吲哚布芬舒张血管的作用及机制研究_李昱

溶剂对照组比较。
１．２．４ 观 察 吲 哚 布 芬 舒 血 管 作 用 与 ＮＯ 的 关 系 血 管 环 收 缩 达坪值后，加入３０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ引 起 完 整 的 血 管 收 缩 后 ，分 别 加 入 Ｌ－ＮＡＭＥ（１ ０ ０μｍｏｌ／Ｌ），Ｌ－ＮＡＭＥ（１ ０ ０μｍｏｌ／Ｌ）和 Ｌ－Ａｒｇ（１０μｍｏｌ／Ｌ），再次达坪值后，分 别 累 积 加 入 吲 哚 布 芬 （０． ３μｍｏｌ／Ｌ、１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ 和 ３０μｍｏｌ／Ｌ）。 记 录相应血管张 力 变 化。 以 加 入 ３０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ诱 发 的 胸 主 动 脉 环 最 大 收 缩 幅 度 作 为１００％ ，建 立 浓 度 －效 应 曲 线 ，并 与 对 照 组 作比较。
且内皮完整组与去内皮组血管之间的有显著的舒张差异性
（Ｐ＜０．０１），ＫＣｌ预刺激内皮完 整 组 和 去 内 皮 组 最 大 舒 张 Ｅｍａｘ 分别为（６１．８５±２．８５）％和（２２．１２±２．３７）％。说 明 吲 哚 布 芬 的 血 管 舒 张 作 用 有 部 分 内 皮 依 赖 性 。 详 见 图 １。
１） 为山西省自然科学基金项目 （Ｎｏ．２００８０１１０７６－４）；山西医科大学２０１２校青年基金资助项目（Ｎｏ．０５７５５７）
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ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＯＮ ＣＡＲＤＩＯ－／ＣＥＲＥＢＲＯＶＡＳＣＵＬＡＲ ＤＩＳＥＡＳＥ Ａｕｇｕｓｔ ２０１４ Ｖｏｌ．１２ Ｎｏ．８
注 ：与 对 照 组 比 较 ，＊ ＊Ｐ＜０．０１。 图 １ 吲 哚 布 芬 对 内 皮 完 整 和 去 内 皮 主 动 脉 环 预 收 缩 的 影 响 ２．２ 内 皮 依 赖 性 舒 张 机 制 在ＫＣｌ预 收 缩 的 完 整 血 管 环 中 ， Ｌ－ＮＡＭＥ 抑制吲哚布芬的 舒 血 管 作 用 （Ｐ＜０．０１），而 给 予 主 动 脉 环外源性的 ＮＯ 合成底物 Ｌ－Ａｒｇ的同时应用 Ｌ－ＮＡＭＥ 后，Ｌ－ ＮＡＭＥ 抑制吲哚 布 芬 舒 血 管 作 用 减 弱，说 明 Ｌ－ＮＡＭＥ 阻 断 吲 哚布芬的舒 血 管 作 用 受 外 源 性 ＮＯ 合 成 底 物 的 影 响。 详 见 图 ２。
Байду номын сангаас
图 ３ 钾 通 道 抑 制 剂 对 吲 哚 布 芬 舒 血 管 作 用 的 影 响
２．４ ＫＢ－Ｒ７９４３ 对 吲 哚 布 芬 舒 血 管 作 用 的 影 响 在 ＫＣｌ（３０ ｍｍｏｌ／Ｌ）预收缩的血管 环 上，加 入 １０μｍｏｌ／Ｌ ＫＢ－Ｒ７９４３，累 积 加入吲哚布芬（０．３μｍｏｌ／Ｌ、１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ 和 ３０μｍｏｌ／Ｌ）后，ＫＢ－Ｒ７９４３ 可 增 强 吲 哚 布 芬 的 舒 血 管 作 用， Ｅｍａｘ（８０．８２±２．８５）％ 。 详 见 图 ４。
中 西 医 结 合 心 脑 血 管 病 杂 志 ２０１４ 年 ８ 月 第 １２ 卷 第 ８ 期
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吲哚布芬舒张血管的作用及机制研究１）
李 昱 ，王 新 风 ，武 冬 梅 ，郭 晓 晶 ，杨 凯 ，牛 栓 成
摘要：目的 研究吲哚布芬对离体大鼠胸主动脉张力的影响，并探讨其作用机制。方法 采用离体血管 张 力 记 录 法，观 察 吲 哚 布 芬 对 大 鼠 主 动 脉 血 管 环 的 作 用 及 不 同 工 具 药 的 影 响 。 结 果 吲 哚 布 芬 （０．３μｍｏｌ／Ｌ、１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ 和３０μｍｏｌ／Ｌ） 对 ＫＣｌ（３０ｍｍｏｌ／Ｌ）预收缩的血管环具有浓度依赖性舒张作用，去内皮组舒张作用弱于内 皮 完 整 组，说 明 此 舒 张 作 用 具 有 部 分 内 皮 依赖性。在 ＫＣｌ预收缩基础上，非特异性 ＮＯＳ抑制剂 Ｌ－ＮＡＭＥ（１００μｍｏｌ／Ｌ）处理大鼠胸主动脉后，吲哚布芬的舒张血管 作 用 部 分 被抑制；加入钾通道阻滞剂４－氨基吡啶４－ＡＰ（１ｍｍｏｌ／Ｌ）、氯 化 钡 ＢａＣｌ２（１ ｍｍｏｌ／Ｌ）、格 列 苯 脲 Ｇｌｉ（１０μｍｏｌ／Ｌ）和 四 乙 胺 ＴＥＡ（１０ ｍｍｏｌ／Ｌ），吲哚布芬舒张血管作用均被抑制。结论 吲哚布芬具有浓度依赖的舒张血管作用且具有部分内皮依赖性；而其 舒 血 管 作 用可被反向钠钙交换体阻滞剂 ＫＢ－Ｒ７９４３增 强。 吲 哚 布 芬 对 大 鼠 胸 主 动 脉 的 舒 张 作 用 可 能 与 ＫＡＴＰ 通 道、Ｋｖ通 道、ＫＣａ通 道 和 ＫｉＲ 通道有关。
１１．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，ＨＥＰＥＳ ５ ｍｍｏｌ／Ｌ。 去 除 离 体 胸 主 动 脉 周 围 结 缔 组织及脂肪后，剪成长度２ｍｍ～４ ｍｍ 的 血 管 环。用 两 根 微 型 挂钩 贯 穿 血 管 管 腔 ，将 离 体 胸 主 动 脉 水 平 悬 挂 在 １０ ｍＬ 浴 漕 内，下方固定，上 方 以 一 细 钢 丝 连 于 张 力 换 能 器 。Ｐｏｗｅｒｌａｂ 生 物信号测 定 系 统 记 录 血 管 张 力 变 化 。 浴 管 内 含 有 通 以 １００％ Ｏ２、３７ ℃的 ＰＳＳ液１０ｍＬ。调整基础张力至２ｇ，平衡１ｈ，其间 调整张力，使之维持 在 ２ｇ 的 恒 定 水 平，每 ２０ ｍｉｎ 换 一 次 ＰＳＳ 溶液。所有动脉环用６０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ进 行 刺 激，当 血 管 环 对 刺 激稳定，即连 续 ２ 次 同 样 的 刺 激 所 引 起 的 收 缩 幅 度 差 别 小 于 ５％ 时 ，开 始 正 式 实 验［４］。 １．２．２ 去内皮胸主动脉 血 管 环 的 制 备 将 制 备 完 成 的 胸 主 动 脉环两端 固 定，用 与 血 管 内 径 相 适 的 棉 棒 轻 刮 血 管 内 壁 ，连 续 ３ 次 。 血 管 环 悬 挂 稳 定 １ｈ 后 ，用 ６０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ刺 激 ，达 到 稳 定 后 ，加 入 乙 酰 胆 碱 （１０μｍｏｌ／Ｌ）。 若 舒 张 幅 度 不 超 过 收 缩 幅 度 的 ５％ 时 ，即 可 认 为 内 皮 去 除 完 全 ，可 以 开 始 实 验 。 １．２．３ 吲哚布芬对 ＫＣｌ预收缩 的 内 皮 完 整 组 和 去 内 皮 组 胸 主 动脉血管环的影响 血 管 环 稳 定 后，内 皮 完 整 组 和 去 内 皮 组 加 入 ３０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ，收 缩 达 坪 值 后 ，分 别 累 积 加 入 吲 哚 布 芬 （０．３ μｍｏｌ／Ｌ、１μｍｏｌ／Ｌ、３μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ 和 ３０μｍｏｌ／Ｌ）。 对 照 组加入溶剂，去内皮组和内 皮 完整组分别以各组加入３０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ诱发的胸主动 脉 环 最 大 收 缩 幅 度 作 为 １００％，计 算 在 加 入 不同浓度后两组舒张百分比变化，再次建立浓度效应曲线，并 与
１ 材 料 与 方 法 １．１ 实 验 材 料 １．１．１ 实验动物 健 康 雄 性 大 鼠，体 重 ２５０ｇ～２８０ｇ，由 山 西 医科大学实验动物中心提供。 １．１．２ 实验药品与试剂 吲 哚 布 芬 （ｉｎｄｏｂｕｆｅｎ），华 东 医 药 （西 安）博 华 制 药 有 限 公 司，编 号：１２２４３８。ＫＢ－Ｒ７９４３，ＴＯＣＲＩＳ 公 司，批 号 １Ｂ／８４０２７。 ＨＥＰＥＳ，ＡＭＲＥＳＣＯ 公 司，批 号 ＣＡＳ 号 ７３６５－４５－９。左 旋 硝 基 精 氨 酸 甲 酯 （ＮＧ－ｎｉｔｒｏ－Ｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ，Ｌ－ＮＡＭＥ），Ｓｉｇｍａ 公 司，批 号 ５１１Ｋ１３５１。 四 乙 胺 （Ｔｅｔ－ ｒａｅｔｈｔｙｌａｍｉｎｅ，ＴＥＡ），Ｓｉｇｍａ 公 司，批 号 ＧＡ２２０８１。 格 列 苯 脲 （Ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ，Ｇｌｉ），Ｓｉｇｍａ 公 司，批 号 ０７５Ｋ１３７６。４－氨 基 吡 啶 （４－ａｍｉｎｏｐｙｒｉｄｉｎｅ，４－ＡＰ），Ｓｉｇｍａ公 司 ，批 号１ ４ ８ ２ ６ＪＡ 。 Ｌ－精氨 酸 （Ｌ－Ａｒｇｉｎｉｎｅ，Ｌ－Ａｒｇ），上 海 康 达 氨 基 酸 厂，批 号： ２００２０６１１。ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２ 等化学试 剂 均 为 天 津 化 学 三 厂 制 造分析纯。以上药品临用前均用生理盐水配制至所需浓度。 １．１．３ 实验仪 器 Ｐｏｗｅｒｌａｂ 生 物 信 号 采 集 分 析 系 统 （澳 大 利 亚埃德公司）；ＭＳ－４０００生 物 信 号 采 集 分 析 系 （广 州 龙 飞 达 科 技 有限公司）；ＢＬ－４２０Ｆ 张 力 换 能 器 （成 都 泰 盟 科 技 有 限 公 司 ）； ＨＳＳ－１Ｂ数字式超级恒温浴锅（成 都 仪 器 厂）；微 量 加 样 器 （上 海 求精生化试剂仪器有限公 司 ）；精 密 天 平 （北 京 赛 多 利 斯 仪 器 有 限公司）；电子 ＰＨ 计（上海理达仪器厂）。 １．２ 方 法 １．２．１ 血管环的制备 大鼠脱臼后立即开胸，取其胸主动 脉 放 置于４ ℃ 生理盐溶液（ＰＳＳ），其成分为：ＮａＣｌ １４２ ｍｍｏｌ／Ｌ，ＫＣｌ ５．９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＭｇＣｌ２１．１５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＣａＣｌ２２．５５ ｍｍｏｌ／Ｌ，葡 萄 糖
１．２．５ 观察吲哚布芬对 钾 通 道 的 作 用 观 察 钾 离 子 通 道 阻 断 剂对吲哚布芬舒血管的作 用 时，血 管 环 用 ３０ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ预 刺 激，当动 脉 血 管 环 收 缩 稳 定 后 ，分 别 向 实 验 组 加 入 ４－ＡＰ （１ ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＢａＣｌ２ （２ μｍｏｌ／Ｌ）、Ｇｌｉ （１０ μｍｏｌ／Ｌ）和 ＴＥＡ（０．２ ｍｍｏｌ／Ｌ），对 照 组 加 入 溶 剂 ，待 各 组 收 缩 再 次 反 应 达 到 稳 定 后 ，
关 键 词 ：吲 哚 布 芬 ；钾 通 道 ；钠 钙 交 换 体 ；血 管 舒 张 ；大 鼠 动 脉
中图分类号：Ｒ３９２．２ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－１３４９．２０１４．０８．０４９ 文章编号：１６７２－１３４９（２０１４）０８－０９９７－０３
吲哚布芬（ｉｎｄｏｂｕｆｅｎ）是 新 一 代 抗 血 小 板 聚 集 药 物［１］，其 对 由血小板聚集活化剂引起的血小板聚集呈现出可逆性和剂量依 耐性 的 抑 制 作 用［２］，目 前 该 药 已 广 泛 用 于 各 种 心 脑 血 管 疾 病［３］。 有研究表明，吲哚 布 芬 与 其 他 同 类 药 （阿 司 匹 林、噻 氯 匹 定 ）相 比，其耐受性更好，而且毒副反应较少。近几年对吲哚布芬的 研 究偏向临床方面，而吲哚 布 芬 对 离 体 主 动 脉 环 的 影 响 及 其 机 制 却未见报道。本实验采 用 离 体 血 管 张 力 测 量 的 实 验 方 法，观 察 吲哚布芬对 大 鼠 离 体 胸 主 动 脉 环 静 息 张 力 的 影 响 ，对 氯 化 钾 （ＫＣｌ）预 收 缩 血 管 作 用 的 影 响 ，以 及 是 否 与 内 皮、一 氧 化 氮 （ＮＯ）和平滑肌上影响血管舒缩作用的离子通道有关系，从 而 研 究 吲 哚 布 芬 对 血 管 平 滑 肌 的 影 响 ，并 探 讨 其 机 制 。