(完整word版)高效液相色谱在蛋白质分离中的应用
蛋白质高效液相色谱
生物标志物的检测
生物标志物富集
蛋白质高效液相色谱可用于富集低丰度生物标志物，提高检测灵敏度和特异性，有助于疾病的早期诊 断。
生物标志物验证
通过蛋白质高效液相色谱对潜在生物标志物进行分离和鉴定，为生物标志物的验证提供有力手段。
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05
蛋白质高效液相色谱的实验流程 与操作
实验流程设计
样品准备
根据实验需求，选择合 适的样品，进行预处理
和溶解。
色谱柱选择
根据蛋白质的性质和分 离要求，选择合适的色
谱柱。
流动相配置
根据实验目的和色谱条 件，配置合适的流动相。
检测器选择
根据实验需求，选择合 适的检测器，如紫外可 见光检测器、荧光检测
成熟阶段
90年代至今，随着技术的不断改进 和仪器的升级换代，蛋白质高效液 相色谱技术逐渐成熟，成为蛋白质 组学研究的重要手段。
应用领域
蛋白质组学研究
用于分离鉴定蛋白质组中的各 种蛋白质，探究蛋白质的表达
、修饰和功能。
疾病标志物发现
用于检测生物样本中与疾病相 关的蛋白质标志物，为疾病诊 断和治疗提供依据。
优点
高灵敏度、高选择性、无需 标记物。
缺点
受电极表面性质影响较大， 且对某些蛋白质的电化学响 应较弱。
04
蛋白质高效液相色பைடு நூலகம்的样品处理
蛋白质的提取与纯化
蛋白质的提取
使用适当的缓冲液和溶剂，从生 物样本中提取蛋白质。
蛋白质的纯化
通过离心、过滤、沉淀等方法去 除杂质，提高蛋白质的纯度。
蛋白质的标记与衍生化
药物研发
用于分离纯化药物目标分子， 研究药物的体内外代谢过程。
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用吴少辉;张成桂;刘光明【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2011(000)008【摘要】The unique absorption,high activity and diversity of bioactive peptide arouse people＇s interest in application.It is significant to studythe separation and analyses of polypeptides so as contribute to industrialization.High performance liquid chromatography（HPLC） is the effective and normal method because of its good repeatability and high resolution ratio.This paper mainly introduced the application of HPLC inthe separation and analysis of polypeptides.%生物活性肽以其独特的吸收机制、极强的活性和多样性成为国内外研究的热点,其分离与分析技术是生物技术实现产业化的重中之重。
高效液相色谱法以其重复性好、分辨率高等优势成为最有效、最常用的方法。
主要介绍了高效液相色谱技术在多肽类物质分离、分析上的应用。
【总页数】3页(P63-65)【作者】吴少辉;张成桂;刘光明【作者单位】大理学院药学院,云南大理671000;大理学院药学院,云南大理671000;大理学院药学院,云南大理671000【正文语种】中文【中图分类】O657.72【相关文献】1.高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用 [J], 唐玲玲;夏明2.超高效液相色谱法在中兽药检测中的应用 [J], 孙思;王安波;杨梅;汪俭;刘文锋3.高效液相色谱法快速检测在乳品检测中的应用 [J], 王丽珊;杨锦明;李夏蕾4.固相萃取-高效液相色谱法在食品中合成着色剂检测中的应用 [J], 赵俊;刘虹5.高效液相色谱法在农产品质量安全检测中的应用 [J], 杨正梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱技术在分离制备中的应用
高效液相色谱技术在分离制备中的应用第一章绪论高效液相色谱技术简称HPLC（High Performance Liquid Chromatography），是一种高效、快速、灵敏、准确、稳定、经济的分离和分析技术。
自20世纪70年代被广泛应用以来，已成为化学、医药、环境、食品、农药等领域最常用的分离技术之一。
第二章高效液相色谱技术原理HPLC是一种液相色谱分析方法，利用样品溶于流动相，在一定条件下与固定相作用，经过不同程度的吸附、分配、离子作用、筛选作用等综合效应，完成各种化合物的分离、提纯和定量测定等目的。
高效液相色谱仪通常由采样系统、泵液系统、分离柱、检测器和数据处理系统五部分组成。
第三章高效液相色谱技术在药物分离制备中的应用HPLC技术在药物领域中应用广泛，可用于药物的质量控制、药物成分的分析、对比质谱分析、生物活性物质测定等方面。
同时，HPLC技术还可用于药物的分离、提纯等工艺环节。
第四章高效液相色谱技术在生物分离制备中的应用HPLC技术在生物领域中也有广泛的应用，成为蛋白质和核酸等生物大分子的精细分离、高效纯化、测定、分级及确定分子结构等方面必不可少的工具。
HPLC技术在生物领域的应用领域还包括蛋白质结构分析及质量控制、酶活性测定、蛋白质交联、肽段合成及小分子药物筛选等。
第五章高效液相色谱技术在食品分离制备中的应用HPLC技术是食品检测及分析领域的一种重要手段，可用于食品中非法添加禁用药物和毒素、食品成分及添加剂的分析、食品的质量检测等。
同时，HPLC技术还可用于食品成分的纯化、食品添加剂含量的测定等方面的工作。
第六章高效液相色谱技术在环境分离制备中的应用HPLC技术在环境监测领域的应用已成为环境保护的重要一环。
可用于大气、水体、土壤、食品等多方面的污染物的监测、分析和鉴定。
同时，HPLC技术还可用于水资源、空气等领域中的对偶有机物和重金属离子的检测分析。
第七章高效液相色谱技术优化分离制备的方法在HPLC分离制备过程中，如何优化技术条件以提高分离、纯化或测定效果是非常关键的。
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中的应用
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中的应用离子交换高效液相色谱技术（Ion Exchange High Performance Liquid Chromatography，简称IE-HPLC）是一种常用的分离和纯化蛋白质的方法。
该技术基于蛋白质与离子交换树脂之间的相互作用，通过调节溶液pH和离子浓度来实现蛋白质的分离纯化。
离子交换高效液相色谱技术在蛋白纯化中具有广泛的应用，本文将着重介绍其在蛋白纯化中的应用和优势。
一、IE-HPLC工作原理及基本步骤IE-HPLC是一种基于离子交换作用的色谱技术，其工作原理是利用固定在色谱柱中的离子交换树脂对蛋白质的吸附和解吸进行分离。
一般包括样品处理、样品加载、洗脱和再生等步骤。
在色谱柱中，离子交换树脂表面带有正或负电荷的离子交换基团。
当样品溶液通过色谱柱时，带有相反电荷的蛋白质会与离子交换基团发生静电作用而被吸附。
随后，通过改变洗脱缓冲液的离子浓度和pH 值，使蛋白质从离子交换树脂上解离，实现蛋白质的分离纯化。
二、IE-HPLC在蛋白纯化中的优势1. 高选择性：离子交换树脂具有特定的离子交换性能，能够选择性地吸附目标蛋白质，从而实现对杂质的去除。
2. 高效性能：离子交换树脂的表面积大，特殊的孔隙结构，以及高效的液相流动系统，使得IE-HPLC具有良好的分离效果和高效的纯化能力。
3. 较强的适应性：IE-HPLC对溶液pH和离子强度的适应性较强，能够适应多种样品条件下的蛋白质纯化需求。
4. 可控性强：能够通过调节洗脱缓冲液的pH值和离子浓度来实现蛋白质的特异性洗脱，从而满足对目标蛋白质纯化的需求。
三、IE-HPLC在蛋白纯化中的应用1. 分离纯化近纯的蛋白质：IE-HPLC能够将目标蛋白质与杂质有效地分离，从而获得近纯的蛋白质样品。
2. 提取特定蛋白质亚型或同工酶：离子交换树脂的选择性对蛋白质的亚型或同工酶有很好的分离效果，能够有效地提取目标蛋白质的特定亚型。
高效液相色谱在蛋白质分析中的应用
高效液相色谱在蛋白质分析中的应用蛋白质是生命体内最重要的分子之一，它参与了几乎所有细胞生物过程，包括信号传导、代谢调控和结构支持等。
因此，研究蛋白质的结构和功能对于深入理解生物学的基本原理至关重要。
而高效液相色谱（HPLC）作为一种广泛应用于蛋白质分析的技术，具有高分辨率、高精确性和高灵敏度等优势，已经成为蛋白质分析的重要工具之一。
HPLC是一种在液相中进行分离和定量的色谱技术。
它可以通过对样品中的分子进行溶解和分离，得到各个组分的峰值，并通过峰的面积或高度来确定样品中目标分子的含量。
在蛋白质分析中，HPLC可以用来实现多种分离方式，包括离子交换、逆向相和亲和层析等。
这些技术可以根据不同的样品特性和分析目的来选择，从而实现对蛋白质的有效分离和定量。
离子交换色谱是HPLC常用的一种技术，在蛋白质分析中具有重要的应用。
该技术通过样品中蛋白质与固定在色谱柱填料上的离子交换基团之间的相互作用，实现分离和定量。
具体来说，当样品溶液通过填料时，离子交换基团会与蛋白质表面的带电部分发生静电作用，使得带电的蛋白质分子在固定相和流动相之间进行反复吸附和解吸附。
通过改变流动相的pH值和离子浓度等条件，可以调控蛋白质在离子交换柱上的保留和洗脱，从而实现对不同蛋白质的分离和纯化。
逆向相色谱也是常用的HPLC技术之一，可用于蛋白质的分离和定量。
逆向相色谱的原理是将样品中的目标蛋白质与填料上的疏水基团发生相互作用，从而实现分离。
与离子交换色谱不同的是，逆向相色谱需要通过有机溶剂和缓冲液的梯度洗脱来控制目标蛋白质的保留和洗脱。
逆向相色谱具有较高的选择性和灵敏度，可以实现对多个蛋白质的同时分离和定量，适用于复杂样品的分析。
亲和层析是HPLC中常用的一种选择性分离技术，通过特定配体与目标蛋白质之间的特异性结合而实现对蛋白质的分离。
亲和层析可以通过配体的特异性识别目标蛋白质的结构域或功能基团，从而实现高效分离。
例如，将金属离子与亲和剂配合，可以选择性地吸附含有特定金属结合位点的蛋白质；将抗体或受体蛋白固定在填料上，可以选择性地捕获与之结合的配体或激素蛋白质。
高效液相色谱技术在生物制品分离纯化中的应用
高效液相色谱技术在生物制品分离纯化中的应用在生物制品分离纯化领域中，高效液相色谱技术(简称HPLC技术)被广泛应用。
本文将从HPLC技术的基本原理、应用领域、操作程序等方面介绍其在生物制品分离纯化中的应用。
一、HPLC技术基本原理HPLC技术是一种在高压下进行的液相分离技术。
在液相载流体下，样品分子经过固相柱填充物层次分离，按特定时间顺序从柱底层抽取出来并监测后，依据峰的出现时间和强度来确定它们的相对量。
HPLC仪器的主要部件包括输液泵、进样器、柱子、检测器和数据处理器。
二、HPLC技术的应用领域HPLC技术在分离纯化领域中主要应用于分离提取具有生物活性分子，例如抗生素、维生素、激素等的精细制备和副产物去除、分析检测等方面。
下面将分别从三个方面介绍其应用领域：1.生化药品制备中的应用：通过高效液相色谱技术对生物大分子，如蛋白质、酶等的纯化、分离，可以使其同时达到相应的纯度和活力。
HPLC技术对生物大分子的生产具有不可低估的重要性。
近来，HPLC技术应用在生物技术的分析和制备中更是得到快速发展。
2.食品科技的应用：对于一些如葡萄糖和果糖等甜味剂的制备、精制，高效液相色谱技术也为这些分子的分离纯化提供了有力工具。
此外，HPLC技术还被广泛应用于糖衣肽类的研究、稳定性考察以及质量控制等方面。
3.环境科学的应用：HPLC也是环境科学中的重要实验手段之一。
通过高效液相色谱分析，可以快速高效的对环境样品，如土壤，水等中的物质进行检测和准确分析，从而从基础上起到了保护环境的作用。
三、操作程序HPLC技术因操作简单、操作快捷，应用范围广，因此在分离纯化领域被广泛采用，而其中所使用的操作程序主要分为以下几种：1. 预凝胶柱层析法：可以应用于分离际聚物和肽。
2. 离子交换层析法：适合对于蛋白质及其组分进行大规模分离纯化。
3. 大分子体积排除色谱法：主要用于高分子纯化。
4. 反相高效液相色谱法：主要用于非极性溶剂中物质的分离。
蛋白质分析中的液相色谱技术
蛋白质分析中的液相色谱技术蛋白质是生物体内非常重要的一种生物大分子，其具有重要的生理和生化功能。
在现代生物学中，对蛋白质的研究已经成为一个非常活跃的领域。
蛋白质分析技术的发展也得到了极大的推动，其中，液相色谱技术已经成为了蛋白质分析的一种重要的手段。
液相色谱技术（Liquid Chromatography，LC）是基于物质在流动液相中因理化性质的差异而发生分离的一种分离技术。
利用固定相、流动相及它们与样品相互作用的物理、化学参数，将混合物中的化合物分离并测定。
流动相可以是气体或液体，其中最常见的是液体。
与其他分离方法相比，液相色谱技术有着具有很多优点，如分离效果好、分离剂用量低、操作简单快捷、可靠性高等，因此被广泛应用在生化、制药、食品、环境等领域。
目前，液相色谱技术被广泛应用于蛋白质分析之中。
其主要包括以下几个方面：一、蛋白质分离纯化液相色谱技术可以实现对蛋白质的快速高效分离纯化。
根据蛋白质的理化性质，液相色谱可以对蛋白质进行不同方式的分离。
例如，按照蛋白质的相对大小进行分离的凝胶过滤色谱，按照蛋白质的电荷性质进行分离的离子交换色谱与电泳；按照蛋白质的疏水性进行分离的反相色谱与亲水色谱等。
通过液相色谱技术，不仅可以获得纯净的蛋白质，还可以对混杂物进行有效的去除。
这为后续的蛋白质分析打下了坚实的基础。
二、蛋白质定量液相色谱技术也可以用于蛋白质的定量。
对于蛋白质的定量需要了解蛋白质的含量、结构、各种功能配体的亲和性，从而推断其生物学性质和功能特点。
目前，蛋白质定量的方法有很多种，其中液相色谱技术是最具有前景的技术之一。
例如，用高效液相色谱分离定量蛋白质配体复合物的方法可以测定点钴原激活因子等的生物活性物质的蛋白质含量，用毛细管电泳定量可以测定血清白蛋白，糖化血红蛋白等各种蛋白质。
三、蛋白质序列分析液相色谱技术也可以实现蛋白质序列的解析。
对于蛋白质的序列分析，通常采用色谱方法和质谱法等多种方法。
其中，液相色谱方法是最常用的技术之一。
高效液相色谱法的应用
在药品分析鉴定的作用
3 在西药鉴别中的应用 在HPLC法中,保留时间与组分的结构和性质有关,是定性的参数,可用于药物的鉴别.如中 国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定:在含量测定项下记录的色谱图中,供试品 主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致.头抱拉定,头孢噻酚钠等头孢类药物以 及地西泮注射液,曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别. 4.在体内药物分析中的应用 HPLC由于测定迅速准确，流动相选择范围广，灵敏度高(10-12 g／mL以上)，填充柱种 类多，且可供选择的检测器也多。所以是实验室研究中一种很好的体内分析方法。在 国内外都很受重视．大多数药物都有紫外吸收，所以最常用的检测器是紫外检测器。 多数药物及内源性物质极性均较大，利用其极性差，可以采用RP-HPLC色谱柱，可获 得良好分离效果。
在药品分析鉴定的作用
1.天然药物分析 天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成 分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标 准来说比较困难，HPLC可通过对天然药物的有效成分进行式，可以判定药材的质量高低。 2..天然药物及复方成药分析 复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用高效液相色谱法。增免扶正片系由当 归、党参、黄芪（图3）等十几味天然药物精制而成，具有益气生津、活血养血、滋 补肝肾、健脾开胃之功效，主要用于抗缺氧、抗疲劳、抗衰老，长期服用可扶正祛邪 ，提高机体免疫功能，健身强体，益寿延年。该药对心、肝、脾、肾虚、纳差、心脑 血管疾病、神经衰弱、慢性肝炎、脂肪肝等都有较好的防治作用。 由于化学药品的开发费用昂贵，而且毒副作用大，近年来人们已把目光转向自然、民 族传统医药、草药、植物药等天然药物，据世界卫生组织统计，当前全世界60多亿人 口中80％的人使用过天然医药。在全世界药品市场中，天然物质制成的药品已占30％ ，国际上植物药市场份额已达300亿美元，且每年以20％ 以上的速度增长。HPLC分析 必定能为我国传统中医药实现现代化，走向世界提供强有力的技术支持。
仪器分析作业-高效液相色谱法和紫外吸收法在蛋白质测定中的应用
高效液相色谱法和紫外吸收法在蛋白质测定中的应用摘要：随着生物技术的迅速发展，蛋白质的研究越来越广泛，重要，蛋白质分离分析测定技术对蛋白质组学、生物化学及整个生命科学的发展具有十分重要的意义。
本文重点介绍一下高效液相色谱和紫外吸收在蛋白质测定中的应用。
关键词：蛋白质；高效液相色谱；紫外吸收蛋白质是生物体中广泛存在的一类生物大分子，由核酸编码的α氨基酸之间通过α氨基和α羧基形成的肽键连接而成的肽链，经翻译后加工而生成的具有特定立体结构的、有活性的复杂的生物大分子。
而且随着生物技术的迅速发展，越来越多地在体外通过各种生物工程的途径被人工制造出来，造福于人类，近年来，随着人们对蛋白质分子结构的深入研究，特别是在后基因组时代，蛋白组学已经成为功能基因组学研究的重要领域，蛋白质分离分析测定技术对蛋白质组学、生物化学及整个生命科学的发展具有十分重要的意义。
此外蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有糖类和脂肪不可替代的作用。
蛋白质与营养代谢，细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关，其分离与定性、定量分析是生物化学和其它生物学科、食品检验、临床检验、诊断疾病、生物药物分离提纯和质量检验中最重要的工作。
目前测定蛋白质含量的方法有很多，如高效液相色谱法，紫外吸收法等。
一．高效液相色谱法在蛋白质测定中的应用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
它可用来进行液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱分析。
高效液相色谱有五个特点：①压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高效：分离效能高。
高效液相色谱技术在蛋白质富集中的应用
高效液相色谱技术在蛋白质富集中的应用高效液相色谱(HPLC)技术是一种常用的分离和纯化生物大分子的方法。
在生物学研究中，蛋白质作为生物体内重要的功能分子，对其进行富集和纯化是非常重要的。
本文将探讨HPLC技术在蛋白质富集中的应用，并介绍几种常用的富集方法。
一、蛋白质富集的意义蛋白质是构成生物体的重要组成部分，对细胞过程、功能调控等起着关键作用。
然而，由于生物样品的复杂性和蛋白质的低丰度，直接从混合物中富集蛋白质是一项具有挑战性的任务。
因此，富集蛋白质对于后续的质谱分析、蛋白质组学研究等具有重要的意义。
二、HPLC技术在蛋白质富集中的应用1. 逆相高效液相色谱法逆相HPLC是一种常见的蛋白质富集方法。
逆相HPLC利用柱填料的亲水性，将蛋白质与溶剂进行分离。
可以通过调节流动相的性质，如有机溶剂的浓度、pH值等来控制蛋白质的保留时间，实现蛋白质的分离和富集。
2. 亲和层析法亲和层析是一种利用亲和剂与目标蛋白质的特异结合来富集蛋白质的方法。
在HPLC中，亲和层析通常采用固定的亲和剂，如金属离子、抗体、DNA或RNA等，将其固定在柱填料上。
样品中的蛋白质与亲和剂发生特异的结合，其他非目标物被洗脱，最后目标蛋白质经过洗脱过程得到富集。
3. 尺寸排阻层析法尺寸排阻层析是利用填充固定相中空隙大小的差异来分离富集蛋白质的方法。
该方法适用于富集分子量较大的蛋白质，如抗体。
以蛋白质的分子量为基准，较小的物质能够渗透到填充固定相中的空隙中，而富集蛋白质则被留在填充固定相的表面，从而实现蛋白质的富集。
三、实验步骤与注意事项1. 样品制备：蛋白质样品要经过适当的预处理，如去除杂质和浓缩等。
样品准备的质量对于后续的分离和富集过程至关重要。
2. 填充柱准备：根据所选用的富集方法，合理选择柱填料，并进行合适的预处理。
柱填料的质量对于蛋白质的分离和富集效果有着重要影响。
3. 流动相的选择：根据样品的特点和富集的目标，选择适当的流动相配比和pH值。
反相高效液相色谱技术在蛋白质纯化中的应用
反相高效液相色谱技术在蛋白质纯化中的应用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种广泛应用于科学研究和工业生产的分离技术。
它通过利用不同化合物在流动相和固定相之间发生相互作用的差异，实现样品分离和纯化。
在蛋白质研究领域，反相高效液相色谱技术（Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography，RP-HPLC）被广泛应用于蛋白质的纯化和分析。
本文将探讨反相高效液相色谱技术在蛋白质纯化中的应用。
一、反相高效液相色谱技术简介反相高效液相色谱技术是一种常用的液相色谱技术，通过选择具有亲水性的固定相、疏水性的流动相以及在两者之间进行相互作用的色谱柱填料，实现对溶液中溶质分离的方法。
反相色谱柱填料通常是由含有疏水基团的C18链或其它疏水基团的材料构成，而流动相通常是由水和有机溶剂的混合物组成，其中有机溶剂的含量逐渐增加。
二、反相高效液相色谱技术在蛋白质纯化中的应用1. 选择适当的色谱柱和填料在使用反相高效液相色谱技术进行蛋白质纯化时，选择适当的色谱柱和填料非常重要。
通常情况下，较长的色谱柱可以提供更好的分离效果，而较细的填料可以提供更高的分离效率。
此外，填料的亲水性和疏水性也需要根据目标蛋白质的特性来选择。
2. 优化流动相组成流动相组成是影响蛋白质纯化效果的重要因素之一。
通过调整流动相中水和有机溶剂的含量，可以改变蛋白质在色谱柱上的相互作用，从而实现蛋白质的分离和纯化。
3. 优化色谱条件除了流动相组成外，温度、pH值和溶质浓度等色谱条件也会对蛋白质的分离和纯化产生影响。
在蛋白质纯化过程中，优化色谱条件可以进一步改善纯化效果，提高目标蛋白质的纯度和产量。
4. 直接纯化与预处理纯化反相高效液相色谱技术可以用于直接纯化复杂样品中的目标蛋白质。
与其他纯化方法相比，反相高效液相色谱技术具有高选择性、高分离效率和较低的样品损失等优点。
高效液相色谱在蛋白质分离中的应用
高效液相色谱在蛋白质分离中的应用蛋白质是一种长链高分子化合物，相对分子量大，在溶液中扩散系数大，易变性，者增加了普通方式分离蛋白质的困难。
高效液相色谱在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备高速、高效、高灵敏度的特点。
已被广泛应用于分离蛋白质。
蛋白质在物理、化学及功能上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础。
根据蛋白质的大小、电荷、疏水性等特性，可以选择不同模式来分离目标蛋白。
反向高效液相色谱在高效液相色谱中应用广泛。
由于反相高效液相色谱固相载体的疏水性，它可以根据流动相中被分离物质分子疏水性的不同而发生强弱不同的相互作用，从而使不同分子在反相柱中彼此分离。
疏水性弱的样品，分子和固定相间的作用弱，因而较快流出。
在反相液相色谱中，蛋白质分子在通过色谱柱时会发生或多或少的去折叠，使得蛋白质分子内部某些疏水残基暴露，并与固定相相互作用。
这是反相液相色谱在蛋白质分离中的一个有力因素。
同时蛋白质有一个特殊的保留机制，这是由吸附机制与分配机制共同作用的结果。
在蛋白质的分离中，初始洗脱条件下洗脱液中有机成分的浓度较低，分子与固定相疏水作用强，几乎完全被固定相吸附；而一旦洗脱液中有机成分达到特定浓度，使得蛋白质与固定相的作用小于它与流动相间的相互作用时，分子完全从固定相上洗脱。
正是由于蛋白质的这种特殊的保留机制，洗脱液成分极微小的改变就会大大影响蛋白质的保留行为从而保证蛋白质得以完全分离。
蛋白质通常是强极性的化合物，与碳十八色谱柱结合较困难。
另外，反相液相色谱常用的流动相，如甲醇、乙腈等都能使蛋白质变性沉积而使色谱柱报废。
因此，在反相液相色谱用于蛋白质分离时，一般使用低pH流动相，室温或较高温度以及使用乙腈或异丙醇作为有机部分，三氟乙酸作为流动相添加剂。
离子交换色谱是最早被用于蛋白质分离的一种方法。
离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。
因为离子交换色谱要求分离样品具有带电性质的差异。
高效液相色谱法在蛋白质纯度测定中的应用与优势是什么？
高效液相色谱法在蛋白质纯度测定中的应用与优势是什么？蛋白质的纯度是评估其质量和功能的重要指标之一。
在生物药物研发和生产过程中，准确测定蛋白质的纯度对于确保药物的安全性和疗效至关重要。
本文将介绍高效液相色谱法作为一种常用的蛋白质纯度测定方法，探讨其在蛋白质研究中的应用与优势。
1.高效液相色谱法的原理。
1.1色谱分离：高效液相色谱法利用固定相和移动相之间的相互作用，将混合物中的组分分离并进行定量分析。
1.2检测器：高效液相色谱法常用的检测器包括紫外-可见光检测器、荧光检测器和质谱检测器，用于定量测定样品中的目标蛋白质。
2.高效液相色谱法在蛋白质纯度测定中的应用。
2.1蛋白质纯度测定：高效液相色谱法可用于测定蛋白质样品中杂质的含量，评估蛋白质的纯度和纯化效果。
2.2蛋白质组分分析：高效液相色谱法可以分离和定量分析蛋白质样品中的不同组分，如亚单位、突变体等。
2.3蛋白质质量控制：通过高效液相色谱法可以对蛋白质样品进行定量分析，确保其质量和一致性，为药物研发和生产提供可靠的依据。
3.高效液相色谱法在蛋白质纯度测定中的优势。
3.1灵敏度和准确性：高效液相色谱法具有较高的灵敏度和准确性，能够快速测定蛋白质样品中的目标成分。
3.2高分辨率：高效液相色谱法的分离效果较好，能够有效地分离蛋白质样品中的杂质和组分。
3.3稳定性和重复性：高效液相色谱法具有较好的稳定性和重复性，可重复测定样品并得到可靠的结果。
4.未来展望。
4.1自动化和高通量：高效液相色谱法的自动化和高通量化将推动其在蛋白质纯度测定中的广泛应用，提高效率和准确性。
4.2多维色谱技术：结合多维色谱技术，如二维色谱和液相色谱-质谱联用技术，可以进一步提高蛋白质纯度测定的分辨率和灵敏度。
高效液相色谱法作为一种常用的蛋白质纯度测定方法，具有灵敏度高、分辨率好、稳定性强等优势。
通过高效液相色谱法可以准确测定蛋白质样品的纯度和组分，为生物药物研发和生产提供可靠的数据支持。
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用植物丁颖班何健伟 200930700207摘要 :对近年来高效液相色谱法分离和测定蛋白质技术作一综述，比较详细地介绍了各种HPLC模式、检测器,以及联用技术的应用情况。
对今后高效液相色谱法在蛋白质研究方面的作用作一展望。
关键词：高效液相色谱检测模式蛋白质分离测定联用技术前言：蛋白质是生命有机体的主要成分,在生命体生长发育的各个阶段都起着重要作用。
所以蛋白质的分离和检测一直是人们研究的热点。
然而蛋白质是一种长链高分子化合物,相对分子量大,在溶液中的扩散系数小、黏度大、易变性,这增加了蛋白质分离、分析的困难。
目前，高效液相色谱法广泛用于蛋白质的分离和检测。
高效液相色谱(HPLC)具有分析速度快、分离效能高, 检测灵敏度高样品适用范围广等优点因此在药学研究和生物医学测定中都得到了广泛的应用。
在高效液相色谱技术中,分配色谱、亲和色谱、离子交换色谱和凝胶排阻色谱都能够用于蛋白质的分离与鉴定。
本文对这几种色谱作一简要介绍。
1 HPLC基本原理HPLC由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检测系统 4部分所组成。
输液泵将流动相以稳定的流速 (或压力)输送至分析体系 ,在进入色谱柱之前通过进样器将样品导人 ,流动相将样品带人色谱柱 ,在色谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性质 ,乃至分子量大小的差异而被分离 ,并依次随流动相流至检测器 ,将检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。
随着HPLC技术的日趋成熟,它已成为分离和检测蛋白质的重要工具。
2 蛋白质的HPLC分离模式物理、化学功能等特征差异是蛋白质分离、检测的基础。
根据蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性功能等特性以及蛋白质的来源、实验要求等可以选择不同的模式来分离目标蛋白质2.1 反相高效液相色谱 (RP-一HPLC)RP_HPLC在HPLC各种模式中的应用最为广泛,但目前比较流行的色谱柱在蛋白质的检测方面并不多见。
高效液相色谱法在蛋白分析中的应用
高效液相色谱法在蛋白分析中的应用
隋广超;石宗舫
【期刊名称】《中国兽医科技》
【年(卷),期】1990(000)008
【摘要】高效液相色谱(High Per-formance Liquid Chro-matography,简称HPLC)法的应用已有几十年的历史。
虽然,HPLC最先是被用于核酸方面的研究,但是,目前用HPLC进行蛋白、多肽、氨基酸方面的分析工作日趋增多。
仅在1987年关于这方面的文献报道就有1000多篇,其中。
【总页数】3页(P43-45)
【作者】隋广超;石宗舫
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S854.43
【相关文献】
1.高效液相色谱法在蛋白质分析中应用 [J], 周雅琳;阚健全;陈宗道
2.高效液相色谱法检测血红蛋白在珠蛋白生成障碍性贫血诊断中的应用 [J], 唐宁;夏汛生;张碧玉
3.高效液相色谱法定量分析HbA2在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用 [J], 张新华;李平萍;罗瑞贵;黄蒙莎;兰小英;吴志奎;王荣新
4.变性高效液相色谱法在α-血红蛋白稳定蛋白基因检测中的应用 [J], 王志鹏
5.高效液相色谱法在牛乳整体蛋白检测中的应用 [J], 陈江;苏美冬;唐欣
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hplc-ms在蛋白质组学中的应用
hplc-ms在蛋白质组学中的应用HPLC-MS，即高效液相色谱-质谱联用技术，是一种将高效液相色谱（HPLC）的分离能力与质谱（MS）的定性分析能力结合起来的分析化学技术。
在HPLC-MS中，液相色谱作为分离系统，它的工作原理是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，通过不同物质在两相间的分配系数、亲和力、吸附能力、离子交换或分子大小等差异引起的排阻作用差别使不同溶质得以分离。
然后，这些被分离的物质会进入质谱仪进行检测。
质谱是一种能够测量物质分子或离子的质量和数量的技术。
在质谱部分，样品被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。
质谱仪主要由进样系统、电离系统、质量分析器和检测系统组成。
HPLC-MS联用技术体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。
这种技术可以分析高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物，因此在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。
HPLC-MS在蛋白质组学中的应用主要体现在以下几个方面：首先，HPLC-MS是蛋白质组学中最强大的分析手段之一。
该技术结合了高效液相色谱和质谱分析的优势，能够在非常高的灵敏度下，同时获得蛋白质的分子量和氨基酸序列信息，实现对蛋白质的全面鉴定和定量分析。
它在蛋白质组学研究中广泛应用于生物标志物的发现、蛋白质修饰的鉴定以及蛋白质相互作用网络的构建。
其次，基于高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）的蛋白质组学技术，是目前最常用的大规模蛋白质鉴定策略。
在自下而上的蛋白质组学分析策略中，蛋白质通过蛋白水解酶水解成肽的混合物，然后通过色谱法或亲和分离技术进行分离，最后通过质谱检测碎裂离子。
通过数据库搜库将质谱与数据库中蛋白质理论消化产生的谱进行匹配，并根据一系列指标进行评分，实现肽谱匹配（PSM），并最终完成蛋白质组鉴定。
高效液相色谱测蛋白纯度的原理
高效液相色谱测蛋白纯度的原理高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种在化学、生物学和医学等领域广泛应用的分离和分析技术。
它基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡常数不同，实现物质的分离。
在蛋白质纯化及纯度检测方面，高效液相色谱技术发挥着至关重要的作用。
本文将详细阐述高效液相色谱测定蛋白质纯度的原理。
一、高效液相色谱的基本原理高效液相色谱法是一种在高压下将液体样品通过色谱柱进行分离的技术。
色谱柱内填充有固定相，而流动相则是携带样品通过色谱柱的溶剂。
当样品溶液通过色谱柱时，各组分在固定相和流动相之间发生分配平衡。
由于不同组分与固定相和流动相的相互作用力不同，导致它们在色谱柱中的迁移速度不同，从而实现分离。
二、蛋白质在高效液相色谱中的行为特性蛋白质是一类具有复杂结构和性质的生物大分子。
在高效液相色谱中，蛋白质的分离主要依赖于它们与固定相和流动相之间的相互作用，如疏水作用、离子交换、亲和作用等。
蛋白质的表面带有多种功能基团，如氨基、羧基、羟基等，这些基团可以与固定相表面的官能团发生相互作用，影响蛋白质在色谱柱中的保留行为。
三、高效液相色谱测定蛋白质纯度的方法1. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法（Gel Filtration Chromatography，GFC）是一种基于分子筛效应的分离技术。
它利用多孔凝胶作为固定相，根据蛋白质分子量的不同进行分离。
分子量较大的蛋白质在凝胶颗粒间的空隙中通过，而分子量较小的蛋白质则进入凝胶颗粒内部，从而实现分离。
通过凝胶过滤色谱法，可以对蛋白质样品进行初步的纯度检测。
2. 反向色谱法反向色谱法（Reversed-Phase Chromatography，RPC）是一种常用的蛋白质分离和纯度检测方法。
它采用非极性固定相和极性流动相，利用蛋白质分子中的疏水基团与固定相表面的非极性官能团之间的相互作用进行分离。
蛋白质分析中的色谱技术应用
蛋白质分析中的色谱技术应用蛋白质分析是现代生物学研究的重要方向之一，因为蛋白质是生命机体的重要组成成分，在细胞响应、代谢和信号传导等生物学过程中都起着不可或缺的作用。
而分析蛋白质的复杂性则体现在其结构多样性以及形态、功能、丰度等方面的复杂性。
因此，分析蛋白质需要多种手段辅组，其中色谱技术是主要手段之一。
本文将探讨蛋白质分析中的色谱技术应用。
一、蛋白质分析中的色谱技术基本原理色谱技术是一种通过分离杂质和纯化待测物质的技术，在蛋白质分析中具有很重要的作用。
利用色谱技术进行蛋白质分析，首先需要将待测物质样品引入色谱柱中，在色谱柱中，待测物质跟随分开的载体（如色谱柱中的填充物）在柱中贯通带着载体运动。
不同蛋白质在载体中的应答不同，导致不同蛋白质在载体中滞留的时间不同，因此经过一定时间的流速后，贵重蛋白质就可滞留在载体中，等待被提取。
而载体的填充物也是十分重要的，当样品中的蛋白质的体积流过填充物时，产生于填充物的交互作用，会导致样品分离成几部分，达到纯化的效果。
二、蛋白质分析中的色谱技术类型在蛋白质分析中，基于样品特性可以使用不同的色谱技术进行分析。
1.尺寸排除色谱（SEC）尺寸排除色谱又称凝胶过滤色谱，是目前常用于分离具有不同分子量的蛋白质的技术。
SEC 是一种基于分子体积排除原理的色谱技术，样品通过某种聚合物材料（通常是多孔的丁苯乙烯微粒）作为填充物，样品中的大分子卡住在多孔材料中，而小分子则通过填充物漏洞直接流过，从而达到分离的目的。
2.离子交换色谱（IEC）离子交换色谱常用于分离带电荷的蛋白质，通过样品与带异电的离子交换，形成静电互相吸引的亲和体系。
一个离子交换色谱柱由水平分隔网相互穿插制造，这样，蛋白质或多酚分子可沿着柱的垂直方向从上到下通者柱底。
3.氢氧化铝亲和层析（IMAC）铁和镍等氧化物颗粒表面存在氢氧化物特异性较强的配合团，可随之与蛋白质制造能力相符定向摆布分散式对一部分蛋白质具有结合和固定功效。
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用培训课件
相信随着新的色 谱柱和多种手段 的联用，高效液 相色谱能够在包 括蛋白质在内的 大分子物质的研 究领域里发挥更 大的作用
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用
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Thank you
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用
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它是在经典液相层析法基础上，
引进了气相层析的理论具有气
相层析的全部优点。
高灵 敏度
应用 范围广
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用
3
根据分离机理蛋白质HPLC又可分为
1 高效凝胶过滤色谱(HPSEC) 2 高效离子交换色谱（HPIEC） 3 高效亲和色谱（HPAFC）
4 反向高效液相色谱（RP-HPLC）
• ⑤ 需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱 柱之间连接一保护柱。
• ⑥ 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内 的杂质。
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用
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四 检测系统
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噪音低
灵敏度高
要求
重复 性好
适用范 围广
高效液相色谱法在蛋白质分离中的应用
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UV 检测器
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反相高效液相色谱法对 血清中胰岛素的测定
色谱柱 流动相
梯度 洗脱
其他
C5 柱(100
mm*4.6mm 5μm，Ph-
enomenex 公司，美国
A 相: 10mmol/L Tris缓冲液 (pH 8.5) ;
B相:乙腈;
流速:
1mL/min
B相体积分数 变化为:0～15 min, 15%～
25.5% ;
。 15～21 min,
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高效液相色谱在蛋白质分离中的应用
蛋白质是一种长链高分子化合物，相对分子量大，在溶液中扩散系数大，易变性，者增加了普通方式分离蛋白质的困难。
高效液相色谱在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备高速、高效、高灵敏度的特点。
已被广泛应用于分离蛋白质。
蛋白质在物理、化学及功能上的差异为蛋白质的分离检测提供了基础。
根据蛋白质的大小、电荷、疏水性等特性，可以选择不同模式来分离目标蛋白。
反向高效液相色谱在高效液相色谱中应用广泛。
由于反相高效液相色谱固相载体的疏水性，它可以根据流动相中被分离物质分子疏水性的不同而发生强弱不同的相互作用，从而使不同分子在反相柱中彼此分离。
疏水性弱的样品，分子和固定相间的作用弱，因而较快流出。
在反相液相色谱中，蛋白质分子在通过色谱柱时会发生或多或少的去折叠，使得蛋白质分子内部某些疏水残基暴露，并与固定相相互作用。
这是反相液相色谱在蛋白质分离中的一个有力因素。
同时蛋白质有一个特殊的保留机制，这是由吸附机制与分配机制共同作用的结果。
在蛋白质的分离中，初始洗脱条件下洗脱液中有机成分的浓度较低，分子与固定相疏水作用强，几乎完全被固定相吸附；而一旦洗脱液中有机成分达到特定浓度，使得蛋白质与固定相的作用小于它与流动相间的相互作用时，分子完全从固定相上洗脱。
正是由于蛋白质的这种特殊的保留机制，洗脱液成分极微小的改变就会大大影响蛋白质的保留行为从而保证蛋白质得以完全分离。
蛋白质通常是强极性的化合物，与碳十八色谱柱结合较困难。
另外，反相液相色谱常用的流动相，如甲醇、乙腈等都能使蛋白质变性沉积而使色谱柱报废。
因此，在反相液相色谱用于蛋白质分离时，一般使用低pH流动相，室温或较高温度以及使用乙腈或异丙醇作为有机部分，三氟乙酸作为流动相添加剂。
离子交换色谱是最早被用于蛋白质分离的一种方法。
离子交换色谱法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。
因为离子交换色谱要求分离样品具有带电性质的差异。
而蛋白质等电点的差异，以及在不同pH值溶液中带电性质会发生变化的特性，使得用离子交换色谱分离蛋白质成为可能。
离子交换色谱又可分为阴离子和阳离子交换色谱。
大多数蛋白质在pH值为6到8时，带负电荷，因此用阴离子交换色谱来分离，如人乳或牛乳中的骨桥蛋白。
对于一些等电点较高的蛋白质，如乳铁蛋白，则采用阳离子交换色谱更为有效。
在选择离子交换剂时，聚苯乙烯离子交换剂等疏水性较强的离子交换剂一般常用于分离小分子物质，如无机离子、氨基酸、核苷酸等。
而纤维素、葡聚糖、琼脂糖等离子交换剂亲水性较强，适合于分离蛋白质等大分子物质。
其中离子交换纤维素目前种类很多，其中以DEAE-纤维素（二乙基氨基纤维素）和CM-纤维素（羧甲基纤维素）最常用，它们在生物大分子物质（蛋白质，酶，核酸等）的分离方面显示很大的优越性。
一是它具有开放性长链和松散的网状结构，有较大的表面积，大分子可自由通过，使它的实际交换容量要比离子交换树脂大的多；二是它具有亲水性，对蛋白质等生物大分子物质吸附的不太牢，用较温和的洗脱条件就可达到分离的目的，因此不致引起生物大分子物质的变性和失活。
三是它的回收率高。
所以离子交换纤维素已成为蛋白质分离中非常重要的一类离子交换剂。
生物素和亲和素
生物素(biotion)和亲和素(avidin)之间具有很强而特异的亲和力,可以用于亲和层析。
如用亲和素分离含有生物素的蛋白等。
生物素和亲和素的亲和力很强,其解离常数为10 15M,
洗脱通常需要强类的变性条件,可以选择biotion的类似物,如2-iminobiotin、diiminobiotin等降低与avidin的亲和力,这样可以在较温和的条件下将其从avidin上洗脱下来。
另外,可以利用生物素和亲和素间的高亲和力,将某种配体固定在基质上。
例如将生物素酰化的胰岛素与以亲和素为配体的琼脂糖作用,通过生物素与亲和素的亲和力,胰岛素就被固定在琼脂糖上,
可以用于亲和层析分离与胰岛素有亲和力的生物大分子物质。
这种非共价的间接结合比直接将胰岛素共价结合与CNBr活化的琼脂糖上更稳定。
很多种生物大分子可以用生物素标记试剂(如生物素与NHS生成的酯)作用结合上生物素,并且不改变其生物活性,这使得生物素和
亲和素在亲和层析分离中有更广泛的用途。
3.维生素、激素和结合转运蛋白
通常结合蛋白含量很低,如1000升人血浆中只含有20毫克Vit -7-10-B12结合蛋白,
用通常的层析技术难于分离。
利用维生素或激素与其结合蛋白具有强而特异的亲和力(解离常数为10 16M)而进行亲和层析则可以获得较好的分离效果。
由于亲和力较强,所以洗脱时可能需要较强烈的条件,另外可以加入适量的配体进行特异性洗脱。
4.激素和受体蛋白
激素的受体蛋白属于膜蛋白,利用去污剂溶解后的膜蛋白往往具有相似的物理性质,难
于用通常的层析技术分离。
但去污剂溶解通常不影响受体蛋白与其对应激素的结合。
所以利用激素和受体蛋白间的高亲和力(10 6-10? 12M)而进行亲和层析是分离受体蛋白的重要方法。
目前已经用亲和层析方法纯化出了大量的受体蛋白,如乙酰胆碱、肾上腺素、生长激素、吗啡、胰岛素等等多种激素的受体。
5.凝集素和糖蛋白
-D-甲基葡萄糖苷洗脱。
同样,用适当的糖蛋白或单糖、多糖作为配体也可以分离各种凝集素。
a-D-甲基甘露糖苷或a-D-吡喃葡萄糖苷的糖蛋白,麦胚凝集素可以特异的与N-乙酰氨
基葡萄糖或N-乙酰神经氨酸结合,可以用于血型糖蛋白A、红细胞膜凝集素受体等的分离。
洗脱时只需用相应的单糖或类似物,就可以将待分离的糖蛋白洗脱下来。
如洗脱伴刀豆球蛋白A吸附的蛋白可以用a-D-吡喃甘露糖苷或a凝集素是一类具有多种特性的糖蛋白,几乎都是从植物中提取。
它们能识别特殊的糖,因此可以用于分离多糖、各种糖蛋白、免疫球蛋白、血清蛋白甚至完整的细胞。
用凝集素作为配体的亲和层析是分离糖蛋白的主要方法。
6.辅酶
核苷酸及其许多衍生物、各种维生素等是多种酶的辅酶或辅助因子,利用它们与对应酶的亲和力可以对多种酶类进行分离纯化。
例如固定的各种腺嘌呤核苷酸辅酶,包括AMP、c AMP、ADP、ATP、CoA、NAD+、NADP+等等应用很广泛,可以用于分离各种激酶和脱氢酶。
7.多核苷酸和核酸
利用poly-U作为配体可以用于分离mRNA以及各种poly-U结合蛋白。
poly-A可以用于分离各种RNA、RNA聚合酶以及其它poly-A结合蛋白。
以DNA作为配体可以用于分离各种DNA结合蛋白、DNA聚合酶、RNA聚合酶、核酸外切酶等多种酶类。
8.氨基酸
固定化氨基酸是多用途的介质,通过氨基酸与其互补蛋白间的亲和力,或者通过氨基酸
的疏水性等性质,可以用于多种蛋白质、酶的分离纯化。
例如L-精氨酸可以用于分离羧肽酶, L-赖氨酸则广泛的应用于分离各种rRNA。
9.染料配体
结合在蓝色葡聚糖中的蓝色染料Cibacron Blue F3GA是一种多芳香环的磺化物。
由于它具有与NAD+相似的空间结构,所以它与各种激酶、脱氢酶、血清清蛋白、DNA聚合酶等具有亲和力,可以用于亲和层析分离。
另外较常用的还有Procion Red HE3B等。
染料作
为配体吸附容量高、可以多次重复使用。
但它有一定的阳离子交换作用,使用时应适当提高缓冲液离子强度来减少非特异性吸附。
10.分离病毒、细胞
利用配体与病毒、细胞表面受体的相互作用,亲和层析也可以用于病毒和细胞的分离。
利用凝集素、抗原、抗体等作为配体都可以用于细胞的分离。
例如各种凝集素可以用于分离红细胞以及各种淋巴细胞,胰岛素可以用于分离脂肪细胞等。
由于细胞体积大、非特异性吸附强,所以亲和层析时要注意选择合适的基质。
目前已有特别的基质如Pharmacia公司生产的Sepharose 6MB,颗粒大、非特异性吸附小,适合用于细胞亲和层析。
亲和色谱法的基本过程是： 1.配基固相化。
将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和性）。
2.亲和吸附。
将含有纯化对象的混合物通过亲和柱，纯化对象吸附在柱上，其他物质流出色谱柱。
3.解吸附。
用某种缓冲液或溶液通过亲和柱，把吸附在亲和柱上的欲纯化物质洗脱出来。