大肠杆菌的检测(MPN计数法)

合集下载

大肠菌群检测(MPN法)

大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。

一、大肠菌群概述

大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。

1.菌落计数法

该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。

2. 硝酸德钠试剂法

将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。该方法已被最可能数(MPN)法所替代。

3. 最可能数法(MPN法)

该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：

^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）

其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。

在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。

大肠杆菌的检测MPN计数法

大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。

一、MPN计数法简介

MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。

二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤

1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处

理，以避免污染和交叉感染。

2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。每个稀

释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。

3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN

计数。这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。

4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基

是为了促进大肠杆菌的生长。每个试管中接种的样品量为10ml。

5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。根据

统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。

6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆

菌的最可能数。

三、MPN计数法的优势和局限性

优势：

1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于

MPN大肠菌群大肠杆菌原理

MPN的全称是Most Probable Number，即最有可能数目。MPN是一种

用于测定微生物数量的方法。在微生物学中，常常需要知道一个环境样品

中微生物的数量，这对于病原微生物的检测、食品与饮用水质量的检验等

具有重要意义。

MPN方法的原理基于一种统计学的原则，即当样品中存在微生物时，

根据样本连续稀释后的阳性结果的比率可以估算样品中微生物的数量。首先，将样品连续稀释，然后分别将稀释液接种到不同的培养基中，根据不

同培养基的阳性结果来估算微生物数量。

大肠菌群是人类消化系统中的一类细菌。它们主要分布在人体肠道的

大肠中，经常与人体共生共存。通常情况下，大肠细菌对人体有很多益处，如帮助消化食物、合成维生素等。然而，有些大肠细菌可能是致病菌，会

导致人体感染。因此，对大肠菌群的检测对于维护人体健康具有重要意义。

大肠杆菌（Escherichia coli）是大肠菌群中的一种细菌，是最常见

的肠道细菌之一、大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状且单株分离。

它们在肠道中发挥着重要的生理功能，如参与食物消化、产生维生素和促

进免疫系统的功能。此外，大肠杆菌在医学和微生物学中也经常被用作实

验模型。

大肠杆菌的检测原理一般采用培养方法。首先，将样品中的细菌进行

传代培养，为了区分大肠杆菌和其他微生物，通常会在培养基中加入选择

性抑制剂。在培养基中生长的细菌经过一段时间后会形成典型的大肠杆菌

形态，如菌落大小、形状和颜色等。此外，还可用生化试剂进行进一步检测，如糖发酵试验和气体产生试验等，以确定细菌是否为大肠杆菌。

大肠菌群检测知识及MPN法检测的注意要点

一、大肠菌群的定义：

1、指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌

氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。

2、该菌群主要来源于人畜粪便, 作为粪便污染指标评价食品的卫生状况, 推断食品中肠道致病菌污染的可能。

3、大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠

杆菌。

4、生化特征及血清学反应并非完全一致。

5、典型大肠杆菌的IMVIC与硫化氢试验结果：++---。

二、分布：

1、广泛分布于自然环境。

2、来源于人和温血动物的粪便。

三、卫生学意义：

1、大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。

2、大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪便污染的程度。

3、表示对人体健康是否具有潜在的危险性。

大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌

4、是人类和温血动物肠道菌群，在数量上占优势。

5、随粪便排出体外后，在外界环境影响下，其存活时间应与肠道致病菌

大致相似或稍长。

6、检验方法简便，易于检出与计数。

7、对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。

四、大肠菌群在不同培养基上的形态：

1、大场菌群在L ST培养基里阳性结果

2、大场菌群在B GL B培养基里阳性结果

3、大场菌群在结晶紫中性红胆盐琼脂VR B A上的菌落特征

4、大场菌群在去氧胆酸钠盐琼脂上的菌落特征

5、大场菌群在伊红美蓝琼脂上的菌落特征

6、大场菌群在显色培养基上的菌落特征

五、大肠菌群检验M P N法接种量剖析：

接种量问题，GB 4789.3 -2016中7.2 初发酵试验规定“选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管LS T肉汤，每管接种1m L（如超过1m L，则用双料LS T）”。这里所说

大肠杆菌的检测(最新知识点)

大肠杆菌的检测

食品微生物检验技术课程综

述

大肠杆菌的检测（MPN计数法）

院系：食品科学与药学学院

班级：食科11４

姓名: 张花

学号：１140３１431

组长：张军玲

成员：张花

赵晶郁

朱娟娟

大肠杆菌Peｔrifilｍ测试片计数法

摘要

食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致

病菌的可能性。Pｅtriｆilｍ大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRＢ平板培养基系统,并添加了TTＣ作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用.该方法目前已被多数权威机构认可,并在国内很多实验室开展运用。...感谢聆听...

关键词大肠杆菌Ｐetrｉfｉｌm测试法

1设备和材料

1.1恒温培养箱:36±1℃。

1.2冰箱２~5℃。

1．3恒温水浴箱：44。5±0。２℃。

1．４天平：感量0．１g.

１．5均质器

1。6振荡器。

１．7无菌吸管：lｍL(具0。01 mＬ刻度）、10ｍＬ(具0.1mＬ刻度）或微量移液器及吸头。

1.8无菌锥形瓶：容量500mL.

1.9 玻璃珠：直径约５mm.

1.1０pH计或pH比色管或精密pH试纸

1。１1试管架。

2。培养基和试剂

2．1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LＳＴ）肉汤。

２。２EＣ肉汤。

２．3蛋白胨水。

2．4缓冲葡萄糖蛋白胨水(MP-ＶP实验用）。

2.5磷酸盐缓冲液.

MPN法测定食品中大肠杆菌群数

知识点：MPN法测定大肠杆菌群数

情境：微生物检测技术

任务：MPN法测定大肠杆菌群数

课程：食品微生物技术

MPN 法测定大肠菌群原理

一、大肠菌群

什么叫大肠菌群

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48h内发酵乳糖并产酸产气。

二、MPN

MPN

❞食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样内大肠菌群最近似数（The most probable number，简称MPN）表示。

❞据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均应以每mL（g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。

三、MPN法测定原理

MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

大肠菌群测定步骤

1.液体样品稀释

以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。

2.梯度稀释

❞用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取（1:10）样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，作成1:100的样品匀液。

❞根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1 mL灭菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。

大肠菌群计数含MPN表

大肠菌群计数

是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。

一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。

例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。

活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；

记录有菌生长的试管。若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。

从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。然而MPN的好处有以下：

若菌无法长在固态培养基时，便可使用；

若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速

的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；

假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；

假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用

大肠菌群MPN表

正反应试管数MPN/ml （ g ）95% 信赖界线

下限上限000< 3

0013< 59

0103< 513

020---

1004< 520

1017121

1107123

11111336

大肠杆菌的检测及原理

1.检测原理：

大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

2.仪器设备与器具：

2.1 恒温培养箱：36±1℃。

2.2 1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。

2.3 接种针。

2.4 显微镜。

2.5 超净工作台。

2.6 玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。

2.7 天平：感量0.01g。

2.8 灭菌釜。

2.9 培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。

2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片

3.培养基及试剂：

3.1 乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。

3.2 伊红美兰琼脂平板：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。

3.3 乳糖发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。

3.4 革兰氏染色液。

3.4.1 结晶紫染色液：

结晶紫1g

95%乙醇20ml

1%草酸铵水溶液80ml

将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

3.4.2 革兰氏碘液：

碘1g

碘化钾2g

蒸馏水300ml

将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300 ml。

3.4.3 沙黄复染液：

沙黄0.25g

95%乙醇10ml

蒸馏水90ml

将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

3.5 生理盐水。

4.检验程序：

检样

稀释↓

乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr ↓

大肠杆菌mpn标准范围

大肠杆菌(MPN)是一种广泛存在于环境中的细菌，人们常用来作为水质检测的

指标菌。MPN检测是水质监测中的一种重要方法，其标准范围被广泛采用作为衡

量水质好坏的依据。

MPN检测的基本原理是根据菌落计数的方法，将大肠杆菌的数量定量，进而

对水质进行评估。目前，国际上普遍认可的MPN标准分为三个级别：100ml、

1000ml和10000ml。其中，标准100ml是指在每100毫升水样中，检测到大肠杆

菌的数量应少于1个，否则将会对人体健康造成潜在的危害。

对于不同类型的水源而言，其MPN标准范围也有所不同。例如，对于饮用水

而言，其标准范围应该在10 MPN/100 ml以内；对于游泳水而言，标准范围可适当放宽；而对于河流、湖泊等自然水源的标准范围则相对较高，一般为100 MPN/100 ml。

当水质超过MPN标准范围时，可能会对人造成潜在的健康影响。例如，如果

饮用水中MPN超过标准范围，可能会引起腹泻、恶心、呕吐、腹痛等症状，还会

增加感染传染病的风险。因此，对于水质的检测和评估非常重要。

值得注意的是，MPN检测并非完全可靠，可能会受到环境和其他因素的影响。因此，在实际应用中，还需要结合其他水质检测指标来进行综合评估。此外，

MPN检测也有一定的局限性，不适用于所有类型的细菌，甚至可能忽略掉某些真

菌和病毒。

总的来说，大肠杆菌MPN标准范围是衡量水质好坏的重要参数之一。随着水

资源的日益紧缺和环境污染的日益加重，对于水质检测和管理的需求也越来越迫切。未来，有必要进一步完善MPN标准范围，并结合更加精准、全面的水质检测指标，为人们提供更加清洁、安全的水资源。

大肠杆菌计数

VRBA-MUG平板计数法检验程序
检样25g(ml)+225ml稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA-MUG平板 36℃±1℃ 18~24h
紫外光下，计数发荧光的菌落
报告结果
检验
选取2～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度分别取1mL注入两个无菌平皿。另取1mL样品稀释液注入一无菌平皿中，作空白对照。将预热至45℃士0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂10 mL～15mL倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL～4mL VRB-MUG 覆盖平板表层。凝固后翻转平板，36℃±1℃ 培养18 h～24h。注：空白对照不加VRB-MUG覆盖。
大肠杆菌计数
严纪文
大肠杆菌的定义

广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气、 IMViC 生化试验 (靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐)为+ + - -或- + - -的革兰阴性杆菌。
卫生学意义
大肠杆菌的某些菌株对人有致病性。相对于大肠菌群和粪大肠菌群，大肠杆菌与粪便污染的相关性最好，应用也最悠久。自1892年被提议作为粪便污染的指示菌以来，已被应用了100多年。为什么后来又有了大肠菌群和粪大肠菌群的应用？主要的原因是因为大肠杆菌的检验过于复杂。大肠杆菌是用于评价食品近期受到粪便污染的指标。随着食品卫生标准的日益科学和细化，以及对大肠杆菌检验方法的不断改进，对特定食品的大肠杆菌的检验需求肯定会越来越多，因此在本次标准修订时增加了大肠杆菌计数方法。

大肠菌群（M.R.N.）的测定

大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。

大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。大肠菌群名称并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

第一节大肠菌群标准检验方法

一、检验方法

（一）检样稀释

1. 以无菌操作将检样25mL（或25g）放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000~10000r/min的速度处理1min，做成1:10的均匀稀释液。

大肠菌群检测(MPN法)

大肠菌群计数MPN法流程图
GB 4789.3-2016（第一法）
检样
稀释
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气大肠菌群阴性
产气大肠菌群阳性
报告
初发酵复发酵
大肠菌群计数MPN法示意图
25g
移1ml
培养基主要成分作用
归纳总结
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）
①胆盐可抑制革兰氏阳性菌。 ②煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。 ③乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。 ④发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。
有肠道致病菌（如大肠杆菌O157、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等），因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数量越多则肠道致病菌存在的可能性就越高，但两者之间并不总是呈平行关系。通常情况下，粪大肠菌群与大肠菌群，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，粪大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，粪大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。

MPN法测定大肠杆菌

试验流程
wenku.baidu.com
1、样品的稀释
（1）固体和半固体样品
称取25g 样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min-10000r/min 均质1 min-2 min ，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。
MPN法测定大肠杆菌
一、材料
1、牛乳样品
2、阳性对照菌
3、仪器设备
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
恒温培养箱、恒温水浴箱、均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。
3、培养基和试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、煌绿乳糖胆盐（BGLB ）肉汤、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、 1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸（HCI) 。
（4）用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
（5）根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。

mpn 法

MPN法是Most Probable Number的缩写，指最大或然数计数，又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。

MPN法的特点是通过待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。该方法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量。

MPN法的实施过程包括确定稀释系列、接种培养基、观察结果和记录结果等步骤。该方法具备一定的定量性，并且可以在相对较短的时间内得出结果，因此在微生物分析领域具有广泛应用，成为许多微生物检测实验室和食品、环境等行业常用的分析方法之一。

以上信息仅供参考，建议查阅专业书籍获取更准确的信息。

大肠杆菌的检测(MPN计数法)

食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MPN计数法）

院系：食品科学与药学学院

班级：食科114

姓名: 张花

学号: 114031431

组长: 张军玲

成员：张花

赵晶郁

朱娟娟

大肠杆菌Petrifilm测试片计数法

摘要

食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段,而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一.根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌.其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。

关键词大肠杆菌Petrifilm测试法

1设备和材料

1。1恒温培养箱:36±1℃。

1.2冰箱2～5℃。

1.3恒温水浴箱 :44。5±0。2℃。

1.4天平:感量0。1g.

1.5均质器

1.6振荡器。

1.7无菌吸管：lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0。1mL刻度）或微量移液器及吸头。

1.8无菌锥形瓶：容量500mL。

1。9 玻璃珠:直径约5mm。

1.10pH计或pH比色管或精密pH试纸

1。11试管架.

2. 培养基和试剂

2.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ LST ）肉汤。

2.2EC肉汤.

2。3蛋白胨水.

2。4缓冲葡萄糖蛋白胨水（MP—VP实验用）。

2。5磷酸盐缓冲液。

2。6无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。

大肠杆菌计数

大肠杆菌测试片的计数与结果报告
选取菌落数在15~150之间的测试片作为计数标准。选择菌落数在15~150之间的稀释度，平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于 15，则计数稀释度最低的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，则以(<)1乘以最低稀释倍数报告之。
大肠杆菌计数
严纪文
大肠杆菌的定义

广泛存在于人和温血动物的肠道中，能够在44.5℃发酵乳糖产酸产气、 IMViC 生化试验 (靛基质、甲基红、VP试验、柠檬酸盐)为+ + - -或- + - -的革兰阴性杆菌。
卫生学意义
大肠杆菌的某些菌株对人有致病性。相对于大肠菌群和粪大肠菌群，大肠杆菌与粪便污染的相关性最好，应用也最悠久。自1892年被提议作为粪便污染的指示菌以来，已被应用了100多年。为什么后来又有了大肠菌群和粪大肠菌群的应用？主要的原因是因为大肠杆菌的检验过于复杂。大肠杆菌是用于评价食品近期受到粪便污染的指标。随着食品卫生标准的日益科学和细化，以及对大肠杆菌检验方法的不断改进，对特定食品的大肠杆菌的检验需求肯定会越来越多，因此在本次标准修订时增加了大肠杆菌计数方法。
基本原理
4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷，英文缩写 MUG。是一种不产生荧光的底物。由于96%的大肠杆菌都具有葡萄糖醛苷酸酶，能分解β-D葡萄糖醛苷，而使4-甲基伞形酮游离出来，在 366nm紫外光下产生蓝色荧光。观察到蓝色荧光即可认为是大肠杆菌阳性。MUG对大肠杆菌的生长繁殖既没有抑制作用也没有促进作用，对菌落形态也没有影响。