金刚鹦鹉多杀性巴氏杆菌的分离鉴定
应用紫外分光光度法进行禽多杀性巴氏杆菌(C48-1)细菌计数的研究
应用紫外分光光度法进行禽多杀性巴氏杆菌(C48-1)细菌计
数的研究
应用紫外分光光度法进行禽多杀性巴氏杆菌(C48-1)细菌计数的研究
本试验通过对禽多杀性巴氏杆菌(C48-1) 菌液不同稀释度吸光度值的测定,与平板活菌计数结果相结合,建立吸光度-菌液浓度回归直线y = 14.757x + 0.2038(R2 = 0.9974).试验结果证明运用测定吸光度进行细菌计数的方法具有简单、迅速等优点,在兽用细菌灭活疫苗生产过程中,具有很高的参考价值.
作者:陈士运沈旭苗立中刘吉山作者单位:陈士运,沈旭(山东绿都生物科技有限公司,滨州,256600)
苗立中,刘吉山(山东省滨州畜牧兽医研究院)
刊名:山东畜牧兽医英文刊名:SHANDONG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE 年,卷(期):2009 30(5) 分类号:S852.61+2 关键词:禽多杀性巴氏杆菌活菌计数菌液浓度吸光度。
多杀性巴氏杆菌分型方法研究进展
多杀性巴氏杆菌分型方法研究进展祁鑫;蒋桃珍;李伟杰【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)008【摘要】多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病.目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型.血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适宜临床大规模快速进行流行病学调查.分子分型具有分辨力高和重复性好等优点,因而在临床中得到了广泛应用.分子分型方法主要包括荚膜多重PCR分型、脂多糖多重PCR分型、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组序列分析等.论文就每种分型方法的原理、优缺点和适用范围进行介绍,以期为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查,特别是分子流行病学调查提供参考.【总页数】4页(P89-92)【作者】祁鑫;蒋桃珍;李伟杰【作者单位】北京农学院 ,北京102206;中国兽医药品监察所 ,北京100081;中国兽医药品监察所 ,北京100081【正文语种】中文【中图分类】S852.612;S854.43【相关文献】1.多杀性巴氏杆菌检测、鉴定和分型研究进展 [J], 高明燕;徐步;赵宝华;范建华;龚建森;刘学贤2.猪多杀性巴氏杆菌的鉴定方法和耐药性的研究进展 [J], 彭苗苗;傅胜才3.多杀性巴氏杆菌的分型及其灭活疫苗研究进展 [J], 赵战勤;乔鹏芸;刘倩玉;薛云;丁轲4.牛源多杀性巴氏杆菌血清分型及毒力相关基因的检测研究 [J], 邬琴;张星星;顾晓晓;陶乔孝慈;黄新;韩猛立;吴桐忠;周霞;钟发刚5.20株禽多杀性巴氏杆菌的分离及荚膜与脂多糖的分型鉴定 [J], 仇桂玲;陈济铛;张济培;钟嘉诚;谭结敏;邓银燕;姚红清;张溢珊;朱婉君;王贺;刘英慧因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
1株鹦鹉源多杀性巴氏杆菌的鉴定
1株鹦鹉源多杀性巴氏杆菌的鉴定李军朝;邸涛;陈静;刘慧谋;张信军;王彦红【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2016(052)007【摘要】多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)属于革兰阴性球杆菌,定居于家禽和野禽的鼻咽部,能引起宿主出血性败血症,发病率和死亡率都很高,但不同类型的家禽易感性不同。
多杀性巴氏杆菌有5个荚膜血清型,分别为A、B、D、E 和F,引起禽类动物的多杀性巴氏杆菌荚膜血清型多为A型[1]。
此外,有较多技术对多杀性巴氏杆菌进行分型,【总页数】2页(P33-34)【作者】李军朝;邸涛;陈静;刘慧谋;张信军;王彦红【作者单位】扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州225009;江苏省人兽共患病学重点实验室,江苏扬州225009【正文语种】中文【中图分类】S858.39【相关文献】1.一株鹅源多杀性巴氏杆菌强毒株的分离鉴定及其血清型鉴定相关基因的克隆 [J], 杨泽晓;刘常钰;王印;姚学萍;邬旭龙;王波;李桂黎;蒙正群;刘亚东2.猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其荚膜血清型鉴定 [J], 李富祥;宋建领;李华春;胡骑3.金刚鹦鹉多杀性巴氏杆菌的分离鉴定 [J], 贺青梅;张红见;文英4.乌鸡源多杀性巴氏杆菌杀禽亚种16S rDNA鉴定及药敏分析 [J], 黄萃; 伍思华; 李钰; 邓贤才; 邬向东5.乌鸡源多杀性巴氏杆菌杀禽亚种 16S rDNA鉴定及药敏分析 [J], 黄萃; 伍思华; 李钰; 邓贤才; 邬向东因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
青藏高原5种动物巴氏杆菌病病原分离与鉴定
2010年7月(上)收稿日期:20091021;修回日期:20100530基金项目:国家自然科学基金项目(30960287)作者简介:张红见(1970-),男,副教授,硕士研究生.通讯作者:赵静(1967-),女,教授,硕士.青藏高原5种动物巴氏杆菌病病原分离与鉴定张红见,赵静,陈刚,文英(青海大学农牧学院,青海西宁810016)中图分类号:S852.61+2文献标识码:B文章编号:10047034(2010)07-0109-03关键词:青藏高原;5种动物;巴氏杆菌;分离与鉴定摘要:为了初步摸清青藏高原主要养殖动物巴氏杆菌病的发病情况,采取常规的病原分离与鉴定技术对青藏高原牦牛、藏羊、猪、兔、禽等进行巴氏杆菌病的微生物学诊断,同时以C47-8为质控菌株对分离获得的野生菌株进行生化特性和耐药性分析。
结果表明:野生菌株与质控菌株有一定的生化差异,野生菌株耐药率较高,而质控菌株无耐药性。
巴氏杆菌病主要是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurel-la multocida ,Pm )所引起的发生于各种家畜、家禽、鸟类、野生动物和人类的一类传染病,在青海地区主要有牛羊出血性败血症、猪肺疫、猪进行性萎缩性鼻炎、禽霍乱、兔巴氏杆菌病等畜禽急慢性传染病,给养殖业造成很大损失[1]。
为掌握青藏高原动物巴氏杆菌病的发病情况,给今后控制该病提供科学依据,笔者于2008—2009年对青海省10个县(市)的牦牛、藏羊、猪、乌鸡、兔巴氏杆菌病病原进行了常规分离与鉴定,现报道如下。
1材料与方法1.1材料1.1.1病料无菌采集病死牦牛、藏羊、猪、乌鸡、兔的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏等脏器,置4ħ冰箱中保存,待检。
1.1.2培养基鲜血琼脂平板、鲜血琼脂斜面和5%胎牛血清肉汤培养基,均由青海大学农牧学院动物医学系传染病实验室自制;MH 培养基(批号为20081206),购自北京奥博星生物技术有限责任公司;生化培养基、氧化酶试纸(批号为080606),均购于北京陆桥技术有限责任公司。
多杀性巴氏杆菌诊断技术及防控策略研究进展
李昕,张正刚,郭亚男,等.多杀性巴氏杆菌诊断技术及防控策略研究进展[J ].中南农业科技,2023,44(10):218-221.多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida )是条件致病菌,可引起多种家畜和野生动物及人类的感染[1]。
由Louis Pasteur 于1887年在禽霍乱病例中分离得到,命名为巴斯德氏菌。
其主要存在于动物的口腔、鼻咽和上呼吸道,通过呼吸道分泌物和飞沫进行传播,致使宿主的呼吸道系统、淋巴系统等发生感染,从而致病,是一种重要的人畜共患疾病。
但其对人的感染报道较少,在人体中主要通过动物咬伤传播,感染后可导致呼吸系统感染,引发败血症、脑膜炎等。
1994年起列为3个亚种,即多杀亚种(P.mul⁃tocida ssp.multicida )、败血亚种(P.multocida ssp.Septzca )及杀禽亚种(P.multocida ssp.Gallicida )[2]。
1巴氏杆菌的特性1.1巴氏杆菌的结构和培养特性P.multocida 是小型、非运动兼性厌氧革兰氏阴性球杆菌,无鞭毛,无芽孢,常以单个或成双分布。
中央微凸,宽度为0.3~1.0μm ,长度为1.0~2.0μm 。
P.multocida 菌株对培养条件营养要求苛刻,可以在营养丰富的培养基上培养,如在胰蛋白酶大豆琼脂、巧克力琼脂或脑心浸液琼脂上生长良好,在5%无菌脱纤维羊血平板上可生长形成直径约1mm 灰白色、黏稠状菌落,无溶血环产生[3]。
在普通培养基和麦康凯(MacConkey )琼脂培养基上不生长[4]。
P.multocida 在培养过程中可分解果糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖,产酸而不产气体;对过氧化氢酶、氧化酶、吲哚和鸟氨酸脱羧酶反应呈阳性,但对脲酶、甲基红试验和VP 试验均为阴性,不液化明胶、石蕊牛乳无变化,能产生硫化氢[5]。
1.2巴氏杆菌的发病机制P.multocida 作为重要的呼吸道病原体,可通过诱发宿主上皮屏障的功能障碍,从而导致细菌入侵以及气道和肺炎症性疾病的发展[6]。
多杀性巴氏杆菌血清型的快速鉴别
※科技动态美国北卡罗来纳州立大学M.A.Brooks 等进行的研究表明,有机丙酸锌中锌的生物利用率优于饲料级硫酸锌。
在孵出后的最初7天,给雏鸡饲喂缺乏锌的半纯化育雏日粮(22mg/kg )。
在8~21天,给鸡饲喂含粉碎玉米、大豆浓缩蛋白和葡萄糖的半纯化日粮作为对照(锌含量20mg/kg )。
在对照组日粮中2月26日,新野县召开肉牛产业化集群示范区控制性详细规划征求意见会议。
县领导常英敏、朱有胜、曾浩、杨建军、段宇珩、徐建强、于德浩、王保山出席会议。
县国土局、规划局、环保局等30个县直单位负责人参加了会议。
会上,项目规划编制单位北京建筑规划设计院相关人员系统介绍了新野肉牛产业化集群示范区建设控制性规划的详细内容。
与会人员分别就规划内容向专家提出质疑和修改建议。
县长常英敏指出,新野肉牛产业化集群是省委、省政府确定的重点项目,是全省三个农业产业化集群试点之一,是现代化农业的一个精品缩影,展示了河南省首个农业产业化集群发展的态势和面貌。
新野肉牛产业化集群示范区控制性详细规划功能定位要准确,要使项目集中布局,产业集群发展,资源集约利用,功能集合构建,带动农民向产业集聚区融合新野县召开肉牛产业化集群示范区控制性详细规划征求意见会肉鸡对丙酸锌中锌的生物利用率澳大利亚莫纳什大学的John Boyce 博士等研制出一种可以准确快速诊断禽霍乱病原体多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida )血清型的工具。
这项新技术不同于以脂多糖(LPS )生物合成基因为基础的菌株,比先前Heddleston 血清分型要准确得多。
John Boyce 博士解释说,在LPS 生物合成基因的基础上,我们深信我们的mPCR 能精确区分多杀性巴氏杆菌菌株(98%左右)。
数据还表明,Heddleston 血清学分型的正确率只有34%左右。
除了血清分型更快更准确,这项技术在重复性上也有了显著提高。
John Boyce 博士说,mPCR 的重复性高于95%。
鹦鹉常见细菌病的病原菌分离与鉴定
鹦鹉常见细菌病的病原菌分离与鉴定
刘容珍;欧阳应峰
【期刊名称】《畜牧与饲料科学》
【年(卷),期】2011(032)005
【摘要】鹦鹉饲养过程中常见的细菌病主要包括大肠杆菌病、传染性鼻炎、禽霍乱、传染性眼炎等.通过对鹦鹉常见疫病的病原茵进行分离鉴定,探讨了鹦鹉常见细菌病的主要致病菌的类型以及行之有效的防治方案.试验结果表明,引起鹦鹉常见细菌病的主要致病菌有大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和耐药性链球菌.
【总页数】2页(P76-77)
【作者】刘容珍;欧阳应峰
【作者单位】仲恺农业工程学院生命科学学院,广东广州,510225;仲恺农业工程学院生命科学学院,广东广州,510225
【正文语种】中文
【中图分类】S858.935.1
【相关文献】
1.鸡腹泻常见病原菌的分离与鉴定 [J], 詹先强;俞建萍
2.浦东地区部分养猪场常见病原菌的分离与鉴定 [J], 俞向前;贾锐;刘耀方;顾武军;龚大弟;范德忠;朱建国;叶承荣
3.甘南州牛羊常见细菌病的病原分离与鉴定 [J], 陈文景;孙瑞明
4.河蟹细菌病病原分离与鉴定 [J], 祖国掌;李槿年;余为一;杨启超
5.水蛭常见病原菌的分离与鉴定 [J], 磨美兰;韦平;周维官;廖品静;陶锦华
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我国部分地区禽多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药情况分析
我国部分地区禽多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药情况分析作者:严专强麦凯杰罗翠芬周祺杨德鸿申翰钦周庆丰来源:《家禽科学》2021年第11期摘要:为调查禽多杀性巴氏杆菌的流行情况,本研究从我国华东、华南和西南等区域8个省市家禽养殖场疑似禽霍乱发病群中分离出17株多杀性巴氏杆菌。
血清型鉴定发现所有分离株均为荚膜A型。
药敏结果显示分离株对阿莫西林、氨苄西林、头孢曲松、头孢吡肟和复方新诺明等药物敏感,对卡那霉素、四环素、庆大霉素和链霉素等药物耐药。
关键词:多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;血清型;耐药性中图分类号:S858.31 文献标识码:B 文章编号:1673-1085(2021)11-0045-06多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida, PM)是引起禽类禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、牛羊出血性败血症等疾病的重要致病菌,家禽急性感染通常可见肺部出血,肝脏、脾脏有大量白色坏死点,死亡率较高[1]。
多杀性巴氏杆菌的血清型根据荚膜抗原可分为A、B、D、E和F五个型,禽霍乱常由A和F型多杀性巴氏杆菌引起[2]。
根据血清型制备灭活疫苗进行免疫是一种有效的预防措施,由于疫苗对异源血清型菌株的保护有限,因此监测流行菌株的血清型非常有必要。
临床生产中多用抗生素进行治疗,随着菌株对常用药物敏感性的降低,药物治疗越来越困难。
本研究通过调查不同地区禽多杀性巴氏杆菌的流行血清型和耐药情况,旨在为临床禽霍乱疾病的防治提供参考。
1 材料和方法1.1 主要试剂TSA(Tryptic Soy Agar)和TSB(Tryptic Soy Broth)培养基,购自美国BD公司;胎牛血清,购自内蒙古金源康生物工程有限公司;2 × PCR mix,购自南京诺唯赞生物科技有限公司;药敏片,购自杭州滨和微生物试剂有限公司。
1.2 样本采集与细菌分离2018~2021年从浙江、福建、广东、江苏、四川、重庆、湖南和贵州8个省市的规模化养殖场采集疑似禽霍乱发病禽群肝脏或头部样品共17份,并将采集的样品于2~8 ℃条件下当天带回实验室进行瑞氏染色镜检和细菌分离。
多杀性巴氏杆菌检测、鉴定和分型研究进展
疫苗 。近 年来 , 着 分 子 生 物 学 技 术 和 P 应 用 基 随 m
础研究 的发 展 , 别是 在对 P 的检 测 、 特 m 鉴定 和 分型
方面 。
1 多 杀性 巴 氏杆 菌 的 分 类 地 位
动物 医学进 展 。0 0 3 ( ) 6 —2 2 1 , l 1 :77
Pr g e s i t rn r e i i e o r s n Ve e i a y M d c n
多 杀 性 巴氏杆 菌检 测 、 定 和 分 型 研 究进 展 鉴
高明燕 , 徐 步 , 宝 华 , 赵 范建 华 , 建 森 , 学 贤 龚 刘
A s atItg isae / eeo i r mb a ercpo lc ls whc e uaeawiev r t f bt c : e r r J h tr dmei me rn ee trmoeue , i rg lt d ai y o r n n 3 c h e
( 国农 业 科 学 院家 禽 研 究 所 , 中 江苏 扬 州 2 5 0 ) 2 0 3
摘 要 : 多杀性 巴氏杆 茵( m) 以 引起 多种 畜禽 疾病 , 养 殖业 造 成 巨大 的经 济 损 失 。为 了系统的 了 P 可 给 解 P 检测、 m 鉴定和 分型技 术 的发展 , 文主要 对 P 的分 类地 位 、 定 和分 型 的 传 统 方 法 以及 分 子 生物 学 论 m 鉴 方 法, 如种 特异性 P R、 诸 C 荚膜 分 型 P R、 毒素 P 的 P R 鉴定 、 6S r NA基 因 测序 法 、 NA 杂交 、 C 产 m C l R D 大
【CN109852563A】一种禽多杀性巴氏杆菌菌影的化学制备方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910167547.3(22)申请日 2019.03.06(71)申请人 杨凌职业技术学院地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区渭惠路24号(72)发明人 李龙 闫红军 仇薪鑫 (74)专利代理机构 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385代理人 董芙蓉(51)Int.Cl.C12N 1/20(2006.01)C12R 1/01(2006.01)(54)发明名称一种禽多杀性巴氏杆菌菌影的化学制备方法(57)摘要本发明公开了一种禽多杀性巴氏杆菌菌影的化学制备方法,旨在利用化学法制备禽多杀性巴氏杆菌菌影。
利用NaOH二倍稀释法测定禽多杀性巴氏杆菌菌株的最小抑菌浓度,NaOH对巴氏杆菌的MIC为3.75mg/ml。
通过MIC的NaOH对巴氏杆菌进行处理制备菌影,结果发现处理60min后裂解率达到100%,同时细菌DNA浓度随着处理时间的延长浓度在不断降低,处理60min时DNA已检测不到。
通过电镜扫描发现NaOH处理会在巴氏杆菌表面形成微小的孔洞,但并未破坏其原有的正常形态。
本发明成功利用MIC NaOH法制备出禽多杀性巴氏杆菌菌影,该制备方法简单、快速和高效。
权利要求书1页 说明书6页 附图6页CN 109852563 A 2019.06.07C N 109852563A权 利 要 求 书1/1页CN 109852563 A1.一种禽多杀性巴氏杆菌菌影的化学制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1 菌种培养禽多杀性巴氏杆菌接种于LB培养基中,37℃200rpm条件下扩大培养2h后进行划线纯化,挑取单菌落扩大培养48h,4℃保存备用;步骤2 最小抑菌浓度测定首先将禽多杀性巴氏杆菌培养液调整至1×108CFU/ml,配制质量分数为60mg/ml的NaOH 溶液,过滤除菌;分别配制NaOH质量分数为30mg/ml、15mg/ml、7.5mg/ml、3.75mg/ml、1.875mg/ml和0.9375mg/ml的LB培养液,接种禽多杀性巴氏杆菌,37℃200rpm条件下培养18h,最终根据培养液的浑浊度判断NaOH的最小抑菌浓度;为确保试验结果准确,MIC测定重复3次,并进行涂板活菌检测;步骤3 菌影制备与裂解率计算将培养72h的细菌培养液在10000g条件下离心10min,收集菌体,用灭菌PBS清洗3次,PBS重悬;将1ml MIC浓度的NaOH加入2ml细菌悬浊液中37℃培养75min,细菌浓度1×108CFU/ml;为测定细菌裂解率,每15min分别取NaOH处理和未处理菌液进行平板计数,利用公式计算裂解率,裂解率=[1-(NaOH处理菌计数/未处理菌计数)],每个样品重复测定3次;在75min处理结束后在10000g条件下离心10min收集菌影,PBS清洗3次后重悬,4℃保存备用;步骤4 无DNA菌影分析为进一步分析细菌裂解过程中DNA的降解,利用细菌DNA提取试剂盒分别提取NaOH处理和未处理菌液15、30、45、60和75min细菌DNA,操作过程严格按照说明书进行,提取DNA利用1%琼脂糖凝胶电泳检测,并利用超微量分光光度计检测提取DNA浓度;步骤5 电镜扫描将细菌菌影用步骤5%戊二醛在4℃条件下固定2h,PBS洗涤三次,用1%四氧化锇在4℃条件下固定1.5h,PBS洗涤三次,分别利用10%、30%、50%、70%和100%的酒精溶液进行梯度脱水,干燥及喷镀处理后使用扫描电镜进行观察。
我国多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及交互免疫试验
我国多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及交互免疫试验
吴范庚
【期刊名称】《中国兽医杂志》
【年(卷),期】1997(23)8
【摘要】我国多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及交互免疫试验吴范庚(中国兽药监察所,北京海淀100081)多杀性巴氏杆菌(Pasteuralamultocida)又称为出血性败血症巴氏杆菌,它可感染多种家畜、家禽、野生动物及野禽,引起发病或死亡,对我国畜牧业的发展危害...
【总页数】1页(P14)
【作者】吴范庚
【作者单位】中国兽药蓝察所
【正文语种】中文
【中图分类】S855.12
【相关文献】
1.鸽源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定 [J], 毛跟年;许牡丹;杨秀芳
2.256株鸭源多杀性巴氏杆菌血清学鉴定及病原特性研究 [J], 程安春;汪铭书
3.产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——给用醋酸处理或不处理的猪接种产毒素多杀巴氏杆菌引起的鼻腔病变比较 [J], 张树成;杨留战;苑士祥;杨旭夫;赵淑春;彭发泉
4.产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌对仔猪的实验感染 [J], 杨留战;张树成;苑士祥;赵淑春;杨旭
夫;彭发泉
5.产毒素多杀巴氏杆菌在猪萎缩性鼻炎病因中的作用研究——支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌混合感染方式对猪萎缩性鼻炎发生的影响 [J], 苑士祥;杨留战;张树成;赵淑春;杨旭夫;彭发泉
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禽霍乱多杀性巴氏杆菌的分离鉴定
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XIONG Lang1,ZHANG Haojie1,WANG Chengdong2,LICaiwu2, LANJingchao3,LUO Li3,LIU Li3,YANG Guangyou1
mortalityofeggswereobservedunderamicroscopeandrecorded.Theresultsshowedthatthekillingrates ofeggswerearound50% aftertreatingwith2.5mg/mL Neopredisan1351for30min,60minor90 min, whilethekillingrateswere74.71%87.64% aftertreating with5 mg/mL Neopredisan1351for30 min and60min.Itwasnoteworthythat10,20and40 mg/mL Neopredisan1351couldcasuemorethan90% killingefficiency.Ourfindingsdemonstratedthat10,20and40 mg/mL Neopredisan1351havestrongkill ingeffecton犅犪狔犾犻狊犪狊犮犪狉犻狊狊犮犺狉狅犲犱犲狉犻狊eggs犻狀狏犻狋狉狅.Consideringcost,killingeffectandenvironmentalfac tors,werecommendedconcentrationofdisinfectantNeopredisan1351is20 mg/mL. 犓犲狔狑狅狉犱狊:犃犻犾狌狉狅狆狅犱犪犿犲犾犪狀狅犾犲狌犮犪;犅犪狔犾犻狊犪狊犮犪狉犻狊狊犮犺狉狅犲犱犲狉犻;egg;Neopredisan1351
多杀巴氏杆菌REP—PCR分析
多杀巴氏杆菌REP—PCR分析锻镪1p|)历磁镯槔/'l宦匿芏二董盘佳垒瘟蔓!查差!麴!塑生!!且i星噩塑硇!l句55',l,f^.JJ多杀巴氏杆菌REP—PCR分析'K.M.Towndend等…/本研究旨在:(1)分析多杀巴氏杆菌菌株都相同.HS-REP图形由520bp,580bp,产生的REP(REP.repetitiveextragenicpalin.1.0kb和2.1kb4条带组成,第5条片段为dromie).PCR指纹,并测定这种方法的分辨2.0bp.将循环数增加到39或40次,大多数能力;(2)确定能否用一个扩增的PEP片段HS分离物可产生一条3.5kb的带.经鉴别菌株;(3)确定REP图形与以前报告的PCR34次循环后在大多数北美HS图形中可引起HS的多杀巴氏杆菌菌株之间毒力的相见到这一片段,经4O次循环后这条带特别关性.强.当在非HS株也有这些大小的片段时,材料和方法嚣篙等黧基因组DNA的制备基本按Sambrook巴氏杆菌分离株.从REP.PCR图形上看与等(1989)的方法制备.血清群B和E的HS分离物是相似的,尽管REP.PCR按V ersalovic等(1991)的方这些疾病的症状明显不同.法进行.有一点非常明显,与HS多杀性巴氏杆标记和Southern杂交从琼脂糖凝胶菌分离株比较,非HS株中REP片段数显着切割特异性REP片段,用BRESA.CLEANTM增加.这种增加与宿主种类无关,因为禽和'试剂盒纯化,用Primea:Gene标记系统标猪分离株都有比牛HS株明显的片段.此记.用常规Southern方法杂交.用Quanta外,牛刨伤分离株0140也表现出比牛和水牛ⅢCmnexIntensifyingScreen和CronexlV的HS分离株更多的扩增产物.禽和猪源非MedicalX射线胶片自动放射照相并于HS株产生的REP指纹,特别是分离株0347 —70"C过夜曝光显视结果.和0288之间有其相似性.这些REP-PCR结果指纹不同处仅是在0288中缺乏1.5kb的用REPPCR产生的38株多杀巴氏杆REP产物.菌DNA指纹显示含大小约350bp~3.5kb未见到多杀巴氏杆菌HS株所独有的扩的多重扩增产物.可根据34次循环后超过增产物.因此,随机选择9332株作PEP.PCR350bp的扩增片段比较REP—PCR指纹,如循的产生的 1.0kb带作为探针,用Southern杂环数增加到39次.低于350bp的REP-PCR交分析菌株关系.用EcoRI.或PstI.消化所产物其强度和重复性可发生很大变化.从大有多杀巴氏杆菌的基因组DNA,证实有一个,范围比较多杀巴氏杆菌分离株的REP-PCR单一的多态限制片段与标记探针杂交.用限指纹证实有一条约lkb的种特异性带,且在制酶消化后,B型HS分离株都表现相似的所有多杀巴氏杆菌的血清型中都见有这条图形,杂交片段变化很小或没有变化.在大带.F:3培养物P4218是唯—强度低于其他多数HS分离株中,PEP探针与11.6bp 的多杀巴氏杆菌分离物的产物,其REP产物为PstI片段杂交,证实分离株0130有一个1.1kb.在几乎所有被分析的多杀巴氏杆菌127kb的片段.非HS血清群B多杀巴氏中.另外的片段约为23kb,在本研究中.仅杆菌分离株有一个大小与HS株明显不同的0358菌株未被证实有此片段.杂交片段.其大小为20.5kb,而HS分离株片血清群B和E的HS株有单一的REP-段大小为11.6kb.RFP探针与EcoRI消化PCR指纹.在4212退火.34次循环时,指纹多杀巴氏杆菌基因组DNA杂交表明,不管18卷第4期1998年11月(总第78其体细胞血清型如何,所有血清群B分离株都有一个8.8kb的杂交片段.在本研究中,检查的所有HSE型分离株其杂交图形与引起HS的B型多杀巴氏杆菌相似.用PstI消化非HS多杀巴氏杆菌菌株(包括败血巴氏杆菌病病例中分离的菌株)都同样能与一个20.5kb的片段杂交.相反,用EcoRI消化的A(0043)和D(0349)血清群分离物的杂交图形变化很大,标记的片段与引起HS的多杀巴氏杆菌明显不同.值得注意的是,Roberts参考TypeIII株0355及P4218(F.3)其EcoRI杂交片段与在HS和HS样培养物所见的相似.讨论对多杀巴氏杆菌菌株之问REP指纹进行比较表明,非HS分离株与HS株比较,REP图形中扩增产物显着增加.在引起HS的多杀巴氏杆菌中REP成分的基因组定位可能在HS发病机理中起作用,但REP成分在原核基因组中的功能仍不太清楚.New-bury等(1987)提出REP序列可稳定上游mRNA并因而可以调节基因表达.值得注意的是,与其他多杀巴氏杆菌菌株比较.HS 分离株中缺乏REP序列使转译上游mRNA 不稳定而影响HS分离株的致病性.但禽霍乱分离株含有的REP分布比HS分离株广, 也产生类似的临床症状.所以.REP序列对发病机理的影响可能需要宿主特异性刺激. 用REP-PCR分析多杀巴氏杆菌分离株可以区分各菌株及显示疾病的特性.引起HS的多杀巴氏杆菌分离株REP-PCR指纹相同,这为存在一种与疾病相关的REP图形的假设提供了支持.这种图形与在其他巴氏杆菌病病料中分离的菌株所显示的图形不同.这种REP指纹为B和E血清群的HS分离株所共有,但与败血巴氏杆菌病(B:l,B :3.4和B:4)病例分离的REP-PCR图形不同,从而为鉴定不同血清型的HS株提供了一种新的方法.在HS分离株间扩增REP产物的大小都接近时,需要作DNA序列分析.一虽熊REP.PCR分析不具有核分型和电场交替凝胶电泳(FACE)区分HS培养物那样的辨别能力,但在非HS多杀巴氏杆菌菌株问有明显的异质性,说明这种方法在禽霍乱暴发的流行病学研究中有价值.用PEP—PCR分析非HS株比核分型或FACE更敏感,可以高度区分分离物,同时也说明具有相同核型的分离物之间有相似的区.分离物0140和0355(菌体血清型3,4)表现有类似的核型,REP.PCR图形之间有显着的相似性.REP探针与EcoRI消化的基因组DNA 杂交后,进一步证实了这些分离物之间的基因组关系,如0140和0355有一个8.8kb的杂交片段.虽然在这些菌株之间存在相似性,但在0355的REP-PCR指纹中缺乏一个1.15kb片段及可以区分0355与0140的独特的SmaIFACE图形.用REP-PCR和分离PEP片段的Southem杂交证实了HS分离株间PEP图形是相同的.不论血清学分类如何,所有引起HS的分离株REP指纹都是相同的.用纯化REP片段产生的杂交图形更能证明多杀巴氏杆菌HS_分离株问的基因组DNA的一致性.这些图形与不引起HS的血清学上相似的菌株的图形明显不同,而显示与败血巴氏杆菌病病例分离株相关.用PEP探针与Pstl消化的多杀巴氏杆菌基因组DNA杂交表明,HS和非HS分离株之问有明显不同, 其杂交片段分别为11.6和20.5kb,分离株0130(Izamager52)是这种分类的唯一例外,杂交片段为~12.7kb.说明0130与其他用核分型或FAGE未检出的AsianHS分离株之间基因组有差异.根据对0130和其他HS分离株杂交片段的核苷酸顺序分析可以确定其不同的区,且可用PCR测定相似的区.以最后鉴定引起HS的多杀巴氏杆菌分离株. Hs样分离株(B:1,B:4和B:3,4)杂交图形与用EcoRI消化的HS株(B:2和E:2) 相似,也与用PstI消化的非HS分离株相似. 这些菌株用核分型分析表明HS和HS样分离株的图形显着不同.Res.V et.Sci.,1997,63(2):15l~155李凯年择姜行知校。
实验八 多杀性巴氏杆菌
巴氏杆菌的生化特性:不分解乳糖、吲哚试验阳性、
硫化氢阳性等
瑞氏染色法:
1、组织触片或推片,自然干燥。 2、在干燥的组织涂片上加瑞氏染液染1-3分钟,勿 使染液干。 3、直接滴加与瑞氏染液等量的蒸馏水到涂片上, 吹气混匀,继续染3-5分钟,水洗,干燥,镜检。
巴氏杆菌镜下形态:
组织片中呈两极着色的示病性特征。
实验八 多杀性巴氏杆菌
多杀性巴氏杆菌:可引发多种家畜、家禽
的巴氏杆菌病,表现为出血性败血症,传染 性肺炎或局部慢性感染。
目的:
1、掌握巴氏杆菌的试验室诊断方法 2、掌握巴氏杆菌两极染色的形态特征
巴氏杆菌诊断内容:
1、涂片染色 2、分离培养 3、动物接种巴氏杆菌实验室诊断程序:
病料
(疑似巴氏杆菌病的 小动物尸体、采集的
动物脏器)
分离培养
接种鲜血平板 麦康凯平板
涂片染色
触片、推心血片 瑞氏染色、镜检
动物接种
病料悬液接种注射 易感实验动物
实验室诊断的继续
分离的纯培养物
革兰氏染色
生化鉴定
血清型 鉴定
分离培养操作:
在鲜血平板上进行划线分离。力求获得单个菌落。
巴氏杆菌培养特征:
在鲜血平板上生长良好,菌落淡灰色、圆形、湿润、呈 露珠样小菌落,无溶血。在普通培养基上生长不良,在麦康
动物试验:
对小鼠和家兔、家鸡有高度致病性,禽源株对鸽有很强 的致病性。
思考题:
1、多杀性巴氏杆菌在纯培养和病料组织中的形态特征有什 么差别?检查时各用什么染色方法? 2、多杀性巴氏杆菌的培养特征及生化特性有哪些? 3、试述多杀性巴氏杆菌的微生物学诊断法。
禽巴氏杆菌病病原的分离与鉴定(以发表)
禽巴氏杆菌病病原的分离与鉴定*** ***(***动物疫病预防控制中心***)禽巴氏杆菌病又叫禽霍乱和禽出血性败血症,是禽类的一种常见接触性败血性传染病,各种类型的禽均可感染并导致死亡。
其特征表现为急性败血过程,发病率和死亡率都很高。
低毒感染或急性发病之后,可出现慢性的、局部性的疾病。
(一)、病原1、形态染色禽巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的,多杀性巴氏杆菌为卵圆形的短小杆菌,少数近于球形,长约0.6~2.5 um(微米),宽约0.2~0.4 um,无鞭毛,不能运动,不形成芽胞。
革兰氏染色阴性,多呈单个或成对存在。
在组织,血液和新分离培养物中的菌体用美蓝、瑞氏、姬姆萨氏法染色均可着色,菌体呈明显的俩极着色,中间部分着色较浅,很像许多并列的两个球菌,所以又叫两极杆菌。
血清型菌株有荚膜,用印度墨汁等染料染色时,可以见到清晰的荚膜。
人工培养后及弱毒株,荚膜不明显或消失。
2、培养特征巴氏杆菌为需氧兼性厌氧菌。
在普通培养基上可生长,37℃培养18~24h (小时),可见灰白色,半透明,光滑,湿润,隆起,边缘整齐的露滴状小菌落,直径约1~2 mm(毫米)。
本菌在鲜血琼脂,血清琼脂或马丁琼脂平皿上培养,生长良好,不溶血。
在肉汤中培养时,初期呈均匀混浊,24h后上清清亮,管底有灰白色絮状沉淀,轻摇时呈絮状上升。
新分离的细菌接种到马丁琼脂平皿上,通过45°折光观察,可见菌落有荧光,呈橘红色带金光,边缘有乳白色光带,结构细致,边缘整齐,称为Fo型菌落,对鸡等禽致病力强;另一类菌落呈蓝绿色而带金光,边缘有红黄色光带,称为Fg型菌落,对鸡等禽致病力较弱。
该菌可利用果糖,甘露糖,蔗糖,产酸不产气;不能利用肌醇乳糖,靛基质,过氧化氢酶,氧化酶和硝酸盐还原阳性,尿素酶阴性,不液化明胶,在麦康凯培养基上不生长,普通琼脂上发育不良或不发育。
3、种类多杀性巴氏杆菌的抗原结构比较复杂,分类方法有很多种,Garter在1955年用间接血凝试验根据细菌荚膜将其分为A、B、D、E四个型。
禽多杀性巴氏杆菌菌株分离及荚膜和脂多糖分型鉴定
养殖与饲料2019年第08期摘要为了解华东地区禽多杀性巴氏杆菌流行情况,本研究对2009-2017年从江苏等附近省份收集的1556份病料样品进行细菌分离鉴定,结果表明共分离102株Pm 菌株,分离率为6.56%;其中鸡分离53株、鸭分离28株、鹅分离21株。
多重荚膜PCR 结果显示所分离的菌株有92株属于A 型,有10株未定型;而脂多糖多重PCR 分型结果发现其中98个Pm 分离株属于L1型,这表明该地区禽Pm 菌株主要为脂多糖L1型。
关键词禽多杀性巴氏杆菌;分离鉴定;多重荚膜PCR ;脂多糖分型禽多杀性巴氏杆菌菌株的分离及荚膜与脂多糖分型鉴定———以2009-2017年华东地区为例高明燕韦玉勇周生徐步*中国农业科学院家禽研究所,江苏扬州225125多杀性巴氏杆菌(,Pm )能引起多种动物发生疾病,包括禽霍乱(fowl cholera,FC )、猪肺疫、猪萎缩性鼻炎、牛出血性败血症、兔出血性败血症等,并可以引起人类发病。
其中禽霍乱是侵害家禽和野禽的高度接触性传染病[1];临床症状表现为急性、亚急性或慢性败血症,发病率和死亡率都很高,是对养禽业危害非常严重的传染病之一。
引起禽霍乱的Pm 分离株荚膜血清型主要为A 型,Heddleston 菌体血清型主要为1型,还有少量3型和4型[2-3];其中1型属于脂多糖(lipopolysaccha-ride ,LPS )基因型L1;3型和4型属于L3[4]。
20世纪70、80年代,禽霍乱对国内的养禽业造成了巨大的经济损失。
随着规模化养殖技术的提高,抗生素在临床的应用以及生物安全措施的重视,该病的危害大大降低,但有关该病的病例报道还时有发生。
为深入了解当前家禽养殖业中禽多杀性巴氏杆菌病流行情况,笔者在2009-2017年共9年间对江苏、安徽、山东、浙江等地区进行了流行病学调查。
共采集1556份禽霍乱临床疑似病例,同时进行了Pm 菌株分离。
采用菌落特征观察、革兰氏染色、生化试验及Pm 种特异性PCR 等方法进行菌株鉴定,并对这些菌株进行荚膜血清型和LPS 基因型分型,为该病的流行病学监测和疫苗的筛选与研制奠定了基础。
多杀性巴氏杆菌鉴定与特性分析的分子生物学方法
23.. 分离培养得 到 病 源 菌 " 直 到 !’#% 年 才 将 分 离 物 做 了 较
为可靠地鉴定 " 并 发 现 人 也 可 被 感 染 ’ !++4 年 " 为 了 纪 念 巴 斯 德 在 微 生 物 方 面 所 做 的 工 作 "将 此 菌 命 名 为 巴 斯 德 氏 菌 ’ 其 中 多 杀 性 巴 氏 杆 菌! (,-./01/55, 605.7839," (:6 ( 可 感 染 猪 )马 )牛 )家 禽 等 多 种 动 物 "引 起 猪 肺 疫 )牛 出 血 性 败 血 症 ) 禽霍乱等 ’ 其 血 清 型 众 多! !; 种 血 清 型 ( " 在 毒 力 及 流 行 病 学 等 方 面 的 生 物 学 特 性 差 异 很 大 ’ 关 于 (:6 的 分 离 ) 鉴 定 ) 特性研究以及分类等方面的工作一直是学者们研究的重点 之 一 ’ 菌 体 的 实 验 室 培 养 和 纯 化 是 对 (:6 进 行 分 离 ) 检 测 ) 鉴定及特性研究的前提’ 传统的生物学分析方法将纯化后 的 细 菌 依 据 形 态 )血 清 学 等 表 型 特 征 进 行 分 类 ’ 然 而 "培 养 条件会影响这些表型特征的表达从而降低了鉴定的稳定性 和可靠性 ’ 随着分子生物学技术的发展 " 其鉴定和特性研究 深入到了基因水平之上 ’ 相对于传统的表型鉴定方法而言 " 基 因 型 鉴 定 更 快 速 )稳 定 )可 靠 "如 核 苷 酸 分 析 能 对 细 菌 进 行 快 速 可 靠 地 检 测 )鉴 定 )分 类 "并 揭 示 其 种 间 遗 传 关 系 ’
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护动 物 。通过 询 问饲 养 员 了 解其 临床 症 状 为 : 病 发 病程 短 , 发病 急 , 流褐 色分 泌物 , 鼻 继而 突然 倒地 、 抽
搐而 死亡 。剖 检观 察病 理变 化 : 口腔 、 管 内有较 多 气 黏液 , 个 右 侧 肺 发 黑 、 肿 , 脏 微 肿 、 点 状 出 整 微 肝 有 血 , 冠脂 肪有 散 在 出血 点 , 他脏 器 病 变 不 明显 。 心 其 笔者 对病 死金 刚 鹦鹉 病 料 进 行 了 病原 的分 离 鉴 定 , 分离 出 1株 多杀 性 巴 氏 杆 菌 ( serl l c— Patu el mu t i a o
的空 隙用 纱 布条 或 麻 丝 填 满 塞 紧 , 灌 注 少 量 松馏 并 油, 以达 到压 迫 止 血 和 防 止 污染 的 目的 。术 后解 除 止 血 带 。系 于清 洁 、 干燥 处 。经 5 7d换 药 1次 , ~ 换 药 时若 发 现仍 有 生 长 不 良的赘 生 肉 芽 , 用 锐匙 要 刮 掉 , 敷药 后 , 继 续按 上法 装 订铁 板蹄 铁 。一 般 经 再 经 5 周 新 角 质 即可 形 成 。此 时可 进 行 轻 度使 役 , ~6 跛 行 完全 消 失后 即可 进行 正 常使 役 。
马厩 、 马场 地 面 保 持 清 洁 、 坦 、 燥 。1 ~ 系 平 干 5 2 Od换药 处理 1次 , 去腐 烂 组 织 , 理 时 注 意保 除 处 护 新 生组 织 。作适 当牵蹈 运动 ,促进 角 质生 长 。
4 典 型 病 例
1 6 分 离 培养 将 病 料 无 菌 接 种 于 5 犊 牛 血 清 . 营养 肉 汤 、 清琼 脂 平 板 、 液琼 脂 平 板 , 7 血 血 3 ℃培 养
( ) 跖 中部 结 扎止 血带 。
肾等 脏器 , 4 置 ℃冰箱 待检 。
大学农 牧 学 院预 防 实验 室 自制 ; 犊 牛 血 清 肉汤 , 5 购 自北京 燕 生 政 博 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 , 号 : 批
010 ; 8 1 2 MH 培养 基 , 自北京奥 博 星生物 技术 责任 购 有 限公 司 , 批号 :0 1 0 ; 种生 化培养 基购 自北 京 0 82 6各
手术 方 法是 : 双 刃刮 削刀 或柳 叶刀 , 病变 组 用 对 织 全 部切 除 , 时 尚需 切 除部 分 皮下 组织 , 在蹄 底 有 如 部 蹄 骨露 出时 , 应用 锐 匙将 骨 面刮 净 , 达 健康 组 亦 直 织 为 止 。最后 撒 布较 厚 的碘 仿 磺 胺 粉 或 5:1的磺 胺 水 杨 酸合 剂 , 以灭菌 纱布 块 , 垫 装钉 铁板 蹄 铁 。装
钉 铁 板蹄 铁 后 , 定要 将 铁板 蹄铁 与 蹄底 、 叉之 间 一 蹄
路 桥 生物技 术 有 限责任 公 司 , 批号 :8 6 6 00 0 。 1 3 实验 动物 . 健 康昆 明系小 鼠 4只 ( 6 0g , 1 ~2 )
购于 青海 省地 方病 研究 所 。 1 4 药敏 纸 片 购 自北 京 天 坛 药 物生 物技 术 开 发 . 公司 , 批号 :9 3 l 00l。 1 5 病料 制 片染 色镜检 . 兰 、 特染 色 , 瑞 镜检 。 将 病料 进行 触片 , 分别 革
1  ̄ 2 , 8 4h 尔后 进行 纯化 培养 。
1 7 生化 试验 .
观 察 结果 。
用灭 菌 接 种 环 勾 取少 许 纯 培 养 物
接 种 于各种 生 化 培 养 基 中 ,3 ℃培 养 1 ~ 2 7 8 4 h后 1 8 动物 试验 将 纯培 养 物 制 成 菌悬 液注 射 小 鼠 . 4只 ,. 只 。另取 小 鼠 2只 , 腔注射 0 1mL 0 2mI / 腹 .
末 填入 患部 的沟缝 内 , 盖过 创 面 2 3mm 厚 , 并 ~ 然后 覆 以灭 菌纱 布 , 钉铁 板 蹄铁 , 塞 紧铁 板 与 蹄叉 的 装 并 空隙 。每隔 2 换 药 1次 , 病 情好 转后 , ~3d 见 可适 当 延 长换 药时 间 , 全部形成 正常角 质时 , 待 即可停药 。 对较 重 的病 例 , 用手 术疗 法效 果 较好 , 可缩 短 并
生 理盐 水 ( 照 )。 对
深圳 赛 马会 3 5号 赛 马 , 6 两后 蹄 患蹄 叉 真皮 疣 状增生 , 以上 述手 术 方 法 治疗 , 后 2 术 6 d换 药处 理
时 , 行减 轻 , 跛 蹄踵 腐 烂 停 止 , 面 干 燥 。术后 4 创 8d 第 2次换 药 时 , 行 消 失 , 后 蹄 蹄 踵 空 洞 基 本 长 跛 两 平 , 质呈 灰 白色 , 护理 3 角 又 2d两患 蹄痊 愈 。
疗程 。
首先 对 蹄形 进行 修 整 , 蹄 形做 好铁 板蹄 铁 , 按 准 备 好 手术 用 的蹄 铲 、 手术 刀 、 手术 剪 , 止血 带 等物 品 。 然 后 将 患畜 在 二 柱 栏 内 站 立 保 定 , 系好 吊绳 围绳 ,
提举 固定 患 蹄 , 除部分 距 毛 , 患蹄 部 清洗 、 毒 。 剪 对 消
C ieeJ un l f tr ayMeiie hn s o ra o ei r dc Ve n n
中 国兽 医 杂 志 2 1 0 2年 ( 4 第 8卷 ) 1期 第
7 3
3.、 0 0 冰片 1 . 、 0 0 滑石 粉 3 . , 0 0 共研 细末 ) 尽 量 将 药 ,
n, M) 暂命 名 为金 刚鹦鹉 株 , 告 如下 1 1 病料 . 1 2 培养 基 .
无 菌采 取 病 死 金 刚 鹦鹉 心 、 、 、 、 肝 脾 肺 鲜血 琼脂 平板 、 清琼脂 平板 由青 海 血
于掌 ( ) 施 行 神 经 传 导 麻 醉 , 保 定 宁 注 射 液 3 跖 部 用 mL作 皮 下 注 射 。 以 保 证 手 术 的 顺 利 进 行 , 掌 于