28-04 最低检测限和定量限_分析灵敏度试验
1.检测限和定量限的确定方法
目前的一些常用方法的缺陷
空白
真实
SD
低值
假设
导致低
LOD/Q
无法 区分
虚假
分布
对称
忽略事 实(LOD)
LOB
LOB
空白样本结果接近零时的分布
仪器内部产生该类型的信号时，许多仪器自动转换阴性值信号为零或一个 低值阳性值。因此只提供非阴性浓度值输出 假设该值超过空白测量中实际空白样本显著变异分布的第95百分位数 如果样本产生一个超过该限值的观测值，它可以宣称分析物含量大于零
α=β=5%。一个α值为5%对应使用空白值分布第95百分位数，宣称测量值显著高于空白限值 一个空白值呈Gaussian分布：LoB=µB+1.645σB
LOB
计算方法
•浓度低于零的情况下不被报告或空白值不呈Gaussian分布时（空白值呈不 对称分布），第95百分位数通过其他方法估计 直截了当的程序使用基于命令值的非参数原理。通过大量的Nb值排序，第 95百分位数作为阳性第Nb(95/100+0.5)位观测值来估计
LOB
LOB验证举例
•用户进行25次空白测量（5个样本5天测量5次） 目测检查显示空白值呈不对称分布，因此，非参数估计LoB，在观测区的第 24位和第25位之间线性内插法得LoB=19.17 U/L（=18.01+0.25*（22.6518.01））
LOD
LOD
第II类错误
为了表述第II类错误，一方面不得不考虑最小样本浓度等于LoD,即提供规定概率下超过LoB 的结果 当第II类错误β水平设为5%时，那么95%的测量结果超过LoB
LOD
图示
LOD
样本分布
•如果样本中分析物的实际浓度等于LoB，50%的测量值超过LoB（a）。样本 实际浓度等于LoD，（100%-β）（95%）的样本测量值超过LoB(b) •样本不呈Gaussian分布（且不能转换为Gaussian分布），有可能使用非参 数估计LoD，另外，有必要生产浓度接近暂定LoD的样本。用于检查5%或更 低的测量观测值低于LoB的最低水平
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限（LOD）和定量限（LOQ）是分析方法灵敏度的两个重要指标，它们通常使用对照品来测定。
检测限是指分析方法能够从样品中可靠地检测出被分析物的最低浓度。
通常，检测限被定义为信号与噪声之间的差异，即当分析物的信号超过背景噪声的3倍时，被认为是可检测到的。
在确定检测限时，一般将对照品溶液的浓度设定为预期的检测限浓度的3～5倍，然后通过重复测量7次来计算检测限。
例如，如果预期的检测限浓度为10ng/ml，则配制一个约为30ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为3倍），然后将该溶液稀释到3/10倍，基本即为该物质的检测限。
定量限是指分析方法能够准确地定量测定样品中分析物的最低浓度。
这个浓度通常被定义为信噪比为10：1时的浓度。
与检测限类似，在确定定量限时，也需要使用对照品溶液。
具体方法是将对照品溶液的浓度设定为预期的定量限浓度的10倍，然后通过重复测量7次来计算定量限。
例如，如果预期的定量限浓度为10ng/ml，则配制一个约为100ng/ml的对照品溶液，并将其注入液相色谱仪，观察其峰高比基线噪音高多少倍（假设为10倍），然后将该溶液稀释到1/10倍，基本即为该物质的定量限。
需要注意的是，以上计算方法是一种常规做法，具体的
操作方法可能因不同的分析方法和仪器而有所不同。
检出限和定量限
检出限和定量限3倍信噪比是检出限，10倍信噪比是定量限，这个有必要知道。
除此之外，检出限表示方法能测出该物质时的最低浓度。
定量限则表示方法能准确定量出该物质的最低浓度。
具体来讲：检测限：分析方法在规定实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量；定量限：分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量。
※两者的区别在于：检测限：检测限指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。
它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。
非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
信噪比法：用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠检测出的最低浓度或量。
一般以信噪比3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限也可采用标准差法：空白值＝0时；①定背景10次以上，求出标准差σ。
②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X，即为方法的检出值；空白值不等于0；定量限：1、指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求。
2、常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限。
方法检出限和定量限标准做法什么时候需要进行测定？检出限（LOD）或定量限（LOQ）的测定通常是在目标物的含量接近于“零”的时候才需要进行测定。
当方法应用于所测定的分析物浓度要比定量限大的多时，检出限与定量限评定就显的不是非常有必要了。
但是对于那些浓度接近于检出限与定量限的痕量和超痕量测试，常报出“未检出”时，这时检出限或定量限对于风险评估或法规决策则就显得非常的重要。
不同的基体需要独立评估其检出限和定量限检出限（LOD）？对于大多数现代的分析方法检出限（LOD）分为两个部分，方法检出限（MDL）和仪器检出限（IDL）。
1.检测限和定量限的确定方法
空白 BLANK//空白限LIMIT OF BLANK(LOB）
空白 Blank 不含有感兴趣分析物，或至少浓度远低于感兴趣最低水平的样本 空白限 Limit of blank(LoB） 可能观测到空白样本的最高测量结果（声称概率下）
注：a）LoB不是通过测量获得的实际浓度。事实上，阳性信号的实际浓度 确认被称为LoD。同样地，LoB是含有在声称概率下分析物水平等于LoD的 样本预期的最低值
功能灵敏度比定量限无任何优势。由于该术语延续灵敏度的不赞成 用法，因此不鼓励它在体外诊断标示中的使用
定性分析中限值的使用
“检测限”
•一个定性测试的检出限有可能根据经验观测不到其增 加，例如，试剂引起的变化。因为样本中分析物可检测 的水平可能低于cutoff值，这可能增加假阴性结果的比 例
同时，高浓度样本同样也可以给出正确的阳性信号。因此，检出限 的测定试验对许多定性测试的质量控制是重要的
空白样本测量。在该单一模式下，假设尽可能高的空白 值是测定分析物存在的阈值
此为检测下限 最常见的是，进行一个空白样本的重复测量，计算这些测量值的均 值和SD，用SD乘以某一因数，加上重复测试的均值，该值被称为 LoD以及可能为LoQ（例如，分析化学）
目前的一些常用方法的缺陷
空白
真实
SD
低值 导致
无法
定性分析中限值的使用
“检测限”
•阳性和阴性结果之间的交叉点（也称为cutoff值，50% 的阳性和50%的阴性）
过渡区称为“95%的区间”，非CI（LOB与临界点相同）
样本浓度与区间关系，重复结果95%阳性结果、95%阴性结果
95%区间上限如同LoD
±20%基础上进行阴阳性结果的重复测量确认
28-04-最低检测限和定量限-分析灵敏度试验
分析灵敏度试验结果评价表年：□□□□流水号：□□□□□□检出限（Limit of Detection，LD；）、最低检测限（Lowest Limit of Detection，LLD）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信检出的最低水平。
（当测量空白样品时，分析物未检出的概率应是99%；当测量样品时，检出概率至少应是95%）。
用来描述空白响应量（RLU）的平均水平和所有响应量（RLU）对于空白均值的离散程度指标。
定量限（Limit of Quantitation，LQ）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信定量的最低水平。
（定量限所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求）。
某样品单次检测可能具有的最小响应量（RLU）仅大于空白检测低限。
注：1. 空白样品（Blank sample ，BS ）的准备：常使用检测系统的系列校准品中的“零标准”作为空白。
对某些项目，可使用术后已无某疾病的病人样品为空白样品。
2. 样本检测：：空白样品重复20次（不低于10次）作批内测定，计算空白样品组的响应量（RLU ）均值0A 和空白样品组响应量（RLU ）的标准差0S 。
3. LLD 的计算：（对于小于或等于检测低限的分析物量报告“无分析物检出”）。
（1）002LLD A S =+计算（以95%为可信限）。
（2）003LLD A S =+计算（以99.7%为可信限）。
注：1. 样本配制方法： 将已确定空白（B ）和低值（L ）的样本按照一定比例混合稀释，配制成20套（一天一套）11个等差浓度水平（10S B 、9S B +1L 、8S B +2L 、7S B +3L 、6S B +4L 、5S B +5L 、4S B +6L 、3S B +7L 、2S B +8L 、1S B +9L 、10L ）的样本。
-20℃冰箱保存备用。
“S B ”：空白样本或生理盐水；“L ”：低值样本。
检测限和定量限用对照品定
检测限和定量限用对照品定检测限和定量限是在分析化学中常用的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
本文将从理论和实际应用两方面介绍检测限和定量限的概念和计算方法。
一、概念解释检测限（Limit of Detection，LOD）是指在特定仪器条件下，能够被检测出来但无法准确测量的最低浓度。
通常来说，检测限是指信号与噪声之间的比例，即信噪比（S/N）达到一定阈值时的浓度。
定量限（Limit of Quantitation，LOQ）是指在特定仪器条件下，能够被准确测量的最低浓度。
与检测限相比，定量限要求信噪比更高，以保证测量结果的准确性和可靠性。
二、计算方法1. 检测限的计算方法检测限的计算方法有多种，其中常用的方法有信号与噪声法、标准差法和3倍标准差法。
信号与噪声法是指在低浓度下测量多个空白样品的信号与噪声，并计算其平均值和标准差；标准差法是指根据多个相同浓度的样品测量结果计算标准差；3倍标准差法是指将标准差乘以3作为检测限。
2. 定量限的计算方法定量限的计算方法与检测限类似，但要求信噪比更高。
通常可以使用3倍标准差法或线性回归法来计算定量限。
其中，线性回归法是指通过绘制浓度与仪器信号之间的标准曲线，根据信号与浓度的线性关系来计算定量限。
三、实际应用检测限和定量限在实际分析中具有重要意义。
首先，它们可以评估分析方法的灵敏度，判断方法是否适用于特定样品的测量。
其次，检测限和定量限可以帮助选择合适的仪器和方法，以确保分析结果的准确性和可靠性。
此外，检测限和定量限还可以用于质量控制和比较不同方法或仪器的性能。
在实际应用中，为了准确计算检测限和定量限，需要注意以下几点。
首先，要选择合适的样品和浓度范围，以涵盖需要测量的目标浓度。
其次，要控制实验条件的稳定性和一致性，避免误差的产生。
最后，要根据具体情况选择合适的计算方法，并对结果进行验证和确认。
检测限和定量限是分析化学中重要的概念，用于评估分析方法的灵敏度和准确性。
检测限和定量限
LOD/LOQ（制/定量限制）确定测试用于计算用户方法的最低分析物浓度。
该测试测定用户的方法能够检测出特定分析物的最低浓度值，以及用户的方法能够定量该分析物所需的最低浓度值。
要确定特定分析物的 LOD 和 LOQ，必须定义以下测试参数：要求：从“线性”测试生成 LOD/LOQ 结果时，该“线性”测试必须具有与“LOD/LOQ 确定”测试相同的“组份”类型。
创建测试配置参数对其适用的样品组时，必须选中所有相关行的“LOD/LOQ 确定测试”复选框。
也可在数据采集结束后，通过选择“附加到所选测试的数据”表中的样品组并单击“改变样品”来选中“LOD/LOQ 确定测试”复选框。
进行所需的更改并保存样品组后，必须处理改变后的样品组。
提示：对靠近或处于 LOQ 的样品进行单独的准确度、重复性和/或中间精度测试，可以确定检测限制 (LOD) 和/或定量限制 (LOQ) 结果值。
采集要求附加到此认证测试的所有样品组方法必须完全满足用户定义的采集要求，样品组才能反映状态。
采集要求表参数：参数说明LOD/LOQ 方法从以下选项中选出 LOD/LOQ 确定的方法：1.线性曲线截距标准差 -“方法认证管理器”根据参照线性测试的截距标准差确定 LOD/LOQ2.线性曲线残差标准差 -“方法认证管理器”根据参照线性测试的残差标准差确定 LOD/LOQ3.信噪比 -“方法认证管理器”使用相关峰的 Empower 信噪比数字平均值来确定 LOD/LOQ。
提示：如果使用线性测试来确定方法的 LOD/LOQ（以上选项 1 和 2），该测试应该在靠近 LOQ 的浓度级别下进行。
平均信噪比值可以来自一个或多个级别的峰。
用于确定 LOD/LOQ 的线性测试。
限制：确定 LOD/LOQ 的方法设置为“信噪”时，该字段为只读字段。
选择线性方法后，该方法必须与 LOD/LOQ 测试在相同的认证研究中，并且包含正确的组份类型。
判据值取决于所执行研究的类型：对于平衡研究，选择精确判据。
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限摘要：药品分析方法的验证是质量控制的重要环节，为检验分析方法提供制定依据。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法是需进行分析方法验证。
在检验前期需通过验证试验得到合适的分析方法对药品进行检验，确保分析方法的可靠性，能准确检验产品质量。
分析方法验证遵循的GMP规定，根据检验项目要求预设验证内容进行验证，使样品检验达到预期要求。
本文就药品分析方法验证试验中检测限和定量限的运用进行的分析讨论。
关键词：药品分析方法；验证试验；检测限；定量限引言：药品分析方法的验证试验主要参考中国药典分析方法验证指导原则，主要涉及的验证参数有专属性、准确性、精密度、线性、检测限、定量限、耐用性、范围。
方法验证的建构应当满足所预期的检测目的及用途，对所涉及的有关参数予以验证。
检测限是指能从被测试样中检出的最低量，考察的是其是否具备灵敏检测能力。
定量限是指能从被测试样中定量测定的最低量，其测定结果符合准确度和精密度要求。
运用于杂质定量试验，能把极少杂质含量精准测定出来，从而达到更好的检测效果，保证药品的质量符合规定。
1药品分析验证方法成功的条件药品分析验证是按照药品生产GMP药物分析方法学进行验证，保障药物分析结果的准确性。
为了排除其它因素的影响，需具备所用仪器在校正有效期内，使用可靠稳定对照品和稳定试剂，确保受试溶液满足稳定性要求，在规定时间内不能出现降解现象，同时还要考虑其专属性、线性、准确度、定量限、检测限、系统适用性等影响。
除此之外，还要对分析方法的验证评价进行严格考量，应使分析方法具有专属性，能区分其共存物质、基团、目标化合物等，从而使分析方法验证达到整体性和系统性要求。
2药品分析方法验证试验中检测限和定量限的概念按照中国药典分析方法验证指导原则，检测限和定量限是重要的验证指标。
检测限是指被测试样能检出的最低量，依靠置信度能检测组分中的最小量和最小浓度，检测限仅作为限度测试指标和定性鉴别依据，无定量意义。
定量限和检测限名词解释-概述说明以及解释
定量限和检测限名词解释-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容：定量限和检测限是在科学研究和实验中广泛使用的两个重要概念。
它们与实验的准确性和可靠性密切相关，在保证实验结果的可信度方面起着至关重要的作用。
定量限是指在给定的条件下，在所选择的分析方法中能够准确、可靠地检测到的最低浓度或最小物质含量。
它代表了实验检测的下限，即只有高于这个限制的浓度才能被检测到。
定量限的确定对于准确测定样品中低浓度物质的含量非常关键，特别是在环境监测、药物分析、食品安全等领域。
检测限是指在给定的条件下，在所选择的分析方法中能够被可靠地检测到的最低浓度或最小物质含量。
与定量限不同的是，检测限更多地关注实验的可靠性，即实验可以检测到物质的存在与否，但无法提供准确的浓度或含量。
检测限的确定往往需要考虑仪器的灵敏度、噪音水平、背景信号等因素，以保证实验结果的准确性。
本文将首先对定量限和检测限的概念进行详细解释，并介绍它们的计算方法和应用领域。
其次，还将分析定量限和检测限在科学研究和实验中的重要性，并展望它们未来的发展方向。
通过本文的阐述，希望能够提高对定量限和检测限概念的理解，促进相关领域的科学研究和实验的准确性和可靠性。
1.2 文章结构文章结构：本文共分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分主要概述和介绍了定量限和检测限的概念，并阐明了本文的目的。
首先，对定量限和检测限的定义和意义进行了解释，明确了它们在科学研究和实验中的重要作用。
其次，介绍了定量限和检测限的计算方法，展示了如何确定和计算这两个指标。
最后，指出了定量限和检测限在不同应用领域的重要性和作用。
正文部分详细探讨了定量限的定义和意义，包括其在科学研究和实验中的重要性。
首先，对定量限的定义进行了解释，概括了定量限是指某种分析方法或仪器在特定条件下能够检测到的最低浓度或含量的限制。
其次，分析了定量限的计算方法，涵盖了方法的原理和具体步骤。
最后，列举了定量限在各个应用领域中的具体应用，如环境监测、食品安全等，展示了其在不同领域中的重要作用和意义。
定量分析方法的空白限、检出限、定量限的建立和评价
分析灵敏度(analytical sensitivity)：校准曲线的
斜率（横坐标为浓度，纵坐标为测量信号），斜 率越大，直线越陡，灵敏度越高。中等斜率、极 低随机变异的方法具有较低的检测限。
功能灵敏度(Functional sensitivity)：测定结果 变异系数等于20%时的被测量的大小。
检出限（Limit of Detection, LoD)：检测方法可检测出的最低被测物 浓度,也称检测低限(lower limit of detection)或最小检出浓度 (minimum detectable concentration)，有时用以表示”sensitivity”.
定量限（Limit of Quantitation)：检测系统能够得到可靠结果的被测 物最低浓度。规定实验条件下，其精密度和正确度可接受。 也被叫做 “lower limit of determination” 、“lower end of the measuring range.” 通常情况下，LoB<LoD≤LoQ
验证LoB; 选择被测量=LoD的样本，获取至少20
次测量结果（多个样本，多天完成）。
计算大于LoB的测定结果所占比例是否 符合（b=5%)要求。
符合要求，验证通过；
不符合，联系厂家或建立LoD.
a=b=5%，LoD=45U/L
25次空白样本测定（5天，5个样本，每 个测定5次）；
溶液的重复测定变异系数
为20.08%，最接近20%。
标准溶液测定均值为
6.22mmol/L，故本胆固醇
测定方法的功能灵敏度为 6.22mmol/L。
空白样本反复测定，计算其均值（M）和标准差 （SD）；
临床实验室如何确定和建立生物参考区间-C-28
临床实验室如何确定和建立生物参考区间-C-28临床实验室如何确定和建立生物参考区间（核准指南――第二版）1 内容简介此指南是专为指导临床诊断实验室、诊断仪器试剂制造商和临床检验工作者在定量实验检测中确定参考值和参考区间而制定的。
它包括在临床医学实验室中建立可靠的参考区间所用的方法步骤和推荐程序。
而该推荐程序的主要内容是如何用最简便和最务实的方法去建立一个能保证足够可靠性和实用性的参考区间的草案。
此文献不可能每一种情形都面面俱到，所以有些内容需要通过指南外来充实。
但在特定的区域内，额外的步骤或努力可以提高参考区间的可信度和精确度。
目前的现状是，临床实验室科研人员和仪器试剂制造商缺乏统一的收集数据及操作方法去建立参考区间，故小组委员会希望此文献能为建立可靠的参考区间提供最基本的、统一的实验草案，并为进一步的研究夯实基础。
该程序指南的关键在于决定“相对健康”群体参考值或参考区间时所选择的样品组是否来源于健康良好的人群，这也是此文献的谈论的重点。
当然，对于其他类型诸如生理或病理情况下的参考值的建立，也应该采用相似的方法。
此程序概要适用于任何类型的参考区间的确定，因为它充分考虑了合适的参考个体的选择及各种分析方法影响因素等情况。
然而，这份文献没有专门地谈到怎样建立诊断域值（如危急值或各种医学决定值）。
这些值的决定方法各异，部分还经常要在特定医学条件下由诊断方法的敏感性和特异性来决定。
不同情况下的参考值研究的各种需求本指南也将涉及，包括：●新分析物的测量●用新的或不同的分析方法测量事先已明确知道的分析物或已标准化测定的生理学的数据和参考值。
●用相同或者有可比性的方法去测量同一分析物，并利用其他实验室或试剂生产商提供的参考值作比较研究（参考值的调用）。
被称为“参考值调用”的最后一项议题是比较复杂的。
因为今后所有的临床诊断实验室将会不断地遇到调用参考值的验证和随后的采用它这个问题，而试剂生产商和其他实验室所提供的参考值是不能直接应用的。
1.检测限和定量限的确定方法
空白 Blank//空白限Limit of blank(LoB）
空白 Blank 不含有感兴趣分析物，或至少浓度远低于感兴趣最低水平的样本 空白限 Limit of blank(LoB） 可能观测到空白样本的最高测量结果（声称概率下） • 注：a）LoB不是通过测量获得的实际浓度。事实上，阳性信号的实际浓度确认被称为LoD。同样地，
•被用于描述一个检验程序以指定的测量不确定度能测量的被测量最低值。 它也被用来指测定下限、定量下限、测量下限和功能灵敏度
功能灵敏度比定量限无任何优势。由于该术语延续灵敏度的不赞成用法，因此不鼓励它在 体外诊断标示中的使用
定性分析中限值的使用
“检测限”
•一个定性测试的检出限有可能根据经验观测不到其增加，例如，试剂引起 的变化。因为样本中分析物可检测的水平可能低于cutoff值，这可能增加假 阴性结果的比例
体外诊断产品性能评估-
检测限和定量限的确定方法
2020年11月9日
术语和定义
α错误// β错误Alpha(α)error// Beta(β)error
α错误//第I类错误//假阳性 Alpha(α)error//Type I error//False positive 错误地拒绝无效假设（物质不存在）的概率，事实上物质真不存在 β错误//第II类错误//假阴性 Beta(β)error//Type II error//False negative 错误地接受无效假设（物质不存在）的概率，事实上物质在指定的水平 存在
LoB是含有在声称概率下分析物水平等于LoD的样本预期的最低值 • b）这同“检测下限”；即声称的给出测量不确定度声称值的测量程序得到的最低结果。也称为“临界值
”（ISO11843）
最低检测限和最低定量限到底有什么区别
-----WORD格式--可编辑--专业资料-----检测限是指产生一个能可靠地被检出的分析信号所需要的某元素的最小浓度或含量，而定量限则是指定量分析实际可以达到的极限。
因为当元素在试样中的含量相当于方法的检出限时，虽然能可靠地检测其分析信号，证明该元素在试样中确实存在，但定量测定的误差可能非常大，测量的结果仅具有定性分析的价值。
定量限在数值上总应高于检出限。
定量限是定量分析方法实际可能测定的某组分的下限。
与检测限不同，定量限不仅受到测定噪声限制，而且还受到空白背景绝对水平的限制，只有当分析信号比噪声和空白背景大到一定程度时才能可靠地分辨与检测出来。
噪声和空白背景越高，实际能测定的浓度就越高，说明高的噪声和空白背景值会使测定限变坏。
……最低检测限，是在给出的仪器条件下所能测出的最低限度最低定量限，样中的被分析物能够被定量测定的最低量或者检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低浓度或量。
检测限是一种限度检验效能指标，即反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白( 本底) 值的高低。
它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。
根据所采用的分析方法来确定检测限。
当用GC 和HPLC 法时，可用已知低浓度样品测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
一般以S / N ＝ 2 或S / N ＝3 时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。
检测限的报告数据应附图谱，说明测试过程和检测限结果。
定量限定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度。
常用信噪比法测定定量限。
一般以S / N ＝10 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。
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浅析药品分析方法验证试验中检测限和定量限
浅析药品分析方法验证试验中检测限和定量限摘要：药品分析方法验证试验是《中国药典》的重要组成部分，也是目前我国药品质量检验机构开展工作的重要依据。
本文在阐述药品分析方法验证试验必要性的基础上，重点分析了检测限和定量限的定义及其作用，并结合实例介绍了常用检测限和定量限的计算方法，最后对药品分析方法验证试验中常见问题进行了探讨。
在药品质量检验工作中，掌握好药品分析方法验证试验中检测限和定量限的确定方法，对于提高方法验证工作的效率具有重要意义。
关键词：药品分析；方法验证；检测限；定量限1方法验证的必要性药品分析方法是指用于检验药品中特定物质的操作规程和规定。
《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）是我国药品生产、流通和使用的技术标准，它是药品质量标准体系中的一个组成部分，也是目前我国最重要的一项药品质量控制标准。
《中国药典》收载了415个药用化学物质成分分析方法，其中，有许多是分析方法，如性状、鉴别、检查、含量测定、杂质检查等。
这些方法是药品质量检验工作中必不可少的技术手段，其科学性和可靠性直接影响到药品质量控制工作的有效性和可靠性。
因此，需要通过一定的实验证明方法的可行性、可靠性和精确性，以保证药品质量检验结果的准确性和可靠性。
目前，我国药典所采用的分析方法主要有气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）、分光光度法（LC）和荧光法（FL）等。
这些分析方法虽然不同程度上涵盖了《中国药典》收载的各种分析方法，但在方法设计时往往都缺乏足够的科学依据，且实验条件、设备仪器等不能完全满足分析方法验证试验的要求。
例如 HPLC法要求样品溶液和对照品溶液必须在同一稀释系统中配制，且两溶液要具有一定的浓度梯度。
对于HPLC法中所用流动相要求为缓冲液，且其 pH值需在一定范围内。
对色谱柱而言，流动相必须是弱酸性或中性水溶液，且需要有一定的流速。
色谱柱长度一般为10~30 cm；进样量一般为1~5μl；检测波长为200~400 CC。
理化分析方法的检测限定量限和耐用性验证及案例
理化分析方法的检测限定量限和耐用性验证及案例一、检测限和定量限的验证1. 检测限（detection limit）是指在特定条件下，能够检测出样品中存在的且与标准物质相关联的最低浓度。
检测限的验证常用方法有标准加入法和空白法。
标准加入法是在样品中添加已知浓度的标准物质，然后进行测定，根据测定结果判断是否能够准确检测出已知浓度的标准物质。
空白法是对不含待测物质的样品进行测试，观察是否出现与待测物质相关的信号。
2. 定量限（quantification limit）是在特定条件下，能够准确测量出样品中存在的且与标准物质相关联的最低浓度。
定量限的验证方法可以使用标准加入法和线性回归法。
标准加入法是在样品中添加已知浓度的标准物质，然后进行测定，根据测定结果判断是否能够准确测量出已知浓度的标准物质。
线性回归法是通过建立一条标准曲线，根据样品测定结果在曲线上的位置来判断是否能够准确测量出样品中的标准物质。
二、耐用性验证耐用性验证是验证分析方法在长期使用和各种实际条件下的稳定性和可重复性。
常用的耐用性验证方法有再现性实验和操作人员间的对比实验。
再现性实验是在相同实验条件下重复进行多个测定，比较测定结果的一致性，可以评估方法的稳定性和可重复性。
操作人员间的对比实验是不同的操作人员在相同实验条件下进行测定，比较测定结果的一致性，可以评估方法的用户依赖性。
三、案例以下是一个案例，介绍了理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证的具体操作步骤和结果分析。
案例：检测饮用水中的重金属镉的浓度1.检测限验证：通过空白法，在不含镉的饮用水样品中进行测定，观察是否出现镉的相关信号。
验证结果显示，当镉的浓度低于0.01 mg/L时，无法检测到镉的信号。
2.定量限验证：采用标准加入法，在含不同浓度的镉标准物质的饮用水样品中进行测定。
结果表明，在镉浓度为0.05-0.5 mg/L范围内，测定结果与加入的镉标准物质浓度呈良好的线性关系。
28-04 最低检测限和定量限_分析灵敏度试验
中日联谊医院检验医学中心文件编号：CJUH/LMC-JL-TY-CX-28-04第1版第0次修订分析灵敏度试验结果评价表年：□□□□流水号：□□□□□□检出限（Limit of Detection，LD；）、最低检测限（Lowest Limit of Detection，LLD）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信检出的最低水平。
（当测量空白样品时，分析物未检出的概率应是99%；当测量样品时，检出概率至少应是95%）。
用来描述空白响应量（RLU）的平均水平和所有响应量（RLU）对于空白均值的离散程度指标。
定量限（Limit of Quantitation，LQ）：是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信定量的最低水平。
（定量限所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求）。
某样品单次检测可能具有的最小响应量（RLU）仅大于空白检测低限。
注：1. 空白样品（Blank sample ，BS ）的准备：常使用检测系统的系列校准品中的“零标准”作为空白。
对某些项目，可使用术后已无某疾病的病人样品为空白样品。
2. 样本检测：：空白样品重复20次（不低于10次）作批内测定，计算空白样品组的响应量（RLU ）均值0A 和空白样品组响应量（RLU ）的标准差0S 。
3. LLD 的计算：（对于小于或等于检测低限的分析物量报告“无分析物检出”）。
（1）002LLD A S =+计算（以95%为可信限）。
（2）003LLD A S =+计算（以99.7%为可信限）。
1. 样本配制方法： 将已确定空白（B ）和低值（L ）的样本按照一定比例混合稀释，配制成20套（一天一套）11个等差浓度水平（10S B 、9S B +1L 、8S B +2L 、7S B +3L 、6S B +4L 、5S B +5L 、4S B +6L 、3S B +7L 、2S B +8L 、1S B +9L 、10L ）的样本。
理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证及案例
理化分析方法的检测限、定量限和耐用性验证及案例检测限和定量限检测限定义为样品中被分析物能够检出但无需准确定量的最低量。
检测限常常与方法的灵敏度相混淆，灵敏度是以响应值对被分析物的浓度或质量作图所得校正曲线的斜率。
定量限（LOQ）定义为能够以适当的精密度和准确度对样品中的被分析物进行定量测定的最低量。
定量限和检测限测定方式包括：a) 视觉判断通过测定待测成分浓度已知的样品，并确定该成分能被可靠检出的最低水平来计算检测限。
如重金属测定法。
b) 信噪比法通过比较测得的已知低浓度的样品信号和空白样品的信号，建立能够监测的被测物的最低浓度所得到的方法。
如色谱法。
c) 基于空白的响应值标准偏差通过分析适当数量的空白样品并计算所得响应值的标准偏差来测量分析背景响应值的大小。
如光谱法。
检测限数据须用含量相近的样品进行验证。
应附测定图谱，说明试验过程和检测限结果；定量限数据还应包括准确度和精密度验证数据。
图1 通过信噪比评价检测限和定量检测限和定量限测定方法（信噪比法）示例：在最灵敏的仪器状态下,测定至少四个空白样品,洗脱时间需覆盖整个样品中所有组分的流出，计算平均噪声水平；然后按信噪比大于2而小于6 配制所有组分的样品溶液，每个样品进样三次,计算该组分的最小检测限；然后按信噪比等于10.0±0.5 配制样品溶液，连续进样三次计算组分的最小定量限。
耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据。
确定方法的耐用性时，使一系列的方法参数在一定的范围内变动，测定这些变动对结果的量化影响。
常见的耐用性考察因素示例如下表。
如果参数的影响在预先设定的允许范围内，则证实方法在该参数范围内耐用。
表1 常见耐用性考察因素耐用性试验可以确定分析方法的关键参数及其允许的容量范围，并可以帮助评估一种或某种参数变化后方法是否需要重新验证。
在方法开发阶段应考虑通过风险评估的方式确定耐用性试验因素设计，这也是“质量源于设计”（QbD）在方法开发中的体现。
最低检测限与
（六）临床意义
1.蛋白浓度升高 （1）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。 （2）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、 免疫增殖病等。
2.蛋白浓度降低
（1）蛋白丢失：如肾病综合征。 （2）摄入不足：营养不良。 （3）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。
二、检测低限试验
检测低限（LLD）：指当标本中不含有待 测分析物时，反应响应量可能出现的数值范 围，即单次测量可达到的非空白检测响应量 对应的分析物量。
三、线性范围试验
可报告范围（RR）：指可以报告的所有结 果的范围，包含两种类型的范围，即分析测 量范围和临床可报告范围。
分析测量范围（AMR）：指对没有进行任 何预处理（稀释、浓度等）的标本，由检测 系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围， 在此范围内一系列不同样本分析物的测量值 与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。也 即线性范围。
测定管吸光度
标准管吸光度 × 蛋白标准液浓度
（50g/L） 参考值：60－83g/L
（四）注意事项
1.严重溶血和黄疸可使测定结果偏高,可 作标本空白管消除。 2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。 3.右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。
（五）方法学评价
1.精密度较好、准确度较高，WHO推荐方法。 2.线性范围宽（10-120g/L）。 3.操作简便你、快速，成本低廉。 4.灵敏度较低。
若a较大，b>1.03或<0.97则认为在高浓度 或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。 试着舍去某组数据，另作回归分析，直到a接 近于0，b在0.97~1.03之间，此时缩小的分析 范围是真实的可报告范围。
下次课预习内容
标准曲线制作（赖氏法测定ALT)
以日间重复cv为20时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值一原理选择合适的空白标本该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质一般用处理过的标本或一般标本在分析步骤中省去关键试剂或操作
最低检测限
最低检测限最低检测限是指在一定的实验条件下，能够被检测出的最小物质浓度。
在环境监测、食品安全等领域中，最低检测限是非常重要的指标，因为它决定了检测方法的可靠性和准确性。
本文将从以下几个方面详细介绍最低检测限。
一、最低检测限的定义及意义1.1 定义最低检测限是指在特定实验条件下，能够被检出的物质的最小含量或最小浓度。
通俗地说，就是当样品中含有某种物质时，仪器或方法可以检出这种物质的最小量。
1.2 意义在环境监测、食品安全等领域中，对于某些有害物质或污染物质，在样品中含量很少时也可能会对人体健康造成影响。
因此，在进行监测和分析时需要使用灵敏度高、可靠性好的方法。
而最低检测限就是评价这些方法是否达到要求的重要指标之一。
二、影响最低检测限的因素2.1 仪器灵敏度仪器灵敏度是指仪器能够检测出的最小信号强度。
仪器灵敏度越高，最低检测限就越低。
2.2 样品基质样品基质是指样品中除了目标物质以外的其他成分。
样品基质中含有大量杂质或干扰物质会降低目标物质的检测灵敏度，从而影响最低检测限。
2.3 检测方法不同的检测方法对于同一种物质的最低检测限可能存在差异。
例如，气相色谱法和液相色谱法对于某些物质的检测灵敏度存在差异。
三、最低检测限的计算方法3.1 信噪比法信噪比法是一种常用的计算最低检测限的方法。
它基于信号和噪声之间的关系来确定最小可检出信号强度。
通常情况下，信噪比应在3:1以上才能认为该信号是可靠的。
3.2 标准曲线法标准曲线法是一种通过制备多个不同含量标准溶液，然后将这些溶液进行测试并绘制出标准曲线的方法。
通过标准曲线可以确定最低检测限。
四、最低检测限的应用4.1 环境监测在环境监测中，最低检测限是评价检测方法是否可靠和准确的重要指标。
例如，对于水体中微量污染物的检测，最低检测限常常需要达到ng/L或pg/L级别。
4.2 食品安全在食品安全领域中，最低检测限也非常重要。
例如，在农产品中检出的农药残留量通常需要达到ppb（10^-9）级别才能保证食品安全。
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中日联谊医院检验医学中心文件编号：CJUH/LMC-JL-TY-CX-28-04第1版第0次修订
分析灵敏度试验结果评价表
年：□□□□流水号：□□□□□□
检出限（Limit of Detection，LD；）、最低检测限（Lowest Limit of Detection，LLD）：
是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信检出的最低水平。
（当测量空白样品时，分析物未检出的概率应是99%；当测量样品时，检出概率至少应是95%）。
用来描述空白响应量（RLU）的平均水平和所有响应量（RLU）对于空白均值的离散程度指标。
定量限（Limit of Quantitation，LQ）：
是一种以物理单位或比例所表示的数值，用以代表可信定量的最低水平。
（定量限所规定的最低浓度，应满足一定的精密度和准确度的要求）。
某样品单次检测可能具有的最小响应量（RLU）仅大于空白检测低限。
注：
1. 空白样品（Blank sample ，BS ）的准备：常使用检测系统的系列校准品中的“零标准”作为空白。
对某些项目，可使用术后已无某疾病的病人样品为空白样品。
2. 样本检测：：空白样品重复20次（不低于10次）作批内测定，计算空白样品组的响应量（RLU ）均值0A 和空白样品组响应量（RLU ）的标准差0S 。
3. LLD 的计算：（对于小于或等于检测低限的分析物量报告“无分析物检出”）。
（1）002LLD A S =+计算（以95%为可信限）。
（2）003LLD A S =+计算（以99.7%为可信限）。
1. 样本配制方法： 将已确定空白（B ）和低值（L ）的样本按照一定比例混合稀释，配制成20套（一天一套）11个等差浓度水平（10S B 、9S B +1L 、8S B +2L 、7S B +3L 、6S B +4L 、5S B +5L 、4S B +6L 、3S B +7L 、2S B +8L 、1S B +9L 、10L ）的样本。
-20℃冰箱保存备用。
“S B ”：空白样本或生理盐水；“L ”：低值样本。
2. 样本检测：每天定时将11个等差浓度比例的样本按照浓度由低到高的顺序分别在检测系统上检测1次，一共检测10—20天。
计算各浓度组的响应量均值i A 和各浓度组的响应量的标准差i S
3. LQ 的计算：以0(3)3i i A S S ->的稀释浓度为LQ （以99.7%为可信限）。