蒽酮比色法测总糖
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。
实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。
实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。
2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。
3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。
4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。
5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。
6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。
2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。
3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。
实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量
实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1．仪器（1）分光光度计；（6）漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2．试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（3）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3．材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（大白菜心）。
四、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL 1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。
3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
蒽酮比色法测总糖
蒽酮比色法测总糖：
实验步骤：
1、可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80℃水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
2、总糖的测定：取提取液1毫升（或0.5毫升，视情况而定）于试管中（空白中用1毫升蒸馏水代替），加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于
，冷却后在620nm波长处比色。
蒽酮试剂：1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。
3、标准曲线的绘制：取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液（100μg/ml）0、0.2、0.
4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。
4、计算：C=AN/W
C—样品总糖含量（μg/g）
W—样品重量（g）
A—标准曲线查得的糖量（μg）
N—样品提取液占样品反应液的倍数。
蒽酮比色法测总糖
[1]姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.1. 2试剂0. 1 mg / mL, 1葡萄糖标准溶液:准确称取10mg葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg于100mL二烧杯中，加入蒸馏水25 mL,，缓慢加入98%质量分数)浓硫酸75 mL,，边加边搅(于冰水浴中完成)，直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用(临用新配)。
浓盐酸、浓硫酸、NaOH，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
1. 3方法1. 3. 1显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。
向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL,，并加入蒸馏水至1m L,，分别加入不同量显色剂显色测定，以0. 1 mL,蒸馏水为空白对照。
1.3.2显色时间选择。
向10 mL二试管中加入0. 1mg / mL葡萄糖标液0. 1 mL二并加入蒸馏水至1mL,，在冰水浴中缓慢加入9 mL显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。
1.3.3葡萄搪标准曲线绘制。
改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水用量，再分别加入9mL显色剂，进行显色测定。
1.3.4正交试验确定提取条件。
采用正交试验，考查4个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验影响，因素水平见表1.1.3.5水溶性总搪提取。
取0. 5 g棉花纤维于150 mL圆底烧瓶中，加入30 mL,蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn,滤出提取液20 mL于50 mL 烧瓶中，加5 mol / L 盐酸5 mL继续在沸水浴中加热30 mLn，冷却后，滴加一滴酚酞，用5 mol / L, 1氧氧化钠中和至中性。
1. 3. 6水溶性总搪测定。
取提取液1 mL于10mL试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL,蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn，冷却后放置30min测定吸光度。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
蒽酮比色法测定棉花成熟纤维中水溶性总糖含量
ｍｇ・ｍＬ 葡 萄 糖标 液 ０ １ｍＬ并 加 入 蒸 馏 水 至 １ 。 ．
ｍＬ， 冰水 浴 中缓 慢 加 入 ９ｍＬ显 色剂 摇 匀 ， 在 改变
沸 水浴 时 间 ， 冷却 至室 温后测 体 系吸光度 。
１ ３ ３葡 萄 糖 标 准 曲 线 的绘 制 。 改 变 ０ １ｍｇ・ ．． ．
有 着重 要作 用 。一 般实验 室 常用 的 比较 简便 、 捷 快
的总糖 测定 方 法为 比色 法 ， ３ ５二 硝 基水 杨 酸 比 如 ，一
色 法 、 甲苯 胺 比色 法Ｅ 苯 酚一 酸 法 、 酮 邻 、 硫 蒽 比色法 ¨ 等 。 ４
本 文采 用水 煮 法 提 取 成 熟 棉 纤 维 中水 溶 性 总 糖 ， 用 蒽 酮 比色 法 测 定其 含 量 ； 出 了成 熟 棉 并 找 花 纤维 中水 溶性 总糖 的最 佳 提 取条 件 ， 蒽酮 比色 对
１ ３ 方 法 ．
法 测定 总糖 含量 的最佳条 件 进 行 了选 择 ， 出 了标 做 准 曲线 ， 测 定 了不 同 产地 、 同 品 级成 熟 棉 花 纤 并 不
维 中水 溶性 总糖 含 量 。
１ ３ １ 色利 酮 一 酸 溶 液） 量 选 择 。 向试 管 ．． 显 蒽 硫 用
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｔ ｌＳｕ ａ ｎｔ ｎ ｓｉ ａ ｕ ｅ Ｃｏ ｔ ｎ Ｆｉ ｅ ｓｎ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆＴｏ ａ ｇ ｒ Ｃｏ ｅ ｔ ｎ Ｍ ｔ ｒ ｔｏ ｂ ｒＵ ｉ ｇ Ａｎｔ ｒ ｎ ｌ ｒ ｍ ｅ ｒ ｈ ｏ ｅ Ｃｏ ｏ ｉ ｔｙ
实 验材 料 ： 花 样 品来 自河 北 威 县 、 北 黄 梅 棉 湖 县 、 疆 石 河 子 市 和 库 尔 勒市 ， 新 由农 业 部 棉 花 品 质 监督 检 验测 试 中心 统一分 取试 验样 品 。 仪 器 ： ６新 世 纪 紫 外一 见 分 光 光 度 计 （ 京 Ｔ 可 北
实验五可溶性总糖的测定(精)
管号 1
葡萄糖 0
标准液 （ml）
蒸馏水 1
（ml）
葡萄糖 0
含量 （μg）
2
3
4
5
6
7
0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8
0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2
10 20 30 40 60 80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml， 加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取 出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm 波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以 吸光值作纵坐标作标准曲线。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架； 漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制 使用。 ３、材料 小麦
四、操作步骤
１、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一
系列不同浓度的葡萄糖溶液：
可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟 甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物， 呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10 －100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量 成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３ 0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖 之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比 较合适。
２、植物样品中可溶性糖的提取
将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克， 放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖 煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容 量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一 50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测 定。
总糖的测定-蒽酮比色法
总糖的测定-蒽酮⽐⾊法植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮⽐⾊法）2010-5-24⼀、实验⽬的掌握蒽酮⽐⾊法测定总糖和还原糖含量的原理和⽅法，学会正确使⽤分光光度计。
⼆、实验原理游离的⼰糖或多糖中的⼰糖基、戊糠醛及⼰糖醛酸在浓硫酸的作⽤下脱⽔⽣成糠醛衍⽣物，糠醛衍⽣物与蒽酮缩合成蓝⾊的化合物，在620nm处有最⼤吸收，在⼀定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
⽤酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底⽔解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进⾏定量测定。
三、实验材料1．可见分光光度计、电⼦天平(1/100)、粉碎机、⽔浴锅、电炉。
2．研钵、量筒、三⾓烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏⽃、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
3．植物原料，如银⽿、⽊⽿、菜叶等。
四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当⽇配制使⽤。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏⽔并稀释⾄1 000ml（可滴加⼏滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加⽔⾄100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏⽔并稀释⾄100ml。
五、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的绘制取⼲净试管6⽀，按下表进⾏操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定称取植物原料⼲粉0.1～0.5g，加⽔约3ml，在研钵中磨成匀浆，转⼊三⾓烧瓶中，并⽤约30ml的蒸馏⽔冲洗研钵2～3次，洗出液也转⼊三⾓烧瓶中。
于50℃⽔浴中保温半⼩时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容⾄100ml。
过滤，取lml滤液进⾏还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加⼊4ml蒽酮试剂，沸⽔浴中准确加热10min，取出⽤⾃来⽔冷却后⽐⾊，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
蒽酮比色法测总糖
实验一脂肪酸价的测定酸价的测定：滴定法。
利用酸碱中和反应，测出脂肪中游离酸的含量。
油脂的酸价以中和1克脂肪中游离酸所消耗的氢氧化钾的毫克数表示。
三、材料、试剂与仪器材料：油脂。
仪器：碘量瓶250mL、量筒、移液管、容量瓶（ 100、1000mL）、滴瓶、烧瓶、碱式滴定管、锥形瓶（250mL）、试剂瓶、称量瓶、天平试剂：1、0.001mol/L Na2S2O3：2、氯仿（三氯甲烷）-冰乙酸混合液：取氯仿40mL加冰乙酸60mL，混匀；3、饱和碘化钾溶液：4、0.5%淀粉指示剂：5、0.001mol/L氢氧化钾（或氢氧化钠）标准溶液；6、中性乙醚—95%乙醇（2:1）混合溶剂：7、1%酚酞乙醇溶液所用试剂为国产分析纯。
四、操作步骤（一）过氧化值的测定1、称取混合均匀的油样2.00g（精确到0.01g）置于干燥的碘量瓶底部，加入20mL氯仿-冰乙酸混合液，轻轻摇动充分混合；2、加入2mL饱和碘化钾溶液，加塞后摇匀，在暗处放置5min；3、取出碘量瓶，立即加入50mL蒸馏水，充分混合后，立即用0.001mol/L Na2S2O3标准溶液滴定至水层呈浅黄色时，加入1mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为止，记下体积V1，并计算POV。
4、同时做不加油样的空白试验，记下体积V2。
（二）酸价的测定1、称取均匀的油样1.00g（精确到0.01g），注入锥形瓶；2 加入中性乙醚-乙醇溶液20mL，小心旋转摇动，使油样完全溶解；3 加2~3滴酚酞指示剂，用0.001mol/L碱液滴定至出现微红色并在30s内不消失，记下消耗碱液的毫升数（V），并计算酸价。
五、结果计算（一）过氧化值（POV）的计算用过氧化物氧的毫克当量数表示时，可按下式计算POV（mmol过氧化物/kg 油) = (V1—V2)×C×1000/W式中：V1—油样用去的Na2S2O3溶液体积（mL）V2—空白试验用去的Na2S2O3溶液体积（mL）C—Na2S2O3溶液的摩尔浓度（mol/L）W—油样重（g）（二）酸价的计算以酸价（AV）表示按下列公式计算AV（mg KOH /g 油）=V× C×56.1 /W式中： V—滴定时消耗的氢氧化钾溶液体积（mL）C—氢氧化钾溶液的摩尔浓度（mol/L）56.1—氢氧化钾的毫摩尔质量W—油样重（g）六、注意事项1、测定POV：（1）加入碘化钾后，静置时间长短以及加水量多少，对测定结果均有影响。
总糖的测定-蒽酮比色法
实验一总糖的测定-蒽酮比色法一、实验目的（1）学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
（2）学习723型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理总糖是指样品中的还原糖及在本法测定条件下水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糠醛衍生物后与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物。
溶液含糖量在每毫升150微克以内，与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用，样品不必经过水解。
三、实验材料、器材与试剂1、材料白薯。
2、器材（1）试管（或具塞试管）及试管架；（2）吸量管；（3）沸水浴；（4）冰浴；（5）723型分光光度计。
2、试剂（1）蒽酮试剂：称取100mg蒽酮溶于100mL98%硫酸溶液（A.R）中，用时配制。
（2）葡萄糖标准溶液（100μg/mL）:精确称取100mg干燥葡萄糖，用蒸馏水定容至1000mL。
（3）样品溶液：称取500g市售白薯，洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆，4层纱布压滤、弃滤液留渣，将渣放入烘箱内80℃～85℃烘干后，再用植物粉碎机（微型）研细，过筛区100目筛下物为待测样品。
（也可用市售红薯面粉代替）取样品在烘箱内150烘干，恒重后，精确称取1～5g，置于锥形瓶中，加入80mL沸蒸馏水，放入沸水浴。
不时摇动，提取半小时。
取出立即过滤，残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤，合并滤液。
冷却至室温，用蒸馏水定容至100mL。
四、实验方法(1)制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，编号后按下表操作。
每管加入葡萄糖标准液和谁后立即混匀，迅速置于冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂后，同时置于沸水浴中，准确加热7分钟，立即取出置于冰浴中迅速冷却。
待各管溶液达室温后，用1cm厚度的比色皿，以第一管为空白，在620nm处迅速测其余各管的光吸收值。
然后以第2～7管溶液含糖量μg数为横坐标，吸光度（A620nm）为纵坐标，画出含糖量与A620nm 的相关标准曲线。
植物水溶性总糖的提取和含量测定蒽酮比色法
实验六植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
3.学习分光光度计的使用。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较适合。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
总糖分测定(蒽酮比色法)
蒽酮比色法测糖一目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法二原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三实验器材及试剂马铃薯干粉可调试移液器或移液管可见分光光度计（723型）电子分析天平水浴锅电炉子蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
四、操作1.制作标准曲线取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。
以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml ）为横坐标作图得标准曲线。
表1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色葡萄糖浓度（mg/ml）2.样品含量的测定样品液的制作：精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中—→加入30ml沸水—→沸水浴30min（不时摇动）—→取出，3000rpm离心10min（或过滤）—→反复洗涤残渣2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到50ml的锥形瓶中—→再从中取出1ml，再定容到10ml的容量瓶中样品液的测定：（1）取4支试管，按照表2加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）表2 蒽酮比色法定糖——样品的测定（2）加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。
（3）以1号试管作为调零管，2、3、4号管的OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：C×Vw = ————×100%m，式中w：糖的质量分数（%）C：从标准曲线中查出的糖质量分数（mg/ml）V：样品稀释后的体积（ml）m：样品的质量（ml）原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
3.蒽酮测糖
实验3 总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液(l00 µg/ml)：精确称取100mg干燥葡萄糖，定容到1000ml.(2)浓硫酸(98%)(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甘薯四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中加入葡萄糖标注液和水后摇匀，立即放入冰浴中，待各管都加入蒽酮试剂4.0 m1后，各管同时放置沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸7min后立即取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：称取500克市售白薯，洗净切碎后用食用加工机磨成匀浆，用4层纱布压滤，丢掉滤液，留残渣，将残渣放入烘箱内80-85o C烘干后，再用粉粹机粉粹，过筛，取过100目后的粉末为待测样品。
称取约5g待测样于锥形瓶中，加入80ml沸腾蒸馏水，放入水浴中提取30分，期间不断摇动锥形瓶。
取出过滤后，残渣用蒸馏水少量反复洗涤后，冷却至室温，用蒸馏水定容质100 ml。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.0 ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。
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[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42.1. 2 试剂0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中，溶解后转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL.蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中，加入蒸馏水25 mL, ，缓慢加入98% 质量分数）浓硫酸75 mL, ，边加边搅（于冰水浴中完成），直至蕙酮溶解，冷却至室温后使用（临用新配）。
浓盐酸、浓硫酸、NaOH ，以上试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
1. 3 方法1. 3. 1 显色剂（蒽酮硫醇溶液）用量选择。
向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ，并加入蒸馏水至1m L, ，分别加入不同量的显色剂显色测定，以0. 1 mL, 蒸馏水为空白对照。
1.3.2 显色时间选择。
向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ，在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀，改变沸水浴时问，冷却至室温后测体系吸光度。
1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。
改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量，再分别加入9mL 显色剂，进行显色测定。
1.3.4 正交试验确定提取条件。
采用正交试验，考查 4 个影响因素（料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问）对实验的影响，因素水平见表 1.1.3.5 水溶性总搪的提取。
取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中，加入30 mL, 蒸馏水，在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中，加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ，冷却后，滴加一滴酚酞，用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。
1. 3. 6 水溶性总搪的测定。
取提取液 1 mL 于10mL 试管中，在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀，在沸水浴中加热9 mLn ，冷却后放置30min 测定吸光度。
从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。
2 结果与分析2. 1 吸收曲线用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描，结果发现在625 nm 处有最大吸收，故本实验采用625 nm 为测定波长。
2. 2 显色剂用量由图 1 可以看出，当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大，故实验采用显色剂用量为9 m l。
2. 3 显色时问由图 2 可知，沸水浴时问在9 min 内，随着时问的延长吸光度值明显增大，9 min 后吸光度值减小，12 min 后吸光度值基本不变，因此最佳显色时间为9 min 。
2. 4 标准曲线实验得到吸光度(A)与葡萄糖浓度(C)的回归方程为11=0.0401C+0.0036 ,r=0. 9994 ，在0~10mg/mL 浓度范围内线性关系良好(图3) 。
2. 5 提取条件的确定准确称取棉花纤维，按表 1 的提取条件提取棉花纤维中的水溶性总糖，采用 1. 3. 6 方法测定总糖含量，结果见表 2 。
由表 2 可见，影响总糖含量的提取条件主次关系为提取时间＞盐酸浓度＞料液比＞水解时问，其中提取时间对提取效果影响最明显，盐酸浓度和料液比其次，实验最佳提取条件为料液比 1 ：30 ，盐酸浓度 5 mol /L, 水解时问30 min ，提取时问60 min 。
2.6 提取液显色稳定性按 2.5 项最佳条件提取棉花纤维中的总糖，取提取液后，按 1. 3. 6 方法操作，分别在显色后10min ，20 min ，30 min ，60 min ，90 min ，120 min 内测定吸光度，结果见图4。
由图 4 可知，吸光度在 3 0 ~60 min 内最大且稳定，以后随着时问推移下降。
因此，要在提取液显色后30~60 min 内测定吸光度，以减少误差。
2. 7 方法的精密度从表 3 可以看出，同一均匀样品 5 份，测得棉花中的水溶性总糖平均含量为7.861 mg/精密吸取己知浓度棉花总糖提取液 5 份，分别加入 1 mg /ml 葡萄糖标液0. 3 mL, 制备供试溶液，按 1.3.6 方法操作，测定吸光度，求回收率。
结果见表 4 。
[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业,1992,03:40-42.2.试验方法2.1 样品处理及标准溶液配制2.1.1 标液制备:将葡萄糖分别配成50~140ug/mL 标液。
吸取标液1mL 加入装有8mL 葱酮试剂的试管或量瓶，水浴加热后用lcm 比色皿在620nm 波长下比色，获得一系列 E 值。
3 结果分析与讨论3.1 糖溶度与其消光值 E 间的关系3.1.1. 对应关系:将配制的不同浓度的标液与蒽酮试剂作用，再置于620nm 处比色，则得相应E值。
重复试验，将测定结果列于表 1 ，并绘制成如图 1 的标准曲线。
从表 1 中看出，各组试验间的结果十分接近，绘制成标准曲线，则重复间的三条线是弥合重迭的（如图1）。
对消光值与糖浓度间相关关系数进行计算，三组试验的相关系数均大于0.99 ，为极显著正相关。
由此可以证明，糖含量与其消光值之间的关系在特定波长下是恒定的，彼此对应。
找出这种关系，便可在实测中省去制标准曲线的工作，从而简化蕙酮比色法测糖含量的测定工作。
3.1.2 。
利用回归分析建立表达式将表1中糖浓度与其E值进行回归分析，获得如表2的表达式。
表2 中，Y=179.5X-2.74 即总的回归表达式，它是三个重复的平均回归，而非回归之简单平均。
此式即是用来代替标准曲线运用于实测的关系式。
从三个重复的关系式可看出彼此间存在一定的离散，但很微小。
将其作图可看出，它们基本弥合在总式上，即呈重迭状态如图 2 。
这更进一步表明所求总式的代表性强，精度高。
3.2 实测结果选择几种具代表性的样品进行测定结果比较，茶叶可作为干样典型，菠萝等则可作为湿样代表。
将样品按标准操作规程测出与其糖浓度对应的消光值，然后按常规方法查标准曲线计算出所获得的值;同时利用换算式直接计算出糖含量。
将测定结果进行对比，便知其准确程度与实用性。
在表 3 中 E 值为多组测定值的平均，而常规法总糖的计算则按公式ug/mL; L 为供试液总量， 此为 500mL;L' 为取用1mL; 10^6 ug g M简化法中， C 变成 Y 值，即前述 Y=C =179 . 5x-2 . 74 ，余同总糖计算式。
由表 3 可看出，常规法与简化法分析的值相差极微，将两种方法进行统计比较其结果如表4。
从表 4 可知，两种方法计算所获得结果相差极微，表明简化法完全符合实测要求。
对 表 4 再求两值间的平一均相对相差则得 -0.07% ，对几组试验值求出的平均偏差 D=0.0115; 标准偏差 S=0.0181 。
因此利用多项统计测验均显示出简化法与常规法所获结果趋于高度一依据。
计算。
式中 c 为标准曲线上查得的糖量值 致，证明葱酮比色法测总糖简化后十分精确， 从而为省去标准曲线制作步骤提供了充足实验3.3由于简化法与常规法均是利用葱酮比色法测总糖含量的同样操作方法与步骤，只是简化法以关系式代替了常规法的标准曲线，故总糖计算式简化为式中：:X 即E，为实测的消化值。
[1] 杨建荣,李玉胜,殷军港. 蒽酮比色法快速测定复合硅铝酸盐霉菌吸附剂中酵母多糖含量[J].粮食与饲料工业,2014,12:57-59.1 材料与力一法1. 1 仪器和试剂1.1.1 材料复合硅铝酸盐霉菌吸附剂（主要成分:水合硅铝酸盐约85%, 酵母细胞壁约5%~10% 。
1. 1. 2 仪器T6 新悦可见分光光度计，涡漩混合器，分析天平（精确度0. 000 1 g） , MI6 微波消解仪。
1. 1. 3 试剂甘露糖标准品（纯度＞98 % , Sigma 公司）;浓盐酸（质量分数37% ~38%）、浓硫酸（质量分数98%）和蕙酮皆为分析纯;实验室用水为蒸馏水。
50 g/I, Na（）H 溶液:5g 分析纯氧氧化钠溶于100 ml 蒸馏水中;质量分数15% 三氯乙酸溶液:15g 分析纯三氯乙酸溶于85 g 蒸馏水中;6 mol/I 二盐酸溶液:25 ml 浓盐酸和25 ml 蒸馏水混匀。
1. 2 方法1.2.1 样品预处理准确称取约0.5g 复合硅铝酸盐霉菌吸附剂于微波消解罐中，加入50 g/I, Na（）H 溶液10 ml, 涡旋振荡 2 min, 混匀。
在温度60 ℃条件下微波消解20 min ，冷却后用 6 mol/I 二盐酸溶液调至中性，再加入浓盐酸使其最终浓度为 6 mol/I, 。
微波消解采用程序升温，条件为: 微波功率为4% W, 温度8 0 0C 时问 5 min, 温度1%0C 、时问 5 min 和温度12%C 时问90 min 。
冷却后转移至1% ml 容量瓶中稀释定容，过滤后滤液备用。
1.2.2 溶液配制1.2.2.1 甘露糖标准贮备液的配制准确称取约0.29 甘露糖于小烧杯中，，用蒸馏水溶解后转移至100 ml 容量瓶中并定容至100 m1 。
1.2.2.2 甘露糖标准使用液的配制分别准确移取甘露糖标准贮备液 1. 00,2. 00,3.00,4.00,5.00 和 6. 00 ml 于50 ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释定容至50 ml 。
1.2.2.3 显色剂蕙酮习壳酸溶液的配制用量筒量取75 ml 浓硫酸（质量分数98%）缓缓倒入装有25 ml 蒸馏水的小烧杯中，并不断搅拌冷却至室温;然后加入0.05 g 蕙酮，搅拌使其溶解，避光保存，现用现配。
1.2.3 蕙酮比色法条件的确定通过紫外分光光度计扫描显色后的溶液，确定最大吸收波长。
在甘露糖标准溶液中加入不同体积的蒽酮试剂（分别为3,5,7,9,11 和13 ml） , 沸水浴时问10 min ，显色测定吸光度后确定蒽酮试剂的最佳体积;加入相同体积的蕙酮试剂，采用不同的沸水浴时问（3,5,7,9,11 和13 min），显色测定吸光度后确定最佳沸水浴时问。
1. 2. 4 甘露糖标准曲线的制作和样品总糖含量的测定分别准确移取 1. 00 ml 蒸馏水、 6 个不同浓度的甘露糖标准使用液 1. 00 ml 和经消解过滤后的样液 1. 00 ml 于8支25 ml 具塞比色管中。
在确定的蒽酮比色法的最佳条件下（蒽酮试剂体积7 ml, 沸水浴时问9 min）显色，将比色管在流动水下迅速冷却，于最大吸收波长处测其吸光度。
根据标准溶液的吸光度和浓度作图，得到标准曲线和回归方程。
根据回归方程和样品的吸光度求出样品中总糖含量（以甘露糖计）。