动物蛋白质的胃蛋白酶消化率体外消化
体外酶法研究进展
体外酶法研究进展摘要：消化能值是评定饲料能量生物学效的主要指标之一。
客观精准地评定饲料的消化能值是确定动物营养需要量及优化饲料配方的主要决策依据。
本文主要介绍了体外酶法的研究进展，影响评定准确性的因素以及体外酶法评定饲料消化能中存在的一些难题。
关键词：猪;消化能;体外酶法引言能量是饲料营养物质的第一要素。
代谢能值是评定饲料能量生物学效的主要指标之一，因此，客观精准地评定饲料的代谢能值是确定动物营养需要量及优化饲料配方的主要决策依据。
目前评定饲料营养价值的方法主要有体内法、半体内法(运动尼龙袋法)和体外法(酶法)。
体内法和半体内法评定饲料营养物质在小肠消化率虽然较为客观实际，但都需要依赖于试验动物，半体内法还需要借助于必要的瘘管手术和试验设备，试验较麻烦且费用昂贵，不适于生产实际，而酶法是利用一种或多种酶或动物小肠液模拟动物体内的环境，在体外对营养物质进行消化，以评定营养物质的消化率，是一种快速且相对准确的试验方法。
酶法最早产生于50年代，最初只是用单一胃蛋白酶法评定饲料蛋白质的消化率，虽然这一方法快速简便，但与体内法所测数据相差较大(Grand 和Carroll,1958; Campbell,1961)。
Akeson和Stahmann(1964)进一步发展了酶法，在胃蛋白酶的基础上又加入了胰蛋白酶，测得真蛋白消化率与体内法所测数据强烈相关(r=0.995)，使得胃蛋白酶加胰蛋白酶法成为评定单胃动物饲料蛋白质消化率的常规方法, 但这种方法是在假定蛋白消化率不受其他养分消化影响的基础上建立的，而消化道酶谱是一个复杂多变的多酶系统，由于各种酶元所需要的激活条件不同以及酶作用于底物的反馈抑制作用。
所以胃蛋白酶加胰蛋白酶法并不能真正反映体内消化过程。
日本Furuya(1974)提出了胃蛋白酶加小肠液测定离体消化试验方法，通过离体法和全收粪二者比较,两法干物质和能量消化率间均为强相关，且测值相当一致。
国内张子仪等(1981-1988)对此法做了进一步研究，已形成一套完整的实验室测定猪饲料营养物质消化率的体外方法。
常用饲料原料的掺假及其鉴别
湖南饲料!""#年第!期常用饲料原料的掺假及其鉴别湖南省兽药饲料监察所陈福华随着饲料工业和畜牧业的发展，对饲料原料的需求量越来越大，而某些不法商人，为谋取不正当的利益，在饲料原料中掺杂使假。
现阶段，在饲料原料中的制假、掺假过程中，不仅仅是简单的添加非原有成分，而呈现出知识化、科技化、专业化的趋势，扰乱了饲料市场的正常秩序。
为此，现提供几种饲料原料的鉴别方法，以飨读者。
一、植物性饲料原料的掺假及鉴别在植物性的饲料原料中（如次粉、豆粕、麦麸），添加滑石粉、碳酸盐，以次充好，或是用这些掺假物质，辅以统糠，经加工、着色制成相似的物质，以次充好。
对于这种掺假方式，可以采用以下方法进行鉴别：$、显微镜检验：利用显微镜，可以直观地看到，有大量白色的物质，呈圆形。
用锐形物夹，容易碎。
变换不同的倍数和焦距，物体没有什么变化。
如果添加有用统糠加碳酸盐或滑石粉制成的添加物，显微镜下可见大量有统糠特征的物质。
!、手感：如添加有这类物质，手感细腻，较滑。
如果是用统糠加碳酸盐或滑石粉制成的添加物，手感比较粗糙。
%、灼烧：由于碳酸盐和滑石粉都是耐灼烧物质，对这些植物性原料进行灼烧，如含有大量的灼烧残渣，说明其中有许多无机物，可能含有上述物质。
&、化学反应：如果上述原料中含有碳酸盐，可滴加盐酸。
如产生大量气泡，说明其中有碳酸盐。
’、水浸泡：如果其中含有由统糠加碳酸盐或滑石粉制成的掺假物，可取样约$"克，加$""毫升水，充分浸泡，搅拌。
如有上述合成物，上层可见大量统糠，底层可见大量无机物。
如果是豆粕，也可能有由麦麸加碳酸盐或滑石粉制成的这类物质，可用这种方法加以鉴别。
#、在豆粕中，有时为了掺假，同时保证粗蛋白的含量，在掺入上述合成掺假物的同时，往往加入一些非蛋白氮，如尿素、碳酸氢铵、醛聚合物。
对于这类掺假物，除进行上述检验外，可以进行水溶性蛋白测定。
如果水溶性蛋白含量特别高，说明掺有这些非蛋白含氮物。
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比较
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比拟摘要：试验分别采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法、肉食性鱼类〔如鲈鱼〕消化道粗酶提取液消化法和草食性鱼类〔如草鱼〕消化道粗酶提取液消化法测定了酪蛋白、鱼粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉等7种蛋白质原料的体外消化率。
3种测定方法中，鱼粉的消化率差异不显著〔P>0.05〕；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉用两步法和草鱼消化酶法测定的消化率无显著差异〔P>0.05〕；棉籽粕消化率用两步法测定值高于用消化酶法的测定值，差异极显著〔P<0.01〕；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉的消化率用两步法比用鲈鱼消化酶测定的值高，差异极显著〔P<0.01〕；草鱼消化酶法和鲈鱼消化酶法对酪蛋白的消化率无显著差异〔P>0.05〕，而对于豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉草鱼消化酶法测定值高于鲈鱼消化酶法的测定值，差异极显著〔P<0.01〕。
结果说明，胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法在测定鱼粉蛋白质消化率时可替代鱼类消化液粗酶消化法，对其它蛋白质原料使用该方法应慎重。
关键词：蛋白质饲料；体外消化率；测定方法消化率是动物从食物中所消化吸收的局部占总摄入量的百分比，是评价饲料营养价值的重要指标之一。
测定饲料消化率主要有两种方法：体外法和体法。
体法测定的消化率能够比拟真实的反映鱼类对饲料的消化情况。
但体法测定方法复杂、时间长、费用高，而且对外界环境的要求较高，季节、温度、光照等都会影响消化率测定值。
体外消化法是利用精制的消化酶或研究对象的消化道酶提取液在试管进展的消化试验，其测定值可近似反映鱼对饲料的消化率。
此法能快速测定原料的相对利用率，为营养师制作配方提供参考[1]。
然而，体外消化法无法反映体消化的真实情况。
Boisen和Eggum〔1991〕在胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法中利用标准过滤装置测得饲料蛋白质消化率与鼠和猪的真消化率十分接近，他们认为这种方法测得的蛋白质体外消化率经源氮校正与回肠末端蛋白质表观消化率高度相关。
动物消化率测定
表观消化率 =
X 100%
粪中养分组成： 饲料中未消化的养分；消化道分泌物；
消化道脱落细胞；消化道微生物及其代谢产物。
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消化率测定
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二、体内消化实验
(2)指示剂法 1）对指示剂的要求： 不被消化吸收，不影响养分的正常消化，无毒无害，分布均匀，易测定。
2）种类：外源指示剂（ Cr2O3 ）
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消化率测定
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消化率测定
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二、体内消化实验
2）桥式瘘管
优点：其对荷术动物生理影响小，
手术成功率高；测量结果优于 T 型
瘘管。
缺点：人工手术复杂，饲养管理繁
重。 图2、桥型瘘管示意图
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消化率测定
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二、体内消化实验
3）回-直肠吻合术 优点：收粪简便，而且可收集全部粪样； 缺点：手术复杂、成功率低和护理相对麻烦。
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消化率测定
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二、体内消化实验
5）指示剂法消化率计算公式： 原理：食入指示剂量=排出指示剂量 饲粮指示剂含量 粪中养分含量 ×
养分消化（%）= 100% —
粪中指示剂含量
饲粮养分含量
×100%
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消化率测定
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二、体内消化实验
（3）回肠末端消化率测定：
1）T型瘘管：
优点：安瘘管后对荷术动物生理影响小； 缺点：测定结果误差大；必须用指示剂， 因不可能收集全部粪尿，由此。取样缺乏 代表性，而且较麻烦。
201消化实验
体内（in vivo） 消化实验
尼龙袋法(nylon bags technique)
猪的消化有三种：
猪的消化有三种：1.机械性消化：是指通过消化道肌肉的舒缩活动，将食物磨碎，并使之与消化液充分混合，以及将食糜不断地向消化道远端推送，最终将消化吸收后的饲料残渣排出体外。
2.化学性消化：是指消化腺所分泌的各种消化酶和植物饲料本身的酶将饲料中的蛋白质、脂肪和糖类分解成为小分子物质的过程。
3.微生物消化：是指由栖居在畜禽消化道内的微生物对饲料进行发酵的过程。
此种消化方式对饲料中纤维素、半纤维素、果胶等高分子糖类的消化具有极为重要的意义。
涉及到的器官和功能：不同部位的消化管因结构的不同，其消化方式各有侧重。
如口腔内以机械性消化为主；小肠内以化学性消化为主；而单胃动物的大肠和复胃动物（牛、羊等）的瘤胃，则以生物学消化为主。
1.口腔内：咀嚼。
①将饲料磨碎，增加与消化液接触面积；尤其是可破坏植物细胞的纤维素壁，暴露其内容物，以利于消化；②便于粉碎后的饲料与唾液充分混合，并湿润和润滑食物，利于食团形成，便于吞咽；③咀嚼动作可以刺激口腔内的各种感受器，反射性引起消化腺的分泌和胃肠道运动，为随后的消化做好准备。
2.胃：单胃动物的胃粘膜一般明显的分为三部分：贲门腺区、胃底腺区和幽门腺区，猪和在近食管端还有无腺体区，此区被覆复层扁平上皮细胞，可能是食糜进行发酵的部位。
贲门腺为粘液腺，分泌碱性粘液，可保护食道处的粘膜免受胃酸的损伤。
胃底腺是胃的主要消化腺，占据整个胃底部，由主细胞、壁细胞和粘液细胞三类细胞组成。
它们分别分泌胃消化酶原、盐酸和粘液。
此外壁细胞还分泌一种称为“内因子”的物质，该物质与小肠维生素B12的吸收有关。
幽门腺分布于幽门部，可分泌碱性粘液。
胃液即是有这三种腺体和胃粘膜上皮细胞的分泌物共同组成的。
胃粘膜内还含有一些内分泌细胞，除了位于幽门腺区的分泌胃泌素的G细胞外，还有分泌生长抑素的D细胞、分泌胰多肽的PP细胞和分泌组胺的肥大细胞。
纯净的胃液是无色、透明、pH值为0.9～1.5强酸性的液体。
除水分外，主要成分为盐酸、胃消化酶、粘蛋白、内因子和电解质。
消化实验方法总结
《豆粕粉碎粒度与蛋白质体外消化率的关系研究》采用胃蛋白酶-胰酶两步法，通过体外模拟鸡体消化道内环境来比较不同粉碎力度豆粕的蛋白消化率，从而确定适合肉仔鸡生长的较适宜豆粕粉碎力度。
白消化率，从而确定适合肉仔鸡生长的较适宜豆粕粉碎力度。
平均粒径采用GB 6971-86 方法，体外试验采用Boisen 和Fernandez 等体外模拟消化方法。
等体外模拟消化方法。
胃蛋白酶最适浓度的选择1g 豆皮→豆皮→100ml 100ml 三角瓶三角瓶+25ml +25ml 磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pH=6.0 0.01M pH=6.0 0.01M ）+10ml 盐酸（盐酸（0.2M 0.2M 0.2M）→温和搅拌）→温和搅拌+1ml(15mg/ml,30mg/ml,45mg/ml,60mg/ml,75mg/ml,90mg/ml)的新鲜胃蛋白酶溶液（由0.01M HCl 配制）配制），pH=2.0 +0.5ml 抑菌剂（青霉素抑菌剂（青霉素++链霉素）→链霉素）→393939℃恒温水浴中震荡℃恒温水浴中震荡6h,6h,消消化后化后+20%+20%+20%黄基水杨酸黄基水杨酸5ml 5ml→室温静置→室温静置30min 30min→抽滤→干燥后残渣凯式定氮法测蛋白质含量→→抽滤→干燥后残渣凯式定氮法测蛋白质含量→计算蛋白质和干物质消化率。
确定最适胃蛋白酶浓度为75mg/ml.胰酶最适浓度选择在最适（75mg/m ）胃蛋白酶液消化后的产物中加入10ml 磷酸缓冲液（0.2M pH=6.8）+5mlNaoH(0.6M)+1ml(70mg/ml,90mg/ml,110mg/ml,130mg/ml,150mg/ml)的胰酶溶液（由磷酸二氢钾缓冲液配制）pH=6.8→3939℃恒温水浴中震荡℃恒温水浴中震荡18h 18h→消化后→消化后→消化后+20%+20%+20%磺基水杨酸磺基水杨酸5ml 5ml→室温→室温静置30min 30min→抽滤，干燥后残渣按照凯式定氮法测其蛋白质含量，计算粗蛋白和干物质消化→抽滤，干燥后残渣按照凯式定氮法测其蛋白质含量，计算粗蛋白和干物质消化率，确定最适胰酶浓度为110mg/ml 110mg/ml。
水产饲料中蛋白原料的蛋白品质评价与价值采购
水产饲料中蛋白原料的蛋白品质评价与价值采购2008-05-07 作者：刘天骥访问次数：229字体【】水产饲料的蛋白含量高，蛋白原料的比例占饲料配方的60%-85%，由于天然动物蛋白资源日益减少，养殖动物副产品也有限，更多的考虑植物蛋白原料，淡水鱼饲料中植物蛋白原料占50%-65%。
2007年随着能源紧张、生物能源的利用而导致能量饲料、蛋白饲料价格猛涨，2008年南方大雪对油菜的影响特别大，预计减产50%以上，新菜粕的供应也受影响，非常规原料的开发也迫在眉睫，面对种类繁多的饲料蛋白原料，如何才能做到合理的选择和配比，成为众多配方师的头疼的问题。
本文结合部分学者对饲料蛋白原料的研究结果，结合集团水产饲料原料使用经验，综合分析了常用蛋白原料的蛋白品质与判断方法及价值采购原则，以供制作配方及原料采购参考。
一、粗蛋白消化率蛋白质是以游离氨基酸和小肽的形式被吸收，饲料中的蛋白质首先被消化成游离氨基酸和小肽，才能进一步被动物利用。
因此，要评价原料蛋白品质，首先要考虑的是原料中蛋白质的消化率。
1.动物蛋白原料粗蛋白消化率动物蛋白消化率可以通过体外测定进行判断，即测定胃蛋白酶消化率(体外消化率)，胃蛋白酶消化率的大小，可表示动物蛋白饲料原料的质量优劣。
它是指被胃蛋白酶消化的蛋白质与粗蛋白之间的比例，通常以百分率表示。
按照国标GB/T17811-1999《动物蛋白质饲料消化率的测定胃蛋白酶法》。
此方法的测定值近似反映实验动物对饲料的消化率，具有快速、简便的特点。
但是，由于此方法存在一定局限性，无法真实反应鱼体的消化情况。
因此，得到的体外消化率是近似值，作为同等情况下比较各饲料源的相对利用情况。
方法步骤:准确称取1克左右脱水脱脂动物蛋白原料，放入300毫升三角瓶中，加入经过预热（42-45℃）的%胃蛋白酶液150毫升，盖好密封，在45℃下边搅拌边消化16小时（可用恒温振荡器）。
消化后用滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上未消化物，将未消化物连同滤纸转入凯式烧瓶中进行消化，随后步骤同测粗蛋白，测出未消化粗蛋白量，同时测定动物蛋白原料的粗蛋白质。
胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法评定豆粕粉碎粒度
胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法评定豆粕粉碎粒度梁明;杨维仁【摘要】选用1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 mm筛孔孔径的筛片粉碎得到粒度为432、505、637、717、805 μm的豆粕,然后制成粉状配合饲料和颗粒饲料.对豆粕及不同粒度基础配制的粉状配合饲料和颗粒料分别进行胃蛋白酶-胰酶体外模拟酶解法测定消化率.试验结果表明:随着筛片孔径从1.0 mm扩大到3.0 mm,豆粕粉碎样品的粒度也从432μm增大到805 μm,筛孔孔径与粒度间具有线性关系(P＜0.01)；选用浓度为70mg/mL胃蛋白酶和16 mg/mL胰蛋白酶进行体外模拟消化,随豆粕粒度的增加,豆粕、粉状配合饲料、颗粒料体外干物质(DM)、粗蛋白质(CP)消化率均随豆粕粉碎粒度的增加均呈现降低.豆粕和颗粒料的体外消化率随豆粕粉碎粒度减小呈线性提高(P＜0.01),但粉状配合饲料消化率随豆粕粉碎粒度的变化未出现明显的线性规律(P =0.443、P=0.113).505 μm组和637 μm组均可得到较高的消化率,但考虑到加工成本问题,637μm可作为豆粕在仔鸡颗粒料最适粉碎粒度,即2.0 mm为制作仔鸡颗粒料的粉碎机筛片最佳筛孔孔径.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2013(028)003【总页数】5页(P87-91)【关键词】豆粕;粒度;胃蛋白酶-胰酶;体外消化法;消化率【作者】梁明;杨维仁【作者单位】山东农业大学,泰安271018;山东农业大学,泰安271018【正文语种】中文【中图分类】S816.9饲料粉碎粒度对饲料消化利用和动物生产性能均有明显影响，对饲料的加工过程与产品质量也有重要作用［1］。
粉碎过程通过破坏谷物种皮的保护，从而增大了饲料的表面积，增加了饲料与消化酶接触的机会，进而提高养分的消化利用率，改善饲料报酬。
适宜的粉碎粒度可显著提高饲料的转化率，减少动物粪便排泄量，提高动物的生产性能，也利于饲料成分混合均匀，便于颗粒饲料的制作，提高制粒的效率和颗粒质量［2］。
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比较
几种蛋白原料的体外消化率的测定方法的比较摘要：试验分别采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法、肉食性鱼类（如鲈鱼）消化道粗酶提取液消化法和草食性鱼类（如草鱼）消化道粗酶提取液消化法测定了酪蛋白、鱼粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉等7种蛋白质原料的体外消化率。
3种测定方法中，鱼粉的消化率差异不显著（P>0.05）；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉用两步法和草鱼消化酶法测定的消化率无显著差异（P>0.05）；棉籽粕消化率用两步法测定值高于用消化酶法的测定值，差异极显著（P<0.01）；豆粕、菜籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉的消化率用两步法比用鲈鱼消化酶测定的值高，差异极显著（P<0.01）；草鱼消化酶法和鲈鱼消化酶法对酪蛋白的消化率无显著差异（P>0.05），而对于豆粕、菜籽粕、棉籽粕、酵母粉和玉米蛋白粉草鱼消化酶法测定值高于鲈鱼消化酶法的测定值，差异极显著（P<0.01）。
结果表明，胃蛋白酶-胰蛋白酶两步体外消化法在测定鱼粉蛋白质消化率时可替代鱼类消化液粗酶消化法，对其它蛋白质原料使用该方法应慎重。
关键词：蛋白质饲料；体外消化率；测定方法消化率是动物从食物中所消化吸收的部分占总摄入量的百分比，是评价饲料营养价值的重要指标之一。
测定饲料消化率主要有两种方法：体外法和体内法。
体内法测定的消化率能够比较真实的反映鱼类对饲料的消化情况。
但体内法测定方法复杂、时间长、费用高，而且对外界环境的要求较高，季节、温度、光照等都会影响消化率测定值。
体外消化法是利用精制的消化酶或研究对象的消化道酶提取液在试管内进行的消化试验，其测定值可近似反映鱼对饲料的消化率。
此法能快速测定原料的相对利用率，为营养师制作配方提供参考[1]。
然而，体外消化法无法反映体内消化的真实情况。
Boisen和Eggum（1991）在胃蛋白酶-胰蛋白酶两步法中利用标准过滤装置测得饲料蛋白质消化率与鼠和猪的真消化率十分接近，他们认为这种方法测得的蛋白质体外消化率经内源氮校正与回肠末端蛋白质表观消化率高度相关。
动物消化率测定课件
2）种类：外源指示剂（ Cr2O3 ） 内源指示剂（酸不溶灰分） 3）优点：在于减少收集全部粪便带来的麻烦，省时省力，尤其 是在收集全部粪便较困难时。
4）缺点：指示剂回收率对消化率影响较大，并且很难找到回收 率很理想的指示物质。指示剂分析误差对结果影响很大，较难获 2得020/3重/28 复性高的测定数据。内源指消化率示测定剂受砂砾的影响大，因此收集6
准确地量化饲料中各种养分被动物消化利用的程度，也是 评定饲料营养价值的重要方法。 3.种类（见图1）
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消化率测定
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消化实验
体内（in vivo） 消化实验
尼龙袋法(nylon bags technique)
食入养分
[食入养分 -（粪中养分-内养分）]
真消化率 =
X 100%
粪中养分组成：
食入养分
饲料中未消化的养分；消化道分泌物；
消化道脱落细胞；消化道微生物及其代谢产物。
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消化率测定
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二、体内消化实验
(2)指示剂法 1）对指示剂的要求：
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二、体内消化实验
5）指示剂法消化率计算公式： 原理：食入指示剂量=排出指示剂量
饲粮指示剂含量 粪中养分含量
养分消化（%）= 100% —
×
×100%
粪中指示剂含量 饲粮养分含量
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动物蛋白质的胃蛋白酶消化率(体外消化)
1、标定：
精确称取0.15g于120℃烘3小时至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25ml水，加2g碘化钾及20ml硫酸溶液（20%），摇匀，于暗处放置10min。加150m水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。近终点时加3ml淀粉指示液(5g/L)，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。同时作空白试验。
2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质含量。然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。
六、测定结果计算与分析：
1、计算：
动物蛋白质胃蛋白酶消化率（%）=A-B×100
A
式中：A—试样中粗蛋白质的含量（%）。
B—试样中的不消化物粗蛋白质的含量（%）。
磷酸盐试液制备准确称取05?1g试样精确至00002g置于100ml容量瓶中用盐酸溶液溶解并定容至刻度混500ml溶解液至50ml容量瓶中加入25ml总离子强度缓冲液加水至刻测定将氟电极和甘汞电极与测定仪器的负端和正端联接将电极插入盛有水的50ml聚乙烯塑料烧杯中并预热仪器在磁力搅拌器上以恒速搅拌读取平衡电位值更换电位值平衡后即可进行标准液和试样液的电位测定
先后用0.5NKOH水溶液和水各20ml，充分振摇洗涤一次，如此再洗涤两次。最后用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。
用索氏抽提器回收乙醚，将抽提瓶中的残留物在105℃温度下烘1h，冷却称重，再烘30min，直至恒重为止。将儿重后的残留物溶于30ml中性乙醚乙醇中，用0.02N氢氧化钾滴定至粉红色。
四、结果计算：
三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml；
氯仿（分析纯）；
丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100ug，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10ug，备用。
黄粉虫蛋白粉成分分析及体外模拟消化功效评价
山东农业大学学报(自然科学版),2023,54(5):683-690VOL.54NO.52023 Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science Edition)doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2023.05.007黄粉虫蛋白粉成分分析及体外模拟消化功效评价迟晓君1,王璇2,张大鹏1,翟梦尧1,张瑞杰1,韦新彤1,孙文君1*1.山东农业工程学院,山东济南2501002.山东农业大学食品科学与工程学院,山东泰安271018摘要:为探究黄粉虫蛋白粉的应用前景，本试验以蛋白质含量、蛋白质消化率、氨基酸组分分析结果、脂肪含量、灰分含量、流动性、白度、分散时间、溶解性作为试验指标，对项目组开发的黄粉虫蛋白粉与市面上主售的乳清蛋白粉、大豆蛋白粉进行成分分析，并对3种蛋白粉的体外模拟消化特征进行评价。
结果表明，黄粉虫蛋白粉的蛋白质含量为73.18%，显著低于乳清蛋白粉（83.03%）和大豆蛋白粉（83.98%）（P＜0.05）；但黄粉虫蛋白粉的消化率高达86.98%，显著高于乳清蛋白粉（69.52%）和大豆蛋白粉（73.56%）（P＜0.05）；黄粉虫蛋白粉中的必需氨基酸百分含量为34.51%，其亮氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸＋半胱氨酸、苯丙氨酸＋酪氨酸的氨基酸评分分别为61.15、34.09、8.58、29.13，显著优于大豆蛋白粉（P＜0.05），与乳清蛋白粉没有显著性差异（P＞0.05）；黄粉虫蛋白粉的脂肪含量较高，为3.47%，显著高于乳清蛋白粉（0.8%）及大豆蛋白粉（0.79%）（P＜0.05）；但黄粉虫蛋白粉的灰分含量较低，为5.48%，与乳清蛋白粉（5.5%）无显著性差异（P＞0.05）；黄粉虫蛋白粉的休止角、白度、堆积密度、分散时间、溶解性分别为16.20°、81.49、9.32g/100mL、1.60min、23.56%，其中流动性、溶解性、分散时间显著优于市售的2种蛋白粉（P＜0.05），可作为优质的蛋白补充剂，为黄粉虫高值化利用提供理论依据。
蛋白质的消化吸收.
蛋白质的消化吸收一、蛋白质的消化宠物对蛋白质的消化由胃开始，狗、猫均为肉食性动物，胃液中盐酸浓度较高。
如狗胃液中盐酸的含量为0.4%～0.6%。
盐酸能使蛋白质膨胀变性，便于分解与消化。
宠物饲粮中的粗蛋白质被宠物采食后，在胃酸和胃蛋白酶的作用下，部分蛋白质被分解为分子较小的多肽，然后随同未被消化的蛋白质一起进入小肠。
在小肠中受到胰蛋白酶、糜蛋白酶、羧基肽酶及氨基肽酶等作用，最终被分解为氨基酸及部分寡肽（二肽、三肽）。
氨基酸和寡肽都可被小肠黏膜直接吸收。
但二肽和三肽在肠黏膜细胞内经二肽酶等作用继续分解为氨基酸。
被吸收的氨基酸进入门静脉到肝脏。
小肠未被消化吸收的蛋白质和氨化物进入大肠后，在腐败菌的作用下，降解为吲哚、粪臭素、酚、甲酚等有毒物质，一部分经肝脏解毒后随尿排出，另部分随粪便排出。
在大肠中，少部分蛋白质和氨化物还可在细菌酶的作用下，程度较小地被降解为氨基酸和氨，其中部分可被细菌利用合成菌体蛋白，但合成的菌体蛋白绝大部分随粪排出，而被再度降解为氨基酸后能由大肠吸收的为数甚少，吸收后也由血液输送到肝脏。
最后，在消化道中所有未被消化吸收的蛋白质，随粪便排出体外。
随粪便排出的蛋白质，除了饲料中未消化吸收的蛋白质外，还包括肠脱落黏膜、肠道分泌物及残存的消化液等。
后部分蛋白质则称为“代谢蛋白质”（即代谢粪N×6.25）。
二、蛋白质的吸收狗、猫的肠管较短，但肠壁厚，具有典型的肉食特征，对饲粮中蛋白质消化吸收能力很强，对氨化物几乎不能消化吸收。
饲粮蛋白质消化的终产物氨基酸并非全部被小肠吸收，各种氨基酸的吸收率不尽相同。
一般情况下，动物对苯丙氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸的吸收率较其他氨基酸为高。
小肠对不同构型的同一氨基酸吸收率也不同，通常L型氨基酸的吸收率比D型氨基酸高。
新生幼犬、幼猫的血液内几乎不含γ-球蛋白。
但在出生后24～36h内可依赖肠黏膜上皮的胞饮作用，直接吸收初乳中的免疫球蛋白，以获取抗体得到免疫力。
人体内有多少种消化酶？
人体内有多少种消化酶？人体内有三大类消化酶，分别是酸性消化酶、碱性消化酶和酶复合酶类。
其中，不论哪一类，每类都有一定数量的不同种类的消化酶，它们的作用是酶可以使食物中的营养成分最大化地被分解、消化、吸收以供我们体内使用。
下面我们来详细看一下人体内消化酶的特点以及各自的作用。
（一）酸性消化酶：1、胃酶：胃酶最为常见，它是通过胃液控制胃蛋白酶来分解食物中蛋白质，这种胃酶只能在胃酸的环境下生效，所以胃蛋白酶常又称为胃蛋白酶酸；2、酸氨酶：酸氨酶是另一种消化性酶，主要分解食物中碱性单位，例如脂肪以及碱性酯，以及胆盐；3、胰酸酶：胰酸酶可以分解糖酒精，可以分解体外的脂肪以及胆汁酸；（二）碱性消化酶：1、胆汁蛋白酶：胆汁蛋白酶可以分解B类单糖，它在人体内主要被分解它在胆汁中；2、碱性磷脂酶：它主要被用来促进脂肪的分解和消化，它最大的作用是胆固醇的分解；3、碱性表面活性物质：碱性表面活性物是人体的细胞和组织的保护剂，它能在胆汁碱度的条件下活性；（三）酶复合酶类：1、胆汁脂肪酶：这种物质由胆汁酸和脂肪酯两部分构成，在胆汁的碱性环境中，胆脂肪酶主要分解植物油中的大分子脂肪；2、胆盐酶：胆盐酶可以快速溶解水杨酰乙酸单体及其盐酸盐，因此这类物质在胆汁中具有促进消化的作用；3、胆汁酸蔗糖酶：这类物质也叫做胆糖酶，它主要可以分解单糖及其运输到动物体内，在胆汁腺的环境中可以分解蔗糖。
总之，人体内消化酶种类多种多样，可以说是相当复杂。
它们各自的活动可以使我们的营养物质都得以合理的分解，而且还可以把机体所需的营养物质带入体内。
因此，消化酶的存在非常重要。
几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
氏定氮法测定残留物的蛋白质含量。 计算饲料蛋白质
为２ Ｉ／ｇ妒鱼消化道混合液； ５０ ｍ ； ０Ｕ 草鱼消化道混合 液； 双抗为青霉素Ｇ钾盐（ ０ ｍ） １ Ｉ／ｌ ５ Ｕ 和硫酸链霉素
匀， 再加浓硫酸２ｍ， ０１ 在消化炉上小心加热， 起初电 压
调大， 冒烟时调小电压， 大量冒烟后再调大电压， 加热 至样品呈透明的浅蓝色或白色为止， 关上电源， 使消 化瓶自 然冷却。 而后， 用蒸馏水冲洗消化瓶， 洗液注人 １０ １ ０ｍ 容量瓶内， 定容。同时做一个空白 对照试验。
１ ．２ 蒸馏 ．１ ２．
于体积 １ ｍ， 值 １ 的Ｈ ｌ Ｃ缓冲液中。 ０ ｌ Ｈ ． Ｃ ＫＩ ０ ｐ ４ －
ｃ ． 用移液管移取 ３ｍ 上述混合液置于三角瓶中。 ０ｌ
鱼类消化道的粗酶液离体消化 １ 后终止反应， ２ ｈ 用定量滤纸过滤， 并用温水冲洗 ３４ 取滤渣（ － 次， 含滤 纸） １ ℃ 在 ０ 下烘干至恒重并准确称重。凯氏定氮法测 ５ 定饲料原料及其消化后相应滤渣的粗蛋白含量。 粗蛋白消化率 （ ＝ ｘ饲料样品粗蛋白含 ％） １ （ ０ ０
１ ． ３ 离体消化程 序 ．２ ２．
黄沦海等： 几种蛋白质原料体外消化率测定方法的比较
①胃蛋白酶处理
ａ 饲料样品２ 分别置于２０ ． 称取０ｇ ． ５ 份， ５ ｍ 带盖 ｌ 三角瓶中（ 每个样品测２ 个平行样） 。
ｂ 称取１７ 蛋白 准确到００ ） ．７ 胃 酶（ ． 准确 ７ｇ ．１ ， ０ｇ置
１ ． １ 胃蛋 白酶最适量的选择 ．２ ２．
标定甲基红一 嗅甲酚绿混合指示剂 ：取 ２ ｍ ０ ｌ
动物消化率测定
—干物质、能量、蛋白、钙、磷
制作人：XXX
内容
一.消化实验概述
二.体内消化实验
三.体外消化实验
四.指标测定方法
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消化率测定
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一.消化实验概念、目的
1.概念： 以测定动物对饲料养分的消化能力或饲料养分的可消化性为目的的试验。
2.目的： 准确地量化饲料中各种养分被动物消化利用的程度，也是评定饲料营养价
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三、体外消化实验
1）方法：用安装瘘管的办法收取小肠液，在试管中进行孵化。 2）优点：操作方便，环境条件、处理方法和时间易控制，更容易标准化。 3）缺点：与动物的生理系列化过程有一定的差异。 4）操作步骤：用胃蛋白酶加盐酸溶液初步孵化，然后用小肠液在pH7.0 的条件下 进一步孵化（用此法得到的结果与全收粪法无显著差异）。
有研究报道：在用胃蛋白酶孵化之前，先用pH5.8 得KH2PO4 . Na2HPO4 . 淀粉 酶缓冲液处理，效果更佳。
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四、指标的测定方法
干物质：烘箱法，具体参数因样品而异。 能量：氧弹式测热法 蛋白：凯氏定氮法 钙：高锰酸钾滴定法 磷：钼黄比色法 具体操作方法参见：《饲料分析及饲料质量检测技术》第3版，张丽英，2007
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二、体内消化实验
2）桥式瘘管 优点：其对荷术动物生理影响小， 手术成功率高；测量结果优于T型 瘘管。 缺点：人工手术复杂，饲养管理繁 重。
图2、桥型瘘管示意图
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二、体内消化实验
3）回-直肠吻合术 优点：收粪简便，而且可收集全部粪样； 缺点：手术复杂、成功率低和护理相对麻烦。
不同种类原料肉对婴幼儿肉泥理化性质和体外消化特性的影响探讨
不同种类原料肉对婴幼儿肉泥理化性质和体外消化特性的影响探讨发布时间：2021-05-08T02:23:05.794Z 来源：《中国科技人才》2021年第4期作者：张龙[导读] 婴幼儿肉泥样品购买于甜甜妈环球母婴店，为嘉宝品牌的牛肉泥，猪肉泥，鸡肉泥。
佛山市顺德区美的电热电器制造有限公司广东省佛山市 528311摘要：0-3岁为婴幼儿期，这也是孩子生长发育的重要阶段，一般在婴儿6个月以后家长就会开始添加辅食，一是补充母乳及奶粉所欠缺的一部分营养，再就是帮助孩子从流食过渡到固体食物。
除了母乳和奶粉外，肉类是婴幼儿获取蛋白质的一个主要来源，为了分析不同种类的原料肉对婴幼儿肉泥的影响，本文通过试验对几种肉泥的理化性质与体外消化特性等进行了对比分析，结论是它们之间存在着较大的差异。
关键词：原料肉；婴幼儿；肉泥；蛋白质1材料与方法1.1材料与试剂婴幼儿肉泥样品购买于甜甜妈环球母婴店，为嘉宝品牌的牛肉泥，猪肉泥，鸡肉泥。
胃蛋白酶（酶活力≥2500units/mg）、胰酶（酶活力≥200units/mg）购自美国sigma公司；盐酸、硫酸、氢氧化钠、硼酸、氯化钾、氯化钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、六水合氯化镁、尿素、石油醚均为国产分析纯。
1.2仪器与设备SH420F石墨消解仪济南海能仪器公司；K1160凯氏定氮仪济南海能仪器公司；DGG-9240A电热恒温鼓风干燥箱上海森信实验仪器有限公司；马尔文3000激光粒度仪英国Malvern；E-816索氏萃取器丹麦BUCHI；THZ-D台式恒温振荡器；AvantiJ-C高速冷冻离心机美国BeckmanCoulter公司；TW20水浴锅德国Julabo公司；Fiveeasy台式pH计瑞士MettlerToledo公司；PD500-TP匀浆机英国PRIMA公司；MCR301型高级旋转流变仪奥地利AntonPaar公司1.3实验方法1.3.1产品制作基本流程原料肉预处理绞肉加热混合均质套管加热热灌装排气杀菌冷却成品。
单胃动物对饲料蛋白质的消化、利用及其影响因素
ห้องสมุดไป่ตู้
种氨基酸。如过多的赖氨基显著降低精氨酸的效能 ， 增加精氨酸 的需要量 。亮氨酸含量过高时 ， 增加对异 亮氨酸的需要量。苏氨酸和色氨酸、 异亮氨酸和苯丙 氨酸 、 苯丙氨酸和苏氨酸、 丝氨酸和苏氨酸之 间也存
在拮抗作用 ， 影响对方的消化与吸收。
３ 影响饲料 蛋 白质消一
动物种类和年龄。
匝
同一种 饲
养殖技术顾 问 ２ ０ １ ４ ． １
氨基酸之 间的竞争和拮抗作用 。氨基酸之间的 拮抗作用发生在结构相似的氨基酸间 ，一些结构相
似的氨基酸互相竞争或排斥 ，一种氨基酸干扰另一
酸， 在肝脏 中脱氨 ， 脱掉 的氨基生成氨 ， 变为尿素 ， 在 肾脏以尿的形式排 出体外 ，剩余 的酮酸部分氧化供
能或转化为糖 原和脂肪作为能力储备 。氨基酸在肝
中蛋 白质水平过高 ， 超过 了动物的消化能力 ， 饲料蛋
白质的消化率就会降低 。因此 ， 饲料蛋 白质水平保持 在动物需要量 的范围内， 其 消化率较高 ， 低 于或高于 动物需要量 ， 消化率都会降低。 蛋 白酶抑制因子 。豆科籽实及其饼粕中含有多 种蛋 白酶抑制因子 ，其 中最主要 的是胰蛋 白酶抑制 剂 。胰蛋 白酶抑制剂能与胰蛋 白酶结合而使胰蛋 白 酶失去活性 ， 从而降低蛋 白质的消化率 。蛋 白酶抑制 因子对热敏感 ， 适 当的热处理可使这些 因子失活。 热损害 。 对大豆等饲料进行适当的热处理 ， 能消 除其中的抗营养 因子 ， 也能使蛋 白质初步变性 ， 有利 于消化吸收。但温度过高或时间过长 ， 则有损于蛋 白 质的营养价值 。
草 食 动 物 对 饲 料 中 的氮 化 物 的利 用 能 力 比猪 强 ， 但 比反刍 动物 差 。
鱼粉质量检测方法
鱼粉质量检测方法1.实验目的：评价鱼粉质量的优劣2.评价指标:粗蛋白、真蛋白、胃蛋白酶消化率、粗脂肪、氨基酸的分析、灰分、盐分、水分3.试验方法与步骤：3．1 检测粗蛋白粗蛋白质是鱼粉中含有氮物质的总称，包括真蛋白质和非蛋白含氮物质两部分，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等。
国产鱼粉粗蛋白质一般为 45—55％，进口鱼粉粗蛋白质一般为60 —67％。
测定方法用凯式定氮法。
原理：凯氏定氮法：食品经加硫酸消化使蛋白质分解,其中氮素与硫酸化合成硫酸铵.然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸液吸收后,再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量,再乘以一定的数值即为蛋白含量,其化学反应式如下.(1) 2NH2(CH2)2COOH+13H2S04 (NH4)2S04+6C02+12S02+ 16H2(2)(NH4)2SO4+2NAOH-----2NH2+2H2O+NA2SO4(3)2NH3+4H3BO3----(NH4)2B4O7+5H2O(4)(NH4)2B407+H2S04+5H20-(NH4)9SO4+4H2BO2三、试剂与仪器：1、硫酸钾2、硫酸铜3、硫酸4、2％硼酸溶液5、40％氢氧化钠溶液6、混合指示剂：把溶解于95％乙醇的0.l％溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95％乙醇的0.l％甲基红溶液2毫升混合而成．7、0.OINHCL标准溶液或0．01N硫酸标准溶液．8、凯氏微量定氮仪一套.9、定氮瓶100m1或50ml一只.10、三角瓶150ml 3只.11、量筒50ml、lOml、lOOml.12、吸量管10ml只.13、酸式滴定管1支.14、容量瓶100毫升1只.15、小漏斗1只.四、操作方法：1、样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg）,移入干燥的100ml或500ml 定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,3g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5小时.取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验.2、按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水.3、想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓慢流入反应室,立即将玻璃盖塞紧,并加水于小玻璃杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏,蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接收瓶,使冷凝管下端离开液皿,再蒸馏1min,然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点.同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作.计算：X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) +F*100X：样品中蛋白质的含量,g；V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml；V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml；N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；m：样品的质量（体积）,g（ml）；F：氮换算为蛋白质的系数.注：（1）样品应是均匀的,固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀.（2）样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上,万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低.（3）消化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入30%过氧化氢2-3ml,促使氧化.（4）在整个消化过程中,不要用强火,保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下.使氮有损失.（5）如硫酸缺少,过多的硫酸钾会引起氨的损失,这样会形成硫酸氢钾,而不与氨作用,因此当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时,要增加硫酸的量.（6）加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点,硫酸铜为催化剂,硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂.（7）混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色.如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液. （8）氨是否完全蒸馏出来,可用PH试纸试馏出液是否为碱性. （9）吸收叶也可以用0.01当量的酸代表硼酸,过剩的酸液用0.01N 碱液滴定,计算时,A为试剂空白消耗碱液数,B为样品消耗碱液数,N为碱液浓度,其余均相同.（10）以硼酸为氨的吸收液,可省去标定碱液的操作,且硼酸的体积要求并不严格,亦可免去用移液管,操作比较简便.（11）向蒸馏瓶中加入浓碱时,往往出现褐色沉淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀.有时铜离子与氨作用,生成深兰色的结合物[Cu(NH3)4]++3．2 检测真蛋白原理：粗蛋白质反映其中所有含氮物质的含量，而不能反映其中真蛋白质部分，因此，有必要进行真蛋白的测定。
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动物蛋白质的胃蛋白酶消化率（体外消化）一、适用范围：本方法适用于动物性原料品质的判定。
二、原理：用脱脂的样本在一个热的胃蛋白酶溶液中，稳定地不断搅拌约16小时，予以消化。
测定它的蛋白质含量。
这种方法不能用于植物蛋白质饲料原料或混合饲料，因为，它们所含复杂的碳水化合物是不能被胃蛋白酶消化的。
将溶解了的蛋白质全部作为可消化的，并用其对粗蛋白质的百分率来表示。
三、设备：1、恒温水浴振荡器：45±2℃。
2、测定粗蛋白质的全套设备。
3、过滤装置。
4、索氏脂肪浸提器。
四、试剂：除测定粗蛋白质用的试剂外，尚需以下试剂：1、0.2%胃蛋白酶溶液的配制：先稀释6.1ml盐酸到1L。
在使用前，现配0.2%胃蛋白酶溶液。
2、所有胃蛋白酶应具有1：3000的活性。
3、加热稀盐酸至42—45℃，然后加入胃蛋白酶2g,轻轻地搅动，使其溶解（此时不要加热！）。
即得在0.75mol/L盐酸中的0.2%胃蛋白酶溶液。
五、测定步骤：1、准确称取1g脱脂试样，放入300ml碘量瓶内，加入经过预热（42—45℃）的0.2%胃蛋白酶溶液150ml，盖好塞子，在45℃下边搅拌边消化16小时，消化后用滤纸过滤，然后用温水洗净滤纸上的不消化物。
将不消化物连同滤纸转入消化管中，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定不消化物中的粗蛋白质含量。
2、另取1份脱脂分析试样，按照测定粗蛋白质含量的方法，测定其粗蛋白质含量。
然后，根据消化的和不消化的粗蛋白质含量计算出试样的胃蛋白酶消化率。
六、测定结果计算与分析：1、计算：动物蛋白质胃蛋白酶消化率（%）= A-B×100 A式中：A—试样中粗蛋白质的含量（%）。
B—试样中的不消化物粗蛋白质的含量（%）。
2、分析：合格的鱼粉，其粗蛋白质的胃蛋白酶消化率应不小于85%；羽毛粉应在75%以上。
植物油脂检验不皂化物测定法GB 5535-85本标准适用于商品植物油不皂化物的测定。
油脂中不皂化物即油脂皂化时，与碱不起作用的，不溶于水的物质，包括留醇，脂溶性维生素的色素等。
一、仪器和用具：锥形瓶：250 ml冷凝管恒温水浴锅电炉分液漏斗：250 ml量筒：50 ml索氏抽提器电热恒温烘箱烧杯、试剂瓶等天平：感量0.001 g二、试剂：1.0N氢氧化钾乙醇溶液0.5N氢氧化钾水溶液乙醇、乙醚中性乙醚乙醇混合液(2：1)三、操作方法：称取混匀试样5g（W）注入锥形瓶中，加1.0N KOH乙醇溶液50 ml，连接冷凝管，在水浴锅上煮沸约30 min，煮到溶液清澈透明为止。
用50 ml蒸馏水将皂化液转移入分液漏斗中，加入50 ml乙醚，趋温热时猛烈摇动1 min后，静止分层。
将下层皂化液放入第二只分液漏斗中，每次用50 ml乙醚提取两次。
合并乙醚提取液，加水20 ml轻轻旋摇，待分层后，放出水层，每次再加水20 ml猛烈振摇洗涤两次。
先后用0.5N KOH水溶液和水各20 ml，充分振摇洗涤一次，如此再洗涤两次。
最后用水洗至加酚酞指示剂时不显红色为止。
用索氏抽提器回收乙醚，将抽提瓶中的残留物在105℃温度下烘1h，冷却称重，再烘30 min，直至恒重为止。
将儿重后的残留物溶于30 ml中性乙醚乙醇中，用0.02N氢氧化钾滴定至粉红色。
四、结果计算：油脂中不皂化物含量按下列公式计算：不皂化物（%）=W VNW)28.0(1001式中：W1——残留物重量，gW——试样重量，gV——滴定所消耗的氢氧化钾溶液体积，mlN——氢氧化钾溶液的当量浓度0.28——每毫克当量的油酸重量，g双试验结果允许差不超过0.2%，求其平均数，即为测定结果。
测定结果取小数点后第一位。
过氧化值的测定一、适用范围：本方法适用于油脂及动物性原料的测定。
二、原理：油脂氧化过程中，产生的过氧化物，与碘化钾作用，生成游离碘；以硫代硫酸钠溶液滴定，计算含量。
三、试剂：1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热加速溶解，冷却后贮于棕色瓶中。
现用现配。
2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀。
3、0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液：称取5g硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）（或3g无水硫代硫酸钠），溶于1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却。
放置两周后过滤备用。
4、1% 淀粉指示剂：称取可溶性淀粉0.5g，加入少许水调成糊状倒入50ml 沸水中调匀，煮沸，现用现配。
四、测定步骤：精确称取2—3g混匀的样品，置于250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液，使样品完全溶解；加入1.00ml饱和碘化钾溶液。
紧密塞好瓶塞，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置5min，取出加75ml水，摇匀。
立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定，至淡黄色时，加1ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点。
同时作空白试验。
五、测定结果的计算与分析：1、计算：X=[（V-V0）×N×0.1269]/m式中：X—样品的过氧化值，%。
V—样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。
V—空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。
N—硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度，mol/L。
0.1269—1N硫代硫酸钠1ml相当于碘的克数。
2、分析：油脂新鲜，其过氧化值不应大于0.15%。
附：0.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液的标定1、标定：精确称取0.15g于120℃烘3小时至恒重的基准重铬酸钾，置于碘量瓶中，溶于25ml水，加2g碘化钾及20ml硫酸溶液（20%），摇匀，于暗处放置10min。
加150m 水，用配制好的硫代硫酸钠溶液滴定。
近终点时加3ml 淀粉指示液 (5g/L)，继续滴定至溶液由蓝色变为亮绿色。
同时作空白试验。
2、计算: C=04903.0)(01⨯-V V m 式中：C —硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度，mol/L 。
m —重铬酸钾之质量，g 。
V 1—硫代硫酸钠溶液之用量，ml 。
V 0—空白试验硫代硫酸钠标准溶液之用量，ml 。
0．04903—与1.00ml 硫代硫酸钠标准溶液【C=1.0mol/L 】相当的以克表示的重铬酸钾的质量。
挥发性盐基氮的测定(VBN)（半微量定氮法）一、原理：挥发性盐基氮是指动物性食品由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质。
此类物质具有挥发性，在碱性溶液中蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。
二、试剂：氧化镁混悬液（10 g/L ）：称取1.0 g 氧化镁，加100 ml 水，振摇成混悬液。
硼酸吸收液（20 g/L ）盐酸[c （HCl ）=0.010 mol/L]或硫酸[c （1/2 H 2SO 4）=0.010mol/L]的标准滴定溶液。
甲基红—乙醇指示剂（2g/L ）次甲基蓝指示剂（1g/L ）临时将上述两种指示液等量混合为混合指示剂。
三、仪器：半微量定氮器微量滴定管：最小分度0.01 ml四、分析步骤：试样处理：将试样除去脂肪、骨及腱后，绞碎搅匀，称取约10.0 g ，置于锥形瓶中，加100 ml 水，不时振摇，浸渍30 min 后过滤,滤液帜置冰箱备用。
蒸馏滴定：将盛有10 ml 吸收液及5滴~6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管的下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取5.0 ml 上述试样滤液于蒸馏器反应室内，加5 ml 氧化镁混悬液(10 g/L)，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5 min 即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（0.010 mol/L ）或硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。
同时做试剂空白试验。
五、计算结果：试样中挥发性盐基氮的含量按式⑴进行计算。
X=100100/51421⨯⨯⨯⨯-m c V V ）（ 式中：X ——试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克（mg/100g ） V1——测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml ） V2——试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积，单位为毫升（ml ） c ——盐酸或硫酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L ）14——与1.00ml 盐酸标准滴定溶液[c （HCI ）=1.000 mol/L]或硫标准滴定溶液[c （1/2 H2SO4）=1.000 mol/L]相当的氮的质量，单位为毫克（mg ）m ——试样质量，单位为克（g ）计算结果保留三们有效数字。
六、精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
三甲胺的测定一、原理：试样中总的含氮量减去载体及水溶氮的含氮量，再除以系数10.03即为氯化胆碱的含量。
二、仪器与试剂：同粗蛋白质的测定。
三、测定步骤：1、精确称取0.45g左右样品测其含氮量，即为总氮N总。
2、精确称取1g左右样品，放入带有定性滤纸的漏斗中，用蒸馏水冲洗10次左右，取出滤纸及残留物烘干，以凯氏定氮法测定含氮量，即为载体含氮量N1。
3、精确称取3g左右样品，用蒸馏水溶解，定容100ml，放置0.5小时后，取上清液5ml 进行蒸馏，测其含氮量，即为水溶氮。
四、测定结果的计算与分析：1、计算：氮化胆碱含量%= N总-N1-N210.03三甲胺的含量%=1459水溶氮的含量2、允许差：两次平行测定结果绝对值不大于1%，取其算术平均值为测定结果。
乌洛托品鉴别（六次甲基四胺）一、试剂和材料：氢氧化钾；硫酸溶液：6+100；钠氏试剂；氨制硝酸银溶液：称取1.0g硝酸银，置于100ml烧杯中，加20ml水溶解，在不断搅拌的同时滴定氨水溶液，至棕色沉淀几乎全部溶解后，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存；红色石蕊试纸：变色范围pH4.5～8.0（红→蓝）；二、鉴别方法：水剂样品，称取约0.5g实验室样品，加10ml水，为试验溶液。
粉剂样品，称取约2g实验室样品，加20ml水溶解，过滤，弃去滤渣，为试验溶液。
在试验溶液中，加10ml硫酸溶液，于电炉上加热、煮沸，用沾有氨制硝酸银溶液或钠氏试剂的试纸检验产生的蒸汽，观察试纸颜色，若试纸颜色变黑，则加入2g氢氧化钾，继续加热产生的蒸汽能使润湿的红色石蕊试纸变蓝，证明有甲醛和氨产生，判定样品中含有六次甲基四胺。
油脂TBA 值的测定方法一、原理：油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。
丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA （硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在538nm 波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。
二、试剂：TBA 水溶液：准确称取TBA0.288g 溶于水中，并稀释至100ml （如TBA 不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100ml ），相当于0.02M ；三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g 及0.1gEDTA ，用水溶解，稀释至100ml ；氯仿（分析纯）；丙二醛标准溶液：称取0.315g 1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml ，此溶液每ml 相当于丙二醛100ug ，置于冰箱内保存。