蒽酮比色法测总糖

[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.

1. 2 试剂

0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.

蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中，加入蒸馏水25 mL, ，缓慢加入98% 质量分数）浓硫酸75 mL, ，边加边搅（于冰水浴中完成），直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用（临用新配）。

浓盐酸、浓硫酸、NaOH ，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。

1. 3 方法

1. 3. 1 显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ，并加入蒸馏水至1m L, ，分别加入不同量的显色剂显色测定，以0. 1 mL, 蒸馏水为空

白对照。

1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ，在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。

1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL 显色剂，进行显色测定。

1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验，考查 4 个影响因素（料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问）对实验的影响，因素水平见表 1.

1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中，加入30 mL, 蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中，加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ，冷却后，滴加一滴酚酞，用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。

1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn ，冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。

2 结果与分析

2. 1 吸收曲线

用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625 nm 处有最大吸收，故本实验采用625 nm 为测定波长。

2. 2 显色剂用量

由图 1 可以看出，当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9 m l。

2. 3 显色时问

由图 2 可知，沸水浴时问在9 min 内，随着时问的延长吸光度值明显增大，9 min 后吸光度值减小，12 min 后吸光度值基本不变，因此最佳显色时间为9 min 。

2. 4 标准曲线

实验得到吸光度(A)与葡萄糖浓度(C)的回归方程为11=0.0401C+0.0036 ,r=0. 9994 ，在

0~10mg/mL 浓度范围内线性关系良好(图3) 。

2. 5 提取条件的确定

准确称取棉花纤维，按表 1 的提取条件提取棉花纤维中的水溶性总糖，采用 1. 3. 6 方法测定总糖含量，结果见表 2 。

由表 2 可见，影响总糖含量的提取条件主次关系为提取时间＞盐酸浓度＞料液比＞水解时问，其中提取时间对提取效果影响最明显，盐酸浓度和料液比其次，实验最佳提取条件为料液比 1 ：30 ，盐酸浓度 5 mol /L, 水解时问30 min ，提取时问60 min 。

2.6 提取液显色稳定性

按 2.5 项最佳条件提取棉花纤维中的总糖，取提取液后，按 1. 3. 6 方法操作，分别在显色后10min ，20 min ，30 min ，60 min ，90 min ，120 min 内测定吸光度，结果见图4。由图 4 可知，吸光度在 3 0 ~60 min 内最大且稳定，以后随着时问推移下降。因此，要在提取液显色后30~60 min 内测定吸光度，以减少误差。

2. 7 方法的精密度

从表 3 可以看出，同一均匀样品 5 份，测得棉花中的水溶性总糖平均含量为7.861 mg/

精密吸取己知浓度棉花总糖提取液 5 份，分别加入 1 mg /ml 葡萄糖标液0. 3 mL, 制备

供试溶液，按 1.3.6 方法操作，测定吸光度，求回收率。结果见表 4 。

[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业,1992,03:40-42.

2.试验方法

2.1 样品处理及标准溶液配制

2.1.1 标液制备:将葡萄糖分别配成50~140ug/mL 标液。吸取标液1mL 加入装有8mL 葱酮试剂

的试管或量瓶，水浴加热后用lcm 比色皿在620nm 波长下比色，获得一系列 E 值。

3 结果分析与讨论

3.1 糖溶度与其消光值 E 间的关系

3.1.1. 对应关系:

将配制的不同浓度的标液与蒽酮试剂作用，再置于620nm 处比色，则得相应E值。重

复试验，将测定结果列于表 1 ，并绘制成如图 1 的标准曲线。从表 1 中看出，各组试验间的结果十分接近，绘制成标准曲线，则重复间的三条线是弥合重迭的（如图1）。对消光值与糖浓度间相关关系数进行计算，三组试验的相关系数均大于0.99 ，为极显著正相关。由此可以证明，糖含量与其消光值之间的关系在特定波长下是恒定的，彼此对应。找出这种关系，便可在实测中省去制标准曲线的工作，从而简化蕙酮比色法测糖含量的测定工作。

3.1.2 。利用回归分析建立表达式

将表1中糖浓度与其E值进行回归分析，获得如表2的表达式。表2 中，Y=179.5X-2.74 即总的回归表达式，它是三个重复的平均回归，而非回归之简单平均。此式即是用来代替标

准曲线运用于实测的关系式。从三个重复的关系式可看出彼此间存在一定的离散，但很微小。将其作图可看出，它们基本弥合在总式上，即呈重迭状态如图 2 。这更进一步表明所求总式的代表性强，精度高。