试剂.速度和功能优于FACSV antage.BD LSR II是LSR的数字化升级版,其性能介于FACSV antage SE 和FACS Calibur之间,是专为生命科学研究设计的台式机.配备固定校准的紫外激光,四种激光立体空间激发、十色荧光同时分析、电子系统数字化、比力易学易用.3．2 Beckman-Coulter公司流式细胞仪介绍Beckman- Coulter 公司生产的流式细胞仪以Profile（早期,现已停产）和EPICS系列为代表,近年又推出了Cytomics FC500系列.EPICS系列是年夜型流式细胞仪,目前市场上有XL、XL-MCL和ALTRA三种型号,其中ALTRA具有分选功能,适用于免疫学、细胞生理、分子生物学、遗传学、微生物学、水质分析和植物细胞分析.Cytomics FC500系列流式细胞仪体积小,可自动进行5种颜色的分析,适用于免疫学检测,如人类HIV诊断.特别是FC500MPL的共同设计可以在同一系统上使用12×75mm的离心管和24或96孔的平板.特别适合工作量年夜的实验室.这二个公司主要针对医学研究和临床工作进行设计和生产,其产物可应用于生物医学基础研究以及临床检测的许多领域,如遗传、肿瘤、血液、免疫等诸多研究中红细胞、T细胞、淋巴细胞亚群测定、检测早期细胞凋亡、肿瘤细胞免疫测定等.这二个公司的流式细胞仪价格昂贵,我国主要购买、使用的单元基本上都是一些医疗机构.3．3 Partec公司流式细胞仪介绍与BD和Becman-Coutler公司的产物相比,德国Partec公司生产的流式细胞仪的共同特点是体积小,造价低,易把持,便于携带,适合植物学研究,适合遥远地域和发展中国家.德国Partec公司的产物分为三类：CCA家族、PAS 家族和CyFlow家族（Galaxy为早期产物,已停产）.CCA家族包括细胞计数分析仪CCA和倍性分析仪PA-I.它是单或双参数的台式小型机,可以进行一些惯例分析,如核DNA测定（检测倍性或细胞周期）、细胞计数、细胞凋亡.它的特点是体积小,易把持,价格低,检测范围广,可以检测多种荧光素（如PI、DAPI、Fluorescein）发出的荧光.PAS家族包括粒子分析系统PAS、粒子分析系统III （PAS-III）和倍性分析仪PA-II.提供三种激光器的三种组合,可检测十余种荧光染料.最多可检测和记录八个自力荧光参数.倍性分析仪PA能够在2分钟内自动丈量植物的倍性水平,检测异倍体.可以对叶片、幼苗、种子、果皮、根、花等植物资料进行分析.在年夜大都植物中,异倍体染色体的检测分辨率为±1条染色体.PA-I使用HBO-100汞灯,属于弧光灯,可发生紫外激发光和蓝光.PA-II中增加了488nm氩离子激光器,能够检测几乎所有的荧光染料,如DAPI,Hoeehst,PI,EB,MMC,FITC,FDA等.汞灯发光是电流经过气体时,气体电离发生的.它能提供最佳的激发波长.CyFlow（R）SL配备三种激光管,可应用于诸如人类健康、微生物学、工业应用、过程控制、生态学等研究.如HIV扫描中免疫标识表记标帜细胞计数、食品处置过程中的微生物计数、细胞凋亡等.它使用l2 V直流电,特别适合遥远地域和发展中国家.国际上20世纪80年代开始将流式细胞仪检测应用到植物的研究中（Galbraith,1983）,众多学者都认为流式细胞仪是一种准确、快速的检测DNA含量的方法（Michaelson,1991）.应用范围主要是利用流式细胞仪研究属内、属间多种植物的DNA含量（Baird,1994；Jacob,1996；HALL,2000）和倍性水平（Costich,1993；Meng,2002）、检测体细胞杂种（Pfosser,1995；Keller,1996）和游离小胞子培养再生株（Kim,2003）的DNA含量.过去我国应用这一检测技术的植物研究工作者寥寥无几,且年夜多是在国外实验室完成的.研究内容包括植物生理、法式性死亡、倍性鉴定等.植物研究中使用的流式细胞仪基本上都是Partec公司的产物,也有少量是BD公司生产的流式细胞仪.BD公司的产物主要定位于医学研究与应用,与Partec产物相比,不太适合从事植物染色体倍性的鉴定.主要体现在不能提供植物样品制备技术/试剂,数据获取软件可同时检测到的倍性数目少.鉴于目前我国科研院所中使用较多的是BD公司生产的流式细胞仪,在下一篇中将会对利用BD流式细胞仪进行植物倍性检测的技术和技巧做详细陈说.如何选择流式细胞仪自七十年代呈现第一代流式细胞仪以来,随着计算机技术、电子制造技术、激光技术及荧光素合成技术的不竭发展,现代流式细胞仪已今非昔比,制造工艺、功能、精确度有了质的飞跃.流式细胞仪生产厂商推出各种分歧型号的流式细胞仪来满足用户的分歧需要.现生产流式细胞的厂商全球至少有六家,各厂商产物又有分歧的系列,各具特点.如何从众多的型号中挑选出最适合自己的机型,我们还需从分析应用动身,评估自己的需求来决定什么样的流式细胞仪最具性价比、最适合自己.⑴、DNA倍体分析DNA分析是流式细胞仪最初且是现在应用最广检测项目.由于恶性细胞DNA含量通常与正常细胞分歧,存在异倍体细胞,所以现有很研究评价异倍体细胞与肿瘤恶性度及其预后的关系.DNA含量检测还可提供细胞周期方面的信息,这在细胞生物学中运用很广泛.特别地,它可暗示出细胞毒性药物对细胞作用过程.这些DNA检测还可与细胞概况标识表记标帜物标识表记标帜同时进行,这样在细胞混合培养中,可通常追踪表达特异标识表记标帜物的细胞显示其生长周期情况.所有方法都是基于染料能与核酸起特异的化学反应并发射出荧光,经常使用的染料为PI,DAPI.流式细胞仪要求：488nm光源,575nm滤光片.⑵、细胞生存能力实验。
流式细胞仪使用规范
流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。
流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。
为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。
1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。
b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。
c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。
2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。
可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。
b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。
c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。
3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。
b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。
c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。
d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。
4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。
b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。
如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。
c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。
5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。
b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。
流式细胞仪安全操作及保养规程
流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。
然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。
为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。
2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。
2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。
在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。
2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。
注意声音警报器和信号灯的功效。
2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。
按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。
2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。
2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。
按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。
2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。
流式细胞仪操作步骤
流式细胞仪操作步骤一、样品准备1. 确认样品是否符合实验要求，如细胞浓度、荧光标记等。
2. 根据实验需求，选择合适的试管和细胞样品。
3. 确认样品中是否有杂质或污染物，必要时进行离心和洗涤。
4. 尽可能缩短样品处理时间，避免细胞活性受到影响。
二、样品上机1. 打开流式细胞仪，确认仪器正常工作。
2. 将样品加入到流式细胞仪的样品管中。
3. 根据实验需求，设置合适的流速和压力。
4. 开始采集数据，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
三、参数设置1. 根据实验需求，选择合适的荧光标记和检测参数。
2. 根据细胞类型和特性，设置合适的门控和阈值。
3. 确认仪器校准和定标工作已完成。
4. 根据需要，设置多色分析，以便于进行细胞分群和定量分析。
四、数据采集1. 在采集数据时，观察仪器工作状态，确保数据准确可靠。
2. 根据实验需求，确定采集的数据量，确保数据具有代表性。
3. 记录采集数据的时间和条件，以便于后续数据分析。
4. 在采集数据时，注意观察细胞活性、浓度和分布情况，及时调整实验条件。
五、数据分析1. 使用专业软件对采集的数据进行处理和分析。
2. 根据实验需求，对数据进行去噪、归一化和定量分析。
3. 进行细胞分群、细胞周期和细胞凋亡等分析。
4. 对数据进行统计学分析和可视化展示。
六、结果输出1. 根据分析结果，输出相应的图表和数据表格。
2. 对结果进行解释和注释，以便于读者理解和应用。
3. 如果需要，可将结果整理成报告形式，提供给相关人员参考和使用。
七、质量控制八、实验室清理。
流式细胞仪原理及应用
流式细胞仪原理及应用流式细胞仪是一种广泛应用于生物医学研究和生命科学领域的仪器，其原理基于光学和流体力学。
流式细胞仪可以实现对细胞的快速、高通量的检测、分类和分析。
下面我将详细介绍流式细胞仪的原理及其应用。
流式细胞仪的原理主要包括光学系统、液体系统和电子系统三个部分。
光学系统是流式细胞仪的核心部分，它主要由激光激发系统、光学透镜系统和探测器系统构成。
激光激发系统产生高能量的激光束，用于激发待检测细胞中的荧光探针或标记物。
光学透镜系统用于聚焦激光束，将其聚焦到流式细胞仪流管中的细胞上，以提高探测的灵敏性。
探测器系统则用于收集细胞发射的荧光信号并转化为电信号。
液体系统由进样系统和流体装置构成。
进样系统用于将待检测的细胞悬浮液按照一定容量进样到流管中。
流体装置则通过泵送系统控制细胞悬浮液的流动速度和方向，使细胞以单个细胞为单位通过光学系统。
同时，流体系统还可通过不同压力的调节来控制流体速度，以适应不同细胞的流动速度。
电子系统则是将光学系统和液体系统产生的信号转化为电信号并进行数据处理和分析。
它主要包括光学信号转化为电信号的模拟-数字转换器（ADC）、电子积分系统和数据分析软件。
光学信号在探测器中转化为电信号后，经过ADC转换为数字信号。
电子积分系统则对每个细胞的光学信号进行放大和积分，以获取荧光强度信息。
数据分析软件则可将收集到的荧光信号以图像或数据表格的形式呈现，以进行进一步的数据分析和图像处理。
流式细胞仪的应用十分广泛。
以下是几个主要的应用领域：1. 细胞生物学研究：流式细胞仪可用于细胞生物学的多个方面，如测量细胞数量及浓度、细胞周期及增殖能力研究、细胞生长状态评估、细胞凋亡和存活率分析等。
2. 免疫学研究：流式细胞仪可用于免疫细胞表型分析、免疫反应程度测定、免疫细胞功能研究、细胞因子分泌分析等。
3. 微生物学研究：流式细胞仪可应用于微生物领域的多个方面，如微生物计数、微生物分类、微生物生长速率研究、细菌表型鉴定等。
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪是一种高级的细胞分析仪器，它可以对单个细胞进行快速、高效的分析和排序。
在使用流式细胞仪时，需要注意以下几点： 1. 样品制备
样品制备是流式细胞仪分析的关键步骤之一。
样品应该充分混合，并且需要过滤以去除细胞团块和杂质。
此外，样品的浓度也需要适当，过高或过低的浓度都会影响分析结果。
2. 仪器操作
在使用流式细胞仪时，需要仔细阅读仪器的操作手册，并按照要求进行操作。
在操作过程中，需要注意仪器的清洁和维护，以确保仪器的正常运行。
3. 数据分析
流式细胞仪可以生成大量的数据，因此需要进行有效的数据分析。
在进行数据分析时，需要注意选择合适的软件和算法，并进行正确的数据解释和统计分析。
4. 安全注意事项
流式细胞仪使用时需要注意安全问题。
在操作过程中，需要佩戴手
套和口罩，避免样品污染和呼吸道感染。
此外，需要注意仪器的电源和电缆，避免电击和火灾等安全事故。
流式细胞仪是一种高级的细胞分析仪器，使用时需要注意样品制备、仪器操作、数据分析和安全问题。
只有在正确使用和维护的情况下，才能获得准确、可靠的分析结果。
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪是一种高效、精准的细胞分析仪器，广泛应用于生物、医学、生态等领域的细胞研究和诊断。
使用流式细胞仪需要以下步骤： 1. 准备样品：将待测细胞或颗粒悬浮在缓冲液中，并且使细胞均匀分散。
2. 调整流速：根据样品大小和含量调整流速。
样品含量高时要降低流速，避免流速过快造成信息遗漏。
3. 线性校准：使用荧光染料或粒子标准品进行线性校准，以保证数据准确性。
4. 过滤样品：使用0.22微米孔径过滤器过滤样品，去除悬浮在样品中的大颗粒。
5. 调节光源：根据样品的荧光信号选择合适的激光波长和强度。
6. 数据分析：通过流式细胞仪软件对数据进行分析和处理，得到所需结果。
需要注意的是，使用流式细胞仪时要注意样品的保存和保护，避免细胞损伤和阳性信号污染。
此外，操作过程中要认真阅读说明书，遵循标准操作程序，确保实验结果的准确性和可靠性。
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BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程
BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。
适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。
责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。
保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。
科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。
内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。
1.4打开电脑。
1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。
1.6做Prime。
1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。
2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。
2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。
2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。
2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。
2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。
2.6退出所有应用软件，关闭电脑。
2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。
3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。
3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。
3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。
3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。
3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。
流式细胞仪使用注意事项
流式细胞仪使用注意事项流式细胞仪是一种广泛应用于生物学、医学、免疫学等领域的高精度分析仪器，可以对细胞、微粒子等进行快速、准确的分析。
但是，在使用流式细胞仪时，需要注意一些事项，以确保其正常运行和准确分析结果。
一、仪器安全1. 使用前检查仪器是否正常，如有异常情况，应及时进行维修或更换。
2. 在使用过程中，应注意避免碰撞和摔落，避免损坏仪器。
3. 在操作过程中，应注意保持仪器干燥、清洁，避免污染或损坏仪器。
4. 在更换试剂或样品时，应注意避免溅出，避免危险物质的接触和吸入。
二、操作规范1. 在操作前，应先熟悉仪器的使用方法和操作流程，避免误操作。
2. 在样品准备和处理过程中，应注意避免污染和交叉感染，避免影响结果的准确性。
3. 在样品注入时，应注意样品的浓度和体积，避免过度稀释或浓缩，影响结果的准确性。
4. 在仪器运行过程中，应注意监测仪器的状态和数据输出，避免出现异常情况。
5. 在操作结束后，应及时清洗和消毒仪器，避免残留污染物或危险物质。
三、结果分析1. 在分析结果时，应注意对数据进行正确解读和分析，避免误判或漏判。
2. 在结果分析过程中，应注意对结果的质量进行评估和验证，避免出现偏差或误差。
3. 在结果分析结束后，应及时记录和保存结果数据，避免数据丢失或误删。
四、安全防护1. 在使用过程中，应注意遵守实验室安全规范和操作规程，避免发生意外事故。
2. 在使用过程中，应注意佩戴个人防护装备，如手套、口罩、护目镜等，避免危险物质的接触和吸入。
3. 在使用过程中，应注意对危险物质进行正确处理和处置，避免对环境和人体造成影响。
总之，流式细胞仪是一种高精度的分析仪器，使用时需要注意安全、操作规范、结果分析和安全防护等方面，以确保其正常运行和准确分析结果。
同时，还需要不断学习和掌握新的技术和方法，提高自身的技能和能力，为科学研究和医学诊断做出更大的贡献。
流式细胞仪验证安全操作及保养规程
流式细胞仪验证安全操作及保养规程1.安全操作注意事项在使用流式细胞仪前，需要了解一些重要的安全操作注意事项。
1.1.操作前准备在开始使用流式细胞仪进行实验前，需要进行以下几项准备：•检查仪器是否处于正常工作状态，确认仪器所有部件处于正确位置且完好无损。
•验证仪器是否与正确的电源相连，且电压是否符合要求。
•在使用前请仔细阅读仪器使用手册和操控手册，了解仪器的使用方法和注意事项。
1.2.操作时的注意事项在使用流式细胞仪时，需要注意以下事项：•在操作中，请戴手套、口罩、护目镜等防护用品以保障实验安全。
•在操作过程中请谨慎处理所有实验物品，包括悬浮细胞、试剂、化学物质等，以防止潜在的危险性。
•在使用前，请认真了解所有细胞、细胞培养液和试剂的性质。
针对化学品，需要了解其化学性质和可能的安全危险。
•如果产生任何实验安全问题，请立即向实验室负责人汇报。
1.3.操作后的处理在完成实验后，需要及时清理和处理实验设备和试剂。
需要注意以下事项：•仔细处理所有试剂和化学物品残余，以避免造成污染和安全隐患。
•在使用后，请及时将实验设备清洗并消毒，以便下一次使用。
•对于所有的样品和试剂，在使用完毕后，需要按照规定的方法和处置方式进行处理。
2.保养规程为了保证流式细胞仪的稳定性和可靠性，需要定期对仪器进行保养和维护。
2.1.日常维护•定期清洗所有外部器具以保证外观清洁。
•在使用后请直接关闭流量阀门。
•室温下运输仪器时，需要等待至少4小时后才能进行使用。
2.2.周期保养•在使用过程中，请避免不当使用和暴力操作。
•每隔3个月，需要对仪器进行一次全面保养，检查每个器具的精确度以及指示符和测量系统的正常性能。
2.3.异常处理•如果在实验中出现任何异常或者问题，请立即联系厂家或者技术支持人员。
•如果需要维修，请按照说明书上的流程进行步骤。
任何私自处理都可能会导致更大的损害。
结论通过对流式细胞仪的安全操作和保养规程的详细说明，可以让我们更加清晰地了解如何安全、高效地进行实验操作。
流式细胞仪用鞘液安全操作及保养规程
流式细胞仪用鞘液安全操作及保养规程流式细胞仪是一种常用的细胞分析仪器，能够实现高通量、高精度的细胞分析，被广泛应用于生命科学领域。
使用流式细胞仪时，鞘液是必不可少的试剂之一，用于细胞的悬浮、稀释和调节细胞生理状态。
然而，鞘液如果不正确使用或者不正确储存，可能会对实验的准确性和可重复性造成影响。
因此，正确的鞘液使用方法和保养是使用流式细胞仪必不可少的一部分。
本文将描述流式细胞仪鞘液的正确使用方法和保养规程。
鞘液的种类和性质流式细胞仪的鞘液种类繁多，其中最常用的鞘液包括PBS缓冲液、含人血清的培养基和含FBS的培养基等。
鞘液的选择要根据实验要求和细胞类型来确定。
每一种鞘液的组成和性质不同，因此其使用方法和保养规程也会有所不同。
鞘液使用前的准备工作在使用任何一种鞘液之前，首先需要仔细查看鞘液的标签，了解其成分、pH值、适用细胞类型、存储条件和保质期等信息。
如果鞘液已经超过保质期或者出现异常变化，应该立即丢弃，不要使用。
在开始操作之前，需要准备以下工具和试剂：•鞘液：按照需要选取合适的鞘液，注意保证其无菌；•无菌离心管：用于接收待测样品和鞘液，并在测量前进行离心；•细胞培养器具：用于维持和培养细胞；•无菌移液器：用于调配、加入鞘液；•消毒剂和纯水：用于清洗、消毒测量流路；•养护液：用于冲洗流式细胞仪的管道。
安全操作规程1.鞘液的储存鞘液的储存条件因种类而异，但一般要求存放于4°C以下、避光的环境中。
在储存之前，应该注意：•需要检查鞘液瓶体是否完整，瓶盖是否紧密，包装是否完好；•不要将鞘液直接放入冰箱中，应该尽可能使用低温水浴缓慢降温至所需温度，防止鞘液过冷而结晶；•避免鞘液受到震动，剧烈摇晃和倒置等操作；2.鞘液的准备在使用鞘液前，需要进行以下准备工作：•将鞘液取出，进行慢速离心，去除气泡和沉淀；•用纯水和无菌移液器清洗鞘液瓶口和盖子，保证无菌；•准备符合要求的细胞样本，根据需要使用无菌离心管接收样品。
流式细胞检测服务安全操作及保养规程
流式细胞检测服务安全操作及保养规程流式细胞仪是一种常用于细胞和微生物学研究的仪器。
由于其高分辨率和高灵敏度，越来越多的实验室选择使用流式细胞仪进行细胞分析和排序。
然而，流式细胞仪需要经常维护和保养，以确保其正常运行和获得准确的结果。
本文将介绍流式细胞检测服务的安全操作和保养规程。
安全操作1. 禁止直接接触样本流式细胞仪中的样本可能含有病原体或有害物质，因此最好避免直接接触样本。
在操作前，请佩戴手套和口罩。
2. 使用防护措施在操作流式细胞仪时，应注意使用防护措施，如佩戴防护眼镜、手套和口罩。
如果意外溅洒了样本或试剂，请立即用大量水冲洗受影响的区域。
3. 清洁工作区在每次使用流式细胞仪后，应及时清洁工作区，以防止潜在的污染。
使用酒精或消毒液擦拭工作区表面。
4. 注意电气安全在插拔电源线和其他电气部件时，务必注意先拔掉电源线。
在更换零部件时，要使用符合安全标准的工具。
5. 遵守细胞培养实验室的规则流式细胞检测服务通常在细胞培养实验室进行，因此应遵守实验室的规则和标准操作程序。
在细胞培养前，请先了解实验室的操作规程。
保养规程1. 定期检查系统保持流式细胞仪的正常运行，需要定期对其进行检查。
这包括检查光源、光学透镜、过滤器、激光、探头、定标等。
如果出现问题，请及时联系售后服务。
2. 定期清洁为了确保流式细胞仪的精度和可靠性，应定期对其进行清洁和消毒。
在清洁过程中，应使用无菌水、酒精或消毒液。
清洁应按照制造商的指示进行。
3. 定期更换耗材流式细胞仪需要定期更换各种耗材，如样本管、石英反射板、过滤器、校准微球和荧光探头等。
更换耗材应按照制造商的指示进行。
4. 避光保存流式细胞仪的灵敏度和可靠性都受光线影响，因此必须避光保存。
在保存和运输流式细胞仪时，应使用防光袋或盒子。
使用前，请检查仪器是否暴露在光线下。
5. 定期校准为了保证流式细胞仪的准确度和可重复性，应定期进行校准。
校准包括流速校准、信号放大器增益校准、定标和荧光补偿等。
流式细胞仪校准安全操作及保养规程
流式细胞仪校准安全操作及保养规程1. 背景流式细胞仪是一种现代化的实验仪器，广泛应用于生命科学、医学研究、诊断和治疗等领域。
流式细胞仪可以对单个细胞进行快速测量和分析，具有高灵敏度、高通量和高精度的优点。
在使用流式细胞仪时，正确的校准和安全操作，以及定期的保养是非常重要的。
2. 流式细胞仪的校准方法流式细胞仪的校准是保证实验结果准确的前提。
在进行校准之前，需要先准备好以下工具：•流式细胞仪校准珠•DI水•漂白液•消毒剂•塑料管•紫外线消毒灯2.1 流速校准1.将流式细胞仪开机，并将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。
2.打开软件界面，进入流速校准模式。
3.将DI水装入塑料管，并连接到样品流路上。
4.开始采集数据，记录每个管道中的时间和事件数。
5.根据样品流速，计算出要达到特定事件数所需的时间，这就是实际流速。
6.通过调整样品流量控制器，将实际流速调整至设定值。
2.2 光学参数校准在进行光学参数校准之前，需要将流式细胞仪校准珠置于样品池中。
2.2.1 激发光的校准1.进入激发光校准模式，打开紫外线消毒灯。
2.将DI水装入塑料管中，并连接到样品流路上。
3.开始采集数据，记录激发光强度和事件数。
4.根据实际激发光强度，调整光源强度，使其达到设定值。
2.2.2 探测光的校准1.进入探测光校准模式，放置漂白液样品。
2.打开灯箱，选择合适的滤片和灵敏度，开始采集数据。
3.根据采集到的数据，调整探测器增益，使其达到合适的灵敏度。
2.3 粒子大小校准1.将流式细胞仪校准珠装载到样品池中。
2.进入粒子大小校准模式，开始采集数据。
3.根据采集到的数据，调整光学系统，将校准珠作为参考，确定粒子的大小。
3. 流式细胞仪的安全操作在操作流式细胞仪时，需要做好以下几点：1.先关掉紫外线消毒灯，并断开电源，然后进行操作。
2.对样品进行处理前，先进行消毒。
3.在进行样品注入时，应该进行过滤，并先进行细胞计数，控制加入的细胞数量。
4.遵守严格的操作规程，在操作流式细胞仪时，不要将手伸入仪器。
FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程
F A C S C a l i b u r流式细胞仪操作维护规程1.目的规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程,正确使用和维护仪器,保证检测工作顺利进行和设备安全;2.适用范围适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作;3.职责3.1操作人员按照本规程操作仪器,对仪器进行正常维护,并作使用记录;3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程,并对仪器进行定期维护和保养;3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理;4.操作程序4.1安全操作注意事项和特别提示：4.1.1该仪器必须有专人保管,使用前需通读仪器说明书;4.1.2严格遵守操作规程,如仪器出现故障,应马上停止使用,并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告,严格按照单位有关制度实施,不得擅自“修理”,查明原因,处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录;4.2设备每日开机程序：4.3设备质控程序：4.3.1.1取试剂盒中的Unlabeled试剂,充分混匀,加一滴到装有1ml鞘液的试管中,混匀,标记为unlabeled;4.3.1.2取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂,充分混匀,各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中,混匀,标记为mixed;4.3.2上机操作：4.3.2.1按电脑桌面的FacsComp进入质控程序;4.3.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息,计算机将保存这些信息；单击“Accept”;4.3.2.3在试验选项中,选择Lyse/No-WashLNW：免洗程序;4.3.2.4在CalibriteBeadsLotIDs中,根据每种颜色的beads所对应的LotIds,输入编号,此编号在Calibritebeads试剂盒内,打开新买的试剂盒,里面有一张橙色胶纸,取出贴在试剂盒的背面,标题是Calibritebeads3BatchNO,选择FACSFlowSheath下的编号右侧的编号;APCLotID此栏不能空,即使是三色校正试剂;4.3.2.5在右侧的保存选项中文件会自动保存,路径Facstation\BDfile\FACSComp\DDMMYY,还可以单击“Location”改变文件保存路径;4.3.2.6按Run开始上样,在仪器面板上按RunHi;高速运行,速度不能低于400个细胞/秒,速度过低可在管中加一滴微球;4.3.2.7上第一管后,按Start键,仪器自动调节PMT,完成后窗口底部出现“PMTsetSuccessfully”,暂停5秒后自动进入下一个调节窗口;注意：速度不能低于400个细胞/秒,速度过低可在管中加一滴微球;4.3.2.8上第二管,单击Start,仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试;4.3.2.9完成后仪器会给出提示,最后软件给出一个SummaryReport;检查报告中的“Result”是否都PASS,如果有的没有PASS,检测原因;①是否试剂过期,②两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同,③仪器做月维护,完成后再重新做FACSComp仪器指控;4.3.2.10打印报告,退出FACScomp软件;4.4样本检测程序4.4.1.样本准备：4.4.1.1取TruCountTube,编号;4.4.1.2用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血,注意血不要碰到试管底部的微球Beads;4.4.1.3取20ul荧光抗体加入到管中,注意：不要碰到血;涡旋混匀,室温避光放置15min;4.4.1.4取出加入450ul1×FACS溶血素,充分混匀,避光放置15min;4.4.1.524小时内上机用MultiSET软件获取细胞进行检测,上机前应充分混匀;4.4.2.上机操作:4.4.2.1执行FACSCalibur开机程序,进入MultiTEST软件;4.4.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息,计算机将保存这些信息,单击“Accept”;4.4.2.3进入“Setup”窗口：在“DataSource”对话框中选择“FromCytometer:AcquisitionandAnalysis”,在“EntryLevelFileNamePrefix”中选择“Samplename”；在“AutomaticSavingOptions”中选择“DataFile”、“LaboratoryReport”、“PhysicianReport”,软件会自动生成一个文件,文件的默认路径Facstation\BDfile\Multiset\DDMMYY文件夹；在“ViewReports”中选择“Until‘Next’ButtonPressed”;4.4.2.4单击“Accept”,进入“FACSComp”窗口,单击“SkipFACSComp”;4.4.2.5进入“TestPrefs”窗口,在“PhysicianReportChoices”中,这一项可以是全选,运行了一种试剂,会自动报告相应的结果;在窗口的最下方点“LotIds”,跳出一窗口,点此窗口左侧的“AbsoluteCountBeads”,在此窗口右侧输入TruCounttube的批号和Beads总数标在包装袋上,单击“Save”;单击“Accept”;4.4.2.6进入“Samples”窗口,在表格中输入相应的PatientName、ID、CaseNumber,在Panel中选择CD4/8/3Truc.4.4.2.7在窗口最上方的“Cytometer”的下拉菜单中,单击“InstrumentSetting”,在出现的新对话框中单击“Open”；打开此路径下Facstation\BDfile\InstrumentSetting\Calibur.LNW文件;调用仪器各个参数的条件,选好后单击“Set”,“Done”.4.4.2.8单击“RunTests”,上样,调整SSC电压和阈值后,单击“Acquire”;4.4.2.9获取完成后,可以人工调整各个门的大小,单击“Continue”；打印“PhysReport”;4.4.2.10继续下一个实验,或单击“Quit”,“Don’tSave”,退出MultiTest软件;4.5每日关机程序4.5.1将样品支撑架置于旁位,用2ml10%漂白剂有效氯浓度0.5%作样品,使外管吸入1-2ml.4.5.2将样品支撑架置于中位,以HIRUN5-10分钟,使内管吸入约1ml.4.5.34.5.4选择Standby模式5分钟后可关掉主机.4.5.4退出所有应用软件,关闭电脑,关闭稳压器和变压器;4.5.5将流式细胞仪的压力阀置于减压状态;5.FACSCalibur清洁和维护5.1.每日维护：实验结束后,请于关机前清洁加样针的外管和内管,防止加样针堵塞或有染料残留;清洁方法同每日关机程序;5.2每月维护：流式细胞仪使用一段时间后,在鞘液管路、废液管路和流动池中会有残留的碎片、污染物等,因此,需要定期清洗管路,要求至少每个月做一次;5.2.1在仪器减压后,取下鞘液筒,倒空;如有必要,应清洗鞘液筒;5.2.2将鞘液滤器短路,使鞘液不流经滤器,直接沿鞘液管路进入流动池;5.2.3鞘液筒中倒入2L浓度为0.5-1%稀释漂白剂注意不能使用原浓度;5.2.4上样管中加入4ml浓度为0.5-1%稀释漂白剂;5.2.5流速选择HI档,RUN运行20-30分钟;5.2.6鞘液筒用蒸馏水清洗干净,再加入蒸馏水2L;5.2.7取下有漂白剂的上样管,换上有4ml蒸馏水的上样管;5.2.8流速选择HI档,RUN运行20-30分钟;5.2.9鞘液筒中换成鞘液,重新安装好鞘液滤器管路;5.2.10流动池PRIME两遍,PRIME结束后,仪器自动回复到STANDBY状态;5.2.11上样管中加入蒸馏水,RUN运行5分钟;5.2.12仪器进入STANDBY状态,可以进行样本检测;5.3定期维护如果鞘液污染将会影响样品检测结果时,在技术支持指导下或参照用户手册的有关内容自行更换5.3.2空气滤网的清洁：空气滤网位于鞘液筒上方,可以用吸尘器或水洗的办法清洁;空气滤网需要定期检查,发现滤网脏了,就需要清洗了;拉出抽屉后取下空气滤网;清洁滤网,如果水洗处理,应等滤网完全干了以后,再进行安装;6.支持性文件6.1全国艾滋病检测技术规范2009年修订版6.2FACSCalibur中文操作手册;。
流式细胞实验安全操作及保养规程
流式细胞实验安全操作及保养规程一、前言流式细胞技术是一种高效、准确、快速、灵敏的分析和检测细胞数量和特征的方法，被广泛应用于细胞学、免疫学、生物医学和生命科学等领域。
在进行流式细胞实验时，安全操作和正确的规范操作是非常重要的，以确保人员和实验设备的安全，并获得可靠和准确的实验结果。
本文档介绍流式细胞实验操作安全和实验设备的保养规程，帮助实验人员保证实验过程的安全和实验结果的准确性。
二、操作安全1. 实验前准备在进行实验前，应仔细阅读相关实验室安全规定，了解实验室的安全标准以及操作的风险和安全防护要求，采取必要的安全措施。
冷冻样品必须在室温解冻，并用20%酒精或0.5%次氯酸钠消毒，消毒时要避免使用重金属离子。
实验人员应全程戴手套、防护眼镜和口罩、穿工作服。
加入细胞荧光素时，要避免吸入细胞荧光素雾气，以免引起呼吸系统不适。
2. 仪器操作操作前必须检查仪器和实验器材的状态，确保和维护设备的正常运行；特别是流式细胞仪的激光器部分的光学装置，在使用前查看工作状态、检查光路和水路，确保激光器正常发光和散热。
操作时应按照操作手册的正确步骤执行，防止操作错误和实验器材故障造成人员伤害和设备损坏。
操作员在操作时，必须保持操作半径内的放样器、样本管和设备清洁，避免出现样本或指令交叉感染。
3. 废液处理实验室废液、试剂、细胞废物等都必须按照实验室废弃物处理方法和规定处理。
废液处理必须在处理场地完成，处理过程中必须穿戴防护设备。
废液处理时，特别是在使用有剧毒化学试剂和生物试剂的实验时，需遵守防护措施，采取防护措施，避免产生反应物和气味污染。
三、设备保养1. 流式细胞仪定期保养流式细胞仪在使用前应根据仪器的使用说明书检查设备、清洗光学元件、检查滤光玻璃和波长选择器的状态。
并根据仪器使用记录年份，定期进行设备的点检和维护。
维护时应按照细胞仪的使用说明执行，包括清洗光学元件、检查滤光玻璃和波长选择器的状态，同时检测仪器的运行状态，保证仪器在最佳状态下使用。
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料仪器名称：流式细胞仪生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司使用方法：一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。
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流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护摘要：介绍了流式细胞仪的结构、工作原理及软件的主要功能，在仪器的维护保养方面进行了详细地叙述。
结合笔者工作实际，介绍了用流式细胞仪对鸡外周血淋巴细胞亚群分析结果。
关键词：流式细胞仪；流动室；细胞分选系统；淋巴细胞
use and maintenance of flow cytometry
wang shujing, hao jianmin, bi jianjie, chang zhongle, cui yanshun
shandong agricultural university, tai'an, 271018, china
abstract: this article describes the structure of flow cytometry, how it works and the main functionality of the software, in the area of maintenance of the instrument are described in detail. in conjunction with our own actual work, the author analyzed the results by flow cytometric peripheral blood lymphocyte subsets in chicken.
key words: flow cytometry; mobile office; cell sorting system; lymphocyte
easycyte mini guava流式细胞仪,适用于各种流式细胞学检测分析,如动物、昆虫、酵母、原代培养、转化细胞、悬浮和贴壁细胞以及荧光微球等。
采用固态蓝色或绿色激光,四色、三色或两色荧光检测,前向散射检测,可选配侧向散射；有自冲洗系统,保证流动通路畅通。
easycyte mini guava 流式细胞仪采用微毛细管流动技术,无需鞘液,特别适合于
传染性危险生物样品的分析,山东农业大学动物疫病防治重点实验室主要用于细胞绝对计数,cd4/cd8细胞计数,免疫细胞分析,细胞标记蛋白表达检测如gfp等。
结合笔者多年使用该仪器的工作经验,对流式细胞仪的工作原理、使用与维护介绍如下：
1流式细胞仪的主要构造和工作原理
流式细胞术(flow cytometry,fcm)是20世纪70年代发展起来的高科技,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体,同时具有分析和分选细胞的功能。
它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内dna和rna含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析,在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析；能够分类收集(分选)某一亚群细胞,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。
(1)流式细胞仪主要由5部分构成：流动室及液流驱动系统；激光光源及光束形成系统；光学系统；信号检测与存储、显示、分析系统；细胞分选系统。
(2)流式细胞仪工作原理（如图1所示）。
2仪器软件的主要功能
guava流式细胞仪的主软件是cytosoft,用于控制仪器、获取细胞和分析数据,相当于一个操作平台。
在此操作平台上共有10个分析模块用于具体的实验：
(1)express分析软件,所有的流式实验都可以使用这个软件来获取细胞和分析数据,用户有更大的自主控制权,包
括设置参数、多色荧光的补偿、设“门”、选择点图或直方图,可以根据实验的具体情况来设计。
guava easycyte mini 配express plus软件。
(2)viacount分析软件：用于活细胞计数,可以检测每单位体积内活细胞的含量和死细胞的含量,为后续实验取用的样品量提供依据,也可以监测细胞的生长状态。
(3)nexin分析软件：用于细胞凋亡的分析。
(4)multicaspase分析软件：用于细胞凋亡的分析。
(5)tunel 分析软件：用于细胞凋亡的分析。
(6)mitopotential分析软件：用于细胞凋亡的分析。
(7)cell cycle分析软件：用于细胞周期的分析。
(8)cell paint分析软件：考察被荧光标记的活细胞在反应体系中的分布。
(9)cell toxicity分析软
件：用于细胞毒性分析实验,分别给出效应细胞和靶细胞在反应体系中的变化。
(10)cellgrowth分析软件：用于细胞增殖分析实验,可以考察5代细胞的数量。
我们主要使用
(1)(2)(7)3个分析软件。
3easycyte mini guava流式细胞仪保养与维护
(1)在每天实验结束后和实验过程中(当样品很多时),
按规定运行“quick clean”“clean”或“clean & shutdown”,防止液流通路的阻塞。
当样品是血样或其他直接来自动物组织的细胞样品,杂质较多的时候样品要先过滤,并在实验过程中适当增加清洗的次数。
为了彻底清洗液流系统,每天实验结束需要运行2遍清洗和关机程序。
在清洗结束后,始终保留一个去离子水管在guava pca上。
(2)当怀疑液流通路被堵塞或封闭时,可以在每个实验
界面或guava check界面,点击backflush(倒冲)按钮,为避免污染未检测的样品,需要移开上样管中的样品管。
移除样品管,装载上20%漂白剂。
backflush结束后,加入1管去离子水,点击“quick clean”。
如果在运行guava check时进行backflush,直接用水倒冲系统。
(3)用注射式洗涤工具清洗流动室。
移出流动室时,操作要小心。
一定不要碰触毛细管,其易碎。
千万不要将流动室装置用力放入底座中。
在试图移出流动室前,为了避免暴露
于激光辐射中,要关闭guava pca电源。
(4)每打开一个guava程序应使激光器预热5分钟。
(5)建议每次实验进行check beads检测,确保仪器参数在正常范围,若较长时间没有使用该仪器,必须先进行check beads检测,以确保系统运行正常。
(6)勿将guava的icf,bleach(漂白剂,5％次氯酸钠)或其他清洁剂放在easycyte mini仪器中过夜或时间过长。
长时间暴露在强氧化剂中会损伤毛细管。
(7)当清洗瓶中的icf只有1/4瓶时,需要在清洗瓶中加入icf。
清洗液通过瓶中的管子进行吸取。
不要使清洗瓶空置,这会导致流动池中有气泡产生,需要重新用水冲洗系统。
(8)关机时记住在easycyte mini仪器中放置1管去离子水。
定时更换装水的管子。
(9)每天实验结束或需要时,要倒空废液瓶。
4应用实例
淋巴细胞是正常机体免疫系统功能最重要的一大细胞群,在免疫应答过程中,末梢血淋巴细胞发育成为功能不同
的亚群,各亚群的数量和功能发生异常时,就能导致机体免
疫紊乱并产生病理变化。
fcm可以通过对不同的淋巴细胞亚群数量的测定来监控病体的免疫状态,指导治疗。
图2和图3是fcm测定鸡外周血淋巴细胞亚群分析结果。
图2是鸡外周血淋巴细胞亚群的前向散射光(fs)和侧向散射光(ss)组成的点阵图,根据forward scatter与side scatter确定待检测的淋巴细胞门。
图3为用anti-cd4mab-fitc和anti-cd8mab-pe对所选淋巴细胞进行标记后的淋巴细胞分群(左上：cd4 t细胞亚群；右下：cd8 t细胞亚群)。
此二维点阵图是细胞的2种荧光(fitc和rd1)双参数数据显示,横坐标和纵坐标均是对数的,横坐标代表fitc,纵坐标代表pe,图中已设定适当的
“门”(十字门)。
参考文献
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