猫2016-11-13
吉利猫（上海）商贸有限公司介绍企业发展分析报告
Enterprise Development专业品质权威Analysis Report企业发展分析报告吉利猫（上海）商贸有限公司免责声明:本报告通过对该企业公开数据进行分析生成，并不完全代表我方对该企业的意见，如有错误请及时联系;本报告出于对企业发展研究目的产生，仅供参考，在任何情况下，使用本报告所引起的一切后果，我方不承担任何责任:本报告不得用于一切商业用途，如需引用或合作，请与我方联系:吉利猫（上海）商贸有限公司1企业发展分析结果1.1 企业发展指数得分企业发展指数得分吉利猫（上海）商贸有限公司综合得分说明：企业发展指数根据企业规模、企业创新、企业风险、企业活力四个维度对企业发展情况进行评价。
该企业的综合评价得分需要您得到该公司授权后，我们将协助您分析给出。
1.2 企业画像类别内容行业纺织服装、服饰业-服饰制造资质增值税一般纳税人产品服务版物批发；出版物零售。
（依法须经批准的项1.3 发展历程2工商2.1工商信息2.2工商变更2.3股东结构2.4主要人员2.5分支机构2.6对外投资2.7企业年报2.8股权出质2.9动产抵押2.10司法协助2.11清算2.12注销3投融资3.1融资历史3.2投资事件3.3核心团队3.4企业业务4企业信用4.1企业信用4.2行政许可-工商局4.3行政处罚-信用中国4.5税务评级4.6税务处罚4.7经营异常4.8经营异常-工商局4.9采购不良行为4.10产品抽查4.12欠税公告4.13环保处罚4.14被执行人5司法文书5.1法律诉讼（当事人）5.2法律诉讼（相关人）5.3开庭公告5.4被执行人5.5法院公告5.6破产暂无破产数据6企业资质6.1资质许可6.2人员资质6.3产品许可6.4特殊许可7知识产权7.1商标7.2专利7.3软件著作权7.4作品著作权7.5网站备案7.6应用APP7.7微信公众号8招标中标8.1政府招标8.2政府中标8.3央企招标8.4央企中标9标准9.1国家标准9.2行业标准9.3团体标准9.4地方标准10成果奖励10.1国家奖励10.2省部奖励10.3社会奖励10.4科技成果11 土地11.1大块土地出让11.2出让公告11.3土地抵押11.4地块公示11.5大企业购地11.6土地出租11.7土地结果11.8土地转让12基金12.1国家自然基金12.2国家自然基金成果12.3国家社科基金13招聘13.1招聘信息感谢阅读:感谢您耐心地阅读这份企业调查分析报告。
猫膀胱炎临床特征及治疗的研究进展
2021年第02期猫膀胱炎是十分常见的猫下泌尿道疾病之一，主要的临床症状有尿频、排尿困难、尿痛、血尿等。
猫膀胱炎与品种、性别、是否去势无关，10岁以下的猫较易感。
其发病原因有很多，首先在生理结构上，公猫的尿道结构比母猫细长，其中尿道球腺部和阴茎部是两个最狭窄且易发生阻塞的部分，如果出现了泌尿道结构异常，如膀胱憩室、膀胱发育不全等，也可能发生泌尿道感染。
肿瘤、外伤、神经性紊乱等疾病也非常容易引起猫下泌尿道炎症，进而降低机体的抵抗力，使细菌在膀胱及尿道中大量繁殖，加重病情。
此外，饲养条件也是重要影响因素之一，长期仅饲喂干猫粮或性格原因造成的饮水量不足、卫生条件不好、去势手术和应激反应等均有概率导致猫膀胱炎的发生。
1流行特征猫膀胱炎发病的年龄在1～10岁，患病高峰年龄为2～7岁，小于1岁的猫患病风险较低；从性别角度比较，公猫发病率较高，品种间的发病率无较大差异；与未绝育的猫相比，已绝育的猫发病风险会高一些。
饲养在室内、多猫使用同一个猫砂盆排尿排便、干粮占膳食的75%～100%的猫发病率较高；肥胖、由于性格原因水分摄取不足、易应激体质的猫患膀胱炎的风险较高。
患猫的行为特征表现为对环境反应过度，紧张、恐惧、防御或具有攻击性。
2临床症状猫自发性膀胱炎的主要下泌尿道症状有：排尿频率增加、不当排尿、排尿疼痛、尿血且排尿时嚎叫。
而临床征象可分为急性或慢性。
应设法区别是否已成为慢性问题，慢性复发的症状需要更细致的诊断评估与治疗计划。
近年的研究显示，患有自发性膀胱炎的猫，有50%以上在首次发病后的1年内出现阵发性或持续性症状。
10岁以下、有刺激性排尿的猫，最常见的诊断为猫自发性膀胱炎，据统计有刺激性排尿临床症状的患猫，猫自发性膀胱炎占60%～70%，泌尿道结石占10%～20%，解剖学异常（如脐尿管憩室、尿道狭窄）占10%，行为问题占10%，细菌性泌尿道感染小于2%，肿瘤小于1%。
而10岁以上出现刺激性排尿临床征象的猫，自发性膀胱炎只占5%，而细菌性泌尿道感染占50%以上，年纪较大的猫，细菌性泌尿道感染常与泌尿道结石或慢性肾病有关。
第16课 《猫》(原卷版)-七年级语文上册课内外拓展延伸阅读(部编版)
第16课猫一、拓展阅读两条狗①父亲扔掉过一条杂毛黑狗。
父亲不喜欢它，嫌它胆小，不凶猛，咬不过别人家的狗，经常背上少一块毛，滴着血，或瘸着一条腿哭丧着脸从外面跑回来。
院子里来了生人，也不敢扑过去咬，站在狗洞前光吠两声，来人若捡个土块、拿根树条举一下，它便哭叫着钻进窝里，再不敢出来。
②这样的狗，连自己都保不住咋能看门呢？③父亲有一次去50公里以外的柳湖地卖皮子，走时把狗装进麻袋，口子扎住扔到车上。
他装了37张皮子，卖了38张的价。
狗算了一张，活卖给皮店掌柜了。
④回来后父亲物色了一条小黄狗。
我们都很喜欢这条狗，胖乎乎的，却非常机灵活泼。
父亲一抱回来便给它剪了耳朵，剪成三角，像狼耳朵一样直立着。
不然它的耳朵长大了耷下来会影响听觉。
⑤过了一个多月，我们都快把那条黑狗忘了。
一天傍晚，我们正吃晚饭，它突然出现在院门口，瘦得皮包骨头，也不进来，嘴对着院门可怜地哭叫着。
我们叫了几声，它才走进来，一头钻进父亲的腿中间，两只前爪抱住父亲的脚，汪汪地叫个不停。
叫得人难受。
母亲盛了一碗揪片子，倒在盆里给它吃。
它已经饿得站立不稳了。
⑥从此我们家有了两条狗。
黄狗稍长大些就开始欺负黑狗，它俩共用一个食盆，吃食时黑狗一向让着黄狗，到后来黄狗变得霸道，经常咬开黑狗，自己独吞。
黑狗只有委琐地站在一旁，等黄狗走开了，吃点剩食，用舌把食盆添得干干净净。
家里只有一个狗窝，被黄狗占了，黑狗夜夜躺在草垛上。
进来生人，全是黄狗迎上去咬，没黑狗的份儿。
一次院子里来了条野狗，和黄狗咬在一起，黑狗凑上去帮忙，没想到黄狗放开正咬着的野狗，回头反咬了黑狗一口，黑狗哭叫着跑开，黄狗才又和野狗死咬在一起，直到把野狗咬败，逃出院子。
⑦后来我们在院墙边的榆树下面给黑狗另搭了一个窝。
喂食时也用一个破铁锨头盛着另给它吃。
从那时起黑狗很少出窝。
有时我们都把它忘记了，一连数天想不起它。
夜里只听见黄狗的吠叫声。
黑狗已经不再出声。
这样过了两年，也许是三年，黑狗死掉了。
死在了窝里。
七年级语文上册第17课猫课内外阅读理解含答案
第五单元灵性的动物17猫01 积累运用。
1．给下面加点字注音或根据拼音写汉字。
污涩．(sè) 懒惰．(duò) 诅．咒(zǔ)红绫．(líng) chànɡ然(怅) quán伏(蜷)nüè待(虐) sǒnɡyǒnɡ(怂恿)2．请结合语境，解释下列加点的词语。
(1)三妹便怂恿．．着她去拿一只来。
鼓动别人去做某事。
(2)找了半天，却没找到。
真是“畏罪潜逃．．．．”了，我以为。
害怕承担罪责而偷偷逃跑。
(3)我没有判断明白，便妄下断语．．．．。
胡乱说出断定的话。
3．下列句子中标点符号运用有误的一项是(C)A．我们都很为它提心吊胆，一天都要“小猫呢？小猫呢？”地查问好几次。
B．找了半天，却没找到。
真是“畏罪潜逃”了，我以为。
C．想到它的无抵抗的逃避，益使我感到我的暴怒，我的虐待，都是针，刺我良心的针！D．它很悲楚地叫了一声“咪呜”，便逃到屋瓦上了。
(解析：“我的暴怒”“我的虐待”为并列成分，应用顿号。
)4．下列句子的表达方式有误的一项是(C)A．花白的毛，很活泼，常如带着泥土的白雪球似的，在廊前太阳光里滚来滚去。
(描写) B．想到它的无抵抗的逃避，益使我感到我的暴怒、我的虐待，都是针，刺我良心的针！(抒情)C．我心里也感着一缕的酸辛，可怜这两月来相伴的小侣！(记叙)D．我家养了好几次的猫，结局总是失踪或死亡。
(记叙)(解析：C项属于心理描写，也是抒情。
)5．动物的语言是丰富多彩的。
根据示例，选择恰当的事物，仿写一个句子。
示例：从小猫的悲鸣中，我们读出被误解的凄凉。
示例：从鸣蝉的欢唱中，我们感受到生命的热烈。
6．文中的第三只猫被“我们”一家误解后蒙冤而死。
在生活中我们也难免误解别人或被别人误解，那么我们应如何对待呢？为此，班级开展了以“消除误解，真诚沟通”为主题的综合性活动，请你来完成以下任务。
(1)请你为这次活动设计一条宣传标语。
示例一：用真诚架起沟通的桥梁示例二：沟通增进友谊，真诚构建和谐(2)生活中，你是否也曾经错怪别人或被人误解过？请你用简洁的语言叙述一下。
宠物猫单侧隐睾的组织形态学观察与测量
52 ·2023.12试验研究0 引言隐睾是动物最常见睾丸发育不良的症状之一，不仅威胁着动物的生理机能健康，还对优良品种繁育及繁殖能力产生重要的影响。
已有研究报道证实，隐睾症的发病率人类为2.5%～4%、犬为0.8%～9.7%[1]、猫为3%～6.3% [2]。
临床主要表现为阴囊内检查不到睾丸，触诊时睾丸一般在左右侧腹股沟内，随着猫年龄的增长，会出现腹部异常和不适等症状[3]。
诱导隐睾发生既收稿日期：2023-11-27基金项目：江苏省高校家畜种质资源与遗传改良国际合作联合实验室开放课题（IJRLD-KF202211）作者简介：刘鹏刚（1986-），男，甘肃定西人，博士，讲师，研究方向：家畜疾病检测及发育。
*通信作者简介：熊文斌（1988-），男，山西闻喜人，硕士，兽医师，研究方向：小动物疾病诊疗。
刘鹏刚，俞可馨，蒋宁，等．宠物猫单侧隐睾的组织形态学观察与测量[J]．现代畜牧科技，2023，103（12）：52-54． doi ：10.19369/ki.2095-9737.2023.12.013． LIU Penggang ，YU Kexin ，JIANG Ning ，et al ．Histomorphological Observation and Measurement of One-sided Hidden Testicles in Pet Cats[J]．Modern Animal Husbandry Science & Technology ，2023，103（12）：52-54．宠物猫单侧隐睾的组织形态学观察与测量刘鹏刚1，2，3，俞可馨1，蒋宁1，熊文斌1*（1. 扬州大学兽医学院，江苏 扬州 225009；2. 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室，扬州大学， 江苏 扬州 225009；3. 江苏省高校家畜种质资源与遗传改良国际合作联合实验室，江苏 扬州 225009）摘要：隐睾是动物最常见的睾丸发育不良症状之一，严重影响着生理健康及繁育能力。
关于猫的资料简介
关于猫的资料简介猫是猫科动物，分为家猫和野猫，是全球最受欢迎的宠物之一。
家猫的祖先据推测是来自古埃及的沙漠猫和波斯猫，尽管已经被人类驯化了3520多年，但它们并没有像狗一样完全被驯化。
猫的外观特征包括圆头、短颈、躯干、四肢和尾巴。
它们的趾底有脂肪质肉垫，让它们行走无声，捕鼠时不会惊跑鼠，趾端生有锐利的指甲。
猫的前肢有五指，后肢有四指。
猫的牙齿包括门齿、犬齿和臼齿。
犬齿特别发达，尖锐如锥，适于咬死捕到的鼠类，臼齿的咀嚼面有尖锐的突起，适于把肉嚼碎；门齿不发达。
猫是夜行性动物，以伏击的方式猎捕其他动物，大多能攀缘上树。
猫的身体小巧，样子招人喜爱，有黄、黑、白、灰等各种颜色。
它们是鼠类的天敌，因此在各地都有畜养。
猫的牙齿也可以用来判断它们的年龄。
成年猫咪的牙齿共30枚，幼年猫咪的牙齿共26枚。
猫的牙齿从两边往中间分别是：上排臼齿大臼齿前臼齿犬齿6颗门齿，下排大臼齿前臼齿犬齿6颗门齿。
在14天左右，猫咪开始长牙，2-3周龄时乳门牙长齐，近两个月龄时乳牙全部长齐，呈白色，细而尖。
3-4月龄开始更换第一颗乳门牙，5-6月龄换第二三颗乳门齿及乳犬牙，6个月龄以后全部换上恒齿。
8个月龄时，恒齿长齐，洁白光亮，门齿上部有尖凸。
1岁时，下颌第二门齿大尖峰磨损至小尖峰平齐，此现象称为尖峰磨灭。
2岁时，下颌第二门齿尖峰磨灭。
3岁时，上颌第一门齿尖峰磨灭。
4岁时，上颌第二门齿尖峰磨灭。
5岁时，下颌第三门齿尖峰稍磨损，下颌第一二门齿磨损面为矩形。
5.5岁时，下颌第三齿尖磨灭，犬齿钝圆。
6.5岁时，下颌第一门齿磨损至齿根部，磨损面为纵椭圆形。
7.5岁时，下颌第一门齿磨损面向前方倾斜。
8.5岁时，下颌第二及上颌第一门齿磨损面呈纵椭圆形。
9-16岁时，门齿脱落，犬齿不齐。
猫在高兴时，会竖起尾巴，发出呼噜声。
而当它生气时，会摇尾巴，并有可能扑向你。
这些都是猫咪表达情绪的方式。
很多人抱怨自己家的猫总是抓人、咬人，留下了伤疤。
但其实这并不全是猫咪的错，主人也有责任。
小故事500字
小故事500字【篇一：小故事500字】无论哪行哪业，都不是一件容易的事，不管多再辛苦都要保持前进,下面这些是小编为大家推荐的几篇励志500字。
500字1：退路与出路古希腊着名演说家戴摩西尼年轻的时候为了提高自己的演说能力，躲在一个地下室练习。
由于耐不住寂寞，他时不时就想出去溜达溜达，心总也静不下来，练习的效果很差。
无奈之下，他横下心，挥动剪刀把自己的头发剪去一半，变成了一个怪模怪样的阴阳头。
这样一来，因为羞于见人，他只好一心一意地练口才，演讲水平突飞猛进。
正是凭着这种专心执着的精神，戴摩西尼最终成为了世界闻名的大演说家。
一个人要想干好一件事情，成就一番事业，就必须心无旁骛、全神贯注地追逐既定的目标。
但人都有惰性、有太多欲望，有时难免战胜不了身心的倦怠，抵御不住世俗的诱惑，割舍不下寻常的享乐。
一些人因此半途而废，功亏一篑。
这时候，不妨学学戴摩西尼的精神，他剪掉了一半头发，就彻底斩断了向惰性和欲望妥协的退路。
而一旦没有退路可逃，就只能一门心思地朝前奔了。
断掉退路来逼着自己成功，是许多明智者的共同选择。
1830年，法国作家雨果为了能把全部精力放在写作上，把除了身上所穿毛衣以外的其他衣物全部锁在柜子里，把钥匙丢进了小湖。
就这样，由于根本拿不到外出要穿的衣服，他彻底断了外出会友和游玩的念头，除了吃饭与睡觉，从不离开书桌，结果作后来闻名于世的文学巨着《巴黎圣母院》。
漫漫人生路上，往往只有不留下退路，才容易赢得出路。
励志故事500字2:与大师克莱德曼握手钢琴王子克莱德曼的中国巡演刚一结束，等待索要签名的拥趸就排成了长龙。
这时，一对不引人注意的父子排在队伍前头。
克莱德曼习惯性地拿起签字笔，客气地问他们想签到哪里。
不料，这位父亲竟然说：我们不要签名。
此言一出，克莱德曼一愣。
我有一个不情之请，这位父亲说，我想让我的孩子握一下您的手。
周围的人更加不解了，纷纷上前看个究竟。
这位父亲向克莱德曼深鞠一躬：您是我非常尊敬的钢琴大师。
加菲猫妊娠期胎儿成活率低的原因及提升措施
摘要加菲猫独特的外表和憨厚的性格使其成为猫舍追逐繁育的大热品种,因其下颌短粗、咬合较差、鼻腔短且狭小、心肺功能差,很多猫舍在繁育该品种过程中常遇到胎儿成活率不高、死胎多等问题。
本文分析了加菲猫妊娠期死胎率高的原因,简述了猫舍繁育加菲猫的注意事项,并提出了提升母猫胎儿成活率的措施,以期为科学繁育加菲猫提供参考。
关键词加菲猫;胎儿成活率;原因;提升措施中图分类号S858.293文献标识码A 文章编号1007-5739(2021)23-0169-02DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2021.23.069开放科学(资源服务)标识码(OSID ):加菲猫妊娠期胎儿成活率低的原因及提升措施蒋珊珊狄和双刘静刘忠慧袁华根翟晓虎(江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300)加菲猫是异国短毛猫中黄色虎斑纹猫类的统称,是非常受欢迎的猫种,在宠物家庭中广泛饲养。
由于该品种下颌短粗、咬合较差、鼻孔狭小,心肺功能较其他品种更为脆弱,在怀孕生产过程中容易诱发很多问题,胎儿出生存活率低。
因此,对于新入行的猫舍繁育者而言,繁育加菲猫极具挑战。
1加菲猫妊娠期胎儿成活率低的原因加菲猫在繁育过程中常发生不孕、产出死胎或胎儿发育不良、胎儿不能正常存活等情况,主要由以下几个原因造成。
1.1遗传缺陷猫繁育存在相当数量的遗传缺陷,其中很多是致死类型。
有些仔猫在妊娠期已经在子宫内死亡并被母体吸收,一部分未到预产期即流产,而另一部分仔猫变成死胎被产出。
例如,死胎常被发现上腭裂、头骨发育不全、出生时大肠和小肠均在体外、没有发育完全,还有心脏畸形、肾脏畸形、泌尿道畸形、骨骼肌肉畸形等情况。
这些情况发生的原因可能是种公或者种母基因中存在遗传缺陷,或者种公、种母近交导致后代发生了遗传变异等。
1.2营养缺失妊娠期母猫需要大量营养供养自身和胎儿,蛋白摄取不足会导致母体营养不良,使胎儿缺乏母体的血液供应而引发营养不良。
不适当的食物也会造成母猫产出虚弱或者有疾病的仔猫。
2016年下半年11月全国翻译专业考试二级笔译实务真题(含官方参考译文-CATTI考试)
2016年11月全国翻译专业资格（水平）考试英语二级《笔译实务》试卷备注：该参考译文来源于官方指定的新世界出版社出版发行的《英语笔译实务真题解析2级》，仅供参考。
Section 1: English-Chinese translation(英译汉)(50points)Passage 1Everyone knows that weddings—the most elaborate and costly form of old school pageantry still acceptable in modern society—are stupid expensive. But it turns out Americans are now blowing even more money than ever before on what’s supposed to be the most magical day of any couple’s life together. Money that, to be honest, could be spent on much, much cooler stuff.The Knot released its annual wedding survey this week, with findings showing that couples are spending a mind-numbing average of $32,641 on matrimonial celebrations. The study includes data from nearly 18,000 pairs across the country. While the cost of a wedding varied greatly from city to city—reaching a nauseating high of $82,300 in Manhattan—the price was steep no matter where couples chose to get hitched. All this despite the fact that weddings (and marriages in general, honestly) can be a fairly impractical thing to invest in. Seriously, even 50 Cent doesn’t spend as much in a day as you’re spending on a reception band alone. Think about that.So rather than buying into the Marriage Industrial Complex on a union that may or may not work out, wouldn’t it make more sense to save your h ard-earned money by forgoing the big ceremony for the major expenses you’re likely to face in married life? Y ou know, like a mortgage. Or braces for your wallet-draining children-to-be. And if your fianceéis dead set on a fairytale wedding? Y ou could always just blow your financial load on a plenty fulfilling single life.With nearly $33,000 to spend in the life of a singledom, you could get pretty far when it comes to amenities and entertainment. Perhaps the best part of being free from the shackles of wedding planning is the opportunity to treat yourself. Like, why drop $1,400 on a frilly dress you’ll wear once before it turns to moth food when you can rock the most expensive shoes of the season and look great doing it?And while weddings are supposed to be all about the happy couple, everyone knows that’s bull, because you have to feed your guests and provide them entertainment and put a roof over their heads for a couple of hours and likely go into debt doing it.In addition to simply having fun, there are some more practical ways to spend your wedding purse as well. For instance, purchasing and providing for a nice housecat rather than dropping major dough on finger bling intended for fending off hotties for the rest of your life. Fluffy won’t care if you bring home someone new every weekend—he’ll just hate everyone indiscriminately.Passage 2My teenage son recently informed me that there is an Internet quiz to test oneself for narcissism. His friend had just taken it. “How did it turn out?” I asked. “He says he did great!” my son responded. “He got the maximum score!”When I was a child, no one outside the mental health profession talked about narcissism. People were more concerned by inadequate self-esteem, which at the time was thought to lurk behind nearly every issue. Like so many excesses of the 1970s, the self-love cult spun out of control and is now rampaging through our culture like Godzilla through Tokyo.A 2010 study in the journal Social Psychological and Personality Science found that the proportion of college students exhibiting narcissistic personality traits – based on their scores on the Narcissistic Personality Inventory, a widely used diagnostic test – has increased by more than half since the early 1980s, to 30 per cent.In their book, The Narcissism Epidemic, psychology professors Jean M. Twenge and W. Keith Campbell show that narcissism has increased as quickly as obesity has since the 1980s. Even our egos are getting fat. This is a costly problem. While full-blown narcissists often report high levels of personal satisfaction, they create havoc and misery around them. There is overwhelming evidence linking narcissism with reduced honesty and increased aggression. It’s notable for occasions like Valentine’s Da y that narcissists struggle to stay committed to romantic partners, in no small part because they find themselves superior.The full-blown narcissist might reply, “So what?” But narcissism isn’t an either-or characteristic. It’s more of a set of progre ssive symptoms (like alcoholism) than an identifiable state (like diabetes). Millions of Americans exhibit symptoms, but still have a conscience and a hunger for moral improvement. At the very least, they really do not want to be terrible people.A healthy self-love that leads to true happiness builds up one’s intrinsic well-being, as opposed to feeding shallow cravings to be admired. Cultivating amour de soi requires being fully alive at this moment, as opposed to being virtually alive while wondering what others think. The soulful connection with another person, the enjoyment of a beautiful hike alone, or a prayer of thanks over your sleeping child could be considered expressions of self-love.Section 2: Chinese-English translation(汉译英)(50points)Passage 1浙江杭州是风景秀美之地，也是创新活力之城。
日本“猫文化”之美学探微
日本“猫文化”之美学探微周雨扬州大学文学院，江苏扬州225002摘 要：自奈良时代以来，猫的形象在日本出现的范围越来越广，逐渐地形成一种特殊的文化现象。
为了探究日本“猫文化”所体现的美学思想，本文通过分析日本“猫文化”的来源以及它在日本社会中的表现，挖掘其折射的原始审美思维下的“万物有灵观”和日本美学之“秀美”范畴。
关键词：猫文化；表现；万物有灵观；秀美猫，在很早的时候就成为了人们生活中的重要伴侣。
时至今日，猫咪已经遍布世界各地，到处可以见到它们的身影。
在日本，猫的存在也渐渐地发展为一种特殊的猫文化。
一、日本“猫文化”的来源猫，并不是源产于日本，根据《广辞苑》记载，“日本家猫是奈良时代从中国传入的。
”奈良时代，日本派遣唐使远赴大唐学习佛教理论，在返回日本的途中，为了保护珍贵的佛教经书免受鼠患之灾，一并将唐朝的猫，即唐猫，引进到日本。
日本作为一个水稻种植的国家，人民饱受鼠灾的祸害，对老鼠深恶痛绝，唐猫由于捕鼠的天性，在一定程度上可以帮助日本解决鼠患问题，因而深受日本人民的喜爱与欢迎。
其次，唐猫作为舶来品，间接地激发起人们对于舶来品的崇拜心理，进而将对唐猫的拥有转化为身份和地位的象征，故而人们对唐猫的追求与喜爱更甚。
猫在最初引进到日本时，也只能由皇室和贵族抚养。
至安土桃山时代，武将丰臣秀吉为了解决愈发严重的鼠害这一问题，下令将所有被锁在府里的猫都松开绳锁，于是猫得以实现自由，可以在大街上自行游走，这样一来，平民百姓才真正得以接触这位传说中的猫。
江户时代，家猫与日本人的关系随着共同的生活变得越来越亲密，猫自身的功能和价值也愈发地被挖掘出来，比如猫的眼睛由于对光线较为敏感，通过它的眼睛可以判断时间，再比如猫具有驱赶捕食老鼠的天性，人们通过饲养猫咪保存家里的粮食，这些特有的能力和天性使得猫在日本人心目中的地位也越来越重要，日本人对猫的喜爱程度也逐渐加深。
自唐猫引进到日本之后，作为珍贵的舶来品只能由贵族和皇族抚养，由此，猫便占据了人们心目中不可替代的位置。
219326092_一例猫传染性鼻气管炎病诊治
兽医临床科学 | Veterinary clinical science632022.21·0 引言猫传染性鼻气管炎是引起以急性上呼吸道症状为特征的高度接触性传染病，潜伏期较短，受猫的免疫情况、年龄及集体健康度等因素影响，一般为2～5 d 。
该病与支原体、呼肠孤病毒、猫瘟病毒等引起的上呼吸道症状相似[1-3]。
该病最早报道于美国，并且分离出病毒，近年在我国也有报道[4]。
感染对象为猫科动物，病毒由可在眼结膜、鼻腔、咽喉、气管等处繁殖并排出体外，各种年龄段的猫均易感染[5-7]，主要临床症状表现为体温升高、精神沉郁、咳嗽、打喷嚏、流泪、眼鼻分泌物增多、口腔糜烂溃疡等，临床表现多样，但角膜炎及角膜溃疡对该病具有诊断意义[8]，不同年龄阶段的猫病死率差异较大，成年猫一般不死亡，但幼猫一旦发病可因呼吸困难导致死亡，死亡率较高，可达50%[9-11]。
死后剖检可发现主要病变在呼吸道。
患病动物终生带毒排毒，在应激条件下易反复。
通常治疗猫传染性鼻气管炎可注射干扰素[12]，并采取对症治疗，控制疱疹病毒，减少并发症对机体对损伤，同时，配合饲养、繁育、预防等手段来有效控制该病的发生。
有研究报道，临床主要用抗病毒药和抗生素类药物对其进行治疗，取得了较好的效果[13]。
1 病例介绍2022年7月28日，接诊一只80日龄的猫，该猫接诊时，鼻部有大量浓稠状粘性分泌物，眼结膜红肿且有粘性分泌物，大量流涎，体温40.5 ℃，精神萎靡。
2 诊断2.1 临床诊断通过观察，该猫鼻部有大量浓稠状粘性分泌物，同时鼻部周围有大量干燥的分泌物，眼部眼结膜红肿且有粘性分泌物，同时眼睛周围有大量干燥的分泌物，大量流涎，检测口部有少量溃疡，溃疡面较小，检测腹股沟体温，温度为41.5℃，同时该猫精神萎靡，无任何食欲，听诊肺部有啰音，肺泡呼吸音增强，同时出现腹式呼吸[14]。
2.2 实验室诊断①全血细胞计数。
通过全血细胞计数查看血液各细胞数量，每个疾病的产生都会影响血液中的某一个数值，通过全血细胞计数可以辅助医生对疾病进行诊断与排查，通常全血细胞计数可以使医生缩小疾病范围和对症治疗，同时也可以判断疾病的严重程度和疾病到达的作者简介：马祖轩（2002-），男，新疆巩留人，大专，研究方向：动物医学。
【最新精选】2016天猫考试部分答案
1、下列哪种情况，天猫有权终止和商家签订的《淘宝商城服务协议》？向淘宝商城提供伪造、变造的卖家资质或商品资料销售侵犯注册商标专用权的商品，或侵犯著作权的软件、出版物商品未达到淘宝商城的试运营考核或季度考核标准的都属于有权终止协议的范畴答案解析：《淘宝规则》2、下列哪些信息商家可以在店铺内及旺旺沟通过程中展现？展现淘宝商城购物网站链接展现商家在淘宝个人交易平台上的店铺链接设置或展现商家外部购物网站链接展现商家的银行帐号和其它支付方式答案解析：《淘宝规则》第五十四条3、下面哪类情况不违规？标题中写上与商品本身无关的热搜词裙子发布在男装类目下标题按照“品牌+商品名称”的形式进行发布使用官网图作主图，缺少所售服饰本身的实物图片答案解析：《淘宝规则》：若在商品类页面发布以下错误描述的商品或信息，每件天猫商品扣一分(但三天内累计扣分不超过七分)：1、商品信息中缺少标题、主图，或服饰类商品缺少所售商品本身的实物图片；3、商品标题等信息不实或者与本商品无关的；5、商品与所发布的类目或属性不符的；4、如何向淘宝索要商城发票？打客服电话不知道在“开票管理”系统中自助申请打运营电话答案解析：自2011年1月起，商家根据自己的需求自助向淘宝申请发票5、以下哪句回复买家的话语较为得体？你到底还要问多少问题，还买不买您好，很高兴为您服务，您刚咨询的那件宝贝我们还有很多货，亲喜欢的话可以直接拍下即可，我们当天就可以发货这个问题在宝贝描述里面写着了，自己看一下吧你脑子有问题吗，问这么白痴的问题答案解析：商家不允许出现对咨询、购买的买家进行任何形式的言语侮辱行为6、天猫违规处罚的计分周期是多久？每一自然年每周每一自然季度每一月答案解析：每一自然年7、以下哪种商品可以在天猫发布？诺基亚N72正品耐克出售-仅供参考西湖龙井招商世博会门票已售完勿拍答案解析：在淘宝分销平台外发布批发、代理、招商类商品，或仅发布联系方式、外网购物链接、实体店信息等非实际交易信息的，属于滥发信息8、如果买家对一件商家包邮的商品要求7天无理由退货，且并非商品质量问题引起的，退货的邮费如何分配？买家只需承担退货运费买家需要承担来回运费买家只需承担商家发货运费买家不需承担运费，全由商家承担答案解析：非商品质量问题而由买家发起的退换货行为:1)商家包邮产品由双方分别承担发货运费；2)非商家包邮产品，所有邮费均由买家承担。
自编童话故事350字：脏乱的小马_作文
自编童话故事350字：脏乱的小马2016年11月13日星期日天气：晴
森林里，住着小鸭、小猫和小马。
有一天，小鸭和小猫一起来小马家做客。
小鸭和小猫站在门口大声地说：“小马，小马，快来开门呀！我们来你家做客了！”小马听了高兴的说：“来了，来了，马上就来！”小马快速的打开门，客气地说：“快请进吧！”小鸭和小猫四处看了下小马的家，说：“小马，你家可真是乱啊！”小马听了，羞愧的底下了头。
小猫看情况有点尴尬，鼓励小马说：“没关系，我们一起帮你整理家。
”小马感激地说：“谢谢你们，真是我的好朋友！”
就这样，它们开始了大扫除。
小鸭来扫地，小马来拖地，小猫来擦桌子。
没过一会儿就完成了。
好了！现在小马的家变得锃光瓦亮的。
“小马，你以后不能再把家弄那么脏了，你看干干净净的家多舒服啊！”小猫说道。
“知道了！”小马开心的说。
从今往后，小马的家里再也没有脏乱过，干净整洁，一个很舒适的家。
猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建
于雯，孙慧敏，方晨捷，等．猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建［Ｊ］．畜牧与兽医，２０２４，５６（５）：１０７－１１２．ＹＵＷ，ＳＵＮＨＭ，ＦＡＮＧＣＪ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙ＆ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉ⁃ｃｉｎｅ，２０２４，５６（５）：１０７－１１２．猫杯状病毒反向遗传系统的建立及弱毒株的构建于雯１，孙慧敏２，方晨捷２，宋家升２∗，鲍恩东１∗（１．南京农业大学动物医学院，江苏南京㊀２１００９５；２．浙江迪福润丝生物科技有限公司，浙江杭州㊀３１００００）摘要：为了构建猫杯状病毒（ＦＣＶ）弱毒疫苗候选株，从杭州流行的ＦＣＶ毒株ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９中提取基因组ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分３段扩增获得ＦＣＶ全基因组，通过同源重组的方法将全长基因组克隆至已插入榔头状核酶（ＨａｍＲｚ）和丁型肝炎核酶（ＨｄｖＲｚ）的ＰＣＩ载体，获得中间质粒ｐＰＣＩ－ＦＣＶ；以ｐＰＣＩ－ＦＣＶ为模板扩增获得含ＨａｍＲｚ㊁ＨｄｖＲｚ和ＦＣＶ全基因组的产物ＦＣＶ－Ｈ，并将其连接到ＢＡＣ载体中获得含有ＦＣＶ全基因组的克隆ｐＢＡＣ－ＦＣＶ㊂将ｐＢＡＣ－ＦＣＶ转染猫肾细胞Ｆ８１连续传代后收获病毒㊂针对ＦＣＶ毒力相关的ＬＣ基因进行缺失，获得感染性克隆ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ，通过转染表达ＦＣＶ－ＶＰ１蛋白的猫肾细胞系进行病毒拯救㊂结果显示，拯救毒株ｒＢＡＣ－ＦＣＶ和ＬＣ基因缺失毒株ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ均可产生细胞病变；测序结果表明，拯救毒株的基因序列与亲本毒株ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９一致，且生长曲线与亲本毒相似，而基因缺失毒株的生长则慢于亲本毒株，产生的噬斑大小也明显小于亲本毒株，表明缺失ＬＣ基因后病毒毒力下降㊂结论：本研究成功构建了ＦＣＶ的反向遗传系统及基因缺失弱毒株，为后续弱毒疫苗研发和ＦＣＶ生物学特性研究奠定了基础㊂关键词：猫杯状病毒；反向遗传学技术；同源重组；基因缺失中图分类号：Ｓ８５２ ６５㊀㊀㊀文献标志码：Ａ㊀㊀㊀文章编号：０５２９－５１３０（２０２４）０５－０１０７－０６ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓＹＵＷｅｎ１，ＳＵＮＨｕｉｍｉｎ２，ＦＡＮＧＣｈｅｎｊｉｅ２，ＳＯＮＧＪｉａｓｈｅｎｇ２∗，ＢＡＯＥｎｄｏｎｇ１∗（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ；２．ＺｈｅｊｉａｎｇＤｉｆｆｅｒｅｎｃｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｃａｎｄｉｄａｔｅｓｔｒａｉｎｆｏｒａｔｔｅｎｕａｔｅｄｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ（ＦＣＶ）ｖａｃｃｉｎｅ，ｇｅｎｏｍｉｃＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｔＦＣＶｓｔｒａｉｎＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９ｉｎＨａｎｇｚｈｏｕ．ＴｈｅｅｎｔｉｒｅＦＣＶｇｅｎｏｍｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｉｎｔｈｒｅｅｓｅｇｍｅｎｔｓｕｓｉｎｇＲＴ－ＰＣＲｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅｆｕｌｌ－ｌｅｎｇｔｈｇｅｎｏｍｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏａＰＣＩｖｅｃｔｏｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ（ＨａｍＲｚ）ａｎｄｈｅｐａｔｉｔｉｓＤｒｉｂｏｚｙｍｅ（ＨｄｖＲｚ）ｔｈｒｏｕｇｈｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｐｌａｓｍｉｄｐＰＣＩ－ＦＣＶｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ．ＵｓｉｎｇｐＰＣＩ－ＦＣＶａｓａｔｅｍｐｌａｔｅ，ｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔＦＣＶ－Ｈｃｏｎ⁃ｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｅｎｔｉｒｅｇｅｎｏｍｅｏｆＨａｍＲｚ，ＨｄｖＲｚ，ａｎｄＦＣＶｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄ，ａｎｄｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｏａＢＡＣｖｅｃｔｏｒｔｏｏｂｔａｉｎａｃｌｏｎｅｄｐＢＡＣ－ＦＣＶｃｏｎｔａｉ⁃ｎｉｎｇｔｈｅｅｎｔｉｒｅｇｅｎｏｍｅｏｆＦＣＶ．Ｔｈｅｎ，ｐＢＡＣ－ＦＣＶｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏｃａｔｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌＦ８１ｆｏｒｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐａｓｓａｇｅｉｎｏｒｄｅｒｔｏｈａｒｖｅｓｔｔｈｅｖｉ⁃ｒｕｓ．ＤｅｌｅｔｉｏｎｏｆＬＣｇｅｎｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＦＣＶｖｉｒｕｌｅｎｃｅ，ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｃｌｏｎｅｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ，ａｎｄｖｉｒｕｓｒｅｓｃｕｅｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｂｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇｃａｔｋｉｄｎｅｙｃｅｌｌｌｉｎｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅＦＣＶ－ＶＰ１ｐｒｏｔｅｉｎ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｓｃｕｅｄｓｔｒａｉｎｒＢＡＣ－ＦＣＶａｎｄｔｈｅＬＣｇｅｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｓｔｒａｉｎｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣｃｏｕｌｄｂｏｔｈｃａｕｓｅｃｅｌｌｕｌａｒｌｅｓｉｏｎｓ．ＴｈｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｅｒｅｓｃｕｅｄｓｔｒａｉｎｗａｓｉｎｄｅｅｄｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｗｉｔｈｔｈｅｐａｒｅｎｔｓｔｒａｉｎＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９，ａｎｄｉｔｓｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｗａｓｓｉｍｉｌａｒｔｏｔｈａｔｏｆｔｈｅｐａｒｅｎｔｓｔｒａｉｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｇｅｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔｓｔｒａｉｎｗａｓｓｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｐａｒｅｎｔｓｔｒａｉｎ，ａｎｄｔｈｅｓｉｚｅｏｆｔｈｅｇｅｎｅｒａｔｅｄｐｌａｑｕｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｍａｌｌｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｐａｒｅｎｔｓｔｒａｉｎ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄａｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｖｉｒｕｓｖｉｒｕｌｅｎｃｅａｆｔｅｒｔｈｅＬＣｇｅｎｅｗａｓｄｅｌｅｔｅｄ．ＴｈｅａｂｏｖｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｙｓｔｅｍｏｆＦＣＶｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ａｎｄａｇｅｎｅｄｅｆｉｃｉｅｎｔａｔｔｅｎｕａｔｅｄｓｔｒａｉｎｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ；ｗｈｉｃｈｌａｉｄｔｈｅｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｔｔｅｎｕａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅｓａｎｄｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＦＣＶｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＦＣＶ；ｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ；ｇｅｎｅｄｅｌｅｔｉｏｎ㊀收稿日期：２０２３－０９－１１；修回日期：２０２４－０３－１８基金项目：江苏省农业科技自主创新资金项目［ＣＸ（２２）２０１６］；南京农业大学校企合作项目（技术服务类）第一作者：于雯，女，硕士研究生∗通信作者：鲍恩东，教授，博导，研究方向为免疫病理及新兽药研发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｂ＿ｅｎｄｏｎｇ＠ｎｊａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ㊂㊀㊀猫杯状病毒（ｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ，ＦＣＶ）属于杯状病毒科㊁水疱疹病毒属的成员［１］，几乎可感染所有的猫科动物，感染后所表现的临床症状主要为口腔溃疡㊁结膜炎和肺炎等［２－３］㊂ＦＣＶ感染后的发病率很高，但死亡率较低㊂不过，最近报道出现了可引起全身性症状的强毒株［３］，感染ＦＣＶ强毒株后可导致出现全身性炎症反应㊁高热㊁弥散性血管内凝血和高死亡率［４－５］㊂ＦＣＶ为单股正链ＲＮＡ病毒，基因组全长约为７ ７ｋｂ，５ᶄ端与病毒组连接蛋白（ＶＰｇ）相连，３ᶄ端多聚腺苷酸化［６－７］㊂基因组有３个开放阅读框（ＯＲＦ），分别为ＯＲＦ１㊁ＯＲＦ２和ＯＲＦ３，其中ＯＲＦ１编码主要的结构蛋白［８］；ＯＲＦ２编码衣壳蛋白，经过水解后形成成熟的衣壳蛋白（ＶＰ１）和衣壳蛋白前体（ＬＣ），ＬＣ与病毒毒力相关［９–１１］；ＯＲＦ３编码ＦＣＶ所特有的ＶＰ２蛋白，ＶＰ２蛋白与病毒的包装和成熟相关［１２］㊂目前ＦＣＶ感染的预防主要依靠疫苗接种，由于ＦＣＶ作为ＲＮＡ病毒，其遗传进化速率较高，仅靠单一的疫苗株很难对ＦＣＶ产生全面而有效的保护，此外感染ＦＣＶ并康复后的动物也会持续带毒㊁排毒［１３］，这也给ＦＣＶ感染的防控增加了难度，因此有必要探索更为有效的疫苗产品以保护猫科动物的健康［１４］㊂本研究利用反向遗传技术，将ＦＣＶ全基因组序列同源重组至ＰＣＩ和ＢＡＣ载体中，构建ｐＰＣＩ－ＦＣＶ和ｐＢＡＣ－ＦＣＶ质粒，转染Ｆ８１细胞后拯救出病毒ｒＰＣＩ－ＦＣＶ和ｒＢＡＣ－ＦＣＶ，之后在ｐＢＡＣ－ＦＣＶ的基础上对部分ＬＣ基因进行缺失，并在Ｆ８１－ＶＰ１细胞上获得ＬＣ基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ，观察分析该毒株的体外生长特性，为进一步研究ＦＣＶ的组织特异性㊁致病机制㊁基因组功能以及新型疫苗的研发奠定基础㊂１㊀材料与方法１ １㊀试验用细胞及试剂ＦＣＶ杭州流行株（ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９），猫肾细胞（Ｆ８１㊁Ｆ８１－ＶＰ１细胞），载体质粒ＰＣＩ和细菌人工染色体（ＢＡＣ），均由浙江迪福润丝生物科技有限公司提供；ＵｎｉｃｌｏｎｅＯｎｅＳｔｅｐＳｅａｍｌｅｓｓＣｌｏｎｉｎｇＫｉｔ重组酶㊁ＥｆｆｉｃｏｍＳｔｂｌ３ＣｈｅｍｉｃａｌｌｙＣｏｍｐｅｔｅｎｔＣｅｌｌ感受态细胞，购自金沙生物；ＰｒｉｍｅＳＴＡＲＨＳ高保真ＰＣＲ酶㊁２ˑＲａｐｉｄＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘ㊁ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ㊁ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ㊁ＨｉＳｃｒｉｐｔＩＩＯｎｅＳｔｅｐＲＴ－ＰＣＲＫｉｔ，均购自诺唯赞生物科技有限公司；２ˑＴ８Ｈｉｇｈ－ＦｉｄｅｌｉｔｙＭａｓｔｅｒＭｉｘ购自擎科生物科技股份有限公司；普通琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒购自天根生化科技有限公司；ＰｌａｓｓｍｉｄＭａｘｉＫｉｔ试剂盒购自Ｑｉａｇｅｎ；转染试剂Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；核酸提取试剂盒Ｅ Ｚ Ｎ ＡＶｉｒａｌＲＮＡＫｉｔ购自广州飞扬生物工程有限公司；草酸铵结晶紫染色液购自上海麦克林生化科技有限公司；４％多聚甲醛固定液购自ＰｈｙｇｅｎｅＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ㊂㊀１ ２㊀引物设计与合成参考ＧｅｎＢａｎｋ中登录的ＦＣＶ基因序列设计引物，引物由擎科生物科技股份有限公司进行合成，引物信息如表１所示㊂表１㊀引物序列引物名称引物序列（５ᶄң３ᶄ）ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９－Ｆ１ＧＴＡＡＡＡＧＡＡＡＴＴＧＧＡＧＡＣＡＡＴＧＦＣＶ－ＰＤ１－１－ＲＣＧＧＣＴＣＣＡＣＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＧＦＣＶ－ＰＤ１－２－ＦＣＡＡＡＧＣＧＴＧＧＡＧＣＣＧＡＧＴＧＴＴＧＦＣＶ－ＰＤ１－２－ＲＧＴＧＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＣＣＡＣＦＣＶ－ＰＤ２－ＦＡＡＡＧＧＣＧＴＡＣＡＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＴＧＦＣＶ－ＰＤ２－ＲＣＣＣＴＧＧＧＧＴＴＡＧＧＣＧＣＴＡＡＡＡＧＣＧＰＤ－Ｈａｍ－ＨＤＶ－ＦＴＧＴＴＡＡＧＣＧＴＣＴＧＡＴＧＡＧＴＣＣＧＴＧＰＤ－Ｈａｍ－ＨＤＶ－ＲＴＣＡＴＧＴＣＴＧＣＴＣＧＣＣＡＡＡＡＡＡＣＣＣＣＴＣＡＡＧＺＴ－ＰＣＩ－ＧＺ－ＦＧＧＣＧＡＧＣＡＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＡＴＧＡＧ⁃ＴＴＴＧＺＴ－ＰＣＩ－ＧＺ－ＲＡＴＣＡＧＡＣＧＣＴＴＡＡＣＡＣＣＴＡＴＡＧＴＧＡＧＴＣＧＴＡＴＴ⁃ＡＡＴＴＴＣＧＺＴ－ＹＪ－ＦＣＧＣＣＴＡＡＣＣＣＣＡＧＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＴＧＧＣＡＴＣＴＣＣＺＴ－ＹＪ－ＲＴＣＣＡＡＴＴＴＣＴＴＴＴＡＣＧＡＣＴＡＴＡＧＧＡＡＴＴＣＣＴＴＴＣ⁃ＣＴＡＴＡＧＺＴ－ＢＡＣ－ＦＧＧＣＣＧＧＣＡＴＧＧＴＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＣＧＺＴ－ＢＡＣ－ＲＣＣＣＴＡＴＡＧＴＧＡＧＴＣＧＴＡＴＴＡＡＴＧＺＴ－ΔＬＣ－ＦＣＧＡＡＧＴＴＴＧＡＧＣＡＴＧＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣ⁃ＡＣＣＡＣＺＴ－ΔＬＣ－ＲＣＡＴＧＣＴＣＡＡＡＣＴＴＣＧＡＡＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧＦＣＶ－Ｆ１－ＲＴＣＡＧＣＣＡＴＡＡＣＣＡＧＣＡＡＡＣＴＴＧＦＣＶ－Ｆ２－ＦＧＴＣＴＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＡＣＣＣＴＧＦＣＶ－Ｆ２－ＲＣＡＣＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＡＣＡＡＡＴＴＧＦＣＶ－Ｆ２－ＲＴＣＡＴＡＧＡＡＧＣＣＧＧＴＧＡＴＡＡＴＴＧＦＣＶ－Ｆ３－ＦＣＡＣＣＧＧＣＴＴＣＴＡＴＧＡＣＡＡＡＴＴＧＦＣＶ－Ｆ３－ＲＣＡＧＧＧＧＧＴＣＣＴＧＴＴＡＧＧＡＴＧＦＣＶ－Ｆ４－ＦＣＣＴＧＡＴＧＴＣＴＡＣＡＣＴＧＧＡＴＧＦＣＶ－Ｆ４－ＲＣＧＧＣＴＣＣＡＣＧＣＴＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＧＹＺ－ＬＣ－ＦＡＴＧＣＡＡＧＴＣＡＡＣＡＴＧＧＴＧＴＧＹＺ－ＬＣ－ＲＡＴＧＣＴＣＡＡＧＧＴＡＧＧＧＧＴＴＧＡＧ１ ３㊀ＦＣＶ全基因组感染性克隆的构建提取毒株ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９的ＲＮＡ，用引物ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－Ｆ１９－Ｆ１／ＦＣＶ－ＰＤ１－１－Ｒ㊁ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｒ和ＦＣＶ－ＰＤ２－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ２－Ｒ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增，获得产物ＰＤ１－１㊁ＰＤ１－２和ＰＤ２㊂用引物ＰＤ－Ｈａｍ－ＨＤＶ－Ｆ／ＰＤ－Ｈａｍ－ＨＤＶ－Ｒ扩增含有ＨａｍＲｚ和ＨｄｖＲｚ片段的合成基因获得产物ＰＤ３，利用引物ＺＴ－ＰＣＩ－ＧＺ－Ｆ／ＺＴ－ＰＣＩ－ＧＺ－Ｒ扩增ＰＣＩ载体，将产物ＰＤ３同源重组至载体ＰＣＩ载体中，获得改造后的载体并将其命名为ＰＣＩᶄ㊂用引物ＺＴ－ＹＪ－Ｆ／ＺＴ－ＹＪ－Ｒ扩增载体ＰＣＩᶄ，将产物ＰＤ１－１㊁ＰＤ１－２和ＰＤ２同源重组至ＰＣＩᶄ载体中，３个产物插入的位置在片段ＨａｍＲｚ和ＨｄｖＲｚ中间，获得中间质粒ｐＰＣＩᶄ－ＦＣＶ㊂以ｐＰＣＩᶄ－ＦＣＶ为模板，引物ＢＡＣ－ＦＣＶ－Ｆ／ＢＡＣ－ＦＣＶ－Ｒ进行ＰＣＲ扩增获得产物ＦＣＶ－Ｈ，ＦＣＶ－Ｈ片段包含ＦＣＶ全长基因组㊁ＨａｍＲｚ和ＨｄｖＲｚ片段，用引物ＺＴ－ＢＡＣ－ＦＣＶ－Ｆ／ＺＴ－ＢＡＣ－ＦＣＶ－Ｒ，扩增ＢＡＣ载体使其线性化，用同源重组的方法将ＦＣＶ－Ｈ和ＢＡＣ载体进行连接，获得含有ＦＣＶ全基因组感染性克隆质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ，引物序列详见表１㊂１ ４㊀ＦＣＶ毒力基因的敲除选择与病毒毒力相关的ＬＣ基因进行缺失，以ｐＢＡＣ－ＦＣＶ为模板，用引物ＺＴ－ΔＬＣ－Ｆ／ＺＴ－ΔＬＣ－Ｒ进行线性化扩增，上下游引物分别在缺失基因的两端，获得产物ＦＣＶ－ΔＬＣ，将线性化的ＦＣＶ－ΔＬＣ进行连接，得到ＬＣ基因缺失质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ㊂１ ５㊀病毒拯救按照ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染试剂说明，将４μｇｐＢＡＣ－ＦＣＶ转染到生长密度约为８０％的Ｆ８１细胞上，ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ质粒则分别转染到Ｆ８１和Ｆ８１－ＶＰ１细胞中，置于３７ħ㊁５％ＣＯ２环境中培养，之后进行细胞传代（每２ｄ传代１次），传代培养过程中随时利用显微镜观察有无细胞病变（ＣＰＥ），当出现ＣＰＥ时收获病毒㊂１ ６㊀拯救病毒的鉴定提取收获的病毒ＲＮＡ，用表１中的引物ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９－Ｆ１／ＦＣＶ－Ｆ１－Ｒ㊁ＦＣＶ－Ｆ２－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ２－Ｒ㊁ＦＣＶ－Ｆ３－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ３－Ｒ和ＦＣＶ－Ｆ４－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ４－Ｒ对Ｆ８１细胞上拯救出的ｒＢＡＣ－ＦＣＶ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增，验证是否拯救出含有ＦＣＶ全基因组的病毒，引物ＹＺ－ＬＣ－Ｆ／ＹＺ－ＬＣ－Ｒ对基因缺失毒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增以此验证病毒的ＬＣ段基因是否缺失，将ＲＴ－ＰＣＲ产物送金唯智生物科技有限公司进行测序㊂１ ７㊀ＦＣＶ重组毒的生物学特性分析１ ７ １㊀缺失毒与亲本毒生长动力学比较将亲本毒和拯救病毒按照感染复数（ＭＯＩ）为０ ０１感染生长密度约为８０％的Ｆ８１细胞，置于３７ħ㊁５％ＣＯ２环境中培养，分别在感染后２４㊁４８㊁７２和９６ｈ收获病毒，每个时间点重复测定３次，以病毒的感染时间为横坐标㊁病毒不同时间点组织半数感染量（ＴＣＩＤ５０）的数值为纵坐标，用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ软件绘制病毒生长曲线㊂１ ７ ２㊀缺失毒的传代稳定性验证将缺失毒接种到生长良好的Ｆ８１细胞上，４８ｈ后观察细胞病变，当细胞出现完全病变后收获病毒并接种到新的Ｆ８１细胞上㊂连续传代５次之后提取病毒ＲＮＡ并用引物ＹＺ－ＬＣ－Ｆ／ＹＺ－ＬＣ－Ｒ进行ＲＴ－ＰＣＲ验证㊂１ ７ ３㊀缺失毒的噬斑染色试验在铺有Ｆ８１细胞的６孔细胞培养板中按照５００ＴＣＩＤ５０／ｍＬ的剂量分别接种亲本毒ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９㊁拯救病毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ和基因缺失病毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ㊂５ｈ后弃去培养液并加入１ ５ｍＬ１％低熔点琼脂糖，待琼脂糖冷却凝固后置于５％ＣＯ２环境中培养㊂之后每２４ｈ在显微镜下观察噬斑大小，待其噬斑大小不再变化后，向接种病毒的孔中加入１ｍＬ多聚甲醛进行固定，静置３０ｍｉｎ后吸出，再加入１ｍＬ草酸铵结晶紫染色液，静置２０ｍｉｎ后小心去掉琼脂糖凝胶块，用水清洗至噬斑清晰后比较两种病毒噬斑的大小㊂２㊀结果２ １㊀ＦＣＶ全基因组感染性克隆的构建以ｐＢＡＣ－ＦＣＶ质粒为模板，使用引物ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９－Ｆ１／ＦＣＶ－ＰＤ１－１－Ｒ㊁ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｒ和ＦＣＶ－ＰＤ３－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ３－Ｒ进行ＰＣＲ验证，分别获得１９２５㊁１６３０和４１６２ｂｐ大小条带，与预期结果相符㊂测序结果也显示与亲本毒株的基因序列一致，成功构建出包含有ＦＣＶ全基因组的感染性单克隆ｐＢＡＣ－ＦＣＶ（图１）㊂Ｍ．ＤＬ５０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．引物对ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９－Ｆ１／ＦＣＶ－ＰＤ１－１－Ｒ的ＰＣＲ产物；２．引物对ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ１－２－Ｒ的ＰＣＲ产物；３．引物对ＦＣＶ－ＰＤ３－Ｆ／ＦＣＶ－ＰＤ３－Ｒ的ＰＣＲ产物㊂图１㊀质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ的ＰＣＲ验证２ ２㊀ＦＣＶ毒力基因的敲除以ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ质粒为模板，用引物对ＹＺ－ＬＣ－Ｆ／ＹＺ－ＬＣ－Ｒ进行ＰＣＲ验证，获得与预期４５１ｂｐ大小一致的条带，测序结果也显示ＬＣ部分基因已经缺失，成功构建出ＦＣＶ的ＬＣ基因缺失的感染性克隆ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ（图２）㊂２ ３㊀病毒的拯救将构建的质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ转染Ｆ８１细胞，经传代后产生明显的ＣＰＥ，主要表现为细胞脱落，细胞变圆核固缩，聚集成葡萄串状；基因缺失的质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ同时转染Ｆ８１和Ｆ８１－ＶＰ１细胞系后，连续传代，转染至Ｆ８１－ＶＰ１细胞系的细胞可观察到ＣＰＥ，转染至Ｆ８１连续传代７次后仍未观察到ＣＰＥ，对照组均未产生ＣＰＥ（图３）㊂Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．引物对ＹＺ－ＬＣ－Ｆ／ＹＺ－ＬＣ－Ｒ的ＰＣＲ产物㊂图２㊀质粒ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ的ＰＣＲ验证Ａ．ｐＢＡＣ－ＦＣＶ转染细胞；Ｂ．正常Ｆ８１细胞；Ｃ．ｐＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ转染细胞；Ｄ．正常Ｆ８１－ＶＰ１细胞㊂图３㊀拯救病毒的细胞病变２ ４㊀拯救病毒的验证提取ｒＢＡＣ－ＦＣＶ的ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ验证，ｒＢＡＣ－ＦＣＶ扩增后获得４３５㊁５８１㊁５４７和５４９ｂｐ的条带，与预期大小一致，且ＲＴ－ＰＣＲ产物的测序结果与亲本毒株序列一致，成功拯救出含有ＦＣＶ全基因组的病毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ㊂２ ５㊀病毒的生物学特性分析２ ５ １㊀生长动力学比较亲本毒ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９㊁拯救毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ和基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ在Ｆ８１细胞中增殖特性如图５所示㊂不同时间点的病毒滴度生长曲线显示，拯救出含有ＦＣＶ全基因组的病毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ的生长趋势与亲本毒株基本一致，但病毒滴度比亲本病毒略低㊂基因缺失毒株ＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ在培养的前４８ｈ其生长较为缓慢，亲本毒株㊁拯救毒和基因缺失毒的病毒滴度在培养至７２ｈ之后趋于稳定㊂Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．引物对ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９－Ｆ１／ＦＣＶ－Ｆ１－Ｒ的ＰＣＲ产物；２．引物对ＦＣＶ－Ｆ２－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ２－Ｒ的ＰＣＲ产物；３．引物对ＦＣＶ－Ｆ３－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ３－Ｒ；４．引物对ＦＣＶ－Ｆ４－Ｆ／ＦＣＶ－Ｆ４－Ｒ的ＰＣＲ产物㊂图４㊀ｒＢＡＣ－ＦＣＶ的ＲＴ－ＰＣＲ验证图５㊀ＦＣＶ亲本毒株与拯救毒株生长动力学比较２ ５ ２㊀缺失毒的传代稳定性验证ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ缺失毒经连续传代，提取每代病毒的ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ验证，电泳结果显示获得与目标大小相符合的条带（４５１ｂｐ）（图６），测序结果也与预期一致，说明本试验拯救出了相对稳定的ＬＣ基因缺失病毒㊂Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；１．第１代；２．第２代；３．第３代；４．第４代；５．第５代㊂图６㊀ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ各代的ＲＴ－ＰＣＲ验证２ ５ ３㊀病毒的噬斑染色将亲本毒株ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９㊁拯救毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ和基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ进行噬斑染色，结果显示ＦＣＶ－ＤＦ０１９和ｒＢＡＣ－ＦＣＶ产生的斑块大小基本相当，但是基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ产生的噬斑大小明显小于亲本毒株和拯救毒株（图７），表明ＬＣ基因的缺失影响了病毒的复制和侵袭㊂Ａ．ＦＣＶ－ＨＺ－ＤＦ－１９；Ｂ．ｒＢＡＣ－ＦＣＶ；Ｃ．ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬ㊂图７㊀亲本毒株与拯救毒株噬斑染色３㊀讨论目前，疫苗接种仍是宠物猫主要传染性疾病防控的核心策略，疫苗多为灭活疫苗和减毒活疫苗，多以联苗和多价苗的形式存在［１５］，这些疫苗毒株往往是通过大量筛选，旨在得到具有更广泛交叉保护性的毒株［１６］㊂然而，ＦＣＶ基因组序列具有高度的遗传变异性，这就使得市场上的疫苗产品难以及时应对该病毒的变异㊂应用反向遗传学技术可以特定地对ＦＣＶ的基因组进行突变㊁缺失或插入操作，为开发具有更强免疫效果和安全性更高的新型ＦＣＶ疫苗提供了可能㊂本研究在拯救基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ的过程中，在Ｆ８１细胞上连续传代７次仍未观察到ＣＰＥ，而在转染Ｆ８１－ＶＰ１细胞上可以观察到ＣＰＥ，ＦＣＶ－ＶＰ１细胞系可以表达整个ＯＲＦ２的基因序列，证明在拯救ＬＣ基因缺失的病毒过程中，通过细胞系反式补充可以协助拯救病毒，拯救出的基因缺失毒ｒＢＡＣ－ＦＣＶ－ΔＬＣ感染Ｆ８１细胞可观察到ＣＰＥ的产生，只是产生ＣＰＥ的时间和程度均不及含有ＦＣＶ全基因组的拯救毒和亲本毒，说明即便形成具有侵袭力的病毒粒子，ＬＣ的缺失也很大程度上影响了病毒的侵袭力和复制能力，与报道的ＬＣ与产生细胞病变有关［１７］相符合㊂ＦＣＶ作为无囊膜病毒需要借助细胞表面受体分子来完成病毒吸附和穿入，病毒与受体发生相互作用的差异性会影响后续细胞信号的传导㊁内吞摄入和膜穿透等下游事件的发生㊂已有研究表明，连接黏附分子Ａ（ｆＪＡＭ－Ａ）是ＦＣＶ感染细胞所必备的，而ＶＰ１表面的残基变化会影响病毒的组装和与ｆＪＡＭ－Ａ的相互识别［１８］，推测ＬＣ序列的存在可能影响ＶＰ１残基的形态，导致病毒侵袭力的变化㊂此外，ＬＣ过度表达会对细胞产生毒性作用，因此构建的细胞系表达整个ＯＲＦ２序列，可减轻对细胞的影响㊂即便如此Ｆ８１－ＶＰ１细胞系在镜下观察也比普通Ｆ８１细胞更为细长，也更易产生死细胞㊂更有研究发现，ＬＣ有利于同属杯状病毒科的诺如病毒在细胞中高效复制［１９］㊂保留ＬＣ部分构建的嵌合兔出血热病毒可以在体外拯救［９］㊂进一步研究使用互补细胞系提供病毒复制和组装所需要的基因，或利用ＬＣ协助其他杯状病毒科病毒在体外培养，值得进一步探索㊂参考文献：［１］㊀ＯＫＡＴ，ＴＡＫＡＧＩＨ，ＴＯＨＹＡＹ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｏｖｅｌｓｉｎｇｌｅｓｔｅｐｒｅｖｅｒｓｅｇｅｎｅｔｉｃｓｓｙｓｔｅｍｆｏｒｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌＭｅｔｈ⁃ｏｄｓ，２０１４，２０７：１７８－１８１．［２］㊀ＳＰＩＲＩＡＭ．Ａｎｕｐｄａｔｅｏｎｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＳｃｈｗｅｉｚＡｒｃｈＴｉｅｒ⁃ｈｅｉｌｋｄ，２０２２，１６４（３）：２２５－２４１．［３］㊀ＵＲＢＡＮＣ，ＬＵＴＴＥＲＭＡＮＮＣ．ＭａｊｏｒｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃＲＮＡｏｆｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２０２０，９４（１５）：ｅ００２８０－２０．［４］㊀ＨＯＷＡＲＤＭＪ，ＣＯＥＬＥＮＲＪ，ＭＡＣＫＥＮＺＩＥＪＳ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｍ⁃ｍｏｂｉｌｉｓｅｄｍｕｒｒａｙｖａｌｌｅｙｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓｖｉｒｕｓＲＮＡｕｓｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｒｏｂｅｓｗｉｔｈｖａｒｙｉｎｇｄｅｇｒｅｅｓｏｆｍｉｓｍａｔｃｈ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌＭｅｔｈｏｄｓ，１９９１，３４（３）：３３３－３４１．［５］㊀ＲＡＤＦＯＲＤＡＤ，ＤＡＷＳＯＮＳ，ＲＹＶＡＲＲ，ｅｔａｌ．Ｈｉｇｈｇｅｎｅｔｉｃｄｉ⁃ｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｃａｐｓｉｄｇｅｎｅｉｎｅｎｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｆｅｃｔｅｄｃａｔｃｏｌｏｎｉｅｓ［Ｊ］．ＶｉｒｕｓＧｅｎｅｓ，２００３，２７（２）：１４５－１５５．［６］㊀ＲＡＤＦＯＲＤＡＤ，ＣＯＹＮＥＫＰ，ＤＡＷＳＯＮＳ，ｅｔａｌ．Ｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉ⁃ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＶｅｔＲｅｓ，２００７，３８（２）：３１９－３３５．［７］㊀ＲＯＮＧＳ，ＬＯＷＥＲＹＤ，ＦＬＯＹＤ－ＨＡＷＫＩＮＳＫ，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒ⁃ｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎａｖｉｒｕｌｅｎｔＦＣＶｓｔｒａｉｎｗｉｔｈａｂｒｏａｄｓｅｒｕｍｃｒｏｓｓ－ｎｅｕｔｒａｌ⁃ｉｚａｔｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔｃｈａｌｌｅｎｇｅｏｆａｈｉｇｈｌｙｖｉｒｕｌｅｎｔｖｓｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ［Ｊ］．ＶｉｒｕｓＲｅｓ，２０１４，１８８：６０－６７．［８］㊀ＭＡＯＪ，ＹＥＳ，ＤＥＮＧＪ，ｅｔａｌ．ＦｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓＰ３９ｉｎｈｉｂｉｔｓｉｎ⁃ｎａｔｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓｂｙａｕｔｏｐｈａｇｉｃｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄｉｎ⁃ｄｕｃｉｂｌｅｇｅｎｅＩ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０２３，２４（６）：５２５４．［９］㊀ＣＨＥＮＧＪ，ＴＡＮＧＡ，ＣＨＥＮＪ，ｅｔａｌ．ＰｓｅｕｄｏＲＨＤＶｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｗｉｔｈｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅａｓｖｅｃｔｏｒｈａｓｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｗｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌＭｅｔｈｏｄｓ，２０２２，３０７：１１４５７２．［１０］ＡＢＥＮＴＥＥＪ，ＳＯＳＮＯＶＴＳＥＶＳＶ，ＳＡＮＤＯＶＡＬ－ＪＡＩＭＥＣ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｌｅａｄｅｒｏｆｔｈｅｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２０１３，８７（６）：３００３－３０１７．［１１］ＰＥÑＡＦＬＯＲ－ＴÉＬＬＥＺＹ，ＣＨÁＶＥＺ－ＭＵＮＧＵÍＡＢ，ＬＡＧＵＮＥＳ－ＧＵＩＬＬÉＮＡ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｌｅａｄｅｒｏｆｔｈｅｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｈａｓｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｖｉｒｏｐｏｒｉｎ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｓｅｓ，２０２２，１４（３）：６３５．［１２］ＳＯＳＮＯＶＴＳＥＶＳＶ，ＢＥＬＬＩＯＴＧ，ＣＨＡＮＧＫＯ，ｅｔａｌ．Ｆｅｌｉｎｅｃａｌｉ⁃ｃｉｖｉｒｕｓＶＰ２ｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｖｉｒｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２００５，７９（７）：４０１２－４０２４．［１３］祖少坡，田进，吴红霞，等．猫杯状病毒２２８０株反向遗传系统的构建［Ｊ］．中国预防兽医学报，２０１７，３９（１）：２０－２３．［１４］刘光清，郭建宏，刘在新，等．反向疫苗学及其应用前景［Ｊ］．中国生物制品学杂志，２００５（２）：１６８－１７０．［１５］王一鸣．５株猫杯状病毒致病性及免疫原性的比较研究［Ｄ］．长春：吉林农业大学，２０１７．［１６］ＹＡＮＧＹ，ＬＩＵＺ，ＣＨＥＮＭ，ｅｔａｌ．ＣｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｏｔｙｐｅｓｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＶＰ１ｇｅｎｅｏｆｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓａｎｄｓｔｕｄｙｏｆｃｒｏｓｓ－ｐｒｏ⁃ｔｅｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｇｅｎｏｔｙｐｅｓ［Ｊ］．ＦｒｏｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０２３，１４：１２２６８７７．［１７］ＡＢＥＮＴＥＥＪ，ＳＯＳＮＯＶＴＳＥＶＳＶ，ＳＡＮＤＯＶＡＬ－ＪＡＩＭＥＣ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｌｅａｄｅｒｏｆｔｈｅｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２０１３，８７（６）：３００３－３０１７．［１８］ＬＵＺ，ＬＥＤＧＥＲＷＯＯＤＥＤ，ＨＩＮＣＨＭＡＮＭＭ，ｅｔａｌ．Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄｓｕｒｆａｃｅｒｅｓｉｄｕｅｓｏｎｔｈｅｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｃａｐｓｉｄａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｉｎ⁃ｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒｆｅｌｉｎｅｊｕｎｃｔｉｏｎａｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅＡ（ｆＪＡＭ－Ａ）［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２０１８，９２（８）：ｅ０００３５－１８．［１９］ＣＨＡＮＧＫＯ，ＧＥＯＲＧＥＤＷ，ＰＡＴＴＯＮＪＢ，ｅｔａｌ．Ｌｅａｄｅｒｏｆｔｈｅｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓｐｒｏｍｏｔｅｓｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｏｒｗａｌｋｖｉ⁃ｒｕｓｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．ＪＶｉｒｏｌ，２００８，８２（１９）：９３０６－９３１７．。
不小心遇到个快递小鲜肉，好想撩他。。
不⼩⼼遇到个快递⼩鲜⾁，好想撩他。
⼩扣柴扉2016 楼主2016-10-27 11:22前半部分从之前的⼀个帖⼦转来，看过的妖精们请⾃动忽视~没想到这种事会发⽣在我⾝上，真的不知道该怎么办了。
⾸先我不是对快递员这个职业有任何歧视，因为他们也是付出了⾃⼰的劳动，尤其是突然喜欢上这个⼩快递员后，我更加觉得靠⾃⼰的⼒⽓吃饭的男⼈很man。
只是从来，从来没想过，⼀向中规中矩的我会有这种不着边际的念头。
说⼀下我们是怎么开始的，当然了，其实并没有开始，我是想说我是怎么开始动⼼的。
我在⼀个事业单位做办公室⼯作，平时⽐较清闲，很喜欢⽹购，也喜欢淘各种便宜东西。
有时东西买的多了⼀天可以收到好⼏个快递，我⼀般都是把快递寄到单位的。
这是背景。
当然，也见过很多送快递的⼩哥，都只是打电话，接电话，然后取快递⾛⼈。
那天，突然不⼀样了。
我正在办公室看某宝，接到⼀个电话，猜想应该是快递，我接起电话，对⽅说“你好，请问是*⽂亮吗？”我的⼼突然特别紧张。
其实，我的名字是叫*⽂靓，说名字应该没事吧，反正全国有好多同名同姓的。
我爸妈给我取的名字是靓，我介绍⾃⼰名字是发⾳也是“*⽂静”，但是从⼩我们家⾥都叫我“亮亮”的发⾳的⼩名，后来才知道这是个多⾳字，可以发“亮”的⾳，就像明星张靓颖，也可以发“静”的⾳，为什么特意强调名字呢，因为只有我⾼中以前的同学叫我“亮亮”，⼤学以后的同学和同事都是叫我“⽂静”。
⽽电话⾥叫我“*⽂亮”的⼈突然让我想到了⾼中时的初恋，他们有⼀个共同点，声⾳⾮常好听，⽽我⼜是声⾳控，我突然呆了⼀下。
对⽅⼜说“你好，*⽂亮是吧？”我说“我叫*⽂静。
”“哦，不好意思，请你来拿⼀下快递。
”挂掉电话，我好⼀会⼉才回过神。
哎，说到初恋，也是说来话长。
我下楼到门⼝，看见某通的快递三轮车，我⾛过去，开始是⼀个背影，在车⾥找东西，我没觉得什么特别的，我⾛到他⾝后，说“你好，拿快递，*⽂静的。
”他转过⾝，把快递给我，然后冲我笑了笑，说“不好意思啊，把你名字念错了。
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猫下泌尿系统综合征的治疗体会
猫下泌尿系统综合征的治疗体会2021年第2期猫下泌尿系统综合征的治疗体会张佳韧，王瑛琪（黑龙江农业职业技术学院动物科技学院，黑龙江佳木斯154002）摘要：为了比较猫下泌尿系统综合征保守治疗与手术治疗的优缺点，现对两例患猫采用两种方案进行治疗，并对治疗过程中的检查结果及治疗效果进行比较。
结果发现，金吉拉猫通过保守输液治疗效果不佳，最终转为手术治疗，治疗周期较长；暹罗猫早期就进行尿道造口，治疗周期明显缩短。
结合病例总结，对于阻塞性猫下泌尿系统综合征尽早进行手术治疗可以有效缩短治疗周期，提高治疗效果。
关键词：猫下泌尿道综合征；肾衰；治疗中图分类号：S829.3文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）02-0062-03Feline lower urinary tract diseases of treatment experienceZhang Jiaren,Wang Yingqi(Heilongjiang Agricultural Vocational and Technical College,Institute of animal science and technology,Heilongjiang Jiamusi154002)Abstract:In order to compare the advantages and disadvantages of conservative treatment and surgical treatment of feline lower urinary tract diseases,two cases of cats were treated with two schemes,and the examination results and treatment effect in the process of treatment were compared.The results showed that the effect of conservative infusion treatment in chingira cat was not good,and finally converted to surgical treatment,with a longer treatment cycle.Siamese cat had urethrostomy in the early stage The treatment period was significantly bined with the case summary,early surgical treatment for obstructive cat urinary system syndrome can effectively shorten the treatment cycle and improve the treatment effect.Key words:Feline lower urinary tract diseases;Renal failure;Treatment猫泌尿系统综合征（feline urologic syndrome，FUS）又称为猫下泌尿系统疾病、猫尿路栓塞、无菌性膀胱炎、间质性膀胱炎等，由膀胱和尿道的结石、结晶和栓塞等刺激引起膀胱和尿道黏膜炎症，甚至造成尿道阻塞的一组症候群[1]。
一例猫胰腺包裹性化脓坏死的诊断与治疗
一例猫胰腺包裹性化脓坏死的诊断与治疗杨金福【摘要】猫胰腺包裹性化脓坏死临床少见,1只3岁猫,表现为厌食、呕吐,临床、生化、B超、胰腺炎试纸检查、手术结合病理学检查,确诊为猫胰腺包裹性化脓坏死,经手术切除5 cm x3 cm x3cm肿块,配合手术后药物治疗而痊愈,状态良好.【期刊名称】《畜牧兽医杂志》【年(卷),期】2017(036)003【总页数】4页(P126-128,130)【关键词】猫;胰腺;包裹性化脓坏死;B超;猫胰腺炎试纸【作者】杨金福【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;成都双林动物医院【正文语种】中文【中图分类】S858.292胰腺炎是猫临床常见疾病，但是由于缺乏特异性的临床症状，临床诊断较为困难，确诊需要和胰腺囊肿、胰腺化脓坏死、胰腺肿瘤、肉芽肿性胰腺炎相鉴别诊断。
胰腺包裹性化脓坏死在人是胰腺炎的并发症之一，兽医临床目前尚无相关的分类，猫胰腺炎的包裹性性化脓坏死临床尚未见报道。
笔者于2016年9月接诊一只公猫，3岁，诊断为胰腺包裹性化脓坏死，现将其诊断治疗过程介绍如下，供同行参考。
猫，公，3岁，厌食、间隙性呕吐1个月，前面医院做过血常规、生化，ALT、ALKP、GGT偏高，怀疑肝脏有问题，常规治疗无好转，此后转到本院。
2.1 临床检查病猫精神差、食欲不好、呕吐，触诊左前腹部有占位性椭圆形直径4～5 cm包块，有痛感。
体温38.5 ℃，心率128次/min，呼吸20次/min(图1)。
2.2 实验室检查颈部静脉抽血分别做血常规、生化12项、血气离子、猫胰腺炎试纸检查。
血常规未见明显异常。
生化ALT 275、GGT 5、CA 2.92 偏高，血气离子检查代谢性酸中毒。
2.3 心电图血压检查猫右侧卧，进行心电图检查，多普勒血压计测血压，心电图正常，血压120/80 mmHg。
2.4 DR-X光拍片拍LR位及VD位腹腔DR-X光片，可见左侧前腹部有直径4～5 cm占位性病变(图2、图3)。
三例猫下泌尿道疾病的诊断与治疗
56福建畜牧兽医第43卷第1期2021年三例猫下泌尿道疾病的诊断与治疗张小苗周玉照-大理农林职业技术学院云南大理671003摘要为总结猫下泌尿道疾病的诊断方法和治疗措施,通过临床检查、实验室检查、影像学检查相结合的方式进行诊断，并结合诊断结果采取治疗措施。
结果3个病例的猫膀胱充盈、有积尿,并伴有膀胱炎，积尿中有大量的鸟粪石，通过导尿和药物治疗后，疗效明显。
这为该病的临床防治提供一些参考。
关键词猫下泌尿道综合征诊断治疗文献标识码:B文章编号：1003-4331(2021)01-0056-03随着人们生活水平的不断提高，家庭宠物尤其是猫的饲养量迅速增加，而宠物猫的下泌尿道疾病也越来越多。
引起该病的病因复杂多样,且有一定死亡率［1］o因此,研究其发病原因、诊断方法和治疗方法并对方法进行评价对猫下泌尿道疾病的预防有较好的参考价值。
王康、郭延敏等、吴俊等［2-呵等都对猫下泌尿道疾病进行了研究并取得丰富的临床经验。
本文就临床实践中遇到的3例猫下泌尿道疾病的检查诊断方法和治疗措施进行分析总结。
结合检查诊断结果采取导尿和药物治疗后3个病例都得到康复。
1发病情况3只猫均为雄性,1~2岁。
食欲废绝，精神状态无小便。
2检查与诊断2.1临床检查体温37.2~38益，脉搏110~115次/ min，呼吸数32~38次/min,腹围增大，触诊敏感。
2.2实验室检查2.2.1血常规检查检查结果见表1病例1红细胞数偏高,而血小板数目、淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、红细胞发布宽度变异系数都下降,提示机体有一定的脱水;病例2白细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积偏高,而淋巴细胞百分比下降,提示机体处于脱水状态,且存在一定程度的炎症;病例3白细胞、红细胞偏高,而淋巴细胞百分比下降,提示机体存在一定程度的炎症。
表1血常规检查结果检测项目参考值病例1病例2病例3白细胞数目(WBC,X109/L) 5.5〜19.518.425.22尹23.5尹红细胞数目(RBC,x1012/L) 4.6〜10.211.5尹16.04尹12.0尹血红蛋白(HGB,g/L)85~153147217尹120红细胞压积(HCT,%)26.0〜47.043.962.1尹36平均红细胞体积(MCV,fL)38.0〜54.038.238.740.0平均红细胞血红蛋白含量(MCH,pg)11.8〜18.012.813.514.0平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC,g/L)290~360335349340血小板数目(PLT,X109/L)100~51812.8引319260淋巴细胞百分比(LYMPH,%)12.0〜45.0 2.2引 2.1引 2.5引单核细胞百分比(MON,%)0.07〜1.360.30.30.3中性粒细胞百分比(GRAN,%)35.0〜85.015.1引37.048.0红细胞发布宽度变异系数(RDW,%)16.0〜23.012.5引17.218.5不佳,喜欢躺着,不愿意活动,频繁到猫砂盆但尿不出来，偶尔有几滴血尿,有呕吐,有大便,超过24h作者简介：张小苗(1989-),女。
猫杯状病毒的进化与致病性研究进展
[31 ]
[32]
[33 ]
Quimby J M, Webb T L, Habenicht L M, et al Safety and nicacy of intravenous infusion of alloxeneic cryopreserved mesen chymal stem cells for treaynent of chronic kidney disease in cats: R%sueesoeeha%%s%qu%neiaepieoeseudis[ J] .Sem C%eR%s%aach & Therapy, 2013, 4(2) ：1 —12. Da Costa F,Schaefer G, Valle S,e al. Clinical/research abstracts accepeed eoapaeseneaeion aeAAFPConeeaence2018 [ J] .Jouanae of Feline Medicine and Suryery,2019 ,21 (1) ：47-55. Zeira 0, Asiaa N, Aralla M ,et al Adult autoloxous mesenchymal stem cells for the yeatment of suspected non-infectious inflammatorg diseases of the canine central nervous system: Safety, feasibilieyand paeaiminaaycainicaaeindings [ J] .JNeuaoIneaammaeion, 2015,12:181.
Chinese Journal of Veterinae Medicine
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猫
猫是一种性格多变的动物。
他有时温顺，有时活泼。
他有时爱睡懒觉，但工作起来也很尽职。
爷爷家就有一只这样可爱的小猫咪。
每当我去爷爷家时，它就会跑过来蹭我的腿，还‘’喵喵‘’地叫着，仿佛在说：“欢迎你回来！”可是，一会儿，它的本性就暴露出来了，什么东西它都能玩个不停，毛线团儿就是他最好的玩具。
他用毛茸茸的前爪把毛线团儿一会儿拨到这边，一会儿踢到那边，乐此不疲，一不小心，毛线团把它缠住了，她就急切地‘’喵喵‘’叫，我赶紧跑过去，把他从毛线团中解救出来，然后它又继续玩毛线团，好像没事人一样。
当温暖的阳光照在屋子里时，便是小猫午睡的时候。
它蜷缩着身体，懒洋洋地窝在沙发上。
肚子一起一伏，几根长长的胡须一抖一抖。
还发出‘’呜－呜‘’的声音，可是，到了晚上，她就特别精神了，有一点动静，它都竖起耳朵，瞪着他那双绿宝石般的眼睛，向四周张望，如果他看见了猎物，他会静悄悄的，先把前爪放在地下，盯准了，再扑上去。
如果是狗捉猎物，就不是静悄悄的了，而是有一点儿声音，只要猎物听见了，就会立刻藏起来。
我们全家都很喜欢这只猫，它已经成为我们家的一份子了。
135班：韩文欣
2016年10月30日。