细胞培养培养基全集
细胞培养基种类及用途
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基础细胞培养基通常指基础合成培养基,主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质(核酸降解物、氧化还原剂等)。
据不同细胞和研究目的,选用合适培养基,•还可补加新成分。
•如杂交瘤中常用DMEM加丙酮酸钠、2-巯基乙醇(相当于胎牛血清可透析组分的作用)。
合成培养基使用时加5-30%血清。
1. 199细胞培养基及其改良品种1950年Morgan等设计,除BSS外,含有53种成分,为全面培养基,广用于各类细胞培养,广泛用于病毒学、疫苗生产。
2. BME细胞培养基基础Eagle培养基(Basal Medium Eagle),1955年Eagle设计,BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素。
简单、便于添加,适于各种传代细胞系和特殊研究用,在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMEM等。
3. MEM细胞培养基低限量Eagle培养基(Minimal Essential Medium),1959年修改,删去赖氨酸、生物素,氨基酸浓度增加,适合多种细胞单层生长,有可高压灭菌品种,是一种最基本、试用范围最广的培养基,但因其营养成分所限,针对生产之特定细胞培养与表达时,并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。
4. DMEM细胞培养基及其改良品种DMEM由Dulbecco改良的Eagle培养基,各成份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)。
生长快,附着稍差肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好,常用杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。
例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。
5. IMEM细胞培养基IMEM由Iscove's改良的Eagle培养基,增加了几种氨基酸和胱氨酸量。
6. RPMI-1640细胞培养基Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,BSS+21种氨基酸+维生素11种等,广泛适于许多种正常细胞和肿瘤细胞,也用做悬浮细胞培养7.Fischer’s细胞培养基用于白血病微粒细胞培养。
细胞培养
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细胞培养
一、复苏
1、开启水浴锅温度设置37℃,预热DMEM。
2、从液氮中取出细胞37℃水浴加热速融。
3、配制培养基:45mL DMEM(HG)+5mL FBS+500ul双抗。
4、将细胞缓慢加入到15mL离心管中,加入5-6mL培养基。
5、800 rpm离心5min。
此时在每个细胞培养皿中加入10mL培养基。
6、吸去上清液,从培养皿中取1mL培养基加入离心管中重悬细胞。
7、将重悬后的细胞加入到培养皿中,放入培养箱中培养。
二、传代
1、开启水浴锅温度设置37℃,预热培养基、PBS、胰酶。
2、取出培养皿,吸去培养基。
3、加入10mL PBS清洗,吸去PBS。
4、加入1mL胰酶消化3min。
5、加入5mL培养基终止消化,吸出到15mL离心管中。
可适当吹打使细胞全部
被收集。
6、800rpm离心5min。
此时在每个细胞培养皿中加入10mL培养基。
7、离心后吸去上清,加1mL培养基重悬细胞,一般情况下一盘分成三盘,将重
悬后的细胞分成三份分别加入到培养基中。
三、细胞计数。
细胞培养各种培养基简介
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DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识培养细胞的完全培养基由基础培养基(如MEM)和添加剂(如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子)组成,培养基的配方一直在改进,其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
一、基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。
MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。
Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM 含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。
MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。
这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。
实际操作中并非如此简单。
显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。
细胞培养基
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细胞培养基1.概述培养基是培养环境中最重要的成分,可提供细胞生长所必需的营养素、生长因子和激素,并能调节培养体系的pH 值和渗透压。
2.种类(1)基础培养基大多数细胞系均可在基础培养基中生长良好,基础培养基中含有氨基酸、维生素、无机盐和碳源(如葡萄糖),但是这种基础培养基配方中必须添加血清。
(2)减血清培养基减少血清对细胞培养实验不良效应的另一种策略是使用减血清培养基。
减血清培养基是一种补充了营养素和动物来源因子从而降低了血清需要量的基础培养基配方。
(3)无血清培养基无血清培养基 (SFM) 通过用适当的营养和激素成分代替血清,避免了使用动物血清带来的问题。
无血清培养基配方可用于多种原代细胞和细胞系,包括:用于重组蛋白生产的中国仓鼠卵巢(CHO) 细胞、各种杂交瘤细胞系、Sf9和Sf21 昆虫(草地贪夜蛾)细胞系以及用于病毒生产宿主细胞系(例如:293、VERO、MDCK、MDBK)等。
使用无血清培养基的一大优势是可通过适当的生长因子组合使培养基对特定细胞种类具有选择性。
3.常用细胞系培养基许多哺乳动物连续细胞系均可采用相对简单的培养基(例如添加了血清的 MEM 培养基)进行培养,而采用MEM培养基培养的细胞同样也可采用DMEM或199培养基进行培养。
但是,如果细胞表达某种特殊功能,则可能需要使用较为复杂的培养基。
有关为某种细胞选择合适培养基的信息通常可通过发表的文献以及提供细胞的机构或者细胞库获得。
如果无法找到细胞该选择何种培养基的信息,您可根据经验选择生长培养基和血清,或者测试几种不同的培养基,以获得最佳结果。
一般而言,贴壁细胞可首先考虑MEM培养基,而悬浮细胞可首先考虑RPMI-1640 培养基。
常用培养基配方范文
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常用培养基配方范文培养基(Culture medium)是一种用于细菌、真菌、植物细胞、动物细胞和其他微生物的繁殖和生长的营养物质。
常用的培养基可分为发酵培养基、微生物培养基和细胞培养基。
下面列举了一些常用的培养基配方。
1. LB培养基(Luria-Bertani medium)成分:-牛肉提取物:10克-酵母提取物:5克-热可溶性淀粉:10克-氯化钠:10克-水:1升2. NB培养基(Nutrient broth)成分:-牛肉提取物或肉蔻精:8克-酵母提取物:4克-葡萄糖:4克-水:1升3. MacConkey培养基成分:-水解动物蛋白:17克-中和胆盐:1.5克-中性红:0.03克-水:1升4. TSB培养基(Tryptic soy broth)成分:-大豆胨:17克-酵母提取物:3克-水:1升5. BHIA培养基(Brain Heart Infusion Agar)成分:-脑心汤固体:37克-水:1升6.R2A培养基成分:-水解酵母提取物:0.5克-蛋白胨:0.5克-葡萄糖:0.5克-脱脂乳粉:0.5克-黄豆粉:0.5克-高氯酸钠:0.3克-多聚体1466:0.05克-水:1000毫升7.比尔斯氏培养基(BHI培养基)成分:-大豆胨:37克-脑心汤固体:2克-水:1升8. 培养基199(Medium 199)成分:-高锰酸钾:0.015克-硫酸:1.55克-磷酸一氢钠:0.184克-高氯酸钠:8.0克-溴酚蓝:0.4克-d-葡萄糖:5.55克-l-谷氨酸:40.525克-苏打粉:0.84克-水:1升9. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)成分:-苔藓胶原酸:1克-乳糖:1克- 谷氨酸:584mg- 水:1000ml这只是一小部分常见的培养基配方,实际上有很多种不同的培养基,它们根据不同的生物特性和培养需求来设计。
不同的培养基可以提供细菌、真菌、细胞等微生物生长需要的各种营养物质。
DMEM培养基配方
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DMEM培养基配方DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是一种常用的培养基,常用于细胞培养和病毒培养中。
该培养基是由Eagle在1961年发展而来的,并在之后被Dulbecco所改进,增加了可以用于细胞培养的组分。
DMEM培养基具有良好的细胞生长和维持能力,适用于多种细胞系的培养。
以下是DMEM培养基的标准配方:成分(每1升DMEM培养基):-无菌去离子水1000mL- 葡萄糖(D-葡萄糖) 1000 mg- L-谷氨酰胺 584 mg-青霉素/链霉素100单元/mL-菌脂体抗生素混合物(氰胺苯胂和核黄素酮)10mL-青霉素/链霉素抗生性混合物10mL- 乳酸 660 mg- 杂酸钠 200 mg- 高氨基酸(L-谷氨酸,L-赖氨酸,L-Leu,L-异亮氨酸,L-Lys,L-Met,L-Phe,L-Thr,L-Trp,L-Arg,L-His,L-Ile,L-Val) 2 mL - L-胱氨酸 4 mg- 胖利钠 392 mg-维生素溶液(1X)10mL-必需氨基酸溶液10mL-非必需氨基酸10mL-小牛血清10%各组分的详细介绍如下:1.无菌去离子水:用于稀释和制备培养基,确保培养基的无菌。
4.青霉素/链霉素:抗菌药物,避免培养基中细菌的污染,浓度为100单元/mL。
5.菌脂体抗生素混合物:混合了氰胺苯胂和核黄素酮,提供对细菌和真菌的广谱抗生素覆盖。
6.青霉素/链霉素抗生素性混合物:对细菌的广谱抗生素覆盖。
7.乳酸:调节培养基的酸碱平衡,以维持适宜的细胞生长环境。
8.杂酸钠:提供缓冲剂,维持培养基的pH值稳定。
9.高氨基酸:添加了多种必需氨基酸,为细胞提供生长所需的氨基酸。
10.L-胱氨酸:提供了硫含量丰富的氨基酸,对细胞代谢和抗氧化有重要作用。
11. 填充无机盐 392 mg:提供一些无机盐,维持细胞代谢所需的电解质平衡。
12.维生素溶液(1X):提供维生素,满足细胞生长过程中的营养需求。
细胞培养所需耗材有哪些

细胞培养的路上,有多虐心就有多少需要值得注意的地方。
小小的平皿之中,细胞点点,引无数英雄竞挂东南枝。
正所谓“万事开头难”,即便是细胞复苏与保存这两件看似简单的事情,也能造成实验汪内心无比巨大的阴影面积。
下面就给各位实验室新手介绍一下细胞培养具体需要哪些耗材。
一、细胞培养基础试剂1、培养基:一般是用不完全培养基+10% FBS(胎牛血清)自己配的,有时也添加双抗预防细胞感染。
具体培养基类型根据你养的细胞类型去选择。
2、胰蛋白酶:简称是胰酶,消化细胞用的。
一般消化1-2 min,时间太短,细胞消化不完全,时间太长,会消化过度损伤细胞。
3、常用试剂:酒精,PBS 缓冲液。
二、细胞培养基础耗材1、细胞培养容器。
(1)培养瓶:如果你们是实验室小规模一般选50ML 100ML 250ML。
(2)玻璃瓶:培养基可以买胰酶的配置需要的成本很低所以准备两三个150ML的瓶子自己配就行了。
配置胰酶需要购买一种过滤器。
(3)细胞4102培养1653板(我们自己常用的有96空、24孔、6孔,当然还有其他的规格,可以根据需回要选择)。
(4)培养基:如果自己配置的话要买一些蓝盖的瓶子,一般规格会有1000ml、500ml、250ml、100ml的,也要买一些装血清的血清瓶,10ml的玻璃试管也要买一些。
2、耗材。
吸管、移液管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。
(1)玻璃吸管:长25-30CM 玻璃器2113皿总是摔5261断所以稍稍长一点比较好。
(2)EP管:4ML的塑料管、冻存管、这些塑料的管子是必须的。
(3)移液枪:(各种型号都要一把吧)这个不算是耗材但是枪头是耗材。
三、细胞冻存试剂和耗材1、冻存液:一般用10% DMSO+FBS+培养基组成,FBS 和培养基的比例依细胞类型决定,比较珍贵的细胞一般用90% FBS,一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。
2、胰蛋白酶等用于细胞培养的一般试剂。
3、冻存管、离心管、离心机、吸管、枪头、显微镜、冻存盒、冰箱、液氮罐等。
293细胞培养
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293细胞培养1.培养基DMEM ++丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏:(1)37度融化后,擦干冻存管酒精擦,细胞加入15ml离心管,加5ml培养基,500g离心5min,弃上清,加1ml培养基重悬后加入到培养瓶中,5~6ml左右,记得晃匀。
3. 传代吸出旧培基,加5mlPBS洗1-2遍,用移液管加1ml胰酶,滚2遍吸出,37度放1min左右计时,看到变圆即加入新培基吹打,几下就好了,分到新瓶里。
我个人认为:293细胞贴壁后形成圆形,可能是细胞本身状态不是很好,细胞不够饱满,细胞的贴壁后的棱角不易显露出来,所以看上去类似圆形,而且细胞较小。
293细胞是用5型腺病毒75株系转化,含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系,是一种E1区缺陷互补细胞系。
它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey 于1976年用DNA转染技术构建而成。
293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长,也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10%FBS-DMEM中能生长很好。
一般来讲,1:10传代后,一周可以长满。
严禁过度生长,这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积,影响病毒斑的形成和转染,传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养,但不容易长期保持稳定。
293细胞在传代120次以后,其表型可能改变,生长状况不再完全是单层的了,偶尔会形成局部的细胞成团聚集,应立即抛弃,重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性:1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9~7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代:倒去废液,PBS洗一次(轻),用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
细胞培养基大全
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细胞培养基⼤全⼀、细胞培养基的概念和原理细胞培养基是⼈⼯模拟细胞在体内⽣长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞⽣长增殖的物质基础。
培养液或培养基的含义⼏乎相同,英⽂都是medium。
当它是粉剂时,倾向性地称为培养基,⽽将粉剂配成液体后,多称为培养液。
培养液中常常补加⾎清、抗⽣素等成分。
培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和⽆⾎清细胞培养基等。
天然细胞培养基是⼈们早期采⽤的细胞培养基,直接取⾃于动物组织提取液或体液,如⾎浆凝块、⾎清、淋巴液、胚胎浸出液等。
营养价值⾼,但成分复杂,差异⼤、不稳定,来源也受到限制。
⽔解乳蛋⽩和胶原是两种较好的天然培养基,富含氨基酸。
⾎清是天然培养基中最有效和最常⽤的培养基,但其组成成分复杂,其中⼀些成分与功能不明确。
⾎清的来源有胎⽜⾎清、⼩⽜或成⽜⾎清、马⾎清、鸡⾎清、⽺⾎清及⼈⾎清,最⼴泛应⽤的为胎⽜⾎清和⼩⽜⾎清。
合成细胞培养基是⽤化学成分明确的试剂配制的培养基,组分稳定,主要包括糖类、必需氨基酸、维⽣素、⽆机盐类等。
⾃1950 年199 细胞培养基问世以来,合成细胞培养基发展⾄今已有⼏⼗种,除了沿⽤半个世纪的基础合成细胞培养基之外,近年来还出现了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基。
由于细胞种类和培养条件不同,适宜的合成细胞培养基也不同,在动物细胞培养中最常⽤基础细胞培养基有6~7 种,如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。
由于天然培养基的⼀些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替,因此⼀般需在合成细胞培养基中添加5%~10%的⼩⽜⾎清。
⼩⽜⾎清的加⼊对细胞培养⾮常有效,但⼩⽜⾎清的成分复杂,这对培养产物的分离纯化和检测会带来⼀定的不便,为减少⼩⽜⾎清的影响,开发了营养成分更加丰富的低⾎清细胞培养基,可以将⼩⽜⾎清的使⽤量降低到1~3%。
⽆⾎清细胞培养基(serum free medium, SFM)是指在使⽤中⽆需添加⾎清的细胞培养基,且其组成成分不含有任何动物组分。
常见细胞系使用的培养基

DMEM,10%胎牛血清
D-17
上皮细胞
狗
骨肉瘤
MEM,10%胎牛血清和NEAA
BT
成纤维细胞
牛
鼻甲骨细胞
MEM,10%胎牛血清和NEAA
MARC-145
猴
猴肾
MEM或DMEM,10%小牛血清
CV-1
成纤维细胞
猴
非洲绿猴肾
MEM,10%胎牛血清
COS-1
成纤维细胞
猴
肾
MEM,10%胎牛血清
垂体肿瘤
F-10,15%马血清和2.5%胎牛血清
GH3
上皮细胞
大鼠
垂体肿瘤
F-10,15%马血清和2.5%胎牛血清
IEC-6
上皮样
大鼠
正常小肠
DMEM,5%胎牛血清,胰岛素0.1μg/ml
L2
上皮细胞
大鼠
肺
F-12K,10%胎牛血清
XC
上皮细胞
大鼠
肉瘤
MEM,10%胎牛血清和NEAA
LLC-WRC256
(4)用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。
细胞系
细胞类型
种
组织
培养基
293
成纤维细胞
人
胚胎肾
MEM,10%热灭活马血清
IMR-90
成纤维细胞
人
肺
MEM,10%胎牛血清和NEAA
W1-38
成纤维细胞
人
RPMI-1640,10%胎牛血清
Raji
淋巴样
人
Burkitt淋巴瘤
RPMI-1640,10%胎牛血清
293T 细胞培养

293T 细胞培养1.培养基: DMEM =丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏:37 度融化后,擦干冻存管酒精擦,细胞加入15ml 离心管,加5ml 培养基,500g 离心5min,弃上清,加1ml 培养基重悬后加入到培养瓶中,5~6ml 左右,记得晃匀。
3. 传代:吸出旧培基,加5mlPBS 洗一遍,用移液管加1ml 胰酶,洗一遍吸出,37 度放1min 左右计时,看到大片大片脱落了即加入新培基吹打,吹洗充分后,吸1ml加到事先加好10ml 新培育基的新瓶里。
293T 细胞是用5 型腺病毒75 株系转化,含有Ad5 E1 区的人胚肾亚三倍体细胞系,是一种E1 区缺陷互补细胞系。
293T 细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞,表现出典型的腺病毒转化细胞的表型,细胞允许Ad5 和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种:贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293T 细胞的大规模培养。
293T 细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长,也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10%FBS-DMEM 中能生长很好。
一般来讲,1:10 传代后,一周可以长满。
严禁过度生长,这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积,影响病毒斑的形成和转染,传代时也不易打散。
悬浮的293T 细胞很容易大规模培养,但不容易长期保持稳定。
293T 细胞在传代120 次以后,其表型可能改变,生长状况不再完全是单层的了,偶尔会形成局部的细胞成团聚集,应立即抛弃,重新引入新传代的细胞。
293 细胞培养特性:1、细胞明显适应酸性环境,pH 值在6.9~7.1 时,可顺利贴壁生长, 换液293T 时动作要轻。
一般用高糖的DMEM 培养基。
2、传代:倒去废液,PBS 洗一次(轻),用0.02%EDTA 与0.25%Trypsin 消化,生长良好细胞,培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s,然后吸去,再让剩下的EDTA/Trypsin 作用30s,镜下观察细胞脱落,就可加DMEM 终止消化,反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
常用细胞培养基配方及缓冲液
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常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶,用于维持细胞的生长与繁殖。
常用的细胞培养基配方和缓冲液如下:一、常用的细胞培养基配方:1. DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)-DMEM是最常用的细胞培养基之一,适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方:-高糖DMEM:添加25mM葡萄糖-低糖DMEM:添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM:添加高浓度的氨基酸,以促进细胞生长和蛋白质合成。
2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。
-基本配方:-高糖RPMI1640:添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640:添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640:添加高浓度的氨基酸。
3. MEM(Minimum Essential Medium)-MEM是最早用于细胞培养的培养基。
-基本配方:-高糖MEM:添加25mM葡萄糖-低糖MEM:添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。
-基本配方:- 高糖Ham's F-10:添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10:添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。
-基本配方:- L-15培养基:必须在CO2-free环境下使用。
二、常用的缓冲液:1. 磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline,PBS)-0.1MPBS的配方:-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方:-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES(pH7.4)-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方:- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方:-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方:- 1M Tris-HCl,pH 8.0-0.5MEDTA,pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子,不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。
培养细胞所需的几种主要液体的配制方法

培养细胞所需的几种主要液体的配制方法:1.DMEM维持培养基DMEM基础培养基95ml 95ml胎牛血清5ml谷氨酰胺液2ml含有DMEM基础培养基95ml,胎牛血清5ml,谷氨酰胺液2ml。
混合均匀,密封后与4摄氏度保存。
2.D-hank’sD-hank’s干粉9.5g(1袋)NaHCO3 0.35g超纯水1000ml取D-hank’s干粉9.5g加入超纯水500ml搅拌均匀,加入0.35g的NaHCO3搅拌至完全溶解,倒入1000ml容量瓶中,用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.3. DMEM完全培养基85ml,DMEM基础培养液85ml,, l-谷氨酰胺溶液, 2ml1000u/ml双抗液1ml胎牛血清15ml取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,混合均匀,密封于4摄氏度保存.4. DMEM细胞基础培养基DMEM干粉13.4g(1袋)Na2HCO3 3.7g超纯水1000 ml取DMEM干粉1袋(13.4g)倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入3.7g的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.5. l-谷氨酰胺溶液l-谷氨酰胺 2.92gDMEM基础培养基100ml称取l-谷氨酰胺干粉2.92g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.6.1000u/ml的双抗液青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)链霉素(注射用) 0.8 g0.9%生理盐水80ml取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素0.8g于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃条件下保存.使用添加量为1ml/100ml培养液.7.0.25%的胰酶溶液胰蛋白酶干粉 0.25 gDMEM基础培养基100ml称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.8.2.5mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)ECGS干粉 15 g(1支)无菌超净水 6 ml取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.9.PBS 液KCL 0.20gNacl 8.00gNa2HPO4.12H2O 2.88gKH2PO4 0.20g分别取KCL0.20g, Nacl8.00g, Na2HPO4.12H2O2.88g,KH2PO40.20g于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存,。
各种动物细胞培养基配方

CHO悬浮细胞生长培养基
CHO细胞抗体药物生产细胞生长
200
1800
200
SAF-CHO-RBH-001
SAF101
CHO细胞微载体灌流反应器、转瓶丰收细胞培养基
EPO、CHO乙肝疫苗生产细胞生长维持收液
200
1800
200
SAF-CHO-G-002
SAF103
富养CHO悬浮细胞培养基
CHO细胞筛选、克隆Biblioteka 160120120
MD601
含Hanks'盐和L-谷氨酰胺不含碳酸氢钠
160
120
120
MD603
含Earle's盐、L-谷氨酰胺和非必需氨基酸不含碳酸氢钠
160
120
120
MD604
含Hanks'盐、L-谷氨酰胺和非必需氨基酸不含碳酸氢钠
160
120
120
MD605
(可高压灭菌)含Earle's盐不含L-谷氨酰胺和碳酸氢钠
BS006
不含酚红和碳酸氢钠
40
30
100
4.低血清培养基
产品名称
产品代码
特 点
10×1L
10L
500ml
SXQ-1
SLM100
VERO细胞微载体反应器用低血清培养基,血清用量≤3%。
320
240
180
199 SLM
SLM110
199培养基的改良低血清培养基。可用于VERO细胞的低血清培养。
320
240
160
120
120
MEM(HBS)
改良MEM,(可高压灭菌)含Hanks’盐,不含L-谷胺酰胺和碳酸氢钠
3T3-L1细胞培养
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3T3-L1细胞培养一、复苏冻存的3T3-L1细胞1 从液氮罐中用镊子拿出冻存的细胞,迅速放入37 ℃浴中,溶解约1min 取出(要留小部分冰不融化)。
2 打开前用75%的酒精清洗冻存管外壁,打开后,移入小号培养瓶,立即加入4~5mL培养基,稀释DMSO,然后放入培养箱。
二、冻存的3T3-L1细胞1 当细胞长到70~80%时,消化细胞。
去除培养基,用5mL 1*PBS 洗去残留培养基,加入1mL 胰酶,轻晃培养瓶,使胰酶覆盖整个培养瓶底部,放入培养箱消化2~3min。
2 加入3~4mL DMEM(10%NBS) 终止消化,轻轻吹打使细胞均匀。
3 取1/5的量移入大培养瓶继续培养。
4取700uL加入冻存管中,,向冻存管中加入100uL DMSO,200uL FBS。
放入程序降温盒,再放入-80度冰箱过夜,第二天拿出放入液氮罐,记录存放位置。
5 每消化一次,细胞代数增加一次,要记录清楚。
三、3T3-L1细胞换液1 新复苏或消化的细胞,在种入新培养瓶5~6h或过夜后,观察细胞贴壁情况。
2 每两天换一次液;待细胞长到70~80%时,进行消化,消化步骤如上所述。
四、种入24孔板1 种入24孔板前,细胞要进行消化,步骤如上所述。
2 计算好传代和种入板中的量。
如:大号培养瓶中细胞长到70~80%进行消化,加入1.5mL胰酶消化,加入4mL 培养基终止消化。
其中0.5mL用于继续培养,剩余5mL, 每一24孔板需要1/5的量。
3 24孔板事先铺0.5%的明胶。
注意事项:1 从液氮中拿出冻存管时尽量不要用手碰,以免冻伤。
2 冻存管取出后迅速放入水浴中,培养基使用前可以先用37度预热。
3 冻存管打开前要用酒精消毒,防止污染。
4 尽快加入培养基稀释DMSO,防止DMSO对细胞毒性作用。
5 冻存复苏细胞遵循“慢冻快融”原则。
6 程序降温盒内是异丙醇,用5次更换一次异丙醇。
7 若没有程序降温盒,可将细胞放入4度冰箱1h,-20度冰箱1h,再放入-80度过夜。
细胞培养-细胞培养用液及培养基
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培养基(液)-无血清培养基
·为什么要使用无血清培养基?
➢血清成分复杂,干扰实验结果 ➢血清含有毒性物质、抑制性物质、影响
某些细胞功能
培养基(液)-无血清培养基
·无血清培养基-缺点
➢通用性较差 ➢细胞增殖缓慢、成本较高 ➢可能失去血清的一些保护性作用
培养基(液)-无血清培养基
·无血清培养基-配置方法
工作浓度: 0.02%
培养用液
·消化液-EDTA
注意事项 ① 需用不含离子的平衡盐缓冲液溶解 ② 与胰酶联合使用可提高消化效率 ③ EDTA不能被血清中和,消化后应彻底
清洗
培养基(液)
维持体外细胞生存和生长的基本 溶液,是组织细胞培养最重要的条件 分类 ·天然培养基 ·合成培养基
培养基(液)-天然培养基
维持渗透压、调节PH、供给细胞生存所需 能量及无机离子成分。 ➢用途
合成培养基(液)的基础液及用于洗涤组 织、细胞等
培养用液
·平衡盐溶液
培养用液
·消化液-用途
➢分散组织、细胞 ➢使细胞脱离附着底物
培养用液
·消化液-成分
➢胰蛋白酶 ➢二乙烯四乙酸二钠(EDTA) ➢胶原酶溶液
培养用液
·消化液-胰蛋白酶
细胞培养用液及培养基(液)
主要内容
· 培养用液 · 培养基(液)
主要内容
· 培养用液 · 培养基(液)
培养用液
细胞培养时,除需要培养基,还 需要大量的液体,包括
·水 ·盐溶液 ·消化液 ·缓冲液 ·维生素液等
培养用液
·水
➢细胞培养所必须的成分(吸收与代谢) ➢维持细胞形态、调节渗透压及PH ➢细胞培养对水质的要求极高
取自动物体液或从动物的组织中 分离提取 优点 ·营养成分丰富,培养效果良好 缺点
细胞培养基及其配制方法

DMEM(A) 细胞培养基(粉末型)成分DMEM(H) 细胞培养基(粉末型)成分DMEM(L) 细胞培养基(粉末型)成分【DMEM专题】DMEM细胞培养基(二)配制方法及注意事项配制方法:(1)在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5%的双蒸水。
(2)在室温(20℃到30℃)的水中加入干粉培养基,轻轻搅拌,不要加热。
(3)水洗包装袋的内部,转移全部的痕量干粉到容器内。
(4)加NaHCO3到培养基中。
(5)用双蒸水稀释到想要的体积,搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
(6)通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值,由于pH值在过滤时会上升0.1到0.3,因而调节pH值使它比最终想要的pH值低0. 2到0.3。
培养基在过滤前要保持密封。
配制培养基要注意以下问题:●认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分,常见的有NaHC O3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的,如NaHCO3、谷氨酰胺,有些根据实验需要决定。
●配制是要保证充分溶解,NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。
●配制所用的水应是三蒸水,离子浓度很低。
●所用器皿应严格消毒。
●配制好的培养基应马上过滤,无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基,它是一种灭菌后保证无菌的溶液,必要时可制成无内毒素等的溶液,可节省科研人员的工作量。
DMEM各种成分都有什么作用一般的基础培养基包括四大类物质:无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。
(1)无机盐:对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。
(2)氨基酸:缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸,不能由其他氨基酸或糖类转化合成。
除此之外,还需要谷氨酰胺(glutamine)。
谷氨酰胺具有特殊的作用,对细胞的培养特别重要,能促进各种氨基酸进入细胞膜;它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源,还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。
细胞培养常用培养基

细胞培养常用培养基高博,苏州大学医学部药学院药理学系1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞,杂交瘤细胞的培养,是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium(MEM)也称最低必需培养基,它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单,可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型,而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养,也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖(标准型)是一种应用十分广泛的培养基,可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养,特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂,含有多种微量元素,和DMEM以1:1结合,称为DMEM/F12培养基(DME/F12 medium),作为开发无血清配方的基础,以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力,改良之一是在DMEM/F12(1:1)中加入15 mM HEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计,可支持多种(如骨髓、皮肤、肺和脾脏等)的原代移植物的生长,除适于一般的原代细胞培养外,主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
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血清的不同批号含有不同的成分,所以许多人发现,应该在使用前对血清进行测试。大多数试剂商提供样品,所满意的批号即可选用,这样可以一次得到足够一年用量的血清,血清在使用前通常在56℃加热30分钟,这一过程称为灭活。
无血清培养基
1979年神经细胞培养出现了一个重要进展,用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清。其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分,最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方,该配方称为N2,专门用于神经细胞培养,最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养。它的基础培养基是1:1的DMEM与H12的混合液,添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒。胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用,硒是谷胱甘肽产生的合作因子,可能有助于过氧化物和超氧化物的水解,有报道说还能防止细胞的光照损伤。随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白。
应该注意,尽管无血清培养基是有化学限定性的,但在培养过程中它仍有变动,培养起始时可能有些物质缺乏,而后细胞的产物可能积累,从而使培养基的成分改变。这其实是有另一方面的好处,即条件培养基(已培养过细胞的培养基)的形成,条件培养基常常用来增加神经元和胶质细胞的发育。
生长因子绝大多数哺乳类胚胎神经元有严格的营养要求,若不能提供适宜的生长因子或合适的因子组分,将会使绝大多数神经元在体外培养的数天中死亡。解决这一问题有两条思路,一是让培养细胞提供自己的营养因子,二是在培养基中加入纯的生长因子。如果细胞混合物能在高密度时生长,所需的生长因子便会积累到可观的数值,尤其当培养基很少变化时。若某种细胞混合物生长时有很少的营养需求,可保持培养基在一段时间里不作任何变动,以使营养(生长)因子积累,而最后促使所需要的细胞类型能够生长。但是,这种对营养(生长)因子自身倚赖性亦有弊端,因为通常在混合细胞群体中细胞很难有同比例增殖,某些细胞会因生长条件的贫乏而受限制。另外,这种方法只能进行相当高密度的细胞培养。因为培养基的条件在细胞的较低密度时变的不够有效。不过某些时候纯化神经元群体的低密度培养可用条件培养基(经过了高密度培养)进行,或在胶质上生长的神经元所用过的培养基来支持。
未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖,随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基,这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养。在某些培养方案中,细胞直接进入无血清培养,这样的培养基可以消除来自血清的不均一性。更为重要的是,它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子,或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂。专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖,故可使神经元纯化。
现有的证据已表明,CNS神经元的营养需求比PNS的更复杂。对脊髓运动神经元与视网膜节细胞神经元的研究表明,这些神经元与外周神经元相比能对更为广泛的营养因子起反应。例如,至少发现了15种不同的分子可在离体条件下增加神经元的存活。而且,已观察到运动神经元与视网膜对任何单独的营养因子的存活反应,与PNS中所观察到的典型反应相比,都要小得多。因此,大多数影响运动神经元及视网膜节细胞的营养因子仅仅只能支持神经元的亚群,而神经元的最佳存活要求诸多因子的结合。在视网膜节细胞的培养中,因子的最佳组合(如BDNF、CNTF、IGF、bFGF)包括了来自不同生长因子家族的代表。这一结果的普遍性尚待进一步的证实,但敲除单一的营养因子基因之后,没有表现出对CNS大多类群的神经元的存活产生太大影响,这一观察与上述的事实是一致的。现已知少突胶质细胞的长期存活也需要众多营养因子的相互作用。
抗有丝分裂剂
某些DNA合成抑制剂对分裂细胞有毒,但对没有DNA合成的细胞仅有轻微影响。由于神经元通常缺乏DNA合成能力,因此对抗有丝分裂剂没有多大反应。这样的试剂常常用于神经元的培养,以消除或减少非神经元群体。若要杀死所有的非神经元细胞,可以先加入血清或生长因子来保证有高比例的非神经元细胞进行DNA合成,此时再加入抗有丝分裂剂。但是,某些细胞在它的细胞周期的某些时相时对抗有丝分裂剂是不敏感的。不过,可以重复的将抗有丝分裂剂使用于增殖的细胞群体。在CNS神经元的培养中抗有丝分裂剂常常在星形细胞形成单层后加入,此时,星形细胞由于接触抑制而终止了DNA的合成(即细胞停止增殖),它们不会因抗有丝分裂剂的加入而死亡。原代培养中用这种方法阻止成纤维细胞的过度增殖是十分必要的。有两种抗有丝分裂剂常用于神经元的培养:Fluorodexyuridine,是胸苷合成酶抑制剂,一般使用浓度为~10μM。尿苷(10μM)也常使用,可阻止不分裂细胞的RNA合成。另外,阿糖胞苷也常被使用,其使用浓度为5~50μM。使用任何一种抗有丝分裂剂,都必须考虑它的神经原毒性,应该确定最低效应的使用浓度。阿糖胞苷在很低的浓度下,也会对某些种类的神经元有毒性,可以造成特定神经原的死亡。其他的抗有丝分裂剂尚未表现出这种毒性。
在所有这些培养基中,谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度,这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡,DMEM含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
尽管很多实验室在细胞系的培养基中常规加入无菌的,原代培养时的细菌污染很少发生。其次,尽管认为抗生素对细胞代谢的影响可忽略,但最好避免使用它们,以免细胞生长环境的不稳定。最重要的是要意识到培养中主要污染物的类型,它们通常暗示了问题的来源。
细胞培养培养基
基础培养基
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上,添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物,其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸,维生素的范围亦很广,另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。MEM/F12 这两种培养基各取1/2,形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM,现应用于快速生长的细胞,同MEM含有相同的营养成分,但浓度高出2~4倍。选择某种培养基,应仔细了解成分表,应知道大多数情形下培养基都有不足。例如,有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸,而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域,但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言,则并非最佳选择,特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁,据报道也有神经毒效应。
原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。
满足神经元营养需求的第二条途径是向培养基中加入生长因子。通常用于组培的通用适宜因子是神经生长因子NGF。不过,只有少数对这种蛋白质有反应的细胞类型的细胞才能生长。
许多PNS类型的神经元在离体状态时表现出简单的营养需求,只需提供单一的营养因子就足以使其在低密度时增殖。例如,大鼠交感神经元仅需NGF即能存活,在其生存期间,这些神经元可在严格局限条件下生长好几个月(即在无血清培养基中、或缺乏胶质细胞、或在化学限定基质上)。有证据表明NGF是活体中交感神经元存活的生理调节因子。然而,交感神经元也对来自胶质细胞的神经营养因子(GDNF)有反应,还有NT3、LIF与CNTF也对其有作用。在不产生GDNF或NT3的动物中,交感神经元会有损伤。在离体与活体营养需求之间的差别或许可以用在不同环境中NGF含量和分布的不同来解释,培养中的NGF弥散在整个环境中,而在活体内,大部分区域的含量是有限的。因此,NGF的重要性在于其合适的浓度。尽管在大多数实验中已经习惯了营养因子的最大效应使用量,其他营养因子的协同效应在亚优剂量下更容易观察到。此外,高浓度的营养因子可使细胞更能抵抗毒剂以及其他压力。相应的,低浓度的营养因子可能用来检查表现型,例如对自由基或氨基酸的毒性刺激剂量的反应。有许多其他的PNS培养系统只需单一营养因子就可使有实用价值的细胞保持在一定比例,广为人知的有雏鸡睫状自主神经节神经元和大鼠背根神经节感觉神经元。不过,这些模型也有局限性。例如,培养中的睫状神经节的神经元加入CNTF时,超过90%的神经元能存活一个很长时期,但并未有迹象表明它属于内源的靶细胞来源的营养因子,而是有争论的相关分子,GPA,扮演了这一角色。大鼠背根神经节含有好几种细胞群体,其中小细胞群、包括nocioceptive cell,对NGF有反应,但其他神经元,例如大细胞群中的proprioception 却对不同的神经营养因子有反应。因此,在大多条件下培养物的生长并不能忠实反映亲代群体的所有特性,这一问题在CNS的细胞培养中特别突出,因为已有的经验表明,没有一种培养基能适合于所有类型及亚类的神经细胞的生长。
培养的保持
培养物是应该保持在孵箱中的。孵箱可以自动将O2与CO2混合很快达到培养基的设计要求,空气中的氧浓度比血液和脑脊液中要高得多。对于某些细胞的生长,包括神经原,应使氧含量处在一个较低的水平。可以用孵箱达到这个标准,但这样的孵箱并未广泛使用。
血清中含有的组分,例如血清蛋白,可作为代谢毒物清除剂使用并能聚集于培养基中。当缺乏这些成分时,如神经元在无血清培养基中生长时,特别容易为过氧化物及自由基伤害,这已被许多研究者注意到了。过氧化物酶以及超氧化物歧化酶可阻止培养基中过氧化物和超氧化物的累积,有报道讲可以促进低密度培养细胞的存活。有学者发现细胞存活可为氧分压的下降而促进。因而,无血清培养基的配方常含有抗氧化剂的试剂。例如,维生素E和丙酮酸,可作为过氧化物清除剂使用。上述这些影响在高密度培养时变小,特别是神经元与胶质共培养时,它们可以吸收和代谢神经元毒性物质如谷氨酸。