生物化学--实验二蛋白质的盐析与透析

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《生物化学》实验讲义

《生物化学》实验讲义

实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应

一、目的意义

1、学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。

2、学习和了解一些鉴定蛋白质的特殊颜色反应及其原理。

二、实验原理

1、双缩脲反应

当尿素加热到180℃左右时,2分子尿素发生缩合放出1分子氨而形成双缩脲.双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物,这一呈色反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中含有多个与双缩脲相似的键,因此也具有双缩脲的颜色反应.借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。应当指出,双缩脲反应并非蛋白质的特异颜色反应,因为凡含有肽键的物质并不都是蛋白质.

2、茚三酮反应

蛋白质与茚三酮共热,产生蓝紫色化合物,此反应为一切蛋白质及α-氨基酸(除脯氨酸和

羟脯氨酸)所共有。含有氨基酸的其他化合物也呈此反应.

该反应十分灵敏,1:1500000浓度的氨基酸水溶液就能呈现反应。因此,此反应广泛用于氨基酸的定量测定.

3、黄色反应

含有苯环侧链的(特别是含酪氨酸)蛋白质溶液与硝酸共热时,呈黄色(硝基化合物),再加碱则变为橙黄色,此反应也称为黄蛋白反应。

OH+HNO

3HO NO2+H

2

O

HO NO2+O N

OH

三、仪器与试剂

1、试剂

(1) 蛋白质溶液:取10mL鸡蛋清,用蒸馏水稀释至100mL,搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。(2) 0。3%色氨酸溶液、0。3%酪氨酸溶液、0。3%脯氨酸溶液、0。5%甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。

(3) 0.1%茚三酮-乙醇溶液:称取0。1g茚三酮,溶于100mL 95%乙醇。

(4) 10%NaOH溶液、1%硫酸铜溶液、尿素、浓硝酸.

《食品化学》课程标准.

《食品化学》课程标准.

《食品化学》课程标准

一、课程概述

食品化学是一门主要包括微生物、化学、生物学和工程学的多学科的科学,是食品科学主要课程,是食品专业的的专业基础课,它的主要任务包括:研究食品材料(原料和产品)中主要成分的组成、结构和性质;食品在贮藏、加工和包装过程中可能发生的化学和物理变化;食品成分的结构、性质和变化对食品质量和加工性能的影响等。

该课程的先修课程有无机及分析化学、有机化学、生物化学等,后续课程有食品工艺学、食品保藏原理、毕业论文等课程。

二、课程目标:

1、知道该学科的性质、地位、独立价值、研究范围、基本框架、研究方法、学科进展和未来方向等。

2、通过对本课程的学习,让学生能够基本掌握食品中主要成分的组成、结构和性质;食品在贮藏、加工过程中可能发生的化学和物理变化;食品成分的结构、性质和变化对食品质量和加工性能的影响,并通过实验来加强对本课程的理解。

3、了解和掌握食品化学的基本知识和研究方法,从而在食品加工和保藏领域较好地从事教学、研究、生产和管理方面的工作。

三、课程的内容和要求

这门学科的知识与技能要求分为知道、理解、掌握、学会四个层次。这四个层次的一般涵义表述如下:知道———是指对这门学科认知。

理解———是指能懂得对这门学科涉及到的概念、原理与技术的说明和解释。

掌握———是指运用已理解的食品化学原理说明、解释并运用到实践中。

学会———是指能模仿或在教师指导下独立地完成食品化学的具体操作。教学内容和要求表中的“√”号表示教学知识和技能的教学要求层次。

四、课程实施

(一)课时安排与教学建议

本课程属于食品工程(本科)专业必修课:理论课学时数35,实验课学时数9,学分2个。具体课时安排如下:

食品生物化学实验教案

食品生物化学实验教案

精心整理

精心整理

食品生物化学实验指导

高建华曹劲松宁正祥编

华南理工大学

二OO 六年三月

实定 1 一胶 1 二备 1 2 实析 5 一析 5 二析 6 实验四氨基酸纸电泳分离鉴定-------------------------------------------------------------------

7 实验五激活剂、抑制剂、温度及PH 对酶活性的影响------------------------------------

9

一、激活剂、抑制剂对唾液淀粉酶活力的影响

10

----------------------------------------------

二、温度和pH值对а-液化淀粉酶活力的影响-------------------------------------------- 10

12 实验六果蔬中过氧化物酶活力测定

-------------------------------------------------------------

实验七酶催化转氨基反应的纸层析鉴定

14 -----------------------------------------------------

实质17 Array实性质19

实取23 实取25实脱盐28 实糖酶30

35

38 实验七43 实验八蔗糖酶的酶活特性研究

45

------------------------------------------------------------------

精心整理

辅助性实验

实验一蔗糖酶活力测定

生物化学实验--蛋白质性质试验

生物化学实验--蛋白质性质试验

取一支试管,加入1ml蛋白液及浓硝 支管中滴加1%硫酸铜溶液,至有沉
酸5滴。加热,冷却后注意颜色变化。 淀产生。
然后再加入10%NaOH溶液1ml,颜色有 2、取一支试管加蛋白液2ml,再加
什么变化?
入10%三氯乙酸1ml,充分混匀,观
(四) 茚三酮反应 取蛋白液1ml于试管中,加10滴茚三 酮溶液,加热至沸,即有蓝紫色出现。
实验九 胰蛋白酶的活力测定
实验十 水果中维生素C的定量测定
实验十一 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳牛血清
生物化学实验技能培训
通过wk.baidu.com物化学实验应该做到:
⑴ 学习设计一个实验的基本思路,掌握各个实验的 基本原理,学会严密地组织自己的实验,合理地 安排实验步骤和时间。
⑵ 训练实验的动手能力,学会熟练地使用各种生物 化学实验仪器。
四、实验步骤
(一)蛋白质的盐析作用
原理:向蛋白质中加入大量的中性盐(硫酸铵、硫酸钠 或氯化钠等),使蛋白质胶体颗粒脱水,破坏其水化 层,同时它所带有的电荷亦被中性盐上所带的相反电 荷的离子所中和。于是稳定因素被破坏,蛋白质聚集 沉淀。盐析作用一般不使蛋白质变性。
操作:1、取试管1支,加蛋白液2ml,然后加固体硫酸铵 (加的过程要缓慢,加的量要少随时摇匀),直至其饱 和(大约为50%)。摇匀静置数分钟,则有球蛋白析出。
蛋白质胶体溶液的稳定因素:水化膜、带电荷。当破 坏这两个因素时,蛋白质中从溶液中析出而产生沉淀。

食品生物化学教案

食品生物化学教案

食品生物化学教案

一、教学目标

1、让学生了解食品生物化学的基本概念和研究范畴。

2、使学生掌握食品中主要营养成分的化学结构、性质和代谢途径。

3、培养学生运用食品生物化学知识分析和解决食品相关问题的能力。

二、教学重难点

1、重点

(1)碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素和矿物质的结构与性质。

(2)食品加工和储存过程中的化学变化及对食品品质的影响。

2、难点

(1)生物大分子的代谢途径和调控机制。

(2)复杂的化学反应原理在食品中的应用。

三、教学方法

1、讲授法:系统地讲解食品生物化学的基本概念和理论知识。

2、案例分析法:通过实际的食品案例,引导学生分析其中的生物

化学原理。

3、实验教学法:安排相关实验,让学生亲身体验食品生物化学的

实验操作和结果分析。

四、教学过程

1、课程导入(约 10 分钟)

通过展示一些常见的食品,如面包、牛奶、水果等,提问学生这些

食品中包含哪些营养成分,引发学生的兴趣和思考,从而引入食品生

物化学的主题。

2、知识讲解(约 50 分钟)

(1)碳水化合物

介绍碳水化合物的分类,包括单糖、双糖和多糖。详细讲解葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉和纤维素的化学结构、性质和在食品中的作用。例如,淀粉在加热过程中的糊化和老化现象,以及纤维素对人体消化的

影响。

(2)蛋白质

讲解蛋白质的基本组成单位——氨基酸的结构和性质。阐述蛋白质

的一级、二级、三级和四级结构,以及蛋白质的变性和复性。举例说

明蛋白质在食品加工中的功能特性,如乳化、起泡和凝胶形成。

(3)脂肪

介绍脂肪的分类,包括饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸和反式脂肪酸。讲解脂肪的化学结构和性质,如熔点、氧化稳定性等。探讨脂肪在食品中的作用,以及油脂在加工和储存过程中的氧化酸败现象。

食品化学课程标准

食品化学课程标准

《食品化学》课程标准

一、课程概述

食品化学是一门主要包括微生物、化学、生物学和工程学的多学科的科学,是食品科学主要课程,是食品专业的的专业基础课,它的主要任务包括:研究食品材料(原料和产品)中主要成分的组成、结构和性质;食品在贮藏、加工和包装过程中可能发生的化学和物理变化;食品成分的结构、性质和变化对食品质量和加工性能的影响等。

该课程的先修课程有无机及分析化学、有机化学、生物化学等,后续课程有食品工艺学、食品保藏原理、毕业论文等课程。

二、课程目标:

1、知道该学科的性质、地位、独立价值、研究范围、基本框架、研究方法、学科进展和未来方向等。

2、通过对本课程的学习,让学生能够基本掌握食品中主要成分的组成、结构和性质;食品在贮藏、加工过程中可能发生的化学和物理变化;食品成分的结构、性质和变化对食品质量和加工性能的影响,并通过实验来加强对本课程的理解。

3、了解和掌握食品化学的基本知识和研究方法,从而在食品加工和保藏领域较好地从事教学、研究、生产和管理方面的工作。

三、课程的内容和要求

这门学科的知识与技能要求分为知道、理解、掌握、学会四个层次。这四个层次的一般涵义表述如下:知道———是指对这门学科认知。

理解———是指能懂得对这门学科涉及到的概念、原理与技术的说明和解释。

掌握———是指运用已理解的食品化学原理说明、解释并运用到实践中。

学会———是指能模仿或在教师指导下独立地完成食品化学的具体操作。教学内容和要求表中的“√”号表示教学知识和技能的教学要求层次。

四、课程实施

(一)课时安排与教学建议

本课程属于食品工程(本科)专业必修课:理论课学时数35,实验课学时数9,学分2个。具体课时安排如下:

生物化学与分子生物学基本试验试验一蛋白质的盐析与透析试验

生物化学与分子生物学基本试验试验一蛋白质的盐析与透析试验

生物化学与分子生物学

基本实验

实验一蛋白质的盐析与透析

实验目的

了解蛋白质的盐析与透析的原理和意义

实验原理

血清中的蛋白质,用盐析的方法,可以分离出清蛋白、α、β球蛋白和γ-球蛋白三种。详情见盐析技术。另选择适宜孔径的半透膜,使蛋白质分子被截留,小分子的中性盐透出而达分离的目的。但透析时正负离子透过半透膜的速度不同,如硫酸铵中的NH4+的透出较快,膜内SO42-剩余而生成H2SO4,其酸度足以使蛋白质变性,因此,除盐时开始应对0.14 mol·L-1的NH4OH透析。本实验分别用双缩脲试剂和Nessler试剂检验蛋白质和NH4+的存在。

仪器材料和试剂药品

仪器材料:(1)离心管、试管及试管架。

(2)2m1刻度吸管、玻璃棒、小烧杯。

(3)透析袋。

(4)离心机。

试剂药品:(1)饱和硫酸铵溶液。

(2)硫酸铵粉末。

(3)双缩脲试剂称取CuSO4·5H2O 2.5g,加蒸溜水少许,微热溶解后稀释至100ml。另取酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·H2O)10g和KI 5g,溶于500ml蒸馏水中,再加入20%氢氧化钠300ml,混匀后,慢慢加入硫酸铜溶液中,加蒸馏水至1000ml。此液可长期储存。

(4)Nessler试剂称取150g碘化钾置于三角烧瓶中,加蒸馏水100ml使之溶解,再加入110g碘,待完全溶解后加140g~150g汞,用力振摇10分钟左右,此时产生高热,须将三角烧瓶放入水中继续摇动,直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾为止。将上清液倾入2000ml容量瓶中,并用蒸馏水洗涤瓶内的沉淀数次,将洗涤液一并倒入容量瓶内,用蒸馏水稀释至刻度,此为贮存液,储于棕色瓶中备用。

生物化学实验“蛋白质沉淀反应与盐析作用”解析

生物化学实验“蛋白质沉淀反应与盐析作用”解析
p e i iai n r a t n a d s l n -o t r cp t t e ci n a t g u ” o o i
ZHANG n u Yu —r , ZHANG i i , YU n L Xi ai Ca —q n Yi g , U u—r n
( .S ho o h r aya dBon ier g C og igU iesyo T c n l y C o g i 0 5 , 1 c ol f am c n iegn e n , hn qn nvri f eh oo , h nqn 4 0 0 P i t g g0 C ia 2 i t d l S ho o i h n ,J ce g 4 0 0, hn ) hn ; .Fr de c ol f n e g i h n 8 0 C ia s Mi Jc n 0
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ห้องสมุดไป่ตู้验



第1 4卷
第 1期
2 1 年 2月 01
F b 2 1 e. 0 1
L ABORAT ORY S E CI NC E
Vo.1 No 1 1 4 .
生物化学实验 “ 白质沉淀反应 蛋 与盐析作 用" 解析
张 云 茹 ,张彩 琴 余 ,
结 果表 明 , 金属 离 子 造成 的蛋 白质 变 性 是不 可逆 重 的, 虽然 变性 时往往 产 生沉淀 , 如果 在小 于等 电点 但

生物化学课后答案2蛋白质

生物化学课后答案2蛋白质

2 蛋白质化学

1.用于测定蛋白质多肽链N 端、C 端的常用方法有哪些?基本原理是什么?

解答:(1) N-末端测定法:常采用2,4―二硝基氟苯法、Edman 降解法、丹磺酰氯法。 ①2,4―二硝基氟苯(DNFB 或FDNB)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4―二硝基氟苯(2,4―DNFB )反应(Sanger 反应),生成DNP ―多肽或DNP ―蛋白质。由于DNFB 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNP ―多肽经酸水解后,只有N ―末端氨基酸为黄色DNP ―氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。

② 丹磺酰氯(DNS)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯(DNS ―Cl )反应生成DNS ―多肽或DNS ―蛋白质。由于DNS 与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNS ―多肽经酸水解后,只有N ―末端氨基酸为强烈的荧光物质DNS ―氨基酸,其余的都是游离氨基酸。

③ 苯异硫氰酸脂(PITC 或Edman 降解)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯(PITC )反应(Edman 反应),生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。在酸性有机溶剂中加热时,N ―末端的PTC ―氨基酸发生环化,生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去N ―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。

④ 氨肽酶法:氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶,能从多肽链的N 端逐个地向里切。根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量,按反应时间和残基释放量作动力学曲线,就能知道该蛋白质的N 端残基序列。

《生物化学》思考题第二章 蛋白质化学

《生物化学》思考题第二章  蛋白质化学

第二章蛋白质化学

学习要求

一、掌握蛋白质分子平均含氮16%的意义,20种氨基酸名称(及三字符号),R结构特点及分类法;蛋白质一、二、三、四级结构基本特点;蛋白质生物学功能。

二、熟悉蛋白质重要的理化性质;其他为应了解的内容。

习题

一、名词解释

1.等电点(pI) 2.肽键 3.蛋白质的变性作用 4.非编码氨基酸 5.α螺旋 6.结合蛋白 7.盐析作用 8.亚基 9.分子病 10.透析

二、思考题

1.不同蛋白质的含量颇为相近,平均含量为%。

2.20种基本氨基酸可以分为哪几类?其分类依据是什么?其中,酸性氨基酸和碱性氨

基酸各包含哪几种氨基酸?

3.蛋白质的一、二、三、四级结构的各自定义及其特点。

4.蛋白质的二级结构有哪些?维持二级结构的化学键是?

5.维持蛋白质一级结构的化学键是键,而维持蛋白质高级结构的化学键有哪些?

6.如果组成蛋白质的2条多肽链之间存在共价键(如二硫键),就没有四级结构。

7.试说明蛋白质结构与功能的关系。

8.维持蛋白质亲水胶体稳定的两个因素是?

9.引起蛋白质变性的理化因素有哪些?蛋白质变性后,其理化性质

....和生物学活性

.....会发生怎样的改变?

10.沉淀蛋白质的方法有哪些?其中法在常温下沉淀出的蛋白质不变性。

11.试举二例说明蛋白质变性在医学、食品工业等实践中的应用。

12.蛋白质和核酸对紫外光均有吸收。蛋白质的最大吸收波长是 nm;核酸的最大

吸收波长是 nm。

13.蛋白质的生理功能有哪些?试从含量及生理功能说明蛋白质在生命过程中的重要

性。

14.氨基酸的等电点和中性点(pH 7.0)有何区别?

蛋白质透析原理

蛋白质透析原理

蛋白质透析原理

蛋白质透析是一种常用的生物化学技术,用于从混合物中分离和纯化蛋白质。

它基于半透膜的特性,通过溶液中溶质的扩散来实现蛋白质的分离。在透析过程中,蛋白质会通过半透膜,而其他小分子溶质则会被留在溶液中。本文将介绍蛋白质透析的原理及其在生物化学领域中的应用。

蛋白质透析的原理主要依赖于半透膜的选择性渗透性。半透膜是一种具有特定

孔径的薄膜,这些孔径可以允许溶质的扩散,但会阻止大分子如蛋白质通过。在透析过程中,将混合物置于半透膜袋中,然后将其浸泡在适当的缓冲液中。由于蛋白质分子较大,无法通过半透膜,而小分子溶质则可以自由扩散进出半透膜袋。通过这种方式,可以实现蛋白质与其他小分子溶质的有效分离。

蛋白质透析的应用非常广泛,特别是在生物化学和生物医学研究领域。透析可

以用于从细胞提取物中纯化蛋白质,去除盐类和其他小分子杂质。此外,透析还可用于改变蛋白质的溶液环境,例如调节pH值或离子强度,以满足特定实验或应用

的要求。透析还可以用于蛋白质的储存和输送,通过透析可以将蛋白质溶液从一种缓冲液转移到另一种,以适应不同的实验条件。

在进行蛋白质透析时,需要注意一些关键因素以确保透析效果。首先,选择合

适的半透膜对于蛋白质透析至关重要。半透膜的孔径和材质会影响溶质的扩散速率和选择性,因此需要根据需要选择合适的半透膜。其次,透析缓冲液的选择也非常重要,适当的缓冲液可以保持蛋白质的稳定性,并提供适当的离子环境。此外,透析时间和温度也需要仔细控制,以确保蛋白质得到充分的纯化和保护。

总之,蛋白质透析是一种重要的生物化学技术,通过半透膜的特性实现蛋白质

生物化学实验

生物化学实验
1. 用铅笔将层析色谱轮廓和 中心点描出来; 2. 测量原点至色谱中心和至 溶剂前沿的距离,计算各种已 知氨基酸和未知氨基酸的Rf值。 3. 分析混合样品中未知氨基 酸的组分。
探究温度对淀粉酶活性的影响 放置于0度、室温、沸 水中的试管,分别呈 淡紫色、无色、深紫 色。
探究ph对淀粉酶活性的影响
pH 5.0、 5.8 、6.8 、8.0
1. 盐析:取一支试管加入3ml蛋白质氯化钠溶液和3m1饱和硫酸铵溶液,混匀,静置 约10 min,球蛋白则沉淀析出,倒出少量混浊沉淀,加少量水。观察现象,加水前后 如图1,2所示
图1
图2
2. 重金属离子沉淀蛋白质:取1支试管,加入蛋白质溶液2ml,再加3%硝酸银溶液12滴,振荡管,有沉淀产生。放置片刻,倾去上清液,沉淀中加入少量的水,观察现 象,加水前后如图3,4所示
图3
图4
3.有机酸沉淀蛋白质:取1支试管,加入蛋白质2ml, 再加1ml5%三氯乙酸溶液,振荡 试观察沉淀的生成。放置片刻,倾出上清液,淀中加入少量水,观察现象,加水前 后如图4,5所示
图4
图5
结果与分析:重金属和有机酸可以使蛋白质变性且不可逆,而氯化钠可以使蛋白质变性但是是可逆的。
氨基酸的分离鉴定纸层析法
卵磷脂的提取与纯化: 黄色油状物加入3~5 mL氯仿搅
拌使其完全溶解,然后搅拌下慢 慢加入10 mL丙酮,搅动使卵磷脂 尽量析出,抽滤,得固体物质卵 磷脂

实验二 蛋白质的纯化-透析实验

实验二 蛋白质的纯化-透析实验

实验二蛋白质的纯化-透析实验

【实验目的】

1. 学习透析的基本原理和操作;

2. 掌握盐析沉淀蛋白质后,蛋白质的脱盐处理技术;

3. 了解透析袋的使用方法。

【实验原理】

透析是利用小分子能通过而大分子不能通过半透膜的原理而把它们分开的一种重要手段,是食品分离提纯过程中经常使用的基本操作技术之一。

蛋白质是大分子物质,不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白质的过程中,常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。

【实验仪器与试剂】

烧杯;玻璃棒;离心机;离心管;冰箱;电炉。1%氯化钡溶液;硫酸铵粉末;1mol/L EDTA;2%NaHCO3。透析管(宽约2.5cm,长12-15cm)或玻璃纸; 皮筋;鸡蛋清溶液:将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1:20混匀,然后用六层纱布过滤。

【实验步骤】

1. 透析管(前)处理:先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中,煮沸10分钟,再在2%NaHCO3溶液中煮沸10分钟,然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。

2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中,加4g硫酸铵粉末,搅拌使之溶解。然后在4℃下静置20分钟,出现絮状沉淀。

3. 离心:将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。

4. 装透析管:离心后倒掉上清夜,加5ml蒸馏水溶解沉淀物,然后小心倒入透析管中,扎紧上口。

5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中,进行透析,并不断搅拌。

6. 每隔适当时间(5-10分钟),用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中,观察是否有沉淀现象。【结果与讨论】

记录并解释实验现象。

蛋白质的盐析实验现象及解释

蛋白质的盐析实验现象及解释

蛋白质的盐析实验现象及解释

盐析是一种常用的蛋白质分离和纯化方法,它基于蛋白质在高盐浓度下发生析

出现象。在盐析实验中,通过加入逐渐增加浓度的盐溶液至蛋白质溶液中,蛋白质会在一定盐浓度下发生溶解度的改变,形成可见的沉淀。

蛋白质盐析的实验现象可以用以下步骤来描述:

1. 制备蛋白质溶液:通过提取或纯化方法获得的蛋白质样品溶解在适当的缓冲

液中。

2. 逐渐加入盐溶液:从低浓度开始,逐渐向蛋白质溶液中加入盐溶液(例如氯

化铵或硫酸铵),搅拌使其充分混合。

3. 盐浓度增加:随着加入盐溶液的浓度逐渐增加,蛋白质的溶解度会受到影响。

4. 盐析沉淀的形成:在某个临界盐浓度下,蛋白质开始发生溶解度的变化。这时,蛋白质簇集在一起,形成可见的沉淀物。

通过对蛋白质盐析实验现象的解释,我们可以了解到以下原理:

1. 离子互作用:蛋白质分子带有正负电荷,当盐添加到溶液中时,离子会与蛋

白质表面相互作用。高盐浓度时,盐离子与蛋白质表面的电荷相互吸引,形成离子云层,从而减少蛋白质分子间的电荷排斥力,使蛋白质变得不溶于溶液。

2. 水合作用:高盐浓度下,蛋白质分子周围的溶液中水分子与盐离子形成氢键。这些被水合的盐离子占据了水分子与蛋白质分子之间形成的氢键位置,使蛋白质分子失去了与水分子的相互作用能力,导致蛋白质析出。

总之,蛋白质的盐析实验现象可以归结为离子互作用和水合作用的影响。充分

理解蛋白质盐析实验的现象和解释,对于蛋白质分离纯化和研究具有重要意义。

生物化学实验技术(2)常用分离技术

生物化学实验技术(2)常用分离技术

4、聚乙二醇沉淀作用 聚乙二醇沉淀作用 聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚 合物可使蛋白质发生沉淀作用。 合物可使蛋白质发生沉淀作用。 5、选择性沉淀法 根据各种蛋白质在不同物理化学因子作用下稳定 性不同的特点,用适当的选择性沉淀法, 性不同的特点,用适当的选择性沉淀法,即可使杂蛋 白变性沉淀,而欲分离的有效成分则存在于溶液中, 白变性沉淀,而欲分离的有效成分则存在于溶液中, 从而达到纯化有效成分的目的。 从而达到纯化有效成分的目的。
第一节 盐析法
所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出, 所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出, 这一过程叫盐析。 这一过程叫盐析。 在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离, 在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离, 如蛋白质、多肽、多糖、核酸等, 如蛋白质、多肽、多糖、核酸等,其中以蛋白质沉淀最为常 特别是在粗提阶段。 见,特别是在粗提阶段。 盐析法分为两类,第一类叫Ks分段盐析法,在一定PH Ks分段盐析法 PH和 盐析法分为两类,第一类叫Ks分段盐析法,在一定PH和 温度下通过改变离子强度实现,用于早期的粗提液; 温度下通过改变离子强度实现,用于早期的粗提液;第二种 分段盐析法,在一定离子强度下通过改变PH PH和温度来实 叫b分段盐析法,在一定离子强度下通过改变PH和温度来实 用于后期进一步分离纯化和结晶. 现,用于后期进一步分离纯化和结晶.

生物化学实验蛋白质沉淀反应与盐析作用解析

生物化学实验蛋白质沉淀反应与盐析作用解析

生物化学实验_蛋白质沉淀反应与盐析

作用_解析

生物化学实验:蛋白质沉淀反应与盐析作用

一、引言

蛋白质是生物体内的重要分子,其性质和功能对于生物的生命活动具有重要意义。在生物化学实验中,蛋白质的沉淀反应和盐析作用是常见的实验技术,用于分离、纯化和鉴定蛋白质。本实验旨在让学生了解和掌握蛋白质沉淀反应和盐析作用的原理和方法。

二、实验原理

1.蛋白质沉淀反应

蛋白质沉淀反应是指通过改变某些条件(如pH、离子强度、温度等),使蛋白质分子之间或蛋白质分子与其它物质之间发生相互作用,从而导致蛋白质聚集的现象。常见的蛋白质沉淀反应包括盐析、有机溶剂沉淀、等电点沉淀、重金属盐沉淀等。

2.盐析作用

盐析作用是指在高浓度盐溶液中,蛋白质的溶解度降低,从而析出成沉淀的现象。这种现象是由于高浓度盐溶液中的离子强度较高,导致蛋白质分子表面的电荷减少,进而减弱了蛋白质分子之间的相互作用,使蛋白质聚集成为沉淀。

三、实验材料与设备

实验材料:牛血清蛋白(BSA)、硫酸铵、乙醇、苯酚、考马斯亮蓝G-250;

实验设备:离心机、分光光度计、电子天平、容量瓶、三角瓶、滴管。

四、实验步骤

1.蛋白质沉淀反应

(1)在5个100mL的三角瓶中分别加入20mL 0.1M NaCl溶液,再分别加入

5mg BSA,摇匀。

(2)向每个三角瓶中分别加入0.1M醋酸溶液或0.1M NaOH溶液,使溶液的pH分别为5、6、7、8、9。

(3)观察各瓶中溶液的颜色变化,记录沉淀出现的时间和数量。

(4)将各瓶中的溶液进行离心分离,收集沉淀。用考马斯亮蓝G-250染色法测定各沉淀中蛋白质的质量。

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的 4HN�例为铵酸硫以。同不度速的膜透半过透子离负正�时盐去法析透用液溶质白蛋

】项事意注【
。 �之去除须必时验实量 定做�扰干的定一有应反脲缩双对在存的盐铵�之释解。在存质白蛋有示表�现出色红紫有 。匀混�滴 5�3 液溶 4OSuC%1.0 加各别分再。匀混�滴 01HOaN%02 加各�滴 01 液内袋加管 号 3�滴 01 液外袋加管号 2�滴 01 液清上铵酸硫和饱加管号 1�支 3 管试 mm001×01⑵ 。在存盐铵有示表�成生淀沉色褐黄或色黄有。匀摇�滴 2 剂 试 relsseN 加各管两�滴 01 液外袋加管一另�滴 01 水加管一�支 2 管试 mm001×01⑴ 查检.4 。中水入进膜透半过通类盐使可时此�钟分 51 析透 � ��么什为�上面水一同于处面液的外内袋使�中杯烧小的水 lm05 有盛于置�袋析透入装 。 �解溶否是淀沉察观�起搅棒璃玻小用�lm3 水加�中淀沉白蛋白的到得备制面上在.3 。用备去倒水将后然�水漏否是查检水加�端上其扎线用� �分部的齐整不 端上纸璃玻去减以可�状袋成叠折管璃玻 mm04×51 绕围�张一纸璃玻 mm021×021 取.2 。 �滤过纸滤干用可也淀沉心离�注�白 蛋白是淀沉�液清上出吸。钟分 01�分/转 0003�心离�后钟分 5 置放�出析中液溶铵酸硫 和饱自白蛋白时此。止为解溶再不铵酸硫量少有至�拌搅棒璃玻小用�末粉铵酸硫量少入加 次分�中管心离一另入移液清上�钟分 01�分/转 0003�心离�后钟分 5 置放。淀沉白蛋球 时此�匀搅棒璃玻小用�lm1 液溶铵酸硫和饱�lm1 浆血或清血入加中管心离净洁于.1
。法方用使作操的机心离通普握掌.3 。义意用实及法方的质白蛋化纯离分悉熟.2 。理原的析透与析盐质白蛋解了.1
ຫໍສະໝຸດ Baidu
】求要的目【
析透与析盐的质白蛋
二验实
�变改不积体的液溶质白蛋持维否可时析透.2 �性变质白蛋止防并�类盐去除量尽到达可才么什意注应时析透.1
】题考思【
。析 透 HO4HN 的 M1.0 用应始开 �时盐去析透做质白蛋化纯法析盐用在此因.度酸的性变质白蛋使 到达以足�性酸呈液溶质白蛋内膜使而�4OS2H 成生而余剩 4OS 内膜中程过析透在.快较出透
】作操验实【
。剂试 relsseN 液溶 4OSuC%1.0.5 液溶 HOaN%02.4 末粉铵酸硫.3 液溶铵酸硫和饱.2 浆血或清血物动.1
剂试、二
袋析透或纸璃玻.5 杯烧小 lm051.4 管量吸度刻 lm1.3 机心离.2 管试 mm001×51 或管心离.1
材器、一
】备准验实【
。性活物生及构结有故其复恢可 仍后盐脱析透过经�淀沉质白蛋的得所析盐由。法方的质白蛋化纯来用常是�析透做叫术技 种这 。质物子分小他其及盐性中的合混质白蛋和去除可法方种这 。开分质物子分小和质白蛋 使可此因�过透能不粒颗质白蛋而�过透够能质物子分小于由�膜透半的宜合径孔用选。膜 透半过透能不以所�内�mn001�1 径直�围范粒颗体胶在粒颗其�大很子分的质白蛋 。法方用常的中 程过化纯离分质白蛋是法此 。淀沉能才中液溶铵酸硫和饱在需则白蛋白 �出析可即中液溶铵 酸硫和饱半在白蛋球。淀沉段分质白蛋种各使可�度浓的盐中液溶质白蛋合混节调。样一不 也度浓盐的要需所析盐故�同不度程水亲、小大粒颗子分质白蛋种各。淀沉性逆可是淀沉的 成生析盐由此因 �性活物生及构结有原子分其复恢并解溶再能 �后盐去除或低减以释稀水用 或析透过经�淀沉质白蛋的得所析盐由。析盐为称�淀沉而水脱粒胶质白蛋�时大够足度浓 的类盐当。 �荷电去失�象现和中荷电生发则�]等 4OSgM 或 lCaN、4OS2aN、4OS2)4HN(如[类盐 性中的属金土碱或属金碱种某入加中液溶质白蛋向 。性定稳的体胶持维 �荷电负带质白蛋般 一中液溶的 0.7 值 HP 在�荷电性同和膜化水借�体胶水亲是质白蛋】 理原验实【
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