蒽酮法测还原糖
蒽酮比色法测定紫花地丁中总糖及还原糖含量
Abstract: Objective: Choosing the best conditions of extracting the total sugar in viola philippicassp munda W. Becker and testing the content of total sugar and reducing sugar in various parts of it. Methods: using orthogonal design L9（33）to choose the best condition of the ratio of material and solvent, reaction time and concentration of HCl, and testing total sugar and reducing sugar unnder 624 nm by Anthrone colorimetry. Results: The content of total sugar in the leaves、leafstalks and roots is 11.53 %,12.1 %,35.8 % respectively, and the content of reducing sugar in the parts above is 4.78 %,4.44 %,11.74 % respectively. The percentage of the experiment is well, RSD is 1.84 % and the Recovery rate is 97.61 %.
Keywords：Viola philippicassp Munda W.Becker; Total sugar; Reducing sugar; Anthrone colorimetry.
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较黄酒作为一种传统的中国酒类饮品，其甜度对于消费者来说是一个重要的指标之一、而酒中的糖分主要可以分为总糖和还原糖两部分。
总糖是指以葡萄糖为单位计算的糖的总含量，包括单糖、双糖和多糖等。
而还原糖则是指可以通过还原反应将还原糖转化为葡萄糖的糖的含量。
目前测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，下面将对其中的几种常用方法进行比较。
一、酶法测定酶法测定是一种常用的测定酒中糖含量的方法。
其基本原理是利用特定的酶将糖分解成可以被检测的物质，进而测定其浓度。
常用的酶法测定总糖和还原糖的方法有苯酚-硫酸法、巴氏显色法和Nelson-Somogyi法等。
苯酚-硫酸法是一种简单、灵敏的测定方法。
该方法将样品中的糖与苯酚发生反应，生成呈紫蓝色的复合物，再用硫酸将复合物水解，生成浓黄色的产物。
样品的吸光度与糖的含量成正比。
巴氏显色法和Nelson-Somogyi法是一种将糖与多酚氧化酶作用后生成还原物质，再与葡萄糖酸生成呈蓝色的化合物的方法。
二、硫酸蒽酮显色法硫酸蒽酮显色法是一种测定还原糖含量的方法。
其基本原理是还原糖经酸水解生成葡萄糖，葡萄糖与蒽酮反应生成紫红色的产物，其吸光度与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、时间短，但只适用于测定还原糖，不能测定总糖的含量。
三、显色剂法显色剂法是一种常用的测定总糖含量的方法。
其基本原理是糖与特定的显色剂反应生成有色化合物，通过测定化合物的吸光度来测定糖的含量。
显色剂法可以测定总糖的含量，但不能区分不同类型的糖。
四、色谱法色谱法是一种常用于测定糖含量的方法。
其基本原理是将糖分离开来，并通过色谱柱上的吸附剂将糖分解为可以被检测的物质。
常用的色谱法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
HPLC法可以快速、准确地分析各种糖类的含量，但设备价格较高。
GC法适用于分析低浓度的糖类，但需要进行样品的脂肪酸酯化处理。
综上所述，测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，各种方法有其优劣之处。
蒽酮比色法测糖.doc
蒽酮比色法测糖一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉、可调试移液器或移液管、可见分光光度计（723型）、电子分析天平、水浴锅、电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每ml含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得。
硫酸溶液由760m l浓硫酸（比重1.84)稀释成1000ml而成。
2g/L蒽酮试剂：溶解2g蒽酮于1L浓硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使用。
四、操作1．可溶性糖的提取称取重约5g的新鲜植物叶子，于研钵中乙醚少许，仔细研磨成均匀的浆状物，倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加蒸镏水30─40ml。
将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70─80℃约半小时，冷却后1滴1滴地加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质，直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。
然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中，加水至刻度，充分振荡。
以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥的三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得的透明滤液即为可溶性糖提取液。
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1．仪器（1）分光光度计；（6）漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2．试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（3）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3．材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（大白菜心）。
四、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL 1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。
蒽酮法实验报告
一、实验目的1. 熟悉蒽酮法检测还原糖的基本原理和方法。
2. 掌握蒽酮试剂的配制和操作步骤。
3. 通过实验，学会运用蒽酮法检测还原糖含量。
二、实验原理蒽酮法是一种检测还原糖的经典方法。
其原理是还原糖在酸性条件下，能与蒽酮发生显色反应，生成红色化合物。
根据溶液颜色的深浅，可以计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 标准葡萄糖溶液- 样品溶液- 蒽酮试剂- 醋酸- 硫酸- 水浴锅- 移液管- 比色皿- 分光光度计2. 实验仪器：- 实验台- 电子天平- 移液器- 烧杯- 滴定管- 玻璃棒四、实验步骤1. 配制蒽酮试剂：- 称取0.1g蒽酮，加入100mL醋酸溶液，溶解后转移至1000mL容量瓶中，用醋酸溶液定容至刻度。
2. 标准曲线的制作：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL标准葡萄糖溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品溶液的制备：- 称取一定量的样品，加入适量的蒸馏水，溶解后定容至100mL。
4. 样品溶液的测定：- 分别吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL样品溶液于6个试管中，依次加入5mL蒽酮试剂，混匀后放入水浴锅中加热10分钟。
- 取出试管，冷却至室温，用蒸馏水定容至10mL。
- 使用分光光度计在波长620nm处测定吸光度。
5. 还原糖含量的计算：- 根据样品溶液的吸光度，从标准曲线中查得相应的葡萄糖浓度。
- 根据样品溶液的体积和浓度，计算还原糖含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：- 标准曲线的线性范围为0.5～2.5mg/mL。
2. 样品溶液的测定：- 样品溶液的吸光度在标准曲线的线性范围内。
3. 还原糖含量的计算：- 样品溶液的还原糖含量为（计算值）mg/mL。
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]
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还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]实验一糖类的性质实验〔一〕糖类的颜色反响一、实验目的1、了解糖类某些颜色反响的原理。
2、学习应用糖的颜色反响鉴别糖类的方法。
二、颜色反响〔一〕α-萘酚反响1、原理糖在浓无机酸〔硫酸、盐酸〕作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反响均呈阳性，故此反响不是糖类的特异反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
用前配制。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL1％淀粉溶液100mL0.1％糠醛溶液100mL浓硫酸500mL4、实验操作取5支试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。
再向5支试管中各参加2滴莫氏试剂，充分混合。
倾斜试管，小心地沿试管壁参加浓硫酸1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
观察记录各管颜色。
〔二〕间苯二酚反响1、原理在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反响是酮醣的特异反响。
醛糖在同样条件下呈色反响缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反响。
实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000mL，称取间苯二酚0.05g 溶于30mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000mL。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL4、实验操作取3试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5mL。
再向3支试管中各参加塞氏试剂5mL，充分混合。
将试管同时放入沸水浴中，观察记录各管颜色。
(二)糖类的复原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的复原性质；2、学习常用的鉴定糖类复原性的方法。
淀粉总糖还原糖的测定方法
淀粉总糖还原糖的测定方法淀粉的测定方法---蒽酮法一( 原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二( 仪器设备三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三( 试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。
2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424保存2,3周。
五实验步骤1. 分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。
重复三次2. 水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。
3. 测定取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*0.9/W) C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(gA—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖:实验步骤:1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
还原糖测定的方法及原理
还原糖测定的方法及原理糖测定是一种常见的化学分析方法，用于测量食品、饮料、生物样品等中糖类的含量。
常见的糖测定方法包括甘露醇法、硫酸还原法、蒽酮法、硫氰酸法等。
以下将介绍甘露醇法和硫酸还原法的原理及操作步骤。
甘露醇法是一种常用的显色滴定法，用于测量还原性糖（如蔗糖、葡萄糖等）的含量。
其原理基于还原性糖可以将甘露醇溶液中的亚铁离子（Fe3+）还原为二价铁离子（Fe2+），形成有色的络合物。
在滴定过程中，利用硫酸铁铵溶液作为试剂，溶液中亚铁离子的数量与还原性糖的含量成正比。
当滴定到终点时，蓝绿色的亚铁络合物转变为暗蓝色的铁络合物，这时在甘露醇滴定溶液中的还原性糖的含量可通过滴定溶液与甘露醇试剂的滴定体积计算得出。
甘露醇法的操作步骤如下：1. 准备试样：将需要测定的样品称重后溶解至一定浓度。
2. 进行甘露醇标定：称取一定量的甘露醇试剂溶液，通过滴定加入硫酸铁铵试剂，观察滴定溶液颜色的变化，并记录滴定体积。
3. 向甘露醇标定溶液中滴加定量的样品溶液，反应一段时间后再进行甘露醇试剂的滴定。
记录滴定体积。
4. 计算还原性糖的含量：根据甘露醇标定的结果，计算出滴定溶液中还原性糖的含量。
硫酸还原法是测定还原性糖的一种典型方法。
其原理是将还原性糖与稀硫酸反应产生羧酸，然后与石墨烯反应生成有色化合物，通过分光光度计测量其吸光度进而计算出还原性糖的含量。
硫酸还原法的操作步骤如下：1. 准备试样：将需要测定的样品称重后溶于稀硫酸中。
2. 水解反应：将溶有样品的稀硫酸加热，使糖类发生水解反应，生成羧酸。
3. 与石墨烯反应：将水解后的样品溶液与石墨烯混合，加热过程中，羧酸与石墨烯反应生成有色化合物。
该有色化合物对应了溶液中还原性糖的含量。
4. 分光光度计测量：将反应后的样品溶液取出，使用分光光度计测量其吸光度。
利用标准曲线，计算样品溶液中还原性糖的含量。
总结来说，糖测定方法通常基于糖类与某种试剂发生化学反应并产生某种可测量的物质的原理，通过测量产生物的量或者相应的物理参数，即可计算出糖类的含量。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
可溶性糖测定
可溶性糖测定作物可溶性糖的测定(蒽酮比色法)测定意义 可溶性糖主要是单糖，即葡萄糖和果糖(也称还原糖)和双糖即蔗糖(也称非还原糖)组成，它是植物体内一种重要的碳水化合物，在一般植物及植物产品中，测定其含量多少，不仅能反映作物的生长状况，而且还能反映其品质。
因此在植物分析中进行可溶性糖的测定颇为重要。
测定原理糖类遇硫酸即脱水成为羟醛类：H HHOC COH CH—CH脱水H2C CH—CH HC C—CHO + 3H2OOOH OH然后，蒽酮与糖醛脱水、缩合，形成糖醛衍生物，呈蓝色，蓝色的深浅，可做为定量的标准。
H HO C —C O+ HC C—CHOOCH—CH2OHO试剂配制(1)准确称取1.000g葡萄糖溶于1升容量瓶中，此清液为1000mg/L，从此液中吸取0、1、2、4、6、8、10毫升注入100毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，此溶液即0、10、20、40、60、80、100mg/L糖溶液，分别吸取系列标准糖液各2ml分别注入7个比色管中，按照试样测定的方法进行处理并比色，以横坐标表示不同的糖浓度，纵坐标表示光度计的相应光密度。
绘出葡萄糖的标准曲线。
(2)蒽酮溶液 称取0 1克蒽酮溶于100毫升72%的硫酸中，(每100毫升0 1%蒽酮溶液硫酸含量为比重1 84的浓硫酸74毫升)此试剂需新鲜配制，若在100毫升蒽酮试剂中加1克硫脲，则可以延长保存时间至一个月。
测定步骤1提取：精确称取经磨细的干样品100毫克，置于一个15毫升的离心管中，加入10毫升80%酒精，在管口上盖一个塞子，保持在80～85℃热水浴内，30分钟，取出离心，把上层清液轻轻移至一个50毫升烧杯中，照此法对残渣重复提取2次，以使可溶性糖提取完全。
把上述酒精提取液置于80～85℃水浴上，使酒精蒸发，直到剩下3毫升液体为止。
而后用蒸馏水定容至25毫升。
作为可溶性糖的提取液。
2 测定：吸取5毫升的糖提取液至一个25毫升容量瓶中，用蒸馏水定容，取2毫升此稀释的糖提取液至一个具有塞的比色管中，然后，沿管壁缓缓注入蒽酮试剂10毫升，加完后立即摇动半分钟，放入沸水浴中加热10分钟，取出后放入冷水中迅速冷却，待10分钟后，使之显色稳定，于620nm波长光源下进行比色，测得光密度。
3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定还原糖
3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。
2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9)UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2)3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
3．实验步骤制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
食品中还原糖的测定方法
食品中还原糖的测定方法还原糖是指能够被还原剂还原为相应的糖醇或糖醛的单糖或双糖。
在食品中，还原糖是一种常见的添加剂，它能够增加食品的甜度和口感。
然而，过量的还原糖会对人体健康造成不良影响，因此需要对食品中的还原糖含量进行测定。
下面介绍几种常用的还原糖测定方法。
1. 蒽酮法蒽酮法是一种经典的还原糖测定方法，它基于还原糖与蒽酮反应生成有色产物的原理。
该方法操作简单，灵敏度高，适用于各种食品中还原糖的测定。
具体操作步骤如下：（1）取适量样品，加入适量水，加热至沸腾，使样品中的还原糖全部还原为糖醇。
（2）将样品冷却至室温，加入适量蒽酮试剂，摇匀。
（3）加入适量氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
（4）在紫外光下测定样品的吸光度，根据标准曲线计算还原糖的含量。
2. 酚硫酸法酚硫酸法是一种常用的还原糖测定方法，它基于还原糖与酚硫酸反应生成有色产物的原理。
该方法操作简单，适用于各种食品中还原糖的测定。
具体操作步骤如下：（1）取适量样品，加入适量水，加热至沸腾，使样品中的还原糖全部还原为糖醇。
（2）将样品冷却至室温，加入适量酚硫酸试剂，摇匀。
（3）加入适量氢氧化钠溶液，使样品呈碱性。
（4）在紫外光下测定样品的吸光度，根据标准曲线计算还原糖的含量。
3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精确、快速、灵敏的还原糖测定方法，它基于还原糖在色谱柱中的分离和检测。
该方法操作简单，适用于各种食品中还原糖的测定。
具体操作步骤如下：（1）取适量样品，加入适量水，加热至沸腾，使样品中的还原糖全部还原为糖醇。
（2）将样品冷却至室温，加入适量甲醇，摇匀。
（3）用过滤膜过滤样品，取上清液注入色谱柱中。
（4）在色谱柱中分离还原糖，检测各组分的峰面积或峰高，根据标准曲线计算还原糖的含量。
总之，还原糖是一种常见的食品添加剂，需要对其含量进行测定。
蒽酮法、酚硫酸法和高效液相色谱法是常用的还原糖测定方法，它们操作简单、灵敏度高、适用范围广，可以满足不同食品中还原糖的测定需求。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。
三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
蒽酮比色定糖法的讲解
样品糖含量(%) =(A×C/W)×100
A-样品稀释后的体积 1000 C-标准曲线上查出的糖含量（µg） W-样品重量（g）10
样品糖含量(%) =(C×V1×D/W×V2×106)×100
C-标准曲线上查出的糖含量（µg）
V1-提取总体积（ml）10
的吸收效应，不同的物质具有各自选择性 的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液 时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的 程度和物质浓度有一定比例关系，即符合 于比色原理：朗伯-比尔定律
光吸收定律
➢ 朗伯（Lambert）定律：一束单色光通过吸光物质的
溶液后，光吸收程度（吸光度）与溶液液层厚度成正比。
即： A lg I0 lg 1 kb
➢单色器：由入射狭缝、准直透镜、色散元件、聚焦透镜 和出射狭缝构成。
➢玻璃吸收紫外光，所以玻璃棱镜仅用于350-3200nm波长 范围，只能用于可见分光光度计；石英（ 185-4000nm ） 则可用于整个紫外-可见光区。
➢光栅利用光的衍射与干涉作用，其优点是适用波长范围 宽、色散均匀、分辨率高；但其缺点是各级光谱有重叠而 产生相互干扰。
总糖是指单糖（葡萄糖、果糖）、双糖（蔗 糖、麦芽糖、乳糖）的总量。
2、总糖的测定是以还原糖的测定为基础。
➢ 常用的方法有直接滴定法，蒽酮比色法 等，常以转化糖计。
三、实验目的
➢ 学习分光光度法的基本原理 ➢ 学习对食品中糖含量进行测定的方法
四、实验原理
➢ 分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的激发下，产生对光
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基， 戊醛糖及己糖醛酸反应，反应后溶液呈蓝 绿色，在620nm处有最大吸收。
测还原糖 蒽酮比色法
采用蒽酮比色法因为此方法最大的特点是灵敏度高，显色稳定，操作简便，适于微量测定。
一实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二实验原理蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
三实验器材及试剂卤汁：原样品和浓缩之后的产品可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml 备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作标准曲线制作葡萄糖标准溶液配制：先配成1 g／L的葡萄糖溶液，然后分别吸取1、2、4、6、8、10、12、14 mL 分别置于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，可得到0．01、0．02、0．04、0．06、0．08、0．10、0．12、0．14 n mL的葡萄糖系列浓度。
葡萄糖标准曲线制作吸取系列标准葡萄糖溶液，蒸馏水各1 mL，分别置于9支试管中，加人5 mL 冷蒽酮试剂，混匀，于试管口盖上玻璃球，在沸水浴中加热7 min，取出后用冷水冷却20 min后，测A(620nm处的吸光光度值)，以吸光度为纵坐标，糖标准溶液浓度为横坐标，绘标准曲线。
2.样品含量的测定样品前处理方法样品测定方法准确吸取1 mL乳清废水原液，移人100 mL容量瓶中，用水稀释至50 mL混匀，加人过量的Ba (OH)：溶液，生成蛋白质沉淀，等完全沉淀后再加人过量的ZnSo4,溶液除去剩余的Ba(OH)2，最后定容摇匀，过滤，滤液作为待测液。
样品液的制作：吸取1 mL样品待测液于试管中，加人5 m 的蒽酮试剂，混匀，于试管口盖上玻璃球，在沸水浴中加热7 min，取出后用冷水冷却20 rain后，测A(620nm 处吸光光度值)。
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒是一种传统的中国酒类，其制作过程中需要添加糖分，因此黄酒中总糖和还原糖含量的测定对于黄酒的质量控制和生产过程的改进具有重要意义。
本文将比较常用的黄酒中总糖和还原糖含量测定方法。
一、黄酒中总糖含量测定方法
1. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种常用的测定黄酒中总糖含量的方法。
该方法的原理是将黄酒中的糖分与酚硫酸反应生成紫色化合物，通过比色法测定紫色化合物的吸光度来计算总糖含量。
该方法操作简单，结果准确，但需要使用昂贵的试剂。
2. 蒽酮法
蒽酮法是一种比较新的测定黄酒中总糖含量的方法。
该方法的原理是将黄酒中的糖分与蒽酮反应生成蓝色化合物，通过比色法测定蓝色化合物的吸光度来计算总糖含量。
该方法操作简单，结果准确，但需要使用昂贵的试剂。
二、黄酒中还原糖含量测定方法
1. 3,5-二硝基水杨酸法
3,5-二硝基水杨酸法是一种常用的测定黄酒中还原糖含量的方法。
该方法的原理是将黄酒中的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成红色化合物，通过比色法测定红色化合物的吸光度来计算还原糖含量。
该方法操作简单，结果准确，但需要使用昂贵的试剂。
2. 酚-硫酸法
酚-硫酸法是一种比较新的测定黄酒中还原糖含量的方法。
该方法的原理是将黄酒中的还原糖与酚-硫酸反应生成紫色化合物，通过比色法测定紫色化合物的吸光度来计算还原糖含量。
该方法操作简单，结果准确，但需要使用昂贵的试剂。
黄酒中总糖和还原糖含量的测定方法各有优缺点，具体选择哪种方法需要根据实际情况进行综合考虑。
总糖的测定实验报告
总糖的测定实验报告一、实验目的总糖是指样品中还原糖和非还原糖的总和。
本次实验的目的是掌握总糖测定的原理和方法，学会使用相关仪器和试剂进行准确的测定，并通过实验数据的处理和分析，得出样品中总糖的含量。
二、实验原理总糖的测定通常采用蒽酮比色法。
糖类在浓硫酸的作用下，可脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色复合物。
在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，通过比色法可以测定出样品中总糖的含量。
三、实验仪器与试剂1、仪器分光光度计恒温水浴锅电子天平容量瓶（100ml、50ml、25ml）移液器移液管（1ml、2ml、5ml、10ml）具塞刻度试管（25ml）玻璃棒漏斗滤纸2、试剂蒽酮试剂：称取 02g 蒽酮溶于 100ml 浓硫酸中，当日配制使用。
葡萄糖标准溶液（100μg/ml）：准确称取 01g 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000ml。
样品溶液：将待测样品经过适当处理后，制成一定浓度的溶液。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取 6 支 25ml 具塞刻度试管，分别编号为 0、1、2、3、4、5。
按表 1 加入葡萄糖标准溶液和蒸馏水。
｜试管编号|0|1|2|3|4|5|｜｜｜｜｜｜｜｜｜葡萄糖标准溶液（ml）｜0|02|04|06|08|10|｜蒸馏水（ml）｜10|08|06|04|02|0|｜葡萄糖含量（μg）｜0|20|40|60|80|100|向各试管中迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热10min，取出后用流水冷却至室温，在 620nm 波长下，以 0 号管为空白对照，测定各管的吸光度值。
以葡萄糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品溶液的制备称取适量的样品，经过粉碎、研磨等处理后，用蒸馏水溶解并定容至一定体积。
若样品溶液中含有较多杂质，可先用滤纸过滤。
3、样品溶液的测定吸取 1ml 样品溶液于 25ml 具塞刻度试管中，加入 4ml 蒸馏水，再迅速加入 5ml 蒽酮试剂，摇匀后立即放入沸水浴中加热 10min，取出后用流水冷却至室温。
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量
蒽酮-硫酸比色法测定多糖含量一. 实验原理糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定。
二. 试剂器材蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀。
当日配制使用；葡萄糖标准液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等。
三. 操作步骤葡萄糖标准曲线的制作取7支具塞试管，按下表数据精密配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液，每个浓度做2-3个重复：管号0 1 2 3 4 5 6 标准葡萄糖溶液/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 在每支试管中立即加入蒽酮试剂6m L，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。
在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量( g)为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
样品的测定将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2m L置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6m L，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。
取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2-3个重复。
在625nm波长下迅速测定各管吸光值。
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总糖的含量的测定（蒽酮法）
一、实验目的
掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理
蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材
1.吸管
2.试管
3.分光光度计
4.水浴锅
5.电炉
6.电子分析天平
四、实验试剂
1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作
1.制作标准曲线
取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作
2.样品的处理（见实验四）
取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：
w —糖的质量分数（%）；
C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；
m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CV
ｍ ×100%。