蜂胶口服液的制备及其黄酮类化合物的测定

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蜂胶中黄酮类化合物的提取与测定

所产生的酶解产物的ACE抑制活性相差较大，其中，用胃蛋白酶酶解鹿血获得的酶解产物的ACE抑制活性可高达68.42%。采用单一蛋白酶酶解产物的ACE抑制活性强于复合蛋白酶酶解产物的ACE抑制活性。温度、pH、酶量、时间和底物浓度5种因素都不同程度上影响着蛋白酶的酶解效果，其影响程度依次为酶量＞pH值＞底物浓度＞时间＞温度，胃蛋白酶在最适水解条件下(温度37℃，pH3.7，酶量6 000 U/g，时间6 h，底物浓度4%)酶解鹿血获得的ACE抑制率为 70.22%。
方法同上。总黄酮含量（以干基结果表示），以芦丁的质量分数X计，数值以10-2或%表示，按下式计算：
《食品工业》2008 年第 3 期
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基础研究
CV D
m
H
式中：C——由标准曲线计算得出的样品的黄酮
浓度数值/（mg/mL）；
V——样品溶液的体积/mL；
D——样品的总稀释倍数；
m——样品的质量/g；
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蜂胶(propolis)素有“紫色黄金”之称，是蜜蜂从胶源植物的新生芽条和愈伤组织处采集的分泌物，加入腺体如蜜蜂舌腺、蜡腺等腺体的的分泌物及花粉等混合转化而成的一种具有芳香气味的胶粘状物质。它主要由蜂胶香脂、蜂蜡、树脂、花粉等组成[1]。其中黄酮类化合物作为一种主要功能成分，具有许多有益的生理效应与药理作用 [2]，如较强的抗氧化、清除自由基作用；软化血管、抗衰老、减少血栓形成及改善人体的微循环作用，被誉为珍贵的天然“血管清道夫”[3-6]。
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[宝典]蜂胶中的黄酮类化合物

天然产物研究与开发N at Prod R es D ev 2009,21:108421090文章编号:100126880(2009)0621084207　收稿日期:2008205216 接受日期:2008210221　基金项目:国家蜂产业技术体系专项(NYCYTX 243)3通讯作者Tel:862571286971952;E 2mail:flhu@zju .edu .cn蜂胶中的黄酮类化合物张翠平,胡福良3浙江大学动物科学学院,杭州310029摘　要:黄酮类化合物是蜂胶中最重要的组成成分和生物活性物质。

本文对国内外从蜂胶中鉴定出的黄酮类化合物进行了分类总结,给出每种成分的中英文名称及化学名称,以避免同物异名或同名异物现象的出现。

本文共列出黄酮类化合物135种,其中黄酮及黄酮醇类化合物46种,二氢黄酮及二氢黄酮醇类36种,异黄酮类11种,查耳酮和二氢查耳酮类17种,以及最近几年从蜂胶中鉴定出的新黄酮类似物25种。

关键词:蜂胶;黄酮类化合物中图分类号:R282.74;S896.6文献标识码:AFl avono i ds i n PropolisZHANG Cui 2p ing,HU Fu 2liang3College of A ni m al Sciences,Zhejiang U niversity,Hangzhou 310029,ChinaAbstract:Flavonoids are the most i m portant components and bi ol ogical substances in p r opolis .I n this article,flavonoids identified fr om p r opolis were classified,and the Chinese and English na me and che m ical na me of each flavonoid was giv 2en,in order t o avoid the phenomenon of homony m and synony m.T otaled 135flavonoids were identified,including 46fla 2vones and flavonols,36flavanones and dihydr oflavonols,11is oflavones and dihydr ois oflavone,17chalcone and dihydr o 2chalcones,and 25neoflavonoids .Key words:p r opolis;flavonoids 蜂胶(p r opolis )是蜜蜂从植物幼芽、树皮与树干裂缝上采集树脂,并混入其上颚腺分泌物和蜂蜡加工而成的具芳香气味的胶状固体物。

蜂胶中总黄酮的提取与紫外可见分光光度计的测定

蜂胶中总黄酮的提取与紫外可见分光光度计的测定作者：梁凤珍来源：《中国化工贸易·中旬刊》2018年第10期摘要：蜂胶是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂，再混以蜜蜂舌腺、蜡腺等腺体的分泌物，经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质。

蜂胶中含有大量的黄酮类化合物。

黄酮类化合物有很好的药用价值，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、消炎镇痛、防腐保鲜等多种功效，能增加机体免疫力，促进组织再生，已越来越广泛地应用于医药、食品、化妆品等领域。

近年来已有很多学者研究了从蜂胶中提取黄酮类化合物的工艺方法，提出了很多新型的、较优的提取工艺方法;并研究了很多黄酮类化合物的测定方法。

本文采用最常用最简单的分析方法-紫外可见分光光度法，在相关文献的基础上对蜂胶中总黄酮的提取与测定进行研究，研究了提取条件（提取方式、提取时间，提取剂浓度）对蜂胶中总黄酮的提取率的影响;研究了参比溶液的选择以及显色剂的选用、酸度、显色时间对测定结果的影响。

通过紫外分光光度法，对蜂胶中的总黄酮进行测定，建立的线性回归方程线性良好，R2=0.9999;线性范围宽，0～20μg/mL;回收率102.4%;检出限0.162μg/mL。

实验结果表明，紫外可见分光光度法简单可行，准确度高，相对标准偏差小，检出限低，是测定蜂胶提取物中总黄酮含量的一种经济有效的方法。

关键词：蜂胶;总黄酮;提取;测定;紫外可见分光光度1 实验部分1.1 实验原理蜂胶中主要含有黄酮类和黄酮醇化合物，利用3、5位有羟基的黄酮与Al+可生成螯合物，显黄色，在最大吸收峰波长415nm左右处测定其吸光度。

在415nm左右范围内，其吸光度与黄酮类化合物的含量成正比。

以芦丁为对照品，建立标准曲线，定量测试黄酮类化合物的含量。

1.2 实验仪器和实验试剂1.2.1 实验仪器UV-2102 PCS型紫外可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司;AL104电子分析天平：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司。

蜂胶中黄酮成分及提取方法研究

云南大学学报(自然科学版),2006,28(S1):245～247CN53-1045/N　ISSN0258-7971 Journal of Yunnan U niversityΞ蜂胶中黄酮成分及提取方法研究程伟贤1,陈鸿雁2,张义平2,谭理想1,高树鹏1,古　昆1(1.云南大学应用化学系教育部自然资源药物化学重点实验室,云南昆明　650091;2.云南警官学院,云南昆明　650223)摘要:对云南蜂胶化学成分进行研究,考查了乙醇浓度和浸提时间等条件对蜂胶总黄酮提取的影响,采用分光光度法测定了蜂胶中总黄酮的相对含量.对提取物的乙酸乙酯部分进行柱层析分离,得到4个黄酮成分,运用波谱技术鉴定为高良姜素、异樱花素、槲皮素和洋芹素.关键词:蜂胶;黄酮;结构鉴定;含量测定中图分类号:O629.9 文献标识码:A 文章编号:0258-7971(2006)S1-0245-03 蜂胶是蜜蜂采集植物的树脂分泌物与蜂蜡,经咀嚼调制而成的一种树脂状物质.蜜蜂用蜂胶加固巢脾,填补蜂巢缝隙与孔洞,涂抹巢房[1].蜂胶是一种亲脂性物质,呈黄褐色到深褐色,有时甚至呈绿色.天然蜂胶的成分因其来源、采集和用途的不同而不同.蜂胶在低温下很硬,受热后变得粘稠,因此被称为“蜂胶”[2].目前从蜂胶中分离出的主要成分有黄酮类化合物和萜烯类化合物,其它成分有对苯二酚、咖啡酸、脂类、槲皮素和木脂素[3～5].在生物活性物质中,黄酮起着决定作用.蜂胶有多功能作用,具有抗菌、抗病毒、抗溃疡、抗炎、局部麻醉、降血压、增强免疫力等作用.蜂胶对多种疾病有辅助治疗作用,尤其对咽喉肿痛、皮肤病、胃溃疡、烧伤、痔疮、牙龈炎和创伤有疗效,但有些还缺乏科学依据[6].1　材料和仪器薄层层析硅胶板和柱层析硅胶均为青岛海洋化工厂产品;无水乙醇、丙酮、甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂均为国产分析纯;芦丁标准品:上海试剂一厂生化试剂;蜂胶为昆明市售商品.熔点用XRC-1型显微熔点仪测定,温度计未校正; IR用Bio-Rad F TS-135型红外光谱仪测定;核磁共振仪为Bruker-300NMR,TMS为内标;质谱用U G Autospec-3000型质谱仪测定;752型分光光度计(上海精密仪器厂).2　实验方法2.1　提取与分离　称取蜂胶200.0g,粉碎后用石油醚(30～60℃)回流3h,脱蜡后得精制蜂胶132.5g,准确称取精制蜂胶5.0g,分别用60%, 70%,80%的乙醇100mL(料液比1g∶20mL)在室温下冷浸,提取时间分别为12,24,36h.过滤后减压浓缩,回收溶剂,干燥后称重,计算蜂胶粗黄酮的提取率.取蜂胶粗黄酮10.0g,用乙酸乙酯100mL ×3萃取,过滤后减压浓缩后所得浸膏6.8g,拌干硅胶上柱进行层析,洗脱剂为氯仿-甲醇体系,得到4个黄酮类化合物:高良姜素、异樱花素、槲皮素和洋芹素.2.2　芦丁-分光光度法测定吸光度芦丁标准液配制:准确称取干燥恒重的芦丁标准品,用30%乙醇配制成0.3m g/mL的标准溶液.工作曲线的绘制[7]:分别取上述芦丁标准溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0mL,分别置于25mL的比色皿中,加入5%亚硝酸钠溶液1.0mL,摇匀,放置6min后加入10%硝酸铝溶液1.0mL,6min后Ξ收稿日期:2005-10-07基金项目:云南省自然科学基金资助项目(2000B006M).作者简介:程伟贤(1979-　),男,云南人,博士生,主要从事生物有机化学方面的研究.通讯作者:古　昆(1945-　),女,教授.Email:gukun@加入10mL 5%氢氧化钠溶液,混匀,用30%乙醇稀释至刻度,10min 后于510.6nm 处进行比色测定,试剂为空白参比.以芦丁的浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,对所得数据进行回归分析.精密称取粗黄酮样品0.0628g ,溶于30%乙醇溶液中,定容至50mL ,按上述方法测定吸光度,平行测定6次,带入回归方程进行计算并分析所得实验数据.3　结果与讨论3.1　结构鉴定(图1)　高良姜素(galangin ):淡黄色针状结晶(甲醇重结晶),分子式为C 15H 10O 5,m.p.214～215℃,EI -MS (m/z ):270(M +,100),242,213,168,136,105,77.IR (K Br )(νmax /cm -1):3318,1655,1605,1600,1504.1H NMR (300MHz ,CD 3Cl 3)δ:6.37(1H ,d ,H -6),6.66(1H ,d ,H -8),8.18(2H ,m ,H -2′,6′),7.52(3H ,m ,H -3′,4′,5′).13C NMR (75MHz ,CD 3Cl 3)δ:145.28(C -2),136.63(C -3),175.52(C -4),156.07(C -5),98.08(C -6),166.02(C -7),92.03(C -8),160.91(C -9),104.07(C -10),130.77(C -11),128.80(C -2′,6′),127.66(C -3′,5′),130.32(C -4′).上述数据与高良姜素文献报道一致[8],故鉴定为高良姜素(3,5,7-三羟基黄酮).异樱花素(isosakuranetin ):淡黄色片状结晶(甲醇重结晶),分子式为C 16H 14O 5,m.p.191～193℃,EI -MS (m/z ):286(M +,100),285,268,242,168,105,77.IR (K Br )(νmax /cm -1):3300,1745,1600,1508,1380.1H NMR (300MHz ,CD 3Cl 3)δ:2.72(1H ,dd ,H -3a ,3.25(1H ,dd ,H -3b ),3.75(3H ,s ,4′-OCH 3),5.46(1H ,dd ,H -2),5.84(2H ,s ,H -6,8),6.91(2H ,d ,H -2′,6′),7.42(2H ,d ,H -3′,5′),10.81(1H ,s ,7-OH ),12.08(1H ,s ,5-OH ).13CNMR (75MHz ,CD 3Cl 3)δ:79.06(C -2),43.22(C -3),195.57(C -4),164.01(C -5),94.98(C -6),167.83(C -7),94.10(C -8),162.62(C -9),102.98(C -10),138.24(C -11),128.70(C -2′,6′),125.96(C -3′,5′),159.40(C -4′),56.08(4′-OCH 3).上述数据与异樱花素文献报道一致[9],故鉴定为异樱花素(5,7-二羟基-4′-甲氧基双氢黄酮).槲皮素(quercetin ):黄色粉末(甲醇重结晶),m.p.312～314℃,易溶于甲醇,盐酸镁粉反应呈阳性,与槲皮素标准品薄层对照,R f 值相同,确定为槲皮素(3,5,7,3′,4′-四羟基黄酮).洋芹素(apigenin ):淡黄色粉末(甲醇重结晶),m.p.346～347℃,盐酸镁粉反应呈阳性,与洋芹素标准品薄层对照,R f 值相同,故鉴定为洋芹素(5,7,4′-三羟基黄酮).3.2　总黄酮质量分数测定　按照上述2.2方法,用芦丁-分光光度法测定吸光度并计算黄酮质量浓度.以芦丁的浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,对所得数据进行回归.回归方程为A =8.451ρ-0.432(R =0.999).对不同提取条件下所得总黄酮质量浓度进行吸光度测定(平行测定6次),代入回归方程计算,取其平均值,取其平均值得黄酮质量浓度,并换算出蜂胶中总黄酮的质量分数,结果见表1.图1　化合物1～4结构Fig.1Structure of compounds 1—4642云南大学学报(自然科学版) 第28卷表1　不同条件对蜂胶总黄酮提取的影响Tab.1Influence to the extraction of propolis total flavones under different conditions编号w (乙醇)/%提取时间/h提取率/%ρ(总黄酮)/(mg ・mL -1)w (总黄酮)/%1601235.80.0770.4062602438.50.0810.4273603638.70.0830.4384701242.50.1050.5545702448.10.1120.5916703648.40.1130.5967801240.50.0970.5128802441.80.1010.5339803642.10.1030.5434　结　论采用乙醇冷浸法提取蜂胶中总黄酮,提取最佳工艺条件为:浸泡时间36h ,乙醇质量分数为70%,此时提取率为48.4%,提取液中总黄酮质量浓度为0.113mg/mL ,提取所得总黄酮在蜂胶原料中质量分数为0.596%.可以看出,乙醇浓度对蜂胶总黄酮提取的影响较大,是主要影响因素,而浸提时间在12～36h 范围内对提取的影响不大.蜂胶的生物学、药理学及医疗功效主要与蜂胶中所含黄酮成分密切相关,我国幅员辽阔,各地气候条件和植物分布中差异较大,所产蜂胶的化学成分及黄酮含量相差也较大[10].为了更好地开发利用蜂胶这一资源,应深入对蜂胶的基础性研究,使蜂胶化学成分的研究活跃并迅速发展.参考文献:[1]　郭伽,周立东.蜂胶的化学成分研究进展[J ].中国养蜂,2000,51(2):17218.[2]　黄卫平,刘放.蜂胶的研究进展[J ].养蜂科技,1998(5):6211.[3]　陈崇羔,周士雄.不同体积分数的乙醇对蜂胶有效成分提取率的影响[J ].福建农业大学学报,1996,25(3):3612363.[4]　BANSKO TA A H ,TEZU K A Y ,PRASAIN J K ,et al .Chemical constituents of Brazilian propolis and their cy 2totoxic activites [J ].Nat Prod ,1998,61:8962900.[5]　BAN KOVA V ,MARCUCCI M C ,SIMOVA S ,et al.Antibacterial diterpenic acids from Brazilian propolis [J ].Z Naturforsch ,1996,51:2772280.[6]　李彦杰,杨勇.蜂胶化学成分及生物活性[J ].粮食与油脂,2003(12):43245.[7]　毛丽珍,徐世芳.蜂胶口服液中黄酮类化合物的测定[J ].中草药,1998,29(4):2312232.[8]　罗辉,蔡春,张建和,等.高良姜化学成分研究[J ].中药材,1998,21(7):349.[9]　丁立生,陈佩卿,彭树林.药用植物灯笼草的化学成分研究[J ].天然产物研究与开发,1998,10(1):629.[10]　胡福良,玄红专.蜂胶化学成分的最新研究进展[J ].养蜂科技,2003(1):27.Study on the flavones compounds and extraction of flavones from the propolisCHEN G Wei 2xian 1,CHEN Hong 2yan 2,ZHAN G Y i 2ping 2,TAN Li 2xiang 1,G AO Shu 2peng 1,GU Kun 1(1.Applied Chemistry Department ,K ey Laboratory of Natural Resources and Pharmaceutical Chemistry ,Ministry of Education ,Yunnan University ,Kunming 650091,China ;2.Yunnan Police Officer College ,Kunming 650223,China )Abstract :Chemical constituents of Yunnan propolis were studied in this paper.Several conditions which influence to the extraction of total flavones such as ethanol concentration and extraction time were examined.Total flavones relative content was determined by photometric method.4flavones constituents were isolated from the ethyl acetate part ,their structures were identified :galangin ,isosakuranetin ,quercetin and apigenin.K ey w ords :propolis ;flavones ;structure identified ;content determination742第S1期程伟贤等:蜂胶中黄酮成分及提取方法研究。

甲醇超声溶解-HPLC法测定蜂胶黄酮类化合物含量

甲醇超声溶解-HPLC法测定蜂胶黄酮类化合物含量陈文;王湘君;李凌燕;王玉杰;黄宇志;钱明;赵秀志;孟凡猛【期刊名称】《琼州学院学报》【年(卷),期】2017(024)005【摘要】为优化五指山蜂胶测定黄酮类化合物实验条件,研究运用甲醇溶剂超声溶解浸出法处理蜂胶样品,除去蜂胶中的蜂蜡及脂溶性杂质;辅以高效液相色谱(HPLC)法,以甲醇-0.4％磷酸(55/45,V/V)为流动相,在检测波长为270～360nm条件下,测定蜂胶中7种黄酮类化合物含量;结果发现甲醇溶剂超声溶解浸出法处理样品操作简单快捷,与常规分析方法相比,HPLC法测定简便快速,回收率高,检出限低,精密度高,受干扰影响小,准确性好.结论:五指山蜂胶黄酮类化合物的含量均在国家标准含量范围内,且该测定方法令人满意.【总页数】7页(P81-87)【作者】陈文;王湘君;李凌燕;王玉杰;黄宇志;钱明;赵秀志;孟凡猛【作者单位】海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院生命科学与生态学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院生命科学与生态学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022;海南热带海洋学院海洋科学技术学院,海南三亚572022【正文语种】中文【中图分类】O656【相关文献】1.HPLC法测定新疆阿尔泰锦鸡儿根、茎、叶、花中3种黄酮类化合物的含量 [J], 迪里木拉提·毛里明;郭玉娟;程煜凤;任丽君;姚军2.甲醇超声溶解-HPLC法测定蜂胶黄酮类化合物含量 [J], 陈文;王湘君;李凌燕;王玉杰;黄宇志;钱明;赵秀志;孟凡猛;;;;;;;;3.高效液相色谱法测定蜂胶中咖啡酸及8种黄酮类化合物的含量 [J], 周萍;邵巧云;徐权华;黄帅;胡福良4.HPLC法测定蜂胶中黄酮类化合物的含量 [J], 宋爱清;刘杰5.HPLC法测定梵净山野生八角莲中黄酮类化合物的含量 [J], 陈仕学;鲁道旺;姚元勇;陈美航;程小涛;万鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蜂胶有效成分测定及质量控制的现代分析技术应用

制产品的质量。蜂胶的化学成分复杂，迄今为止发
酚类、醇类、酸类、类等）生物学活性广泛，为脂，成国内外蜂产品研究与开发的热点。蜂胶制品如雨后春笋般涌现出来，品质量出现良莠不齐，产以次充
好、以假当真的个案屡见不鲜。现行的蜂胶质量标准落后，价方法（观性状等感官指标、评外理化指
维普资讯
３蜂产品质量监控４
中国蜂业
分测定及质量控制的现代分析技术应用
潘建国贺丽苹郑尧隆卢占列林励
（１广州市宝生园有限公司；２华南农业大学；３广州中医药大学）
蜂胶是蜜蜂采集植物茎、芽的树脂并混入自腋度草药典、国药用植物学会、德加拿大药用植物学
身分泌物、粉和蜂蜡混合而成的一种具芳香气味花的胶状固体物，一种黄酮类物质含量高达１％的是０独特而宝贵的纯天然保健食品资源和药源，多种其功效成分具有显著的抗肿瘤、抗病毒、菌消炎、抑降血糖、降血脂等多种医疗和保健功能。
世纪８０年代初发展的毛细管电泳（ａｉａｙｌｔｃｐｌｒｅｅｌｃ
料及蜂胶产品的蜂胶指纹图谱的研究和开发。科学建立起相应的质量技术评价平台和质量标准评价平台，最终推广行业应用，并实现产业化，从而确保
蜂胶质量稳定可控。指纹图谱是一种新型检测方法，中草药的质量控制上已经广泛应用，全面在可反映中药所含的物质群。国ＦＡ、国草药典、美Ｄ英印

不同产地蜂胶中总黄酮的提取及含量测定

２２蜂胶中总黄酮的提取－
２２１正交设计优选蜂胶提取工艺－．根据蜂胶理化性质知水提取效果差，适用乙醇为溶剂提取，选择乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量作为考察因素，以蜂胶总黄酮得率（总黄酮含量＋蜂胶重量× ０１０％）为评价指标。因素水平安排见表１。表１因素水平表
Ｔ．Ｆｃｏｓａｄｌｖｌ，１ａｔｒｎｅｓｅ
水平
１
２
Ａ乙
５Ｏ６５
８０
度
Ｂ乙
】０
１２
彰ｃ提取时间ｍ
Ｄ提
１
称取蜂胶样品（江西产）１，精密称定，共９约ｇ份，按正交实验表（见表２于７）０℃温浸，过滤于１０ｍ量瓶中，用乙醇洗０Ｌ涤残渣，定容，吸取１Ｌ溶液置５ｍ量瓶，加乙醇溶液至刻ｍ０Ｌ度，摇匀，作为供试品溶液。精确移取供试品溶液ｌｍＬ，置２Ｌ５ｍ容量瓶中，加水至６ｍＬ，Ｊ１Ｊ５％亚硝酸钠溶液ｌＬ，摇￣ｍ匀，静置６ｎ；加ｌｍｉ０％硝酸铝溶液１Ｌ，摇匀，放置６ｍｎｍｉ；／ｌ．Ｊ４３％氢氧化钠溶液１ｔ０ｍＬ，加水稀释至刻度，摇匀，放置１ｉ，波长５０ｒ５ｎ在ａｒ０ｍ处测定吸光度，ｉ根据标准曲线算出样品中总黄酮含量。直观分析表明对总黄酮得率的影响因素大小为ＢＣＡＤ，优化处方为ＡＢＣＤ３＞＞＞２２３；根据方差分析，可知，Ｂ因素—ｌＩ１的用量对总黄酮提取影响显著；Ｄ因素，即提取，即乙醇２２２３３３Ａ次数对总黄酮提取影响最不显著，综合分析结果和实际应用情况，选择Ａ：２为蜂胶中总黄酮提取条件，蜂胶最佳提取ＢＣＤ２工艺为ｌ倍量６％乙醇，温浸２，每次２２５次小时。按此提取方法提取蜂胶（江西产）中总黄酮，总黄酮得率平均为ｌ．２９８％，

高效液相色谱法测定蜂胶中咖啡酸及8种黄酮类化合物的含量

高效液相色谱法测定蜂胶中咖啡酸及8种黄酮类化合物的含量周萍;邵巧云;徐权华;黄帅;胡福良【摘要】采用高效液相色谱(HPLC)法,在以甲醇-0.4％磷酸(55/45,V/V)为流动相,检测波长为360 nm的条件下,同时测定蜂胶中咖啡酸和8种黄酮类化合物(芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松属素、柯因、高良姜素)的含量.并将该方法与分光光度法进行比较.实验结果表明,该方法具有简便快速,回收率高,准确性好等特点.为蜂胶生产加工过程中品质的监控提供一个科学的检测方法.【期刊名称】《蜜蜂杂志》【年(卷),期】2013(033)004【总页数】3页(P4-6)【关键词】蜂胶;咖啡酸;黄酮类化合物;测定【作者】周萍;邵巧云;徐权华;黄帅;胡福良【作者单位】浙江大学动物科学院,浙江杭州310058【正文语种】中文【中图分类】S896.6蜂胶是工蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的一种黏稠物质[1]。

蜂胶具有较强的抑菌活性和抗氧化性能，能够增强机体免疫并治疗多种疾病[2]。

在蜂胶复杂的化学组成中，黄酮类化合物作为主要的功效成分，很大程度上决定了蜂胶的特殊药理活性。

因此，黄酮类化合物含量通常作为评价蜂胶质量的指标之一。

蜂胶中的黄酮类化合物主要包括黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、二氢异黄酮、查尔酮、二氢查尔酮等[3]。

此外，蜂胶中含有大量的咖啡酸，因其具有较强的抗菌抗病毒活性[4]，近年来备受蜂胶研究者的关注。

目前，在蜂胶质量评价体系中，总黄酮或8种黄酮的含量是主要的评价指标，其测定方法往往采用紫外分光光度（UV）法[5]、高效液相色谱（HPLC）法[6]、气相-质谱（GC-MS）法等。

而同时检测黄酮类化合物和咖啡酸含量并将其作为蜂胶质量评价指标的方法未见报道。

本文采用高效液相色谱法建立了同时测定蜂胶中8种黄酮类化合物和咖啡酸含量的方法，并与传统测定蜂胶中总黄酮含量的紫外分光光度法进行比较，以期能够为蜂胶生产加工过程中品质的控制提供一个快速、准确、有效的检测方法。

蜂胶中总黄酮的分离及其含量测定

蜂胶中总黄酮的分离及其含量测定【摘要】目的利用聚酰胺柱层析分离蜂胶中总黄酮，并运用紫外分光光度法(UV)对其进行含量测定。

方法利用聚酰胺柱层析，干法上样，分别用30％、95％不同浓度的乙醇进行洗脱，盐酸―镁粉反应定性检测及分光光度法定量测定，并对分光光度法进行了改进。

结果经定性检测，30％乙醇洗脱液几无黄酮，紫外分光光度法测量95％洗脱液中总黄酮的含量为0.956mg/ml。

结论利用聚酰胺柱层析初步纯化蜂胶中总黄酮，并提供了测量蜂胶中总黄酮含量的一种快速、准确的方法―紫外分光光度法，为进一步分离其中的单体黄酮及研究其药理活性打下了基础。

【关键词】蜂胶；总黄酮；聚酰胺柱层析；分光光度法Separation and Determination of Flavonoids in ProplisGAO Xiu-rong，ZAN wang(Department of Pharmacy，Chengdu Medical College，Chengdu 610083 China)Abstract：Objective To separate the flavonoids in proplis by polyamide column chromatography and to establish the method of UV for determination of flavonoid.Methods Flavonoid of proplis was separated by polyamide column chromatography with 30%，95% ethanol and determined by Hd-Mg reaction and ultraviolet-visible spectrophotometry.Results There was almost no flavonoid in eluate of 30% ethanol，the concentration of eluate of 95% ethanol was 0.956mg/ml by U-V Spectrophotometry.Conclusion The flavonoid was primarily purified by polyamide column chromatography，and a fast，accurate method— ultraviolet-visible spectrophotometry was put forword.Key words:proplis;flavonoid;polyamide columnchromatography;ultraviolet-visible spectrophotometry蜂胶（proplis）是蜜蜂从植物树芽、花苞和树干处采集的树胶，并混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等成分而成的一种具有芳香气味的褐色胶状固形物。

高效液相色谱法测定蜂胶中的黄酮成分

２实验部分
２．１仪器和试剂仪器：Ｗａｔｅｒｓ２４４型高效液相色谱仪，
ＵＶ４８６检测器，Ｍ５１０泵，Ｍ７３０数据处理机，高压六通进样阀，超声震荡器。
试剂：芦丁、杨梅酮、桑色素、槲皮素、山柰素、芹菜素、柯因、松鼠素和高良姜素均为色谱纯（Ｓｉｇｍａ）；甲醇为优级纯并经０．５肛ｍ滤膜过滤；水为重蒸水并经０．４５ｔｔｍ滤膜过滤；磷酸为优级纯。２．２色谱条件
3.期刊论文孟霞.彭敬东.刘绍璞.MENG Xia.PENG Jing-dong.LIU Shao-pu 高效液相色谱法测定蜂胶液中的6种有
机酸 -西南大学学报（自然科学版）2008,30(9)
建立了蜂胶中6种有机酸的高效液相色谱测定方法.固定相为Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm;5 μm),流动相为乙腈-0.4%的冰乙酸溶液 (φ=30∶70, pH=2.93), 流速0.8 mL/min, 柱温28 ℃. 检测波长采用设定波长程序的方法, 样品中6种组分的加标回收率在89.35% ～104.5%之间, 绿原酸、咖啡酸、香草酸、阿魏酸、苯甲酸、肉桂酸的线性范围分别为0.022～44,0.025～50,0.029～58,0.022～44,0.0414～62.1,0.0444～66.6 μg/mL, 检测限分别为4.55,3.95,8.7,6.29,10.35,3.92 ng/mL, 相对标准偏差小于3%. 该法简便、快速、灵敏, 可用于蜂胶中6种有机酸的同时分离测定.
Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ（瑞士）电话：（＋４１—１）６３２—３０３４
传真：（十４１一１）６３２—１０８２
Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｐｉｃａ２０００＠ｔｅｃｈ．ｃｈｅｍ．ｅｔｈｚ．ｃｈ
（雨段收集提供）

微波辅助萃取蜂胶中黄酮类化合物的研究

维普资讯
《现代食品科技》
ＭｏｅｎＦｏｃｎｅｎｅｈｏｏｙｄｒｏｄＳｉｃｄＴｃｎｌｇｅａ
Ｖ１３Ｎｏ５总９）ｏ．．（５２
微波辅助萃取蜂胶中黄酮类化合物的研究
吴玉敏，何锦风，蒲彪，魏雅萍
ｔａｄｇｅｙｅ．ｉｎｈｈｒｉｄｍｅｉｌ
Ｋｅｒｓｍｉｒｗａｅａｓｓｘｒｃｉｎｐｏｌ；ｏｌａｏｅｙｗｏｄ：ｃｏｖ－ｉｔｅｔｔ；ｒｐｉｔｔｖｎｓｓｄｅａｏｏｓａｆｌ
蜂胶（ｒｐｌ）是蜜蜂采集杨树等植物的新生枝ｐｏｏｉｓ
（．ｌｒｕｐｉｑｉＩｓｔｔｏＧｎｒｌｏｉｉｅａｔｎＰＡ，ｅｉ０００Ｃｉａ２ＭｉｔｙＳｐｌｓｕｐｎｔｕｅｆｅｅａＬｇｓｃＤｐｒｔｆＬＢｉｎ１０１，ｈ）ｉａｅＥｉｔｓｍｅｏｊｇｎ
ＡｓａｔＭｉｏｖ — ｓｔｘｒｃｏＭＳ）ｆｏｌａｏｅｆｍｐｏｌＷａｕｉｎｔｉｐｐｒＴｅｉｌｅｃｓｆｏｆｔｒｂｔｃ：ｃｗａｅｓｉｅｔｔｎ（Ｅｏｔｔｆｖｎｓｒｒｒａｓｄｅａｉａｌｏｒｐｉｓｓｄｅｏｓｔｄｉｈｓａｅｈｎｕｎｅｏｓｍｅａｏｓ．ｆｃ，
（．１四川农业大学，四川雅安６５１）（中国人民解放军总后勤部军需装备研究所，北京１０１）２０４２．０００
摘要：利用微波辅助萃取法提取蜂胶中的黄酮类化合物，考察了微波提取条件（溶剂浓度、微波功率、提取时间、料液比）对蜂胶中黄酮提取率的影响，采用分光光度法测定提取液中黄酮的含量。结果表明：乙醇浓度为８％，微波提取功率为８Ｗ，提取时间００为１ｍｉ，料液比为ｌ，ｎ５：４时，提取效果最佳。微波辅助法与传统提取法相比，具有提取效率高，时间短，节省溶剂用量等特点。关键词：微波辅助萃取；蜂胶；黄酮类化合物

蜂胶中总黄酮的含量测定

蜂胶中总黄酮的含量测定李彩霞;班桂荣;董玉【摘要】目的建立测定蜂胶中总黄酮含量的紫外分光光度法.方法以芦丁为对照品,采用紫外分光光度法测定蜂胶中总黄酮含量,检测波长为528 nm.结果芦丁质量浓度在7.952～39.76μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系,线性回归方程为Y=8.312 4X+0.021 7(r=0.999 6),平均回收率为101.85%,RSD为2.31%(n=6).结论该方法简便、灵敏、准确,可用于蜂胶中总黄酮的含量测定.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2010(019)021【总页数】2页(P10-11)【关键词】蜂胶;总黄酮;紫外可见分光光度法;含量测定【作者】李彩霞;班桂荣;董玉【作者单位】内蒙古医学院附属人民医院药剂科,内蒙古,呼和浩特,010020;内蒙古锡林郭勒盟白旗医院,内蒙古,锡林郭勒,013800;内蒙古医学院药学院,内蒙古,呼和浩特,010059【正文语种】中文【中图分类】R284.1%R282.72蜂胶(propolis)是蜜蜂采集植物芽孢和树脂，并混入蜂蜡等自身分泌物而形成的一种棕色黏性固体物质，其中含蜂胶(55%)、蜂蜡(30%)、花粉和芳香油(15%)及少量杂质[1]。

目前蜂胶产品多为蜂胶的醇提取物，其醇提取物中的黄酮类、酚类具有生理和药理活性。

临床证明，黄酮和酚类具有抗菌、抗癌、促进组织再生和提高肌体免疫力等功效[2-3]。

现代药理研究表明，蜂胶具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、调血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用[4]，在药品、保健品及化妆品等方面具有广阔的应用前景。

蜂胶总黄酮的含量已成为判定蜂胶产品质量的标志性物质之一。

笔者以芦丁为对照品[5-6]，采用紫外分光光度法测定蜂胶醇提物中总黄酮含量，现报道如下。

1 仪器与试药752N型紫外分光光度计，电子分析天平。

蜂胶(市购);芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);95%乙醇(市购)，其余试剂均为分析纯。

蜂胶总黄酮提取工艺优化与含量测定研究

蜂胶总黄酮提取工艺优化与含量测定研究【摘要】目的：研究蜂胶总黄酮的最优提取工艺，测定总黄酮的具体含量。

方法：采取正交试验法及单因素法，不断优化提取工艺，选择芦丁作为本次研究的对照品，测量其实际含量。

结果:在乙醇体积分数为95%且料液比为1：9时，将温度控制为50℃，持续提取48h的情况下，可以达到最佳提取效果，提取到的黄酮总量为10.82%，含有五种化合物。

结论：该提取工艺比较简单快捷，并且符合蜂胶总黄酮的提取要求，可以将其作为提取方法或者综合性指标。

【关键词】蜂胶；总黄酮；提取工艺；含量天然物蜂蜜是一种胶状固体物质，由密封从植物上采集，混入分泌物及蜂蜡后得到的物质，具有一定的芳香气味。

蜂胶拥有多种生物活性作用，包括抗氧化、提高免疫力、降血脂等，最关键的功效成分有两种，一种为黄酮类化合物，另一种为酚酸类化合物。

蜂胶内总黄酮含量与场地有着较大的关系，为此要选择适合的研究材料。

1研究材料及方法1.1研究材料、试剂及仪器材料：本次研究蜂胶取自某县城养蜂场，选择秋季采集蜂胶。

试剂：芦丁、乙醇、乙酸乙酯、甲醇、醋酸钾、丙酮等（均为国产分析纯）。

仪器：λ-17型紫外-可见光谱仪美国PE公司；QP2010气相色谱-质谱联用仪日本岛津公司；RE-52AA旋转蒸发仪上海圣科仪器设备有限公司；SHZ-III型循环水真空泵杭州雷琪实验器材有限公司；冷柜、电子天平。

1.2研究方法1.2.1制作标准曲线精确称取在120℃减压干燥至质量恒定的芦丁标准品20.00mg，置100mL容量瓶中，并向其中加入100mL乙醇溶液，定容，即得0.2mg/mL芦丁标准液。

准确吸取芦丁标准液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL分别置于25mL容量瓶中，各加乙醇至6mL，加质量分数5%亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，放置10min；加质量分数10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置10min；加质量分数5%氢氧化钠溶液10mL，摇匀，加乙醇至刻度，定容，放置15min；以辅料溶液作为空白，在波长502.1nm处均有最大吸光度。

高效液相色谱法测定蜂胶中的六种黄酮

高效液相色谱法测定蜂胶中的六种黄酮作者：霍丽斯刘嘉亮陈颖芯来源：《农产品加工·上》2019年第06期摘要：采用甲醇-水提取液体系提取蜂胶中的6种黄酮，即芦丁、莰菲醇、芹菜素、松属素、苛因和高良姜素，以高效液相色谱法-紫外检测法测定，对不同比例的甲醇-水溶液对蜂胶中黄酮类物质的提取率進行研究。

结果发现，以60%甲醇-水为提取液提取效果较好，空白加标回收率均在85%～99%，检出限为0.1 g/kg，定量限为0.3 g/kg，线性范围为0.2～50μg/mL。

关键词：黄酮;高效液相色谱法;蜂胶;芦丁;莰菲醇;芹菜素;松属素;苛因;高良姜素中图分类号：O657.7 ; ; 文献标志码：A ; ; doi：10.16693/ki.1671-9646（X）.2019.06.015Abstract：Extraction of six flavonoids from propolis by methanol-water extraction system （rutin，camphenanthrol，api- genin，pinus genistein，caustin and galangin）. The extraction efficiency of flavonoids from propolis with different proportions of methanol-water solution was studied by high performance liquid chromatography-ultraviolet detection. The results showed that 60% methanol-water was the best extractant. The recovery of blank standard addition was between 85%～99%，the detection limit was 0.1 g/kg，the quantitative limit was 0.3 g/kg，and the linear range was 0.2～50 μg/mL.Key words：flavonoids;HPLC;propolis;rutin;camphenanthrol;apigenin;pinusgenistein;caustin;galangin蜂胶，又被称为“紫色黄金”，是蜜蜂从植物芽孢或树干上采集的树脂，混入蜜蜂口器中腺体的分泌物，再和花粉、蜂蜡加工制成的一种胶状物质，是蜂巢的保护伞[1]。

紫外分光光度法测定峰胶胶囊中总黄酮的含量

紫外分光光度法测定峰胶胶囊中总黄酮的含量万军兰雁周霞（成都中医药大学科技中试中心成都610072）摘要：本文研究了紫外分光光度法测定蜂胶胶囊中总黄酮的含量。

当芦丁浓度在0.00816～0.04896mg/mL范围内，与吸收度呈良好线性关系，r＝0.9999；平均回收率为99.0％。

本文方法简单、快速、结果准确。

关键词：蜂胶胶囊总黄酮紫外分光光度法1实验部分1.1 仪器与试药TU－1901紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；sartorius BP2111D 电子天平；水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司）；autoscience AS5150A 超声波清洗器。

芦丁对照品（0080－9705）：中国药品生物制品检定所。

其余试剂均为分析纯。

1.2 溶液的制备1.2.1 对照品溶液的制备取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品适量，精密称定，加乙醇制成0.2mg/mL的溶液。

1.2.2 供试品溶液得制备取本品0.35g精密称定，置50.0mL容量瓶中，加乙醇适量，超声处理（150W，50Hz）45min，取出，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

2 方法与结果2.1 测定波长的选择据药典及文献报道，蜂胶中主要含黄酮类成分，可溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯，故采用甲醇、乙醇、醋酸乙酯、75％乙醇、75％甲醇、60％乙醇作为提取溶剂进行考察。

据药典介绍，芦丁最大吸收波长在500nm左右，故取各个样品溶液与芦丁对照品乙醇溶液，以不加样品（但需要加显色剂及NaOH试液）的乙醇溶液为空白，分别于300～600nm波长范围内进行扫描。

结果见表1。

表1 不同提取溶剂的提取结果提取溶剂甲醇乙醇醋酸乙酯75％乙醇75％甲醇60％乙醇样品吸收波长（nm）378 402 398 501 378 493芦丁吸收波长（nm）503由表1可见，芦丁对照品在503nm 波长处有最大吸收，样品（75％乙醇处理）在501nm 波长处有最大吸收，考虑到操作误差及仪器因素，故选择75％乙醇作为样品提取溶剂，501nm 作为测定波长。

蜂胶液中总黄酮测定方法改进

蜂胶液中总黄酮含量测定方法的改进林德祥1，何腾飞1，王晓平2，邵飞2，刘晓倩2（1．南京老山药业股份有限公司，江苏南京 211800；2.江苏省蜂业工程技术研究中心，江苏南京 211800）关键词：蜂胶液；总黄酮；芦丁对照品摘要：目的：研究改进后配置的芦丁对照品溶液（方法二）对实验结果的影响。

方法：使用紫外-可见光分光光度法，分别以两种方法配置的对照品溶液对同一批号蜂胶液进行检测。

结果：得出20组数据，并进行假设检验，两种方法检测结果无显著性差异。

结论：说明改进后的标准品溶液（方法二）能完全适用于蜂胶液总黄酮的测定。

Improvement on the method for determination of totalflavonoids in Propolis LiquidKEY WORDS: Propolis Liquid; total flavonoids; rutin reference substance ABSTRACT: AIM: To investigate the impact of improved rutin reference substance（method two）liquid on the experimental results. METHODS: Determine total flavonoids in Propolis Liquid of the same batch number using UV-VIS spectrophotometry, the reference substance liquid was prepared by two different methods. RESULTS: Hypothesis testing was used during 20 groups. Data show there is no significant difference with reference substance liquid which was prepared by two different methods. CONCLUSION: The improved rutin reference substance（method two）could be fully applicable to the determination of total flavonoids in Propolis Liquid.总黄酮作为蜂胶类保健品的功效成分，是蜂胶液中间体和成品的重要指标项目，对它的有效控制可直接反映出产品质量。

蜂胶中总黄酮含量的测定

蜂胶中总黄酮含量的测定王烁;蒋明蔚;李晓斌;贾楠【摘要】This paper introduces a new content determination method of total flavonoids in propolis products. The test solution goes through polyamide powder absorption and vacuum extraction-filtering treatment, then, with sodium nitrite-aluminium nitrite-sodium hydroxide as the chromogenic agent and rutin the reference substance, detects the total flavonoids in propolis at a wavelength of 510 nm by spectrophotometry. T test analysis shows that there is no significant difference between this method and the method of National Standard ＜ GB/T20574-2006 determination of total flavonoids in propolis ＞ , and it is proved to be highly accurate and precise. This method is more suitable for determination of total flavonoids in propolis capsules and other lipophilic samples.%文中建立一种测定蜂胶制品中总黄酮的方法.试验样品溶液经过聚酰胺粉吸附,真空泵抽滤处理后用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠做显色剂,以芦丁为对照品,用分光光度法于波长510 nm处测定蜂胶中总黄酮的含量.经过T检验分析表明,该方法和国家标准《GB/T20574-2006蜂胶中总黄酮含量的测定方法分光光度比色法》无显著性差异,但准确度和精密度高.该方法更适用于蜂胶胶囊等脂溶性样品中总黄酮的测定.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2012(038)012【总页数】5页(P152-156)【关键词】分光光度法;总黄酮;T检验【作者】王烁;蒋明蔚;李晓斌;贾楠【作者单位】中国食品发酵工业研究院,北京,100027【正文语种】中文蜂胶(propolis)是蜂产品中一类十分重要的天然物质，是蜜蜂从植物芽孢及树干上采集的树胶，并混入蜜蜂上颚分泌物和蜂蜡等加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物。