奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法
检测奶粉三聚氰胺方法
检测奶粉三聚氰胺方法
奶粉中三聚氰胺的检测方法主要有以下几种：
1. HPLC-UV法：利用高效液相色谱技术结合紫外检测器，通过样品中三聚氰胺的特征吸收峰进行定量分析。
2. LC-MS/MS法：利用液相色谱联用串联质谱仪的方法，对样品中的三聚氰胺进行定量分析，具有较高的灵敏度和准确性。
3. 免疫法：通过制备抗三聚氰胺抗体或利用商用的抗体盒，然后利用抗体与三聚氰胺结合形成特定复合物，并通过免疫反应进行检测和定量。
4. 酶法：利用三聚氰胺酶催化三聚氰胺分解产生氨气，然后利用氨气检测仪器进行定量分析。
需要注意的是，以上方法在检测奶粉中三聚氰胺时，通常需要先进行样品的预处理步骤，如提取、净化、富集等，以提高检测的灵敏度和准确性。
此外，不同的方法对样品的处理和仪器设备要求也有所不同，具体操作还需要参考相关的检测标准和方法说明。
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。
三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。
本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。
1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。
根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。
取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。
1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺
高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺邸万山【摘要】以双氰胺为内标物,采用高效液相色谱内标法测定奶粉中三聚氰胺的含量,通过对色谱条件的优化,最后确立了有效的检测方法.样品经20 mL 50℃热水,0.5g 无水硫酸镁,10 mL乙腈提取后,采用Nova-PakC18色谱柱(3.9 mm×15 mm×5 μm)分离,以0.01 mol/L乙酸铵∶乙腈=90∶10 (V∶V)作为流动相,218nm为检测波长.结果表明,双氰胺在该条件下能够与三聚氰胺完全分离,可以作为测定三聚氰胺的内标物.在0.500～1.500 mg/kg的添加范围内,三聚氰胺的回收率为98.2％～100.5％.精密度实验结果相对标准偏差为0.44％.所测定奶粉样品中三聚氰胺为0.223 mg/kg.此法处理样品处理简便易行,回收率、准确度高,分析速度快,具有良好的重复性和再现性,适于测定奶粉中的三聚氰胺.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)003【总页数】3页(P145-147)【关键词】三聚氰胺;高效液相色谱法;奶粉【作者】邸万山【作者单位】辽宁石化职业技术学院应用化学系,辽宁锦州121001【正文语种】中文【中图分类】TS207.3三聚氰胺作为一种价格低廉的有机化工原料，其最大的特点就是含氮量高（质量分数为66.6%），掺假增氮效果明显，成本低。
因此，在技术上和经济上存在奶粉中掺加三聚氰胺的可能。
研究表明，三聚氰胺长期累计摄入会导致肾、输尿管和膀胱结石，并有生殖系统损伤的可能性［1］。
因此有必要对奶粉中的三聚氰胺进行监测，明确其实际含量，防患于未然。
奶粉中总氮质量分数测定国家标准中使用凯氏定氮法，该方法对设备要求低，操作相对简单，但精度差。
国家规定奶粉中残留三聚氰胺限量＜1 mg/kg。
液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg，高于2.5 mg/kg的产品一律不得销售。
原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法
原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法GB/T22388-原料乳与乳制品中三聚氛胺检测方法-10-07发布-10-07实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言本标准包括三个方法:第一法高效液相色谱法,第二法液相色谱一质谱/质谱法,第三法气相色谱一质谱联用法,检测时,应根据检测对象及其限量的规定,选用与其相适应的检测方法,,本标准的附录氰为资科性開录,,本标准由全国食品安全应急标准化工作组、全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会提出并归口,,本标准第一法起草单位:中国检验检疫科学研究院、中国疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、北京市疾病预防控制中心、国家乳制品质量监督检验中心、渐江省质量技术监管检演研究院、国家加工食品质量监督检验中心(广州),,本标准第一法主要起草人:宋书锋、鲁杰、安娟、杨大进、李淑娟、张晶、刘艳琴、杨红梅、杨金宝、鄂来明、廖上富、陈小珍、蔡依军、郭新东、吴玉空,,本标准第二法起草单位:中国检验检疫科学研究院、北京市疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、中国疾病预防控制中心、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局,,本标准第二法主要起草人:彭涛、吴永宁、邵兵、王浩、李晓娟、郭启雷、苗虹、赵云峰、丁涛、李立、蒋原,,本标准第三法起草单位:上海市质量监督检验技术研究院、国家食品质量安全监督检验中心、中国检验检疫科学研究院,,本标准第三法主要起草人:巢强国、常宇文、雷涛、陈冬东、赵玉琪、周通斌、種同娜、葛宇、曹程明、张辉、麦成华、曹红,原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法1.范围本标准規定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法,即高效液相色谱法(HPLC法)、液相色谱一质谱/质谱法(LC-MS/MS法)和气相色谱一质谱联用法[包括气相色谱一质谱法(GC-MS法),气相色谱一质谱/质谱法(GC-MS/MS法)]。
本标准适用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定量测定;液相色谱一质谱/质谱法、气相色谱一质谱联用法(包括气相色谱一质谱/质谱法)同时适用于原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的定性确证。
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量精选全文
测定奶粉中三聚氰胺的含量 ——高效液相色谱法
生物工程1001班
目录
1
三鹿毒奶粉事件
2
液相色谱法简介
3
样品检测方案
4
结论与反思
毒奶粉事件回顾
❖ 2008年7月，举国上下正在为刚刚过去的 汶川大地震默哀纪念的时候，正在为即将到 来的北京奥运会而欢庆的时候，一则新闻报 道了大量婴儿因喝了某品牌奶粉而患上了肾 结石。随后三鹿集团被推上了风口浪尖，一 时间包括蒙牛、伊利在内的全国各大品牌奶 粉均被查出“毒奶粉”，引起了全国恐慌， 三鹿集团因此也破产倒闭。而这一毒奶粉事 件的罪魁祸首——三聚氰胺也随之为大众知 晓。
样品的来 源和预处 理方法
确定仪器 配置
确定初始 操作条件
定性鉴定 与
定量分析
实验结果 及判定
样品的来源和预处理方法
❖ 高效液相色谱法要求试样能制成溶液。这样， 我们在接到一个未知样品时，就必须了解的来 源，从而估计样品可能含有的组分，以及样品 的溶解度范围。如果样品体系简单，试样组分 可溶解则可直接分析。如果样品中有不能用 HPLC直接分析的组分，或样品浓度太低，就 必须进行必要的预处理，如采用吸附、解析、 萃取、浓缩、稀释、提纯、衍生化等方法处理 样品。
④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液 相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差 化合物的分离分析，显示出优势。
⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得 多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分 钟内即可完成，一般小于1小时。
样品检测方案
高效液 相色谱 法检测
0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL的标准工作液和中样品处理后的浸泡液 注入色谱仪中，以保留时间定性，以色谱峰面积或峰高定量。
原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法
ICS 67.100C 53中华人民共和国国家标准GB/T 22388—2008 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法Determination of melamine in raw milk and dairy products2008-10-07 发布2008-10-07 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布前言本标准包括三个方法：第一法高效液相色谱法，第二法液相色谱-质谱/质谱法，第三法气相色谱-质谱联用法，检测时，应根据检测对象及其限量的规定，选用与其相适应的检测方法。
本标准的附录A 为资料性附录。
本标准由全国食品安全应急标准化工作组、全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会提出并归口。
本标准第一法起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、北京市疾病预防控制中心、国家乳制品质量监督检验中心、浙江省质量技术监督检测研究院、国家加工食品质量监督检验中心（广州）。
本标准第一法主要起草人：宋书锋、鲁杰、安娟、杨大进、李淑娟、张晶、刘艳琴、杨红梅、杨金宝、鄂来明、廖上富、陈小珍、蔡依军、郭新东、吴玉銮。
本标准第二法起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京市疾病预防控制中心、国家食品质量安全监督检验中心、中国疾病预防控制中心、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。
本标准第二法主要起草人：彭涛、吴永宁、邵兵、王浩、李晓娟、郭启雷、苗虹、赵云峰、丁涛、李立、蒋原。
本标准第三法起草单位：上海市质量监督检验技术研究院、国家食品质量安全监督检验中心、中国检验检疫科学研究院。
本标准第三法主要起草人：巢强国、常宇文、雷涛、陈冬东、赵玉琪、周耀斌、穆同娜、葛宇、曹程明、张辉、麦成华、曹红。
原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法1 范围本标准规定了原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的三种测定方法，即高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）和气相色谱-质谱联用法[包括气相色谱-质谱法（GC-MS），气相色谱-质谱/质谱法（GC-MS/MS）]。
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法
三聚氰胺奶粉检测方法如下：
1. 离子色谱法：该方法基于三聚氰胺在水中形成氢氧化铵和靛酚蓝络合物的反应，在离子色谱柱中用硫酸为流动相进行分离，再通过紫外检测器进行检测。
2. 高效液相色谱法：该方法使用高效液相色谱柱进行分离，以甲醇和水为流动相，以紫外检测器和荧光检测器进行检测三聚氰胺。
3. 液质联用法：该方法是高效液相色谱法和质谱法的结合，可以同时分离和定量三聚氰胺及其代谢产物。
4. 岛式红外光谱法：该方法利用不同样品的红外光谱图谱的差异性来鉴别含三聚氰胺的奶粉。
5. 快速检测法：该方法使用荧光和拉曼光谱等技术，可以在几秒钟内快速、准确地检测奶粉中的三聚氰胺。
以上是常用的几种三聚氰胺奶粉检测方法。
不同的方法具有不同的优点和适用范围，可以根据实际需求选择合适的检测方法。
三聚氰胺 检测标准
三聚氰胺检测标准三聚氰胺（Melamine）是一种有机化合物，常用于生产塑料、胶合板、涂料、树脂等工业产品。
然而，由于其含有氮元素丰富且价格低廉，三聚氰胺曾被不法商家添加到奶粉、食品中，以提高蛋白质含量的假象，引发了2008年中国“三聚氰胺奶粉事件”，导致数千名婴儿中毒甚至死亡。
为了防范类似事件再次发生，各国纷纷制定了三聚氰胺的检测标准，以保障食品安全。
目前，国际上对三聚氰胺的检测标准主要包括ISO 18664:2005《食品中三聚氰胺的测定气相色谱-质谱法》、ISO 17366:2007《食品中三聚氰胺的测定液相色谱-质谱法》等。
这些标准主要从食品样品的制备、检测方法、仪器设备、检测限等方面进行了详细规定，确保了对三聚氰胺含量的准确测定。
在中国，国家标准《GB/T 21924-2008 食品中三聚氰胺的测定液相色谱-质谱法》也对三聚氰胺的检测提出了具体要求。
该标准规定了样品的采集、制备、检测方法、仪器设备、检测限等方面的内容，为食品生产企业和检测机构提供了可操作的技术规范。
除了食品中的三聚氰胺检测外，还有一些国家和地区对奶制品中三聚氰胺的含量进行了规定。
例如，中国对奶粉中三聚氰胺的限量标准为1mg/kg，欧盟对奶粉和其他婴幼儿食品中三聚氰胺的限量标准为0.15mg/kg。
这些限量标准的制定，为奶制品生产企业提供了明确的指导，也为监管部门提供了依据。
在实际检测中，检测人员需要严格按照标准要求进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
同时，仪器设备的选择和维护也对检测结果起着至关重要的作用。
只有严格遵守标准要求，才能有效地保障食品中三聚氰胺的检测工作。
总的来说，三聚氰胺的检测标准是保障食品安全的重要环节，各国都在不断完善和更新相关标准，以应对食品安全的挑战。
只有加强对三聚氰胺的监测和检测工作，才能有效预防类似事件的再次发生，保障人民群众的身体健康和生命安全。
希望各国在食品安全领域加强合作，共同促进全球食品安全水平的提升。
奶粉中三聚氰胺的测定
奶粉中三聚氰胺的测定2篇奶粉中三聚氰胺的测定（一）近年来，随着食品安全问题的频发，人们对奶粉的质量和安全性关注度越来越高。
奶粉中是否含有三聚氰胺成为大家关注的一个焦点。
三聚氰胺是一种危害性较高的有机化合物，其摄入后可能对人体健康造成严重影响。
因此，准确测定奶粉中的三聚氰胺含量对于保障食品安全至关重要。
奶粉中三聚氰胺的测定方法主要有以下几种：高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、质谱联用技术等。
其中，HPLC法是目前常用的一种方法，具有灵敏度高、分离效果好、结果准确可靠的特点。
下面将详细介绍奶粉中三聚氰胺测定的HPLC法。
首先，在进行HPLC测定之前，需要对样品进行预处理。
通常的预处理方法有加热提取法和重复提取法。
加热提取法是将奶粉样品与盐酸或硫酸进行加热提取，将提取液经旋转蒸发干燥后再加入溶剂进行溶解；重复提取法是将奶粉样品与溶剂进行重复振荡提取，并对提取液进行浓缩。
这两种方法都可以有效提取样品中的三聚氰胺。
接下来，提取得到的样品需要经过进一步的处理。
常见的处理方法有固相萃取和亲水基固定相柱分离纯化两种。
固相萃取是利用固相萃取柱对样品进行进一步的纯化，去除潜在干扰物质；亲水基固定相柱分离纯化则是通过使用亲水基固定相柱将样品中的亲油性物质去除。
最后，进行HPLC测定。
将纯化后的样品溶液注入HPLC仪器中，通过进样器控制样品的进入。
在采用倒相色谱柱时，流动相通常为水-有机溶液的混合物。
通过调节流动相的组成和流速，可以实现三聚氰胺与其他组分的分离。
在检测方面，可选择紫外检测器或荧光检测器进行。
紫外检测器的最大吸收波长为226 nm，选择该波长进行检测能够提高测定的准确性和灵敏度。
综上所述，HPLC法是一种准确可靠的奶粉中三聚氰胺的测定方法。
通过样品预处理、纯化和HPLC测定等步骤，可以有效地检测奶粉中的三聚氰胺含量，为食品安全提供有力支持。
奶粉中三聚氰胺的测定（二）随着奶粉质量和安全问题的日益严峻，准确测定奶粉中的三聚氰胺成为保障食品安全的重要手段之一。
超高效液相色谱_串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量
需要选择合适的色谱柱。 该试验在研究过程中， 考察了 Waters 公司的 ACQUITY UPLCTM BEH HILIC 柱（2.1 mm× 50 mm i.d.，1.7 μm）和日本资生堂的 CAPCELL PAK CR1∶4 柱（2.0 mm×100 mm i.d.，5 μm）。 Waters 公司的 HILIC 柱采 用乙腈和纯水作为流动相标准溶液能够获得较好的色谱 峰，信噪比较高，而流动相中加入甲酸、乙酸、乙酸铵都会使 响应值降低，这与文献 ［4］报道一致，但是用于样品分析时， 离子抑制很严重， 这可能是由于三聚氰胺在HILIC 柱几乎 无保留，与杂质同时流出，离子受到抑制有关。 日本资生堂 的 CAPCELL PAK CR 1∶4 柱的填料是 C18 填料和阳离子交 换填料按照 1∶4 混合而成，由于三聚氰胺是强极性化合物， 在该柱上的保留主要与阳离子交换填料有关，因此，流动相 的酸碱度跟三聚氰胺在该柱上的保留时间密切相关。 该研 究过程中， 使用 CAPCELL PAK CR 1∶4 柱， 用乙腈和 0.01 mol/L 乙酸铵溶液（等体积混合）作为流动相，流速为 0.3 ml/ min，调整流动相的酸碱度，得到三聚氰胺的保留时间与 pH 值的关系（见表 3）。 由于加大流动相中有机相的比例会加 速三聚氰胺的洗脱， 该研究最终选择了 pH 值=4.4 乙酸铵 溶液和乙腈进行梯度洗脱 （见表 1），即保证了目标峰不受 杂质峰的干扰，而且能够出峰较快、节约分析时间。
0.01 mol/L 乙 酸 铵 溶 液 （pH 值=4.4），梯 度 洗 脱 ，洗 脱 程 序 用。
见表 1。 柱温 30℃，进样量 10 μl。
1.4.2 奶粉的提取方法 准确称取 2 g 奶粉于 50 ml 圆底
表 1 梯度洗脱程序
GBT22388奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法
2016.02.29
1 性质
三聚氰胺：别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。 分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量： 126.12 物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味； 相对密度：1570kg/m³； 熔点：在常压下，354℃分解； 升华温度：300℃； 溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、 甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、 苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性
三聚氰胺检测原理（LC/MS/MS）
标准中：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取， 经阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相 色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法 本实验室用0.2 mol/L高氯酸溶液提取，增 加了“样品经0.2 mol/L高氯酸溶液提取后 加入10 mL二氯甲烷萃取”,离心，取上层 过柱，内标法定量，固相萃取净化步骤同 标准。
化学性能
三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料， 显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐； 在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基 逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚 氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应 生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树 脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防 火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地 板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水 和阻燃剂
Time(min ) A% 0.0 95 1.0 95 2.0 50 4.5 50 4.6 95 8.0 95
注意事项
每批检测样做样顺序为试剂空白、样品空白、样品加标、样品。 加标回收：移取0.2 mL，0.1 μg/mL标准溶液至样品中，相当于0.01 mg/kg添加水平，加入0.2mL 0.2 μg/mL内标工作液，初测加标要选 同等基质的样品做空白，样品复测做平行样，复测时如没有同等基 质的空白样品则直接在样品中加标，加标量为初测时样品中的含量 3 倍，且加入内标量也应与三聚氰胺含量相当，样品提取液在过固 相萃取柱之前稀释到合适的范围，取稀释液过固相萃取柱，且应保 证最终上机工作液中内标的含量为10.0ng/mL . 检测结果无需校正回收率，检测结果应减去试剂空白。 每次检测结果应与标准谱图对照，如相同浓度标液峰面积偏差较大， 应及时查找原因；
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。
2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。
二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。
2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。
反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。
但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。
三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。
若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。
测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。
奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。
加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。
脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。
反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。
对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。
但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。
通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。
近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。
三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量
高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量姓名：班级：学号：摘要：三聚氰胺是一种低毒的化工原料，动物实验结果表明，其在动物体内代谢很快且不会存留，主要影响泌尿系统。
乳制品中添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试，就送检的奶粉样品，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其中的三聚氰胺的含量。
关键词：三聚氰胺食品质量与安全奶粉标准依据高效液相色谱检测方法1材料与方法1.1盐酸（HCl）。
1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
1.3铁氰化钾（K3[Fe（CN）6]）。
1.4硫酸（H2SO4）。
1.5氢氧化钠（NaOH）。
1.6盐酸（HCl）（10+2）：量取100mL盐酸，加入20mL水中，混匀。
1.7盐酸（HCl）（1+1）：量取50mL盐酸，加入50mL水中，混匀。
1.7盐酸苯肼溶液（C6H8N2•HCl）（10g/L）：称取1.0g盐酸苯肼，加80mL水溶解，再加2mL盐酸（10+2），加水稀释至100mL，过滤，贮存于棕色瓶中。
1.8铁氰化钾溶液（K3[Fe（CN）6]）（20g/L）：称取2.0g铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
1.9硫酸（H2SO4）（1+35）：量取1mL硫酸缓慢注入35mL水中，混匀。
1.10碘标准溶液（I2）（0.1mol/L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.11硫代硫酸钠标准滴定溶液（Na2S2O3）（0.1moL／L）：配制和标定按照GB/T601或购商品化标准物质。
1.12氢氧化钠溶液（NaOH）（40g/L）：称取4g氢氧化钠，加水溶解并定容至100mL。
1.13甲醛标准储备液（CH2O）原理：以三聚氰胺为原料制作的成型品经4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色谱分离、测定，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。
1.14 奶粉1.1 主要材料与试剂1.1.1盐酸（HCl）。
1.1.2盐酸苯肼（C6H8N2•HCl）。
高效液相色谱法测定乳粉中三聚氰胺的方法优化
高效腋相色谱法测定乳粉中三聚氟服的方法优化■文丨卢竹阳沈蕾陈丹莹柏宁江苏省南通市产品质量监督检验所二聚気胺含氮量高，俗称“伪蛋白”，几乎无味，微二^溶于水，可溶于甲醇、乙酸、甲醛等，经常被用作化工原料，对健康有害，我国明确规定三聚氟胺不是食品原料，也不是食品添加剂，禁止人为添加。
“三鹿奶粉”事件影响恶劣，也给食品检验机构敲响警钟，三聚氧胺参数在乳品检测中成了必检指标，研究其检测方法尤为重要。
GB/T22388-2008《原料乳与乳制品中三聚氧胺检测方法》明确规定，测定三聚気胺有三种方法，即液相色谱-质谱/质谱法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法前两种方法涉及的仪器高端精密，费用昂贵，后续维护保养较为繁琐，不具备普遍性，本文对高效液相色谱法检测乳粉中三聚氧胺的前处理和色谱条件进行了优化。
一、材料和方法1.仪器。
Agilent-1200高效液相色谱仪（VWD）,多功能氮吹仪，高速冷冻离心机，数控超声波清洗器，电子天平（I级），固相萃取联用仪，SPE小柱：Poly-Sery MCX,60mg/3mL o2.试剂。
三聚氟胺标样（1.0mg/mL）,甲醇、乙睛、正己烷均为色谱纯，柠檬酸、辛烷磺酸钠、氨水、三氯乙酸均为分析纯。
3.样品前处理。
（1）提取"准确称取lg乳粉置于50ml具塞离心管中，加入8ml三氯乙酸溶液（1%）和2ml乙睛,超声提取约lOmin,涡旋提取约lOmin,9500r/min离心8min,取上清液于50ml离心管中；残渣重复提取一次，合并两次提取液，加入10ml三氯乙酸溶液和饱和的正己烷溶液，涡旋振荡lmin,9500r/min离心6min,取下层清液，待净化.（2）净化"依次用3ml甲醇和5m冰对SPE小柱进行活化和平衡，抽至近干；将待净化的清液转至SPE小柱中，用3ml水和3ml甲醇进行淋洗，抽至近干；用6mL氨化甲醇溶液（5%）洗脱，洗脱液于5（TC氮气吹干，残留物用lml 流动相定容，涡旋混合lmin,过0.22|xm微孔水相滤膜后，供测定。
三聚氰胺在食品中的液相色谱—质谱检测方法构建分析
三聚氰胺在食品中的液相色谱—质谱检测方法构建分析摘要：建构在液相色谱之上的检测路径，能辨识三聚氰胺特有的精准含量。
选出来的制剂，带有质谱兼容这样的特性。
三聚氰胺在预设的色谱之上，可被存留并分离，不干扰关联着的在线检定。
采纳特有的内标法、多反应查验的方式，增添了定量之中的稳定属性。
检测之中的定量限，应能超出每克0.1ng；液态特性的奶液之中，拟定的这一定限，应设定成每克0.8ng。
这样的流程，带有便捷的优势，也提升了原有的稳定水准。
比对其他范畴的色谱检定，液相色谱及特有的质谱测定，提升了精准层级。
关键词：三聚氰胺；液相色谱-质谱；检测方法奶粉及其他范畴的奶制品，曾经检定出了三聚氰胺，超出拟定好的安全指标。
三聚氰胺带有工业特性，充当着蛋白质，被添加至制备好的食物之中。
若摄入偏多的这一物质，会带来身体以内的结石，伤害着健康。
三聚氰胺关涉的检测途径，包含气液相架构下的色谱法、气相特有的色谱质谱、免疫检定的方式。
液相特性的色谱及质谱，缩减了惯用的繁琐流程，提升灵敏层级。
因此，建构这种方式，应当明辨细化的检定思路，并注重检测之中的多样细节。
一、检测必备流程（一）必备制剂及仪器液相特性的色谱质谱仪，安设了电喷雾特性的离子源。
实验室安设了电子天平、某规格下的离心机、超声特性的清洗仪、圆周架构中的振荡摇床、涡旋特性的混合配件、固相特性的萃取柱、安设的氮吹仪。
预备好的检测物质，可分成乙腈、醋酸铵及调制得来的盐酸、标准态势下的三聚氰胺、调制成的纯净水。
预备出来的试样，都来自超市。
（二）调和标准溶液三聚氰胺调制出来的标准液，规格设定成每升1120克。
采纳73%特有的乙腈溶液，经由完全溶解，放置容量瓶以内，摇匀并定容。
拟定的存留条件，是室内特有的避光条件；存留的有效期，设定成一个月。
选出来的调配溶液，包含某规格下的三聚氰胺、提炼得来的同位素。
采纳乙腈特有的水溶液，稀释得来可用的储存液体。
二、预备时段中的提取及测量（一）液体净化称量得来520毫升特有的混杂液体，转移直至活化特性的萃取柱。
自组装微流高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺
关 键词 ： 三聚氰胺； 微流高效液相； 内标法； 奶粉 中图分类 号 ： ６８ ０ ５ 文 献标志 码 ： Ａ 文章 编号 ：０８７ １（ １）３０７—４ １ —５６２ ００—０ １０ ０ ０
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｆｍ ｅａ ｉ ｎ ｍ ｉｋ ｐｏ ｔ ｒ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｌｍ ｎｅ ｉ ｌ ｗｄｅ ｙ ｓ ｌ ｓ ａｉ ｄ ｍ ｉｒ － ｒ ｂ ｅｆｉ ｔ ｌｅ ｃ ｏ ｎ
ｄｉ ０３６ ６ｉ ｎ１０ — ５ ６ ０ ０ ３ １ ｏ： ． ９ ．ｓ． ８ ７ １ ． １． ． ８ １ ９ ｓ ０ ２ ００
自组装微流 高效 液相 色谱法
测 定 奶粉 中三 聚 河南科技学院， 河南 新 乡 ４ ３ ０ ） ５ ０ ３
摘要 ： 试验建立了微流高效液相（ 一 Ｐ Ｃ测定奶粉中三聚氰胺的方法． ＨＬ） 该方法采用自组装微流液相装置， 它
主要由一个 四通分流器 、 两根不 同内径的空 毛细管和毛细管在柱检测池组成， 可灵活调整合适的背压． 样品由超
声 离心提取， 然后加入 ｌ ％三氯乙酸沉淀蛋 白净化． 色谱条 件： 自制色谱柱 （ 有效 长度 ２ ｍ， ９ｃ 总长 ３ ． ｃ ５ ７５ ｍ， ｍ
Ｏ Ｓ 即十八烷基硅烷 ） Ｄ ； ， 流动相 为乙腈 一离子对缓 冲液， 检测波长 ２０ａ ． ３ ｍ在添加浓度为 ０１ １ ／ Ｌ的范围 ． ．ｍｇ ２ ｍ 内线性关系 良好 ， 相关系数 Ｒ为 ０９ ６ ， 回收率为 ９ ．５ 结果证明该方法简便 、 ． 平均 ９Ｏ ３ ％． ２ 快捷 、 经济， 可以作 为检测 三 聚氰胺的有效手段．
ｖ ｌｅ ｓ ｌ ｔ ｇ ａ ｐ ｉｎ ｅ ｔ ｏ ｄ ｆ ｒ ｎ ｎ ｉ ｅ ｄ ａ ｔｒｅ ｔ ａ ｉ ａｙ ｃ ｐ ｌ ｒ ｎ ｃ ｌ ｍｎ ｄ ｔｃｉ ｎ ｃ ｌ ｗ ｉｈ ｃ ｕｄ ａｖ ｐ ｉ ｉ ｐ ｌ ｃ ， ｉ ｅ ｅ ｔｉ ｓ ｉ ｍｅｅ ｍｐｙ ｃ ｐ ｌ ｒ ，ａ ｉ ａｙ ｏ － ｏｕ ｅｅ ｔ ｅ ｌ ｈ ｃ ｏ ｌ ｔｎ ａ ｗ ｄ ｌ ｌ ｏ ，
乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告
2009级化学教育仪器化学综合性与设计性实验指导老师：曹** 2011年 5月 30号一、实验目的1．通过分析化学综合性实验、设计性实验，培养学生初步的解决分析化学实际问题的能力，培养学生的创新意识与创新能力。
2．学习查阅参考文献、综合参考资料、设计小型分析化学实验。
3．复习和巩固有关理论基础知识并用于指导实践。
4．进一步熟练掌握实验操作技术。
①实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）②摘要、关键词：[摘要]为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取, 离子交换萃取小柱净化, 结合高效液相色谱进行样品测定。
色谱条件: A液：0.9508 g 辛烷磺酸钠（5 mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。
色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm），检测波长：239 nm结果表明: 三聚氰胺标准曲线为y = 4495951x +18978.83, 相关系数R = 0.9999693, 在0.17～110.0 mg/L范围内线性关系良好, 方法检出限为0.12 mg/L, 两个样品三个水平的加标回收率分别为96.34 % (RSD = 4.76)、84.86 % (RSD = 7.21) 、104.29 % (RSD = 7.63) 和95.31 %(RSD = 4.39) 、89.25 % (RSD = 3.88) 、92.59 % (RSD = 5.27)。
[关键词]高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品③引言一、目前有关三聚氰胺在乳制品中的概述：三聚氰胺(melamine) ）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1,3,5-三嗪-2,4,6-三氨基”，是一种重要的氮杂环有机化工原料, 通常用于塑料制品中合成树脂的生产[ 1 ] 。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量引言三聚氰胺是一种有机氮化合物，被广泛用作氮肥和杀虫剂。
三聚氰胺在食品中的超标使用会对人体健康造成危害，尤其是对婴幼儿和孕妇。
准确测定液态奶中三聚氰胺的含量对保障食品安全至关重要。
本研究旨在建立一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺含量。
实验方法1. 样品准备将不同来源的液态奶样品分别取样，并冷冻保存以确保样品的新鲜度和完整性。
2. 萃取过程将50ml的液态奶样品加入250ml的锥形瓶中，然后加入20ml的去离子水。
将样品与水充分混合，并进行超声处理5分钟。
接着将样品倒入100ml的固相萃取管中，并采用正向固相萃取法进行样品预处理。
3. 洗脱过程使用10ml甲醇-去离子水（3:1，v/v）进行3次洗脱，用5ml甲醇进行1次洗脱。
将洗脱液合并，并置于50℃水浴中浓缩至干燥。
随后加入2ml的去离子水重新溶解，转移到2ml小瓶中备用。
4. 分析参数采用高效液相色谱法将三聚氰胺化合物在C18色谱柱上分离，采用二极管阵列检测器进行检测，流动相A为0.1%甲酸溶液，流动相B为乙腈。
柱温为30℃，流速为0.8ml/min，进样体积为10μl。
5. 样品检测将萃取液用0.22μm滤膜过滤后，进行高效液相色谱分析。
利用标准曲线法定量测定三聚氰胺的含量。
结果分析通过以上实验方法，我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。
我们分别采用标准品对该方法进行了验证，在不同浓度下三次测定的相对标准偏差(RSD)均小于3%，符合测定法的要求。
该方法的检出限为0.05μg/kg，定量限为0.2μg/kg，对实际样品的分析结果也表现出较好的准确性和灵敏度。
结论我们成功建立了一种固相萃取一高效液相色谱法，用于测定液态奶中三聚氰胺的含量。
该方法具有操作简便、准确性高、灵敏度好的特点，可以应用于实际液态奶的质量控制和食品安全监测中。
未来，我们还将探索该方法在其他食品中三聚氰胺含量测定方面的应用，并不断优化方法，提高其分析精度和适用范围。
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三聚氰胺检测原理（LC/MS/MS）
标准中：试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取， 经阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相 色谱-质谱/质谱检测和确证，外标法
本实验室用0.2 mol/L高氯酸溶液提取，增 加了“样品经0.2 mol/L高氯酸溶液提取后 加入10 mL二氯甲烷萃取”,离心，取上层 过柱，内标法定量，固相萃取净化步骤同 标准。
GB/T22388 奶粉中的三聚氰胺检测液相色谱质谱法
2016.02.29
.
1 性质
三聚氰胺：别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。 分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量： 126.12
物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味； 相对密度：1570kg/m³； 熔点：在常压下，354℃分解； 升华温度：300℃； 溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、
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流程图
称样 2g 50 mL 离心管 均质
0.2 mol/L 高氯酸溶液 9.8 mL 0.2 μg/mL 内标溶液 0.2 mL 10 mL 二氯甲烷
振荡萃取，400（上层）5 mL 过柱（用前预活 化）
3mL 水和 3mL 甲醇洗涤柱子，弃去洗液 3mL5%的氨化甲醇洗脱柱子，收集洗脱液
2 5 10 20 10
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3．色谱条件
• 仪器型号：Agilent 1200-6410 LC/MS (08JL016)
• 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH HILIC 1.7 μm
• 流速：0.2 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：5
μL；
• 流动相：A醋酸铵水B乙腈；梯度洗脱；
• Iron Source：ESI+；Capillary：4kV； Time(min) 0.0 1.0 2.0 4.5 4.6 8.0
A%
95 95 50 50 95 95
• Fragmentor：105；delta EMV：300；
• Gas Temp：110 ℃； Gas Flow：11L/hr；
• Nebulizer: 35psi。
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注意事项
每批检测样做样顺序为试剂空白、样品空白、样品加标、样品。 加标回收：移取0.2 mL，0.1 μg/mL标准溶液至样品中，相当于0.01
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检出限
HPLC/MS/MS：0.01 mg/kg HPLC:2mg/kg
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检测流程：
称样2.00 g, 准确加入0.2 mol/L高氯酸溶液9.8 mL、 0.2 μg/mL三聚氰胺内标溶液0.2 mL，均质，加入 10 mL二氯甲烷，振荡，4000r/min 离心5分钟，准 确移取5 mL上清液过混合性阳离子交换固相萃取 柱（用前用3 mL甲醇、3 mL水活化），分别用 3mL水和3mL甲醇淋洗柱子，再用3.0 mL 5%氨水 甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于50 ℃氮气吹干，准 确加入乙腈+水（9+1）2.0 mL，涡旋振荡，洗脱 液用0.25 μm微孔滤膜过滤，上机测定。
洗脱液于 50 ℃氮气吹干 2.0 mL 乙腈+水（9+1）洗脱、过滤，上机检测
.
标准曲线配制
曲线浓度
2、5 、10 、20ng/mL(各含内 标10.0 ng/mL)
曲线
工作液
移取体积 （mL）
0.2
0.5 0.1μg/mL
1.0
2.0
内标0.2ug/mL 0.5
稀释至 10 mL
浓度 （ng/mL）
甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、 苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性
.
化学性能
三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料， 显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐； 在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基 逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚 氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应 生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树 脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防 火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地 板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水 和阻燃剂
mg/kg添加水平，加入0.2mL 0.2 μg/mL内标工作液，初测加标要选 同等基质的样品做空白，样品复测做平行样，复测时如没有同等基 质的空白样品则直接在样品中加标，加标量为初测时样品中的含量 3倍，且加入内标量也应与三聚氰胺含量相当，样品提取液在过固 相萃取柱之前稀释到合适的范围，取稀释液过固相萃取柱，且应保 证最终上机工作液中内标的含量为10.0ng/mL . 检测结果无需校正回收率，检测结果应减去试剂空白。 每次检测结果应与标准谱图对照，如相同浓度标液峰面积偏差较大， 应及时查找原因；