临床分子生物学检验 总
临床分子生物学检验
第1～6章1、现代分子生物学的开端：1953年，Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构，标志着现代分子生物学的兴起，为揭开人类生命现象的本质奠定了基础。
2、临床分子生物学检验：是分子生物学技术在临床检验诊断应用中发展起来的，以疾病为中心、以生物分子标志物为靶标的新一代临床检验诊断技术，是临床分子生物学的重要组成部分。
3、应用到临床的分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物。
4、分子标志物：是指可以反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质（多肽）、代谢产物等生物分子，是生物标志物的一种类型。
5、核酸分子标志物包括：基因突变，DNA多态性，基因组DNA片段，RNA和循环核酸等多种形式。
6、DNA一级结构（直径，两个碱基之间的距离，一个螺距，一个螺旋有多少个核苷酸）：DNA一级结构就是指各核苷酸单体沿多核苷酸链排列的顺序。
7、DNA二级结构（右手螺旋—B型最常见，左手螺旋—Z型）：DNA的二级结构是双螺旋结构，主要特征是①主干链反向平行：DNA分子是一个由两条平行的脱氧多核苷酸链围绕同一个中心轴盘曲形成的右手螺旋结构，两条链行走方向相反，一条链为5’→3’走向，另一条链为3’→5’走向。
磷酸基和脱氧核糖基构成链的骨架，位于双螺旋的外侧；碱基位于双螺旋的内侧。
碱基平面与中轴垂直。
②侧链碱基互补配对：两条脱氧多核苷酸链通过碱基之间的氢键连接在一起。
DNA双螺旋的直径为2nm，一圈螺旋含10个碱基对（一个螺旋有20个核苷酸），每一碱基平面的轴向距离为0.34nm，故每一螺距为3.4nm，每个碱基的旋转角度为36°。
8、DNA三级结构（真核生物DNA三级结构是染色质或染色体）：DNA双螺旋进一步盘曲形成更加复杂的结构，称为三级结构。
超螺旋是DNA三级结构的最常见的形式。
9、真核生物的DNA形成染色质的包装过程（4步）：①形成核小体：构成染色质的基本单位是核小体。
核小体由核小体核心和连接区组成。
临床分子生物学检验技术
概念临床分子生物学检验技术是一种通过检测核酸或蛋白质分子的特异性探针，结合PCR扩增等技术手段，对患者进行疾病诊断、评估和监测的生物学检测技术。
其主要原理是通过检测局部基因组的DNA序列变异或特定基因表达的差异，较快地、精准地检测出有关疾病的相关信息。
常见的临床分子生物学检验包括基因测序、实时荧光定量PCR、基因芯片、蛋白质组学等。
应用临床分子生物学检验技术在诊断和治疗疾病等方面有广泛的应用。
它包括以下方面：病毒感染检测病毒感染检测是临床分子生物学检验技术的最常见应用之一。
例如，病毒性肝炎、艾滋病等病毒可以通过PCR扩增等技术检测其DNA或RNA序列，快速、准确地诊断出相关病情。
遗传疾病检测临床分子生物学检验技术可以用来检测遗传疾病，例如囊性纤维化、血友病等。
通过测试特定基因的变异，可以帮助提供准确的诊断和治疗方案。
肿瘤检测临床分子生物学检验技术可以用于肿瘤的检测和治疗。
例如，可以通过检测特定基因的变异来确定病程、判断预后、评估生存率。
此外，分子靶向治疗可以根据肿瘤基因异质性搭配治疗，旨在找到更好的治疗方案。
发展趋势随着分子生物学技术的不断发展，临床分子生物学检验技术也有了新的发展方向，主要包括以下几个方面：个性化医疗个性化医疗是临床分子生物学检验技术的重要发展所趋，它利用分子层面的信息，识别和分析患者的基本和环境因素，以针对性和定制性地制定最佳治疗方案，提高临床疗效。
基于大数据的检测随着数据采集和处理技术的不断提高，数据已成为生物医学研究中最重要的资源之一。
临床分子生物学检验技术在未来还将集成可视化数据分析、机器学习等技术，打造更开放、高效、便捷的医学数据系统。
智能化诊断随着人工智能技术的崛起，临床分子生物学检验技术将融合人工智能技术，利用计算机进行大数据分析和诊断，打造智能化临床检测平台，大大改进诊断效率和准确性，从而进一步提升疾病的治疗效果和预测准确性。
总的来说，临床分子生物学检验技术在治疗、预防及生物医学研究方面持有巨大潜力。
临床分子生物学检验技术
04
优势：快速、准确、灵敏度高
05
局限性：成本高、技术要求高、需要专业人员操作
遗传病诊断
基因检测：通过基因测序技术， 检测遗传病相关基因突变
产前诊断：通过基因检测，评估 胎儿遗传病风险，指导优生优育
遗传咨询：根据基因检测结果， 提供遗传病风险评估和预防建议
药物治疗：根据基因检测结果， 制定个性化的药物治疗方案
04 跨界合作：与其他领域的技 术相结合，如人工智能、大 数据等，为分子生物学检验 技术带来更多的市场机遇。
汇报人：xxx
液体活检技术的发展： 通过血液样本检测肿瘤 细胞，提高了肿瘤检测
的准确性和便捷性
生物芯片技术的应用： 用于基因表达分析、 基因分型等，提高了 检测效率和准确性
单细胞测序技术的发展： 实现了对单个细胞的基 因表达分析，提高了检
测的灵敏度和分辨率
基因编辑技术的发展： CRISPR/Cas9等基因 编辑技术的出现，为基 因治疗提供了新的可能
市场前景与机遇
01 市场需求：随着人们对健康 重视程度的提高，分子生物 学检验技术在医疗领域的应 用将越来越广泛。
02 技术进步：随着分子生物学 技术的不断发展，检验技术 将更加精准、高效，为市场 带来更多机遇。
03 政策支持：政府对医疗领域 的投入加大，为分子生物学 检验技术的发展提供了有利 的政策环境。
生物学与工程学的融合：分子 生物学检验技术需要利用工程 学原理和方法，如微流控芯片、 纳米材料等，进行生物大分子 的检测和分析。
技术瓶颈与难题
技术难度：分子生物学检验技术涉及 多个学科，技术难度较大
成本问题：分子生物学检验技术成本 较高，难以普及
检测准确性：分子生物学检验技术检 测准确性有待提高
临床分子生物学检验技术名词解释
临床分子生物学检验技术名词解释临床分子生物学检验技术是一种应用分子生物学原理和技术的方法，用于检测和诊断临床样本中的遗传变异、基因表达和蛋白质水平等。
它可以为临床医生提供有关疾病发生、发展和治疗反应的重要信息。
以下是一些常见的临床分子生物学检验技术及其解释：1.聚合酶链反应（PCR）：PCR是一种用于扩增DNA片段的技术。
它可以从极小的DNA样本中扩增特定的DNA片段，以检测和诊断遗传性疾病、感染和肿瘤等。
2.基因测序：基因测序是一种用于确定DNA或RNA序列的技术。
它可以揭示个体的遗传信息，检测基因突变和多态性，帮助诊断遗传性疾病、肿瘤和药物反应等。
3.核酸杂交：核酸杂交是一种用于检测目标DNA或RNA序列的技术。
它利用DNA或RNA探针与目标序列互补结合的原理，可以检测病毒感染、基因突变和融合基因等。
4.蛋白质电泳：蛋白质电泳是一种用于分离和检测蛋白质的技术。
它通过在凝胶中进行电泳，可以分离不同大小、电荷和亲和性的蛋白质，用于疾病标记和生物标志物的检测。
5.免疫组化：免疫组化是一种用于检测蛋白质在细胞或组织中的表达和定位的技术。
它利用特异性抗体与目标蛋白质结合，通过染色或荧光信号来检测和定量蛋白质的表达水平。
6.质谱分析：质谱分析是一种用于分析和鉴定化合物的技术。
它可以通过将样本中的分子离子化，利用质谱仪测量其质量和电荷比，从而确定样品的组成和结构，用于肿瘤标记物和药物代谢产物的检测。
这些临床分子生物学检验技术在临床实践中起着重要的作用，可以帮助医生进行准确的诊断和治疗决策，为患者提供更好的医疗服务。
随着技术的不断发展和突破，我们可以预期未来将出现更多更精确的分子生物学检验技术，为临床医学带来更大的进步和革新。
分子生物学检验技术的临床应用
分子生物学检验技术的临床应用分子生物学检验技术是一种应用于临床诊断和治疗的重要工具。
它基于分子生物学的原理和方法，通过对生物体内分子水平的研究，为医生提供了更准确、快速和个体化的诊断和治疗方案。
本文将从分子生物学检验技术的原理、临床应用及其优势等方面进行探讨。
一、分子生物学检验技术的原理分子生物学检验技术主要包括核酸提取、聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR、基因测序等。
其中，核酸提取是从样本中提取出核酸分子，PCR是通过扩增特定DNA片段来检测目标基因的存在，实时荧光定量PCR则可以定量检测目标基因的数量，基因测序则是对DNA序列进行测定。
这些技术的基本原理是在体外模拟生物体内的核酸复制和扩增过程，从而实现对目标基因的检测和分析。
二、分子生物学检验技术在临床中的应用1. 基因突变检测：分子生物学检验技术可以对致病基因的突变进行检测，从而帮助医生确定遗传性疾病的诊断和治疗策略。
例如，通过PCR技术可以检测乳腺癌基因BRCA1/BRCA2的突变，帮助判断患者是否具有乳腺癌的遗传风险。
2. 微生物检测：分子生物学检验技术可以快速、准确地检测各类病原微生物，包括细菌、病毒、真菌等。
利用PCR技术可以检测结核分枝杆菌、艾滋病病毒等病原体的存在，帮助医生确定感染性疾病的诊断和治疗方案。
3. 肿瘤标志物检测：分子生物学检验技术可以检测肿瘤标志物的存在和表达水平，帮助医生判断肿瘤的类型、分级和预后。
例如，通过实时荧光定量PCR技术可以检测前列腺特异性抗原（PSA）的表达水平，辅助诊断和监测前列腺癌。
4. 基因型鉴定：利用分子生物学检验技术可以对个体基因型进行鉴定，帮助医生制定个体化的药物治疗方案。
例如，通过基因测序技术可以确定患者对某些药物的代谢能力，从而避免不良药物反应或提高药物疗效。
三、分子生物学检验技术的优势1. 高灵敏度：分子生物学检验技术可以在非常低浓度的样本中检测到目标基因的存在，具有非常高的灵敏度。
临床分子生物检验
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感谢倾听
20XX
临床分子生 物检验
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1
临床分子生物学检验的主要任务
2
临床分子生物学检验的技术方法
3
临床分子生物学检验的应用领域
临床分子生物检验
临床分子生物学检验是一门结合临床医学和分 子生物学的综合性学科，主要研究各种疾病在
分子水平上的诊断、预防和治疗
随着现代医学技术的快速发展，临床分子生物 学检验在医学领域中发挥着越来越重要的作用
肿瘤免疫治疗：通过对肿瘤细胞的 基因表达和免疫状态进行分析，可 以为肿瘤免疫治疗提供重要的指导 和参考
遗传病预测：通过对家族遗传病史 和患者基因进行分析，可以预测遗 传病的发病风险和预后情况，为患 者提供针对性的预防和治疗方案
2
临床分子生物学检验的技术方法
临床分子生物学检验的技术方法主要包括以下几种
基因测序：通过对患者样本进行全基因测序或目标区域测序，可以检测出各种 基因突变和异常表达等
实时定量PCR：通过实时定量PCR技术可以检测特定基因的表达水平，为疾病诊 断和治疗提供依据
蛋白质组学分析：通过蛋白质组学分析可以检测出各种蛋白质的表达和修饰情 况，为疾病诊断和治疗提供参考
生物信息学分析：通过生物信息学分析可以对大量数据进行挖掘和分析，为疾 病诊断、预防和治疗提供重要的指导和参考
产前诊断和胎儿健康评估：通过对孕妇样本进行基因检测和分析，可以检测出胎 儿是否存在遗传缺陷和异常情况，为孕妇提供针对性的产前诊断和健康评估服务
临床分子生物学检验的应用领域
01
总之，临床分子生物学检验是现代医学中不可或缺的一部分， 它为疾病的早期诊断、预防和治疗提供了重要的指导和参考
02
随着技术的不断进步和发展，相信临床分子生物学 检验将会在未来的医学领域中发挥更加重要的作用
(完整word)临床分子生物学检验 总
四个阶段：一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心二、以PCR技术为核心三、以生物芯片为核心四、以DNA测序技术为核心广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA)为主基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标病原生物基因1。
菌种鉴定：PCR—测序和PCR—DNA探针杂交;缩短检测时间2。
确定病毒感染和病毒载量:明确感染源,判断病情,监测疗效3.病毒分析:基因型变异产生不同临床症状4。
细菌耐药监测和分子流行病学调查 :随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播基因变异1。
致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3。
肿瘤相关基因单基因病1。
致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2。
致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2。
疾病诊断和遗传咨询3。
多基因病的研究4。
器官移植配型和个体识别循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI） 3。
日本国立遗传研究所(DDBJ）一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPRO T等。
蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等.蛋白质数据库常用的有SWISS—PROT、 PIR、 PDB数据库。
2024版临床分子生物学检验技术
信号分子异常
信号分子的合成、分泌、运输或 降解异常均可影响细胞信号传导， 导致细胞功能紊乱和疾病发生。
信号通路异常
信号通路中关键分子的基因突变、 表达异常或相互作用异常均可破 坏信号通路的平衡，导致细胞增 殖、分化、凋亡等异常，进而引 发疾病。
2024/1/30
17
细胞信号传导检测技术及应用
免疫学检测技术
利用荧光共振能量转移（FRET）、 生物发光等成像技术，实时监测 活体内细胞信号传导的动态过程。
18
2024/1/30
05
CATALOGUE
免疫分析技术
19
抗原抗体反应原理及特点
2024/1/30
抗原抗体反应原理
基于抗原与抗体之间的特异性结合 反应，形成抗原-抗体复合物。
特点
高度特异性、敏感性和可逆性，受 多种因素影响如温度、pH值等。
2024/1/30
25
组织芯片和细胞芯片的原理及应用
原理
组织芯片和细胞芯片是一种高通量的组织或细胞分析技术，通过将大量组织或细胞样本固定在固相支持物 上，利用组织学、免疫组化、原位杂交等方法对组织或细胞进行染色和分析，实现对组织或细胞的形态、 功能和基因表达的研究。
应用
组织芯片和细胞芯片在疾病病理研究、药物筛选、生物标志物发现等领域具有广泛应用。例如，在肿瘤研 究中，可以利用组织芯片对大量肿瘤组织样本进行高通量的病理分析和基因表达研究，为肿瘤的分子分型、 预后评估和个性化治疗提供重要依据。
蛋白质分离与鉴定方法
01
02
03
双向凝胶电泳技术
通过等电聚焦和SDSPAGE两步电泳，实现蛋 白质的分离。
2024/1/30
质谱技术
利用质谱仪对蛋白质进行 鉴定，包括MALDI-TOF、 ESI等。
临床分子生物学检验考试总结
临床分子生物学检验标志物一、名词解释生物标志物：可客观的测量和评价，作为正常的生理过程、疾病过程或药物对治疗干预的反应指标分子生物标志物：可反映机体生理、病理状态的核酸、蛋白质、代谢产物等生物分子基因组：一个细胞或一种生物体的整套遗传物质，包括基因和非编码DNA质粒：细菌细胞染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状分子多基因家族：某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因动态突变：三核苷酸的重复次数可随世代交替的传递而呈现逐代递增的累加突变效应单核苷酸多态性：在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列的多态性表观遗传：DNA序列不发生改变，基因功能出现可逆的、可遗传的变化DNA甲基化：生物体在DNA甲基转移酶的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程微小RNA：一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小约20～25个核苷酸，在细胞内主要发挥基因转录水平调控作用蛋白质组：一种基因组所表达的全套蛋白质，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质似然比：反映真实性的一种指标，属于同时反映灵敏度和特异度的复合指标二、简答题5.简述人类基因组的DNA多态性的形式6.简述临床分子生物标志物应具备的特征1、该标志物在临床上是否有可行的检测方法2、该分子生物标志物是否增加新的信息3、判断生物标志物是否有有助于医生对患者的处理7.简述生物标志物的发现与评价“五阶段”方法。
1、临床前的探索性研究。
筛选的标志物要具有诊断、预后或治疗（预测性的）价值，具有潜在的临床应用价值。
2、建立可在临床应用的检测方法，这些检测方法应具有良好的重复性3、针对临床上还未能进行检测的疾病进行试验，对生物标志物的灵敏度和特异性进行评价，用于检测已经在临床上发现的疾病。
4、要在前瞻性队列研究中评估分子生物标志物的灵敏度和特异性。
5、在筛选的人群中对新的诊断方法进行效益/风险评估第三章临床标本处理与分离纯化技术2简述临床标本处理的一般原则。
检验科分子生物学科室个人总结
检验科分子生物学科室个人总结短短的三个月，在医院党政领导的正确领导下，在检验科主任的带领下，我认真学习各专业知识，立足本职岗位，踏踏实实做好医疗服务工作。
现总结如下：一、恪尽职守，认真做好本职工作方面积极熟悉临检室检查项目，到目前为止，已能够顺利的开展工作，并熟练的完成本职工作。
在业务工作中，认真履行科里的各项规章制度，一切检验操作都严格遵守操作规程。
对待工作认真负责，时刻以谨慎的工作态度处理好每一个待检标本，认真处理好工作中遇到的疑难问题。
对检测结果与临床诊断不太相符的结果，第一时间向上级检验师反映，坚持做到复查，确保发出检验报告的准确性，及时与临床医生联系，提供有利的诊断依据。
二、严于律已，努力提高业务水平方面医德医风和医疗质量方面：具有强烈的事业心和责任感，对待每一个前来检查的病人，全心全意为病人服务。
对不符合检验质量的标本，要求病人重新留取，并和病人说明原因，取得病人的认可，杜绝医患关系的发生。
严格组织纪律观念，做到不迟到、不早退、不串岗。
三、工作中存在的主要问题在短短几个月的工作和学习中，由于自己各项素质尚须进一步提高，工作中难免出现这样和那样的问题和错误，如存在急躁情绪，开拓创新不够等。
这有待于在今后的工作中加以改进。
新的一年意味着新的起点、新的机遇、新的挑战，我决心再接再厉，努力开创工作新局面，为总院的发展做出贡献。
现将20xx年工作计划如下：1、按照二甲医院审核的标准帮助主任组建血库，对血库的各条检查内容进行分解对照，逐条梳理，认真准备，力争检验科在二甲医院复审中顺利通过。
并保证血库配发血准确率达到100%，登记完好率100%;成份输血使用率达到99%。
2、继续熟悉并掌握检验科生化检验、免疫检验等科室的各项检测项目，熟练操作技能，注重理论和实践相结合，对异常结果，试验中的异常情况具有一定的处理能力。
及时、准确的完成各项工作。
检验科分子生物学科室个人总结。
《临床分子生物学检验》课程教学大纲
《临床分子生物学检验》课程教学大纲一、课程基本信息【课程名称】临床分子生物学检验【英文名称】(Clinical molecular biology technology ) 【课程编码】YXZX3430【课程类别】专业选修课【总学时】22学时【总学分】1学分【适用专业】医学检验专业【开课院系】医学院二、课程得性质与任务【课程性质】分子生物学就是研究生命化学得科学,它在分子水平探讨生命得本质,即研究生物体得分子结构与功能、物质代谢与调节、及其在生命活动中得作用。
由于分子生物学越来越多地成为生命科学得共同语言,当今分子生物学已成为生命科学领域得前沿学科。
临床分子生物学检验得教学任务主要就是介绍核酸与分子标志物、核酸杂交、扩增及序列分析、芯片技术、生物信息分析技术以及应用分子生物学技术较多得有关病毒、细菌、真菌感染得分子生物学检验。
课程涵盖最新得有关单基因病检测、肿瘤、线粒体病、染色体病分子检测技术,同时目前临床上技术要求很高得药物相关基因、胚胎植入前以及移植配型与法医物证学得相关分子生物学检验得内容也有详细讲解,对于解决精准医疗得相关问题提供了实验室检测依据。
【教学目标】通过临床分子生物学检验课程得学习,学生将能够:(1)描述生物体(主要就是人体)内得主要物质得组成、分子生物学功能。
(2)基本掌握核酸杂交技术与核酸扩增技术及核酸序列分析。
(3)学会初步通过生物芯片技术与蛋白质组学技术得学习,运用生物信息学技术可以进行简单得数据结果分析。
(4)结合分子生物学得基本理论掌握病毒学、细菌感染、真菌等得分子生物学检测。
(5)了解有关单基因遗传病、肿瘤、线粒体疾病、染色体病、药物相关性基因、胚胎植入前及移植配型相关技术。
【教学任务】(1)要求学生掌握临床分子生物学检验得基础理论、知识与方法。
(2)通过实验课,使学生能够了解分子生物学检验基本技术得临床应用。
三、课程教学基本要求(一)理论教学内容与基本要求绪论教学内容:1、临床分子生物学检验得定义及其发展历史。
临床分子生物学检验绪论
耐异烟肼分子机制：结核杆菌耐异烟肼与过氧化氢酶-过氧化物酶编码基 因(katG)、烯酰基还原酶编码基因(inhA)、烷基过氧化氢酶还原酶编码基 因(ahpC)、β2S酮酰基酰基运载蛋白合成酶编码基因(kasA)有关。 主要是katG基因的点突变、缺失、插入。
耐氨基糖苷类药物：rpsL基因发生突变 耐吡嗪酰胺：pncA 基因突变
l第二阶段 核心技术：聚合酶链式反应（PCR）技术
以基因组特异性序列（DNA,RNA）为靶标
为获得性（病原微生物）基因疾病（DNA,RNA）的诊断提供了有效的 方法。
1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:PCR 技术的发明
PCR电泳结果
Q-PCR结果
1.临床分子生物学定义及其发展 临床分子生 物学检验的 发展:以生物 芯片为代表 的高通量密 集型技术
最早的微阵列图片
生物芯片：
一般指高密度固定在互相支持介质 上的生物信息分子（如基因片段、 DNA片段或多肽、蛋白质、糖分 子、组织等）的微阵列杂交型芯片。
1.临床分子生物学定义及其发展
临床分子生 物学检验的 发展:以生物 芯片为代表 的高通量密 集型技术
1.临床分子生物学定义及其发展
临床分子生 物学检验的 发展:以生物 芯片为代表 的高通量密 集型技术
第四代检验 诊断
第三代检验诊断
1.临床分子生物学定义及其发展
临床分子生 物学检验的 发展DNA双 螺旋的发现
1953年，Watson和Crick提出 DNA双螺旋模型，现代分子生 物学开始兴起，为分子检验奠
定了基础
James Watson 和 Francis Crick
1.临床分子生物学定义及其发展
1.临床分子生物学定义及其发展
临床分子生物学检验技术实验指导
临床分子生物学检验技术实验指导简介临床分子生物学检验技术是一种在临床医学中应用的分子生物学技术，通过分析和检测个体的基因组、蛋白质组和代谢产物等分子级别的信息，以帮助诊断和治疗疾病。
本文档将指导您进行一系列临床分子生物学检验技术实验，包括基因扩增、基因测序和蛋白质分析等。
基因扩增实验实验材料•反应体系：DNA模板、引物、dNTPs、酶切酶、Taq聚合酶、缓冲液等•实验仪器：热循环仪、电泳仪等•实验耗材：离心管、PCR管、琼脂糖凝胶、电泳试剂等实验步骤1.准备反应体系：–将PCR管中添加所需的反应体系成分，包括DNA模板、引物、dNTPs、酶切酶、Taq聚合酶和缓冲液等，按照所需体积进行计量。
–将PCR管密封。
2.设置热循环仪参数：–根据扩增反应的需求，设置热循环仪的参数，如退火温度、延伸温度和循环次数等。
3.进行扩增反应：–将PCR管放入热循环仪中，开始扩增反应。
4.等待扩增反应结束：–根据所设定的循环次数，等待扩增反应结束。
5.进行电泳分析：–取出PCR管中的反应体系，加入加载缓冲液，并将其倒入琼脂糖凝胶槽中。
–以合适的电压和时间进行电泳分析。
6.结果分析：–通过电泳图，观察扩增产物带的大小和强度，判断扩增是否成功。
基因测序实验实验材料•反应体系：DNA样本、引物、dNTPs、酶切酶、DNA聚合酶、缓冲液等•实验仪器：测序仪•实验耗材：离心管、测序管等实验步骤1.提取DNA样本：–从待测样本中提取DNA，使用适当的提取试剂盒进行提取。
2.准备反应体系：–将测序反应所需的反应体系成分，包括DNA 样本、引物、dNTPs、酶切酶、DNA聚合酶和缓冲液等，按照所需体积进行计量。
–将反应体系混合均匀。
3.进行测序反应：–将反应体系转移到测序管中，加入测序仪所需的荧光探针。
–将测序管放入测序仪中，开始测序反应。
4.等待测序反应结束：–根据所设定的反应时间，等待测序反应结束。
5.结果分析：–通过测序仪输出的测序图谱，解读每个碱基的荧光信号，得到待测DNA序列。
分子生物学检验技术的临床应用
分子生物学检验技术的临床应用分子生物学检验技术是指利用DNA、RNA等核酸作为检验对象，通过PCR、序列测定等技术进行检测的一种生物学检验技术。
这种技术特点是高灵敏度和高特异性，已经被广泛应用于疾病诊断、预后评估、药物治疗监测等方面。
分子生物学检验技术的临床应用主要包括以下方面：1. 病原体诊断：分子生物学检验技术可以快速、准确地检测各种病原体，如细菌、病毒、真菌等，对于疾病的诊断具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测艾滋病毒、乙型肝炎病毒、结核杆菌、HPV病毒等，替代了传统的细菌培养和病毒抗原检测等技术，大大缩短了诊断时间和提高了诊断准确性。
2. 遗传性疾病诊断：分子生物学检验技术可以检测患者基因突变和遗传疾病的易感性基因多态性等，对于遗传疾病的诊断和家族遗传咨询具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测囊性纤维化、地中海贫血、肌萎缩性侧索硬化等遗传疾病。
3. 肿瘤诊断和治疗监测：分子生物学检验技术可以检测肿瘤相关的突变基因和异常表达基因等，对于肿瘤诊断和治疗监测具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测BCR/ABL转座子和JAK2突变基因等，对慢性粒细胞白血病等血液系统疾病的诊断和治疗监测有重要作用。
4. 药物代谢基因检测和个体化用药：分子生物学检验技术可以检测药物代谢基因的多态性和药物靶点基因表达等，对于个体化用药和药物不良反应的预防具有重要意义。
例如，PCR技术可以检测CYP2C9和VKORC1基因多态性，用于华法林等抗凝药物的个体化用药。
总之，分子生物学检验技术在临床医学中应用广泛，已经成为现代医学的重要组成部分，对于疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
未来随着技术的不断进步，分子生物学检验技术将继续对临床医学的发展做出更大的贡献。
绪论临床分子生物学检验
在一定的条件下基因也 可以从原来的存在形式突然 改变成另一种新的存在形式， 就是在一个位点上，突然出 现了一个新基因，代替了原 有基因，这个基因叫做变异 基因。于是后代的表现中也 就突然地出现祖先从未有的 新性状。
例如英国女王维多利亚 家族在她以前没有发现过血 友病的病人，但是她的一个 儿子患了血友病，成了她家 族中第一个患血友病的成员。 后来，又在她的外孙中出现 了几个血友病病人。很显然， 在她的父亲或母亲中产生了 一个血友病基因的突变。这 个突变基因传给了她，而她 是杂合子，所以表现型仍是 正常的，但却通过她传给了 她的儿子。
临床分子生物学检验
专业培养目标
培养学生具有扎实的 分子生物学理论基础
（1）掌握本学科的基础理论和基本技能
（2）了解本学科的前沿领域和发展趋势
• 研究对象：生物大分子(核酸、蛋白质)的结构、功 能和生物合成等
• 研究目的：阐明各种生命现象的本质 • 研究技术：克隆、扩增、测序、
杂交、电泳等
分子生物学的诞生与发展 是整个自然科学的大事
这种天生的基因突变使得人们不能用两
只眼睛来观察世界，这种畸形一般在250人
中会有1人患有。脸部会模糊或者鼻子会失
去作用，如果碰到这样的情况，一般家长会
在孩子出生之前就会选择不要。这种人类基
因突变都是遗传因素或者是因为母亲身体中
摄入了毒素。
从图片上可以看到，这个男子看起来就像是一个树人，手脚上都有树的 分支。20年来，他一直都是这样的生活，他全身上下都有苔藓，这让他看 起来像是在森林里生长的植物。这些在他身上的苔藓可能有12多磅而他总 身重也就100磅。他走几步道就会觉得很累因为全身上下多余的体重很沉。 有专家认为引起他这种基因突变的原因是一种HPV病毒。有两种HPV病毒， 一种可以导致宫颈癌，而另一种可能导致皮肤上有苔，显然，他是属于后 者的。当他进入青春期的时候，这些基因也跟随着他开始发展，这些东西 是他所不能控制的。
临床医学检验临床分子生物学
临床医学检验临床分子生物学临床医学检验临床分子生物学随着科技的不断发展，临床医学检验方法也在不断升级，其中一种亮点就是临床分子生物学的应用。
今天，我们将从不同类别的角度来解析临床分子生物学给医学检验带来的变革。
第一类：深度解读疾病在临床分子生物学发展初期，其主要作用是通过DNA测序等方法，对疾病基因进行准确的定位和描述。
通过这些信息，医学检验可以更好地理解疾病的本质和机理，让人们更有针对性地制定治疗方案。
例如，研究表明，某些癌症患者在基因水平上存在一些微小的变异，这些变异可能会影响治疗效果。
然而，在之前的检验方法中，这些变异难以被检测和确定。
而临床分子生物学的出现，则为定位和研究这些薄弱点提供了更好的平台。
第二类：加速诊断进程临床分子生物学不仅可以揭示疾病的本质，还能有效缩短诊断的时间。
临床分子生物学方法可以更快地进行检测，例如PCR技术，它能够在很短的时间内检测出病原体DNA，因此可以让医生尽快得到初步诊断。
这对于一些急症患者来说，尤其重要。
另外，在某些世代病毒感染疾病中，由于病原体在患者体内的繁殖速度较慢，因此常规检验方法可能会产生误报或假阴性结果。
而临床分子生物学则可以通过直接检测病原体的核酸，获得更为准确的结果，消除误诊的风险，从而辅助医生制定更好的治疗计划。
第三类：监测疗效临床分子生物学方法还可以帮助医生监测患者的疗效。
在治疗的过程中，临床分子生物学方法可以采集表征信号分子等标记，如某些特定蛋白质、基因表达等数据，然后利用急性期和慢性期的比较，判断疗效是否达到预期。
例如，某些肿瘤治疗药物会影响肿瘤细胞表达特定蛋白的水平，通过检测这些蛋白水平的变化，医生可以更好地监测疗效是否达标。
总结：随着临床分子生物学技术的不断发展，它已经成为医学检验的重要手段之一，通过其应用，我们可以更准确地诊断疾病、选择合适的治疗方案、并实现更好的疗效监测。
因此，我们相信，在不远的将来，临床分子生物学还会继续带来更多好处，进一步推动医学检验行业的升级和发展。
临床分子生物学检验技术
临床分子生物学检验技术是应用于临床诊断和治疗的一种重要检验技术，它主要通过对生物样本（如血液、组织等）中的分子水平信息进行分析，从而实现对疾病的诊断、预后评估和治疗效果监测等目的。
以下是一些常见的临床分子生物学检验技术：
1. 聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于复制DNA片段的技术，可以在体外迅速扩增特定DNA序列，常用于检测病原体的核酸、基因突变和基因表达水平等。
2. 实时荧光定量PCR（qPCR）：qPCR结合了PCR和荧光探针技术，可以实时监测PCR反应过程中的DNA扩增情况，适用于定量检测特定DNA序列的含量。
3. 核酸序列分析：通过对DNA或RNA序列进行测序，可以揭示基因组中的突变、异质性和基因表达差异等信息，有助于疾病诊断和个体化治疗的实施。
4. 基因组学分析：利用高通量测序技术对整个基因组进行测序和分析，可以发现与疾病相关的遗传变异，为精准医学提供支持。
5. 蛋白质组学分析：通过质谱法等技术对生物样本中的蛋白质进行分析，有助于发现疾病标志物和治疗靶点。
6. 细胞遗传学检测：包括FISH（荧光原位杂交）和CGH（比较基因组杂交）等技术，用于检测染色体异常和基因拷贝数变异。
7. 免疫组化检测：通过对组织中特定蛋白质的免疫反应进行检测，用于肿瘤标志物的检测和疾病诊断。
这些临床分子生物学检验技术在癌症诊断、遗传性疾病筛查、微生物感染检测等领域发挥着重要作用，为临床医生提供了更精准的诊断信息和治疗方案制定依据。
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四个阶段：一、以导致遗传病的基因突变位点为靶标，以DNA分子杂交为核心二、以PCR技术为核心三、以生物芯片为核心四、以DNA测序技术为核心广义：分子标志物包括基因组DNA、各种RNA、蛋白质和各种代谢物临床分子生物学检验靶标主要以核酸（DNA和RNA）为主基因组DNA是临床分子生物学检验中最常用的分子靶标病原生物基因1.菌种鉴定：PCR-测序和PCR-DNA探针杂交;缩短检测时间2.确定病毒感染和病毒载量：明确感染源，判断病情，监测疗效3.病毒分析：基因型变异产生不同临床症状4.细菌耐药监测和分子流行病学调查：随机扩增多态性DNA；指导选择治疗方案，控制病原菌的感染传播基因变异1.致病基因的分子缺陷 2.线粒体基因突 3.肿瘤相关基因单基因病1.致病基因结构发生了改变，影响了编码产物量和质的改变，如血红蛋白病、血友病、Duchenne肌营养不良等。
2.致病基因中核苷酸三联体重复序列发生高度扩展，如脆性X综合征、亨廷顿病、强直性肌营养不良等。
基因多态性用于：1.基因定位和疾病相关性分析2.疾病诊断和遗传咨询3.多基因病的研究4.器官移植配型和个体识别循环游离核酸检测（包括游离DNA和游离RNA）用于：产前诊断、恶性肿瘤早期诊断、病例检测临床分子生物学检验技术以分子杂交技术、PCR技术和DNA测序技术、芯片技术、双向电泳技术、生物信息学技术为主要技术分子生物学检验技术可用于微生物感染的确诊、感染性病原体的分型、耐药监测。
分子生物学检验技术有利于临床上对遗传性疾病的早期预防、早期诊断、早期治疗。
重要国际生物信息中心：1.美国国立生物技术信息中心（NCBI）2.欧洲生物信息学研究所(EBI) 3.日本国立遗传研究所（DDBJ）一级核酸数据库有GenBank、EMBL和DDBJ；蛋白质序列数据库有SWISS-PROT、PIR、UNIPRO T等。
蛋白质X射线晶体三维结构数据库有PDB等。
蛋白质数据库常用的有SWISS-PROT、 PIR、 PDB数据库。
二级数据库非常多，如人类基因组图谱库GDB、转录因子和结合位点库TRANSFAC、蛋白质结构家族库SCOP等。
**乙型肝炎病毒核酸的检测常用技术：1.普通PCR技术2.荧光定量PCR技术3. 支链DNA技术4. 核酸杂交技术5.杂交捕获系统6.基因芯片技术**HBV基因分型的方法： 1,PCR-RFLP 2.PCR-RBD 3.ELISA 4.基因芯片人乳头瘤病毒基因组结构：HPV DNA 为一双链闭环分子，基因组可分三个区段：早期区（E）、晚期区（L）、长控制区或上游调节区或非编码区。
***HPV DNA检测及基因分型：1.核酸杂交技术（主要包括核酸印迹、原位杂交、杂交捕获等技术。
目前常采用HCⅡ技术、核酸分子杂交与PCR相结合的方法。
具有较强的特异性，并可分型）2.PCR技术** （采用型特异性引物进行HPV快速分型，现已成为HPV感染最常用的检测方法之一。
目前常用通用引物-PCR（GP-PCR）和实时定量PCR。
1. GP-PCR，依据不同HPV亚型有共同保守序列的特点来设计通用引物，可广谱扩增HPV DNA，具有较高的敏感性，可检测出10-400拷贝的HPV病毒含量。
在GP-PCR的基础上，建立了巢式PCR和巢式多重PCR检测HPVDNA。
提高了检测敏感性和多重感染率。
2.实时定量PCR法，该法可实现HPV DNA定量和快速检测。
现在市售产品可以检测E6和E7的mRNA；进行HPV16、18、31、33与45分型。
检测灵敏度高，但设备昂贵，操作繁琐，不适于宫颈癌的大规模筛查。
）3.基因芯片技术（基因芯片可对HPV进行分型和多重感染诊断，适于高通量HPV筛查）4.流式荧光液芯技术5.飞行时间质谱技术临床意义：（一）宫颈疾病风险预测（二）疗效评估及术后跟踪（三）预防控制和疫苗研发**HIV-1基因组中，gag、pol、env为结构基因，编码病毒核心蛋白(gag)、多聚酶(pol)、和外膜蛋白(env)。
vpr、rev、vif、tat、vpu／vpx、nef等6个基因为调控基因，编码调控蛋白和辅助蛋白。
核酸序列依赖扩增（NASBA）是一种等温扩增RNA的技术，能直接扩增单链RNA特异序列，通过合成cDNA，在等温条件下进行体外序列特异性核酸扩增。
NASBA需要AMV逆转录酶、核糖核酸酶H、噬菌体T7RNA聚合酶共同作用完成。
NASBA 分非循环相(模板RNA 与引物Ⅰ互补)和循环相(转录的反义RNA 与引物Ⅱ 互补)两个阶段流行性感冒病毒核酸检测：主要有RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、基因芯片、逆转录-环介导等温扩增（RT-LAMP）等。
结核分枝杆菌核酸的检测: 1.PCR 2.Real-time PCR 3. PCR-RFLP 4. 线性探针杂交法（LPA） 5.链替代扩增技术（SDA） 6.扩增结核分枝杆菌直接试验（AMTDT） 7.基因芯片技术 8.GeneXpert全自动结合检测平台结核分枝杆菌的耐药性检测:（1）DNA测序（2）PCR-SSCP （3）PCR-RFLP （4）PCR-RDB （5）基因芯片技术淋病奈瑟菌核酸的检测: 1.PCR 2.实时荧光定量 PCR技术 3. 连接酶链反应 4.连替代扩增技术（SDA）淋病奈瑟菌的主要耐药基因:（1）gyrA和parC基因（2）pen A、ponA基因（3）porB基因（4）Mtr系统调控基因（5）erm基因淋病奈瑟菌耐药检测的分子生物学技术:（1）DNA测序（2）PCR-SSCP （3）PCR-RFLP （4）基因芯片技术*医院细菌感染的常用分子生物学检验技术: 1.脉冲场凝胶电泳(PFGE）被认为是菌株分子分型的“金标准” 2. PCR-RFLP 3.扩增限制性片段长度多态性分析 (AFLP)4. 重复序列PCR5. 随机扩增多态性DNA技术6. 多位点测序分型白假丝酵母菌的分子生物学检验： 1.PCR 普通PCR、实时PCR、巢式PCR和多重PCR等 2. PCR-斑点杂交 3. DNA指纹技术，包括RFLP、随即扩增多态性分析（RADP）、电泳核型分析等 4. AP-PCR 5.DNA序列分析 6.基因芯片技术新型隐球菌的分子生物学检验：1.PCR 2. 斑点杂交 3. PCR-RFLP沙眼衣原体的分子生物学检验：1.PCR 2. 连接酶链反应 3. DNA序列分析肺炎衣原体的分子生物学检验：PCR、实时荧光定量PCR技术、巢式PCR和竞争性PCR肺炎支原体的分子生物学检验：1.PCR 2. 核酸杂交，探针有特异性DNA片段探针、人工合成的寡核苷酸探针、全DNA探针。
常用斑点杂交。
3. PCR-RFLP梅毒螺旋体的分子生物学检验：1.PCR 2. 核酸杂交 3. PCR-RFLP 分子生物学检验可早期诊断患者的梅毒感染，及时治疗，防止病情恶化与蔓延。
另外是耐药基因分析和流行病学研究的首选方法。
弓形虫DNA主要有三种形式：染色体DNA、线粒体DNA、和胞质DNA利用分子生物学技术已检出弓形虫的主要基因有B1基因、P22基因（SAG2）、P30基因（SAG1）、 P43（SAG3）和棒状体蛋白1（ROP1）等。
分生检测：1.PCR 主要侧重检测B1基因和P30基因。
2. 斑点杂交α珠蛋白合成障碍性贫血的分子生物学检验 1.PCR 2.Southern印迹杂交 3.AS-PCR4. SSCP5.gap-PCRβ珠蛋白生成障碍性贫血的分子生物学检验：PCR-RDB、PCR-RFLP、基因芯片、PCR-ASO、AS-PCR血友病B的分子生物学检验：直接检测法有Southern印迹杂交、DNA测序、基因芯片和毛细管电泳；间接检测方法有RFLP、SSCP、变性梯度凝胶电泳(DGGE) 、双脱氧指纹图谱、变性高效液相色谱（DHPLC）。
脆性X综合征的分子生物学检验：（一）Southern印迹杂交（二）PCR （三）微卫星序列分析通过分子诊断FMR-1基因突变开展患者判定、携带者筛查、产前诊断和群体筛查等。
肿瘤相关的基因:原癌基因、抑癌基因、细胞周期调节基因、细胞凋亡基因以及维持细胞基因组稳定性基因等。
细胞周期调节基因:周期蛋白（cyclins）、周期蛋白依赖性激酶（CDKs）、CDK抑制因子（CKIs）及细胞周期检查点等其他蛋白细胞凋亡相关基因可分三类：促细胞凋亡基因、抑制细胞凋亡基因、细胞凋亡过程中表达的基因。
p53是研究的较为充分的与肿瘤发生、发展关系明确的抑癌基因，绝大多数肿瘤都伴有p53基因的突变。
乳腺癌（17号染色体长臂上）的发生、发展紧密联系的基因有BRCA1、BRCA2、TP53、c-erbB2、c-Myc、P53、Bcl-2、BAX、iASPP、ATM、MDM-2以及PTEN等乳腺癌的分子生物学检验：1.雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）检测（免疫组织化学）2.c-erbB-2/HER2检测（免疫组化、荧光原位杂交）3. PS2检测4. Ki67检测5. 乳腺癌复发基因检测（DNA微集阵列技术、多基因RT-PCR定量检测技术）（70基因检测方法、21基因检测方法）遗传性结直肠癌相关基因：结肠腺瘤性息肉病（APC）基因、DNA错配修复（MMR）基因、微卫星异常微卫星异常主要表现为：微卫星不稳定性（MSI）；微卫星杂合性丢失（LOH）。
结直肠癌的分子生物学检验：1.HNPCC的筛查2. 微卫星异常检测3. APC基因突变检测4. DCC基因突变检测5. DNA甲基化的检测6. 结直肠癌个体化治疗的相关检测白血病相关基因突变：C-KIT、FLT3、 NPM（核仁磷酸蛋白）、N-RAS、 NOTCH1白血病相关基因表达异常：WT1、HOX11、白血病融合基因。
（WT1可作为不伴特异分子异常的AML微小残留白血病（MRD）的理想检测指标）白血病的分子生物学检验：FISH、PCR、RT-PCR、实时定量PCR（FISH适于多种临床标本，但灵敏度不及PCR，主要用于初诊和复发的检测。
）线粒体12SrRNA基因的A1555G和C1494T突变是导致氨基糖苷类抗生素耳毒性的主要分子致病基础。
tRNA Ser(UCN)T7511C等突变则与非综合征型耳聋相关；而tRNA Leu(UUR)A3243G 等突变可导致综合征型耳聋。
耳聋相关的mtDNA突变的检测：1.PCR-RFLP 2.DHPLC 3.DNA测序 4.基因芯片LHON（Leber遗传性视神经病变）相关的mtDNA突变位点的检测方法有PCR-RFLP、PCR-SSCP、DHPLC、DNA测序、荧光定量PCR、AS-PCR、及基因芯片等tRNALeu(UUR)A3243G仍是目前国际上唯一公认的线粒体糖尿病致病突变线粒体糖尿病的分子生物学方法：PCR-DHPLC、PCR-RFLP、PCR-测序、荧光定量PCR、基因芯片等。