高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率
中药药效物质基础的研究究现状与展望
中药药效物质基础的研究究现状与展望宋霁翔，褚福浩，王鹏龙，徐昕，李国梁，周粲，汤明杰，李强，雷海民+(北京中医药大学中药学院，北京100102)摘要：中药是中医药体系的重要组成部分，在临床治疗中广泛应用，中药药效物质基础研究对深层诠释中医药科学内涵及中医药理论的现代创新具有十分重要的作用，本文就近几年该领域的研究进展及方法进行综述，旨在为读者提供有益的肩示。
关键词：中药；物质纂础；理论；途径Situation and Prospect of Research on Potential Basis ofC hinese MedicineS O N G Ji—x ia ng，C HU Fu—hao，WANG Peng-10ng，XU Xin，L I GuO—liaIlg，ZHOU-Shen，TANGMing-jie，LI Qiang，LEI Hai-min木(Sc ho ol of ClI in e se Ph锄a吼BeijiIlg UniVerS时of Chin眦Medici北，Beijing 100102，Chim)Abs tr act：TCM is an impOn an t co m p on e n t oftlle Sys tem of Ch in es e m e di c in e，an d widel y use d in clinic altr e at m en t，T0 study the pote嘶al b弱is of Ch ine se medici舱is v e r y irnport锄t fo r eval岫ting Chinese medici地s onmod锄ization o f ChiIle辩瑚teria m e d ic a．i n this p a p e L the re s ea fc ha scjent i最c b黔is a nd p rom oti ng d lep ro g r es sa11d the m e tI l o d s in this field in fecent yea rs w e r e reviewed to propose n e w iIlsights柚d印proaches fbr the丘Itu∞developm髓t．Ke)啪rds：Tmditional Chinese m e di c in e：po t en t ia l b私is；111eo哆；P atll wa、，中药是在中医理论指导下用以防病治病的天然物质，有上千年的应用历史。
中药活性成分与血清白蛋白结合的研究
中药活性成分与血清白蛋白结合的研究急诊急救论文急救护理论文医学护理论文医学核心期刊1 仪器与材料1.1 仪器F-4500型分子荧光分光光度计（Japan，Hitachi）；Tu-1800SPC 型紫外-可见光分光光度计（北京普析公司）；1cm石英比色皿；微量注射器；微型旋涡混合器，精密天平（Germany,Sartorius），pHS-3酸度计。
J-810圆二色分光光度计（Japan，Jasco）；彩陆毛细管电泳系统（北京，中科院化学所），配紫外检测器和HW-001色谱工作站（中国，千谱软件有限公司）；未涂层石英毛细管，52 cm ×50 μm i.d.，有效长度为44 cm（中国河北永年光学纤维公司）；超滤管，截留分子量15 000（PALL FILTER CO., LTD, USA）；TGL－16型高速台式离心机（湘仪）。
1.2 试剂牛血清白蛋白（Roche），以水配成2.0×10-5 mol/L的储备溶液，4 ℃保存备用；18β－甘草次酸（GA，≥97%,Fluka, product of Spain）；槲皮素、金丝桃苷、芦丁、槲皮苷、山萘酚、大黄酸、大黄素对照品，购自中国药品与生物制品检定所（中国北京）；甲基莲心碱（由中南大学湘雅医院药剂科刘韶惠赠，HPLC纯度大于98％）；中药活性成分均以90%甲醇配成2.5×10-3 mol/L的溶液；pH 7.40的Tris-HCl缓冲溶液；Tris（淮安和元化工有限公司），氯化钠二水磷酸二氢钠（河南焦作），盐酸（湖南师范大学化学试剂厂）。
除已标明者外，试剂均为分析纯；水为双重蒸馏水。
2 方法2.1 光谱实验方法2.1.1 荧光猝灭方法在10 ml 容量瓶中依次加入2 ml 0.50 mol/L NaCl 溶液、2 ml pH 7.40 的Tris-HCl 缓冲溶液、2 ml BSA储备溶液，以水定容为10 ml, 摇匀，在一定温度下静置30 min。
高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用
北方药学2016年第13卷第2期高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用陈华（鄂尔多斯市中心医院鄂尔多斯017000）摘要：中药所含成分多样复杂，为质量标准的研究带来挑战。
高效液相色谱法以其高效准确、灵敏、应用范围广等特点，在中药含量测定中发挥着重大作用。
本文对高效液相色谱法在中药制剂有效成分含量测定中的应用展开介绍，其中包括生物碱类、中药苷类、黄酮类、萜类成分含量测定。
关键词：高效液相色谱法中药制剂有效成分含量测定中图分类号：R927.1 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2016）02-0019-01近年来，高效液相色谱法（HPLC）在多种结构类型的中药活性成分含量测定中的应用较为广泛。
这是由于HPLC与其他分离分析方法相比，具有灵敏度高、柱效高、分离速度快、重现性好、用范围广、操作方便等优点。
因此，HPLC成为中药制剂有效成分质量控制的重要手段。
以下对其在生物碱类、中药苷类、黄酮类、萜类有效成分含量测定中的应用进行介绍。
1生物碱类成分含量测定生物碱在中药界分布较广、种类较多、化学结构复杂，大多数生物碱化合物具有药理活性，成为中药的有效成分之一。
目前，临床中的生物碱成分大约80多种，由于生物碱存在形式不同（游离型与成盐型），碱性强弱不同。
采用HPLC法能够准确测定生物碱的有效成分含量。
侯伟雄等[1]利用HPLC法测定苦参碱分散片中苦参碱的含量，得出的结论是HPLC测定苦参碱含量准确、操作简便、结果可靠、方法可行。
朱丹妮等[2]采用蒸发光散射检测器和Shimadzu-10A高效液相色谱仪，对贝母类药材中生物碱成分进行了测定，结果表明，贝母类生物碱HPLC-ELSD 图谱有明显差异，样品制备简便，分离度较好，重现性佳，可用于贝母类药材的质量控制。
2中药苷类成分的含量测定苷类在中药界分布广泛，生理活性多种多样，如芍药苷、苯甲酰芍药苷类具有抗氧化、抗炎、抗肝损害、调节免疫等作用。
超滤法结合高效液相色谱法测定淫羊藿苷的血浆蛋白结合率
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５ ・ ８
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超滤法 结合高效液相色谱法测 定淫羊藿苷 的血浆蛋 白结合率
李 向军 ， 王海 荣， 刘敏 彦 ， 军永， 安 王超， 王胜
Ｌ ａ ｇ ｕ ，ＷＡＮ Ｈ ｉ ｏｇ Ｉ ｎｙｎ Ｎ Ｊ ｎｙ ｎ ，ＷＡＮ Ｃ ａ ，ＷＡＮ Ｓ ｅｇ （ｈ ｉ ｈ ａ ｇ ｉｎ Ｉ Ｘｉ － ｎ ｎｊ Ｇ ａ— ｎ ，Ｌ Ｕ Ｍｉ—ａ ，Ａ ｕ —ｏｇ ｒ Ｇ ｈｏ Ｇ ｈ ｎ Ｓ ｉａ ｕｎ Ｙ ｉｇ ｊｚ ｌ
Ｐ ａｍ ｃｕｉ ｌ ｏ Ｌｄ， ｈ ａｈ ａ ｇ ５ ０ ５ Ｃ ｉ ｊ ｈ ｒ ａ ｅ ｔａ ． ｔ．Ｓ ｉ ｚ ｕｎ ０ ３ ， ｈｎ ｃ Ｃ ， ｉ ｆ ０ ａ
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型离心超滤 管 （ｉ ｉｏ ｅ ０ Ｄ ０ ５ ｍ ， ；Ｍ 一 Ｍ ｎ ｐ ｒ ，１Ｋ ， ． Ｌ ） Ｍ ２型快速旋 涡 振 荡器 （ 江苏省姜堰市沈高康健生化器具厂） Ｔ ６ ３型高速 ；Ｇ １— 离心机 （ 北京时代 北利 离心机有 限公 司） 。 ２ 方法与结果
高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率
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０２ ． ５ｍＬ浓 度 为 １ ５ ｔ ｌＬ的 葛 根 素 溶 液 混 合 并 ． ｍｏ／ ｘ Ｈ Ａ 及 葛 根 素 的 浓 度 分 别 为 ６０ Ｓ ３ ｐ ｌＬ和 ０ ７ ｘ ＵＬ， 中 ＨＳ 的 浓 度 与 人 血 ￣ ／ ｍｏ ．５ｔ ｍｏ 其 Ａ
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３ ｍｉ ０ ． ⑩ ｎ后 移 取 至 规 格 为 １ ５ｍＬ 的 超 滤 装 置 中 离 心 ３ ｎ １ ０ ／ ｎ） 超 滤 膜 截 留 相 对 分 子 质 量 ０ｍｉ（ ００ ０ｒ ｍｉ ， ⑩ （ Ｌ 分 析测 定 。 ＨＰ Ｃ） 为 了 消 除 超 滤 膜 对 药 物 的 吸 附 对 测 定 结 果 的 干
蛋 白的结 合 率影 响着药 物在 体 内的药 动学 及药 效学 结果 ， 定药 物一 白结合 率对 临床 用 药具 有 重要 意 测 蛋
义 。 由此 可 见 ， 中 药 的 现 代 化 过 程 中 ， 究 中 在 研 药 有 效 成 分 与 血 清 白 蛋 白 问 的 相 互 作 用 ， 于 提 高 对 中药 用 药 的 科 学 性 ， 解 中 药 药 物 分 子 在 体 内 的 转 了 运 和 代 谢 等 具 有 特 别 重 要 的 意 义 文 献 ［ ］ 用 ４ 采
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图 １ （ ） 根 素 与 （ ） 依 春 的 结 构 ａ葛 ｂ告
蛋白质结合率的测定方法
1.平衡透析法：
优点：简单、经济、受实验因素干扰小等 缺点： 1)透析平衡时间较长。 2)血浆和缓冲液的pH值以及离子强度必 须严格控制。 3)受稀释作用、Gibbs—Donn舳效应以 及体积迁移效应的影响。 4)非特异性的透析设备表面的药物吸附 效应。
2.超滤法：
超滤法利用半透膜原理。为 解决超滤过程中非特异性超滤装 置表面的药物吸附问题．在测定 皮质激素与血浆蛋白结合的过程 中。Taylor等51对传统超滤法进 行了改进，解决了可溶性差以及 药物的吸附问题，使方法特别适 合于先导化合物的优化。
总之，测定药物血浆蛋白结合率的方法还有 很多，如超速离心法，该法对药物的吸收较 少，主要受药物沉积作用的影响；凝胶过滤 法，该法省时快速，可适用于高分子量的药 物；此外，色谱法，质谱法，圆二色谱法以 及多种检测方法联用技术在测定血浆蛋白结 合研究中有很广阔的发展前景。近年来，随 着高通量药代筛选技术的迅猛发展，这种高 效、高速的新技术也应用到血浆蛋白结合率 的测定研究中。
5.高效前沿分析法(HPFA)：
优点：1)样品预处理简单，允许直接进样，可以连接到 在线的高效液相色谱或毛细管电泳系统中进行自动分 析。2)所采用的流动相是模拟人体生理环境的磷酸盐缓 冲液，属于水性介质。3)当药物峰与蛋白峰完全分离时， 可同时从药物平台峰的峰面积和峰高计算出总药物浓 度和游离药物浓度。4)串联一个手性高效液相色谱法 (HPLc)柱，或与毛细管电泳手性拆分技术相结合，可分 别得到外消旋体中两个对映体的平台峰，求得蛋白结 合参数。5)具有调节效应相当于药物的富集，大大提高 了样品的检测限，可用于药物蛋白结合率很高、游离 药物浓度极低的药物研究。6)可以分析纳摩尔级的样品， 或进行纳升量样品的测定。HPFA对于分析药物与缺乏 的或较难获得的蛋白质的结合研究是非常有利的。
用高效液相色谱法测定人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率
用高效液相色谱法测定人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率王弘;陈济民;张清民
【期刊名称】《沈阳药科大学学报》
【年(卷),期】2000(17)2
【摘要】用高效液相色谱法对人血浆中黄芩苷进行了测定 .在 5、15、2 5 μg/mL 范围的回收率为95 .0 %、88.7%、94.2 % .人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率测定 ,为设计合理的给药方案提供了实验依据 .
【总页数】3页(P107-109)
【关键词】黄苓苷;蛋白;结合率;血药浓度;HPLC
【作者】王弘;陈济民;张清民
【作者单位】沈阳药科大学药学系
【正文语种】中文
【中图分类】R969.1
【相关文献】
1.超滤法结合高效液相色谱法测定淫羊藿苷的血浆蛋白结合率 [J], 李向军;王海荣;刘敏彦;安军永;王超;王胜
2.中空纤维液相微萃取结合高效液相色谱法测定比索洛尔血浆蛋白结合率 [J], 刘亚非;马海英;宫雪菲;王宝华
3.高效液相色谱法测定金银花中黄酮类成分槲皮素的血浆蛋白结合率 [J], 修玮
4.高效液相色谱法研究蓝萼甲素与大鼠血浆蛋白的结合率 [J], 曹露晔;陈子君;李云森;李仪奎
5.高效液相色谱法测定大鼠血浆中马钱子碱与血浆蛋白的结合率 [J], 徐金华;陈军;蔡宝昌;高颖
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高效液相色谱与串联质谱法测定游离丙戊酸钠与人血浆蛋白的结合率
空 纤 维前 处理技 术 结合 高效 液相 与 串联 质谱 法 ，测 定游 离丙戊 酸钠 的 浓度 ，采 用蛋 白沉 淀 法测定人 血 浆
中总的 丙戊酸 钠 的 浓度 。结 果 ：低 、 中 、高 ３ 种 浓度 下 ，丙 戊酸钠 的血 浆蛋 白结合 率分 别 为 ８ ８ ． ２ ７ ％、 ８ ９ ． ６ ３ ％、９ ５ ． ５ ５ ％。 结论 ：建 立 的方 法 经方 法 学考 察 能满足 药品分 析要 求。
ＬＣ－ ＭＳ ／ ＭＳ Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆｒ ｅ ｅ Ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ Ｖａ ｌ ｐｒ ｏ ａ ｔ ｅ Ｃｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ Ｂｉ ｎｄｉ ｎｇ Ｒａ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｓｏ ｄｉ ｕｍ Ｖａ ｌ ｐｒ ｏ ａ ｔ ｅ ｔ ｏ Ｈｕ ｍａ ｎ Ｐｌ ａ ｓ ｍａ Ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎｓ
对样 品进行前 处 理 ，不仅 能准 确测 定游 离丙 戊酸 的 浓 度 ，还 大 大 降 低 了损 失 。 本 文建 立 了丙 戊 酸 钠 在人 血 浆 中游离 和 总浓度 的测 定方 法 ，考察 丙戊 酸 钠 的血浆 蛋 白结 合率 ，为 临床 上丙 戊酸 钠 的血药 浓 度监 测 和应 用提 供 了方法 和依 据 。
ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｂ ｉ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｒ ａ ｔ ｅ ｓ ｏ ｆ ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ ｖ ａ ｌ ｐ ｒ ｏ ａ ｔ ｅ ａ ｔ ｌ ｏ ｗ， ｍｉ ｄ ｄ ｌ ｅ ａ ｎ ｄ ｈ ｉ ｇ ｈ ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ８ ８ ． ２ ７ ％ ，８ ９ ． ６ ３ ％ ａ ｎ ｄ
木犀草素在不同血浆中蛋白结合率的高效液相色谱法测定
【 关键词 】 木犀 草素 ； 谱 法， 色 液相 ； 白结合率 蛋 【 中圈分类号 】 Ｒ９１ 【 ６ 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号 】 １０ — ３６ ２１）３ ３９ — ３ ０２ ７８ （００２ — ３４ ０
马鞭草是马鞭 草科植 物 Ｖ ｒｅａｏ ｃ ａｉ Ｌ 的 干燥 地 上 ｅｂｎ ｆ ｉ ｌ ． ｉ ｆｎ ｓ 部分入药 ， 具有活血散瘀 、 截疟 、 解毒 、 利水 消肿 等功效 ， 主治流 感、 闭痛经 、 疟疾 、 喉痹 、 痈肿 、 水肿 、 热淋 、 牙周 炎 、 牙髓 炎、 白喉 等证 … 。黄酮类物质为马鞭 草中主要药效物质成分 ， 中木犀 其 草素（ｕｅｌ ） １ｔ ｉ 为含量较高的有效成分之一 ， ｏｎ 可作为马鞭草药材 定性 、 定量的指标性成分 。鉴于木犀 草素在药理 学方面 的重 Ｊ 要作用 ， 本研究采用 未见 报道 的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 测定 大 鼠血浆 、 人血 透析袋 中， 初浓度分 别为 ４ ０ ３ ０和 ３０ ／ ｌ每个浓 ， １ ｌＡ型 四元 泵 ， １２ Ａ型 自动进样 器 ， １ １Ａ型 Ｇ３ｌ Ｇ ３９ Ｇ３６ 柱温箱 ， １ １ Ｂ型 紫外检 测器 （ ｇ ｅｔ 司 ） Ｃ ｅ ｆｃ Ｇ ３４ Ａ ｉｎ公 ｌ ； ｈｍ Ｏ ｅ色 ｉ 谱工作 站。木犀 草 素 对 照品 （ 批号 ： １５ ０２ ００ ） 人 血 浆 １ １２ ． ２ １ ， ０ （ 河北省血液中心提供 ， 批号 ：０ ００ ０ ０ ８３ ） 大 鼠血浆 （ ０ ５ １７４ ０４ ０ ， 自
测 定 ６次 。使 透 析袋 中 留 有 少量 空 气 ， 将 透 析 袋 的 另 一 端 折 并 叠 后 用 双 股 线 扎 紧 ， 置 于 盛 有 ２ ５ｍ Ｈ ７ ４磷 酸 盐 缓 冲 液 放 ． ｌ ． ｐ （ Ｂ ，．２ｍ ｌＬ的磷 酸 盐 缓 冲 液 ， 含 ０ １ ｏ／ Ｐ Ｓ ００ ｏ ／ 内 ． ５ｍ ＬＬ氯 化 钠 ）
超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率
超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率目的测定冬凌草甲素在健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆中的蛋白结合率，为设计合理的给药方案提供依据。
方法采用超滤法结合高效液相色谱法（HPLC）对冬凌草甲素与大鼠、家兔和健康人血浆的蛋白结合率进行测定。
结果冬凌草甲素在覆盖临床给药范围的5.4，21.6和108.0 μg/mL下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为80.6%，78.3%，76.2%，与大鼠的血浆蛋白结合率分别为69.3%，67.5%，68.1%，与家兔的血浆蛋白结合率分别为65.2%，66.7%，64.3%。
覆盖临床给药浓度的3个浓度的冬凌草甲素在同种血浆中血浆蛋白结合率差异无统计学意义（P > 0.05）。
结论结果表明本法简便快速、灵敏度高、专属性好，能够满足测试生物样品的要求，超滤法结合高效液相色谱法可用于冬凌草甲素血浆蛋白结合率的检测。
在本研究试验浓度范围内，冬凌草甲素的血浆蛋白结合率与药物浓度无显著相关性，不同种血浆的蛋白结合率试验结果表明，冬凌草甲素与健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆蛋白均具有中等强度的结合。
标签：冬凌草甲素；血浆蛋白结合率；超滤法；HPLC冬凌草甲素（oridonin）是唇型科香茶菜属植物冬凌草Rabdosia rubescens （Hemsl.）Hara.中提取的一种贝壳杉烯二萜类化合物，具有较强的抗肿瘤活性，对人胃癌SGC-7901细胞、食道癌109细胞、肝癌BEL-7402细胞等多种肿瘤细胞均呈现较好的抑制作用，而对正常细胞毒性较低[1]。
目前临床多用于食管癌、贲门癌、肝癌、食道癌和胰腺癌的治疗[2]。
虽然冬凌草甲素抗肿瘤作用显著，但由于冬凌草甲素的水溶性差[3]、半衰期短、生物利用度低和在水溶液中稳定性不好[4]等原因，其临床应用受到限制，目前临床上使用较广的仅有“癌得宁注射液”，癌得宁注射液通过使用表面活性剂和有机溶剂来增大冬凌草甲素的溶解度，达到临床给药浓度，但制剂刺激性大，长期使用容易引发静脉炎等不良反应[5]。
超滤法测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率
超滤法测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率目的：测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率。
方法：采用超滤法结合高效液相色谱法对牛蒡苷及牛蒡苷元与大鼠血浆以及健康人血浆蛋白结合率进行测定。
结果：牛蒡苷与大鼠血浆在64.29，32.14，16.07 mg·L-1下的血浆蛋白结合率分别为（71.2±2.0）%，（73.4±0.61）%，（78.2±1.9）%，与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为（64.8±3.1）%，（64.5±2.5）%，（77.5±1.7）%；牛蒡苷元与大鼠血浆在77.42，38.71，19.36 mg·L-1下的血浆蛋白结合率分别为（96.7±0.41）%，（96.8±1.6）%，（97.3±0.46）%，与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为（94.7±3.1）%，（96.1±0.3）%，（97.9±1.3）%。
结论：牛蒡苷与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合，略高于与人血浆蛋白结合率；牛蒡苷元与大鼠血浆和健康人血浆均有很强的结合。
标签：牛蒡苷；牛蒡苷元；血浆蛋白结合率；超滤法；高效液相色谱法牛蒡子Arctii Fructus收载于《中国药典》2010年版一部，为临床常用中药之一。
其主要成分为木脂素类，以牛蒡苷及牛蒡苷元为代表，具有广泛的生物学活性[1]。
目前对牛蒡苷及牛蒡苷元的提取纯化方法研究较多，本课题组采用水提取-硅胶柱纯化法，制得牛蒡苷纯度>98%，收率>70%；采用自身酶水解-醇提取-硅胶柱纯化法制得牛蒡苷元纯度>97%，收率>50%，为牛蒡苷及牛蒡苷元的新药开发奠定了基础。
本实验采用超滤法[2-7]结合高效液相色谱法测定了牛蒡苷及牛蒡苷元与大鼠血浆以及健康人血浆的血浆蛋白结合率，为牛蒡苷及牛蒡苷元的新药开发研究提供一定的试验参考。
洋川芎内酯I与血浆蛋白结合率的测定
洋川芎内酯I与血浆蛋白结合率的测定作者：李恩华沈佳伟来源：《中国民族民间医药·上半月》2018年第01期【摘要】目的：研究洋川芎内酯I与大鼠和人血浆蛋白结合情况。
方法：采用平衡透析法测定洋川芎内酯I与大鼠和人血浆蛋白结合率，以液相质谱联用法测定透析内外液中洋川芎内酯I的浓度，计算其血浆蛋白结合率。
结果：血浆中其他成分对测定无干扰，洋川芎内酯I 在0.05～10μM浓度范围内线性关系均良好，精密度及稳定性结果均符合方法学要求；实验选择紫杉醇为阳性对照，孵育8h后，紫杉醇与大鼠和人血浆蛋白结合分别为92.3%～94.5% 和93.8%～97.2%，与文献报道的范围88%～98%一致。
孵育8h后，洋川芎内酯I与大鼠血浆蛋白结合率为83.5%～86.5%；与人血浆蛋白结合率为82.1%～83.9%。
结论：该方法操作简便、快速，灵敏度高，能满足生物样品的分析要求。
洋川芎内酯I与大鼠和人血浆蛋白结合较强（> 80%）。
【关键词】洋川芎内酯I；血浆蛋白结合率；平衡透析法；液相质谱联用【中图分类号】R284 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）01-0044-04Abstract：Objective To determine plasma protein binding ratio of senkyunolide I in rat and human plasma.Methods The plasma samples were precipitated by acetonitrile and analyzed by high performance liquid chromatography-mass spectrometry （LC-MS/MS）.The rapid equilibrium dialysis was carried out to determine the protein binding rate of senkyunolide I in rat and human plasma.Results The results showed that no substances from plasma interfered the determination of senkyunolide I.The calibration curve of the analytes was in good linearity in certain range of 0.05～10 μM.The precision and stability of the analytes met the methodology requirements.Taxol was used as the positive control， after incubation for 8 h， the binding ratio were 92.3%～94.5% and 93.8%～97.2% for rat and human， respectively， which was in accordance with the literature.The binding ratio of senkyunolide I were 83.5%～86.5% and 82.1%～83.9% for rat and human，respectively.Conclusion The method was proved to be simple， rapid and sensitive.And senkyunolide I displayed a high plasma protein binding ratio （> 80%）.Keywords：Senkyunolide I；Plasma Protein Binding；Rapid Equilibrium Dialysis；LC/MS/MS洋川芎内酯I是伞形科植物川芎Ligusticum Chuanxiong Hort.的主要活性成分之一[1]。
超滤法结合高效液相色谱法测定淫羊藿苷的血浆蛋白结合率
超滤法结合高效液相色谱法测定淫羊藿苷的血浆蛋白结合率目的测定淫羊藿苷的人血浆蛋白结合率。
方法采用超滤法结合高效液相色谱法对淫羊藿苷与健康人血浆的蛋白结合率进行测定。
结果淫羊藿苷与人血浆在200、100、50 ?g/mL浓度下的血浆蛋白结合率分别为89.51%±1.08%、90.12%±0.78%、90.26%±0.64%。
结论体外淫羊藿苷与人血浆蛋白具有较强的结合，且蛋白结合率对血药浓度无明显的依赖性。
Abstract：Objective To determine the protein binding rates of Icariin with human plasma protein. Methods Ultrafiltration method coupled with HPLC were employed to determine protein binding rates of Icariin with human plasma protein. Results The protein binding rate of Icariin with human plasma protein was 89.51%±1.08%，90.12%±0.78%，90.26%±0.64% with plasma concentration of 200，100 and 50 ?g/mL，respectively. Conclusion Icariin has higher extent protein binding with human plasma protein. Moreover，the binding rate was not proportionally dependent on plasma concentration of Icariin.Key words：Icariin；ultrafiltration；plasma protein binding rate；HPLC淫羊藿为小檗科（Berberidaceae）淫羊藿（Epimedium Brevicornum）属多年生草本植物，在我国应用历史悠久，具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的作用，主要用于阳痿遗精、筋骨痿软、风湿痹痛、麻木拘挛[1]。
高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率
高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率蔡晓明;张岩;于龙;郭志谋;张秀莉;梁鑫淼【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2011(29)4【摘要】采用高效亲和色谱技术(HPAC)对中药成分与人血清白蛋白(HSA)的相互作用进行了研究.首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率.利用该方法测得模型化合物华法令与HSA的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与HSA的结合率.在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA的相对结合率分别为10.26%和10.20%.同时用超滤的方法测定了葛根素与HSA的结合率为14.25%.结果表明,HPAC可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致.%The interaction of two Chinese medicinal ingredients and human serum albumin (HSA) has been investigated by high performance affinity chromatography (HPAC). HSA bounded silica-based stationary phase was prepared based on the "click chemistry" strategy,and packed in a column (named as HSA column). The drug-HSA binding ratio was calculated from the difference of the drug' s retention times on the HSA column and silica column ( blank column). The warfarin-HSA binding ratio determined by this method was similar to the reference reported value by ultrafiltration method. The results indicated that the new HSA column and the HPAC method can be used for the detection ofbinding ratio of drug and HSA. The binding ratios of puerarin and goitrin determined by the HPAC method were 10. 26％ and 10.20％, respectively. And the binding ratio of puerarin determined by ultrafiltration was 14. 25％. All these results showed that HPAC is a useful method to investigate the interaction between drugs and protein.【总页数】4页(P358-361)【作者】蔡晓明;张岩;于龙;郭志谋;张秀莉;梁鑫淼【作者单位】中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;University of Califonia-Irvine,CA 92697-4625,USA;中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.中药有效成分与人血清白蛋白相互作用研究 [J], 陈李燊;黄芬芬2.高效亲和色谱法测定丹皮酚与固定化人血清白蛋白结合域 [J], 于雪;张君才;卫引茂3.罗布麻活性成分与人血清白蛋白结合的光谱学研究 [J], 苏忠;秦川;谢孟峡;李建东;王英典4.高效液相色谱法测定金银花中黄酮类成分槲皮素的血浆蛋白结合率 [J], 修玮5.维生素C与维生素B_2对中药有效成分牡荆素与人血清白蛋白结合的扰动作用[J], 张国文;赵楠;王琳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效亲和色谱法测定丹皮酚与固定化人血清白蛋白结合域
高效亲和色谱法测定丹皮酚与固定化人血清白蛋白结合域于雪;张君才;卫引茂【摘要】利用亲和色谱,在模拟人体生理环境下(37 ℃、pH 7.4),采用竞争置换法研究了丹皮酚(PAE)与固定化人血清白蛋白(HSA)的相互作用.通过对PAE的自我竞争分析及PAE与HSA上结合位点的标记物间的竞争置换分析,得到了PAE和HSA 间的结合常数、结合位点数和结合域.结果表明:PAE在HSA分子中仅存在一类结合位点,结合常数为4.84×103 L/mol,该结合位点为HSA上的Sudlow siteⅡ;通过对PAE与HSA相互作用的热力学研究,推断出二者间的作用力类型为氢键或范德华力.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2010(028)007【总页数】5页(P688-692)【关键词】高效亲和色谱;竞争置换分析;丹皮酚;人血清白蛋白【作者】于雪;张君才;卫引茂【作者单位】西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室,化学与材料科学学院,陕西,西安,710069;西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室,化学与材料科学学院,陕西,西安,710069;咸阳师范学院化学与化工学院,陕西,咸阳,750021;西北大学合成与天然功能分子化学教育部重点实验室,化学与材料科学学院,陕西,西安,710069【正文语种】中文【中图分类】O658药物-血清白蛋白的结合作用不仅直接影响着药物在生物体内的转运、分布、药效、药物代谢以及毒副作用等方面的性质,而且还是多组分药物之间发生相互作用的基础,例如当两种或多种药物分子同时与蛋白质结合时,药物分子之间就可能发生直接或间接的竞争作用。
因此开展药物与蛋白质结合规律的研究具有重要意义[1]。
由于人血清白蛋白(HSA)分子结构信息明确完整,因此作为模型生物大分子被广泛地应用在相关的研究中。
HSA的一级结构是由 583个氨基酸组成的单条多肽链,包括17对二硫键;其类球状高级结构可分成主要由α-螺旋体反向平行形成的 3个结构域 (dom ain),从 N-端开始依次为dom ainⅠ、dom ainⅡ和dom ainⅢ。
蛋白A高效亲和膜色谱法测定人血浆中免疫球蛋白G的含量(精)
蛋白A 高效亲和膜色谱法测定人血浆中免疫球蛋白G 的含量周冬梅邹汉法**杨利贾凌云张玉奎(中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心大连116011提要研究了蛋白A 高效亲和膜色谱对水溶液及人血浆中人免疫球蛋白G (HIgG 的特异性吸附和定量测定。
方法具有较高的精确度和较好的重复性:HIg G 标样5次重复进样的相对标准偏差为1. 5%, 人血浆样品3次重复进样的相对标准偏差为3. 6%; 所测得的定量标定曲线的线性相关系数达到0. 9993; 不含己二胺间隔臂的亲和介质的非特异性吸附极低, 基本检测不出来。
快速实验中, 一次分析可在0.5min 内完成。
实验表明, 利用所建立的方法对人血浆中的HIgG 进行定量测定可以得到较为满意的结果。
关键词高效亲和膜色谱法, 蛋白A , 人免疫球蛋白G 分类号O 658/Q 511前言人免疫球蛋白G (HI gG 是一种活性生物大分子, 是人血浆中的主要成分之一, 通常采用免疫学的方法来对它进行测定。
蛋白A (Pr ot ein A 是金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白, 分子量为42000。
在蛋白A 与免疫球蛋白G 分子的F c 区之间具有很强的特异性的亲和作用, 因而固载蛋白A 的亲和介质可用于分离、纯化和分析各种免疫球蛋白G [1～4]。
我们曾采用灌流亲和色谱分析分离单克隆抗体[5, 6]。
本文采用含己二胺间隔臂和不含己二胺间隔臂两种方法合成出了以甲基丙烯酸缩水甘油酯复合纤维素膜为基质的亲和膜及以蛋白A 为配基的亲和介质, 研制出可与高效液相色谱仪配套使用的高效亲和膜色谱柱[7], 建立了一种对人血浆中的HIg G 进行定量测定的方法, 并对两种介质进行了比较; 同时对HIg G 的快速分析进行了一定的尝试。
所建立的测定方法具有简便、快速、可靠等优点, 分析一次只需5min, 快速分析只需0. 5min , 而且血浆样品不需预处理, 这是通常的免疫学方法所无法比拟的。
我的 用高效液相色谱法测定人血浆中黄芩苷
用高效液相色谱法测定人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率[翻译]王弘陈济民张清民摘要：用高效液相色谱法对人血浆中黄芩苷进行了测定.在5、15、25 μg/mL范围的回收率为95.0%、88.7%、94.2%.人血浆中黄芩苷与血浆蛋白的结合率测定，为设计合理的给药方案提供了实验依据.关键词：高效液相色谱法；黄芩苷；蛋白结合率药物进入机体后能与体内多种生物高分子发生结合,比如药物与受体的结合,药物与核酸的结合等.药物与血浆蛋白的结合,也是药物与生物高分子的结合,与上述其它类型的结合之间存在一定的相关性,因此药物与血浆蛋白的结合,是药理学基础理论研究,特别是分子药理学的重要研究内容之一.高度结合时（一般指80%以上）还具有下列临床意义:延缓药物经肾排泄;延缓进入细胞外液,从而影响药物体内分布;药物的药理作用强度常常只与血浆中未与蛋白结合的游离浓度成线性关系,故在设计最适给药方案时,常需考虑血浆蛋白结合率〔1,2〕.1 实验材料与条件1.1 仪器、样品、试剂与材料仪器:635高效液相色谱仪；200-10型UV-VIS分光光度计.样品:黄芩苷（深圳南方药厂提供）;黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）；呋喃苯胺酸(沈阳第一制药厂).试剂:3%磺酸水杨酸试剂;透析液(pH7.4的0.02 mol/L磷酸盐缓冲液,内含0.15 mol/L NaCl).材料:正常人血浆（沈阳军区总医院血液科提供）；管状半透膜(周长5 cm,长10 cm).1.2 色谱条件色谱柱: C18(5 μm) 4 mm×250 mm ;流动相:甲醇-水-乙酸（体积比为60∶39∶1）;流速:0.9 mL/min; 柱温:室温；检测器:276 nm（UV-VIS分光光度计）.1.3 实验条件1.3.1 最大吸收波长的选择经紫外全波长扫描,黄芩苷在276 nm处有最大吸收,故选用276 nm处测定.1.3.2 流动相选择经比较选择，作者所用流动相分离完全,血浆杂质无干扰。
亲和毛细管电泳法测定茶碱人血清白蛋白的结合常数
亲和毛细管电泳法测定茶碱人血清白蛋白的结合常数周大炜;王怀锋;李发美【期刊名称】《中国药科大学学报》【年(卷),期】2005(36)1【摘要】目的 :测定茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数。
方法 :亲和毛细管电泳法 ,以 2 0mmol/LpH7 4的磷酸盐缓冲液 (含氨基乙酸 0 . 5mol/L ,EDTA1mmol/L)为运行缓冲液 ,茶碱作为运行缓冲液的添加剂 ,样品为含 5 %丙酮的 30 μmol/L人血清白蛋白溶液 ,采用更加可靠的描述性指标———淌度比 (M)估算了茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数 ,检测波长为 2 14nm。
结果 :测得的茶碱与人血清白蛋白的结合平衡常数与文献值基本吻合。
结论 :亲和毛细管电泳法可用于茶碱蛋白结合常数的快速测定。
【总页数】4页(P36-39)【关键词】亲和毛细管电泳法;荼碱;结合常数;人血清白蛋白【作者】周大炜;王怀锋;李发美【作者单位】天津大学药学院;沈阳药科大学药学院【正文语种】中文【中图分类】TQ460.72【相关文献】1.压力驱动亲和毛细管电泳法研究3种龙血素与人血清白蛋白的结合作用 [J], 钱凯;陈旭;陈沁2.亲和毛细管电泳激光诱导荧光法测定牛血清白蛋白与其单克隆抗体的结合常数[J], 王清刚;罗国安;杨树标3.亲和毛细管电泳法测定牛血清白蛋白和加替沙星的结合常数 [J], 姚之;张浩波;武艺;郭怀忠4.亲和毛细管电泳间接紫外检测法测定金属络合物的亲和常数 [J], 夏之宁;刘勇;张小川;屈鹏程5.亲和毛细管电泳法测定3种黄酮类化合物与人血清白蛋白的结合常数 [J], 周新;汪子明;邹明强;郑静;宋大千;郑健;王璐;张寒琦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效迎头分析法测定药物-人血清白蛋白混合液中游离药物浓度
高效迎头分析法测定药物-人血清白蛋白混合液中游离药物浓度乔明曦;郭兴杰;李发美【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2001(19)4【摘要】用高效迎头分析法(HPFA)测定了药物-人血清白蛋白（HSA）混合液中游离药物的浓度。
样品溶液不经任何处理直接进样到装有内表面反相固定相的色谱柱中，用67 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4，I=0.17 mol/L）作流动相。
当进样体积足够大时，游离药物以平顶峰的形式被洗脱出来，平顶峰区域洗脱液中的药物浓度等于样品溶液中游离药物的浓度。
收集平顶峰区域的洗脱液，然后将一定体积的洗脱液注入到反相色谱柱中，测定游离药物的浓度。
用该法测定酮基布洛芬-HSA和头孢哌酮-HSA两种混合液中游离药物的浓度，并与超滤法进行了比较；考察了进样体积和流速对平顶峰形成的影响。
结果表明，获得平顶峰所需的最小进样体积随药物不同而不同；流速对平顶峰的形成没有影响。
高效迎头分析法与超滤法测得的游离药物浓度相同，并且具有相似的精密度。
【总页数】3页(P329-331)【作者】乔明曦;郭兴杰;李发美【作者单位】沈阳药科大学,;沈阳药科大学,;沈阳药科大学,【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱法测定大鼠血浆中灯盏花乙素的药物浓度 [J], 高敏;卢李倩;王晓月;周庆颂2.高效液相色谱法测定葫芦素B人血清白蛋白纳米粒中药物含量 [J], 王宁;邓意辉;王绍宁;周欣羽;赵静;沈琳;董晓辉3.高效液相色谱法测定人血浆中左乙拉西坦的药物浓度 [J], 蔡乐;朱英;张明华;陈静静;柴栋4.毛细管电泳-迎头分析法测定血清或血浆中氯氮平的游离浓度 [J], 周大炜;李发美5.超高效液相色谱-串联质谱法测定小鼠肿瘤组织中阿霉素药物浓度 [J], 王婷; 孙亮; 王东亮; 甘雅玲; 胡西学; 郭宏博; 何芳菲; 王昱青; 蒋乔因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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2011年4月Vo.l 29No .4April 2011Chi n ese Journal of Chromatography358~361研究论文DOI :10.3724/SP .J .1123.2011.00358*通讯联系人:张秀莉,副研究员,主要研究天然小分子和多肽的分离分析.Te :l (0411)84379521,E m ai:l zhangx i uli @dicp .ac .cn .基金项目:重大新药创制专项(N o .2009ZX 09313 003)和国家自然科学基金面上项目(No .30801513).收稿日期:2010 12 08高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率蔡晓明1, 张 岩2, 于 龙1, 郭志谋1, 张秀莉1*, 梁鑫淼1(1.中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析重点实验室,辽宁大连116023;2.Un ivers ity of C alifon ia Irvi ne ,CA 92697 4625,USA )摘要:采用高效亲和色谱技术(HPAC )对中药成分与人血清白蛋白(HSA )的相互作用进行了研究。
首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA 蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,根据药物在该色谱柱上与空白硅胶柱上的保留时间差计算得到药物与蛋白的结合率。
利用该方法测得模型化合物华法令与H SA 的结合率与文献中采用超滤法测得的结果基本一致,表明该方法可用于测定药物与HSA 的结合率。
在此基础上用该方法测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA 的相对结合率分别为10 26%和10 20%。
同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA 的结合率为14 25%。
结果表明,HPAC 可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种简便可行的方法,其测定结果与超滤方法一致。
关键词:高效亲和色谱法;人血清白蛋白;葛根素;告依春;结合率;超滤中图分类号:O 658 文献标识码:A 文章编号:1000 8713(2011)04 0358 04Detection of drug hu m an seru m albu m in b ind i ng ratios of t woCh i nese m edici nal ingred ients by h igh perfor m anceaffinity chro matographyCAI Xiao m i n g 1,Z HANG Yan 2,YU Long 1,GUO Zhi m ou 1,ZHANG X iuli 1*,LI ANG X in m iao1(1.CAS K ey L abora tory of Sepa ra tion Sc ien ce for An a ly tica l Che m istry ,D a lian In stitu te o fChe m ica l Phy sics,Chin ese Acade m y o f Scie n ces,Da lian 116023,Ch i n a;2.Un iver sity o f Ca lifon ia Ir vin e,CA 92697 4625,U SA )A bstract :The i n teraction of t wo Chinese m edici n al i n gredi e nts and hum an seru m al b u m in (HSA )has been investigat ed by high perf or m ance affi n it y chro m atography (HPAC ).HSA bounded silica based stati o nary phase w as prepared based on t he click chem istry strategy ,and packed in a colu m n (nam ed as HSA col u m n).The drug HSA binding rati o was calculated fro m t he diff erence of t he drug s ret enti o n ti m es on the H SA colu m n and silica col u m n (blank col u m n).T he warfari n HSA bindi n g rati o det er m ined by t his m ethod was s i m ilar to t he refer ence reported value by ultrafiltration m et hod .The results i n dicat ed that the new HSA colu m n and t he HPAC m et hod can be used for t he detection of binding ratio of drug and HSA .T he bi n di n g ratios of puerari n and goitri n deter m i n ed by the HPAC m ethod were 10 26%and 10 20%,respecti v e l y .And the binding rati o of puerarin deter m i n ed by ultrafiltrati o n was 14 25%.A ll t hese results showed t hat HPAC is a usef ul m et hod t o i n vestigate the interacti o n bet ween drugs and protein .K ey words :high perf or m ance affinity chro m atography (HPAC);hu m an seru m albu m i n ;puer ari n ;goitrin ;binding ratio ;ultrafiltration 人血清白蛋白(hu m an seru m albu m in ,HSA)是由585个氨基酸残基组成的一条单肽链,相对分子质量约为66500,是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白[1]。
H SA 上有多个药物结合位点,药物进入血浆后,首先与血清白蛋白结合,然后再被输送到身体的各个部位产生药效。
药物进入体内后的许多重第4期蔡晓明,等:高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率要的药动学参数(包括药物的代谢、排泄、分布、扩散等)都与药物和蛋白的结合率有关,因此药物与蛋白的结合率影响着药物在体内的药动学及药效学结果,测定药物 蛋白结合率对临床用药具有重要意义[2]。
由此可见,在中药的现代化过程中,研究中药有效成分与血清白蛋白间的相互作用,对于提高中药用药的科学性,了解中药药物分子在体内的转运和代谢等具有特别重要的意义[3]。
文献[4]采用高效亲和色谱法(hi g h perfor m ance affi n it y chro m atography ,HPAC)测定了丹皮酚与固定化人血清白蛋白的结合域。
葛根素[5](图1a)和告依春[6](图1b)分别是中药葛根和板蓝根中的主要成分,本文利用HPAC 方法,以HSA 为为固定相,测定了葛根素与告依春两种中药成分与H SA 的结合率,同时用超滤的方法测定了葛根素与H SA 的结合率,并将两种方法测得的值进行比较。
图1 (a)葛根素与(b)告依春的结构Fig .1 Stru ct ures of (a)puerarin and (b)goitrin1 实验部分1.1 仪器与试剂HP 1100高效液相色谱仪(美国Ag ilent 公司),包括G 1310A 四元梯度泵、G 1314A 二极管阵列检测器;M illi Q 纯水系统(M illi p ore ,USA);Ther m o868系列pH 计(美国热电集团)。
色谱数据通过HP 工作站采集和获得。
人血清白蛋白购自Sig m a 公司;葛根素购自西安山川生物技术公司;告依春为本实验室从板蓝根中经工业色谱分离纯化得到;华法令购自武汉远程科技发展有限公司;磷酸氢二钠与磷酸二氢钠购自北京精求化工厂,分析纯;水为超纯水。
1.2 溶液配制磷酸缓冲液:按7 3的比例称取Na 2HPO 4 12H 2O 和N a H 2PO 4 2H 2O 用超纯水配成0 067m ol/L 的缓冲液,并用N aOH 调节pH 至7 4。
HSA 模型化合物溶液:取华法令适量用磷酸缓冲液配制成10 m ol/L 的溶液。
样品溶液:取葛根素和告依春适量用磷酸缓冲液分别配制成3 m ol/L 和5m ol/L 的溶液。
所配制的溶液均于4 保存。
1.3 色谱条件所采用的HSA 色谱柱及空白柱(4 6mm 150mm )为本实验室采用click chem istry [7]方法制备得到,H SA 色谱柱的制备过程见图2,空白柱为未键合H SA 的叠氮硅胶柱。
流动相为0 067m ol/L 的磷酸缓冲液(pH 7 4),过0 45 m 膜。
葛根素和告依春分析时采用0 6mL /m i n 的流速,华法令分析时采用1 5m L /m in 的流速。
柱温为37 。
进样量为5 L 。
葛根素的检测波长为254n m,告依春为280n m,华法令为308n m 。
图2 HSA 亲和色谱柱的制备Fig .2 P reparation strategy of t he H SA st ati onary phase1.4 超滤实验取20m g H SA 于0 25mL 磷酸缓冲液中,与0 25mL 浓度为1 5 m ol/L 的葛根素溶液混合并振摇,混合后HSA 及葛根素的浓度分别为630 m ol/L 和0 75 m ol/L ,其中HSA 的浓度与人血清中的白蛋白浓度一致。
将混合溶液在37 孵育30m i n 后移取至规格为1 5m L 的超滤装置中离心30m i n (10000r/m in),超滤膜截留相对分子质量为3kD a 。
滤液中葛根素的含量经高效液相色谱(HPLC)分析测定。
为了消除超滤膜对药物的吸附对测定结果的干扰,取0 5mL 浓度为0 75 m ol/L 的葛根素溶液直接在37 孵育30m i n 后移取至超滤装置中离心30m i n (10000r/m i n ),滤液用HPLC 分析。