SOP-C SDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程

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SOP-C SDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程

审批及颁发：会审：分发：一、目的建立重组人生长激素电泳检查标准操作规程，使中间产品检验有据可依。

二、范围适用于本公司中间产品“重组人生长激素”的电泳检查。

三、职责1 质量部负责制定本规程。

2 QC人员负责按照本操作规程的规定操作，并做好记录。

3 QC室主任负责监督QC人员按照本规程的规定操作实施。

四、术语无五、内容1 仪器、设备恒压电源、垂直板泳槽和制胶模具。

2试剂2.1检查所需试剂是否在有效期内，未准备好的及时配制，缺少的试剂及时申购。

2.2所需试剂有：2.2.1 水：电阻率应不低于18.2MΩ.cm。

2.2.2 A液：（ 1.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取18.15g三羟基氨基甲烷，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，加水稀释至100ml。

2.2.3 B液：30%丙烯酰胺-0.8%N，N`-亚甲基双丙烯酰胺溶液（避光保存）。

2.2.4 C液：1%十二烷基磺酸钠溶液。

2.2.5 D液：10%四甲基乙二胺溶液。

2.2.6 E液：10%过硫酸铵，临用前配置。

2.2.7 F液：（0.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取6.05g三羟基氨基甲烷加适量水溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100ml。

2.2.8 电极缓冲液：称取3g三羟基氨基甲烷，14.4g甘氨酸，1g十二烷基磺酸钠，加适量水溶解，用盐酸调PH值至8.3，加水稀释至1000ml。

2.2.9 供试品缓冲液：称取0.303g三羟基氨基甲烷，0.189ml盐酸，4ml甘油，2mg溴酚蓝，0.8g十二烷基磺酸钠，加水溶解并稀释至10ml，此溶液用于非还原SDS-PAGE。

如用于还原SDS-PAGE，则再加2mlβ-巯基乙醇。

2.2.10 固定液：取量250ml乙醇,60ml冰醋酸,加水稀释至500ml。

，加乙醇200ml，冰醋酸50ml，加水至2.2.11 考马斯亮蓝染色液：称取1g考马斯亮蓝R250500ml，混匀。

SDSPAGE电泳SOP

SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。

2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。

3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。

4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。

6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。

6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。

SDS-PAGE凝胶电泳操作

SDS-PAGE凝胶电泳操作一、常规试剂的配制1. 30% 聚丙烯酰胺贮液：丙烯酰胺150g，甲叉双丙烯酰胺4g，双蒸水500ml，滤纸过滤后，棕色瓶避光4℃保存；2. 1.5mol/L，pH 8.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：18.15g Tris，用1mol/L HCl定容至100ml，棕色瓶避光4℃保存；3. 1.0mol/L，pH 6.8 Tris-HCl分离胶缓冲液：12g Tris，用1mol/L 调pH至100ml，棕色瓶避光4℃保存；4. 10% SDS溶液：10g SDS加水定容至100ml，完全溶解室温保存；5. 10% AP溶液：0.1g AP（过硫酸铵）加水定容至1ml，用前新鲜配制；6. 1×SDS-PAGE电泳缓冲液：25mM Tris（3.0285g/L），192mM甘氨酸（14.41g/L），0.1%SDS （1g/L），pH 8.30；7. 染色液：0.25g 考马斯亮蓝R-250溶解于45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸，过滤除去杂质；8. 脱色液：45ml甲醇，45ml水，10ml冰醋酸；9. 固定液：50ml甲醇，40ml水，10ml冰醋酸；10. 2×SDS-PAGE上样缓冲液：10% SDS 0.4ml，0.375M Tris-HCl（pH 6.8）0.333ml，甘油0.2ml，1% 溴酚兰10μL，β-疏基乙醇100μL，加水定容至1ml，分装后-20℃保存。

二、样品的处理1. 蛋白含量较低的酶制剂或原料样品（1）粉剂（或颗粒）样品称取样品1g，加入3-5ml蒸馏水进行搅拌溶解1h（搅拌时间可根据实际情况进行增减），4000rpm离心10min，取离心上清液等体积加入20%的三氯乙酸聚沉30min，离心，弃去离心上清液，用70%的丙酮溶液洗涤沉淀，4000rpm离心10min，重复洗涤3-5次，将丙酮洗涤液吹干，加入适量（1-3ml）PBS溶解沉淀，溶解液即可用于电泳实验。

SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档

SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)一．仪器装置1．电泳仪2．夹心式垂直电泳槽3．玻璃板：长14.5×11.5×2mm、短14.0×11.5×2mm4．可调微量移液器5．微量进样器6．转移脱色摇床二．试剂配制1．丙烯酰胺液（30%T/2.7%C）用天平分别称取58.4g丙烯酰胺（Acr）和1.6g N,N’-亚甲双丙烯酰胺（Bis），溶于120ml温热（37℃左右，以利于溶解Bis）的去离子水中，然后转移至200ml容量瓶中，补加去离子水至刻度，摇匀，用滤纸过滤后，检查其pH值应不大于7.0，贮存在棕色瓶中，4℃保存。

每隔2个月重新配制。

小心：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套。

如不慎接触皮肤，应立即用水和肥皂清洗。

2．分离胶缓冲液（1.5M Tris-HCl，pH8.8）用天平称取36.3g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至8.8~8.9（先加5ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。

3．浓缩胶缓冲液（0.5M Tris-HCl，pH6.8）用天平称取12.1g Tris，溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至6.7~6.8（先加8ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。

4．10% 十二烷基硫酸钠溶液用天平称取20.0g 电泳级十二烷基硫酸钠（SDS），加180ml去离子水，68℃水浴使溶解后，用去离子水定容至200ml，室温保存。

5．10% 过硫酸铵溶液用天平称取0.50g过硫酸铵（APS），溶于5ml去离子水中，分装Eppendof管冰冻保存。

6．四甲基乙二胺（TEMED）液7．分离胶覆盖液（（0.375M Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS）取分离胶缓冲液25ml、10% SDS溶液1.0ml，混匀，加去离子水定容至100ml，室温保存。

SDS凝胶电泳操作手册

各项检验操作注意事项一.SDS-PAGE操作及注意事项1.制胶按如下配方制备分离胶和浓缩胶4%浓缩胶（3ml）10%分离胶（4ml）AB-3 0.25mLAB-6 0.8mL3×gel buffer 0.75mL 1.335mL50%甘油(v/v) 0.64mLH2O 2mL 1.235mL10%APS(w/v) 22.5uL 20uLTEMED 2.25Ul 2uL注意事项：（1）配制前先将两块玻璃板夹紧，可以先试漏。

首先配置分离胶，用水封，静置40min 后，将水吸干，再注入浓缩胶，插上梳子，注意要避免梳孔出现气泡。

（2）在加入APS（10%过硫酸铵）和TENED后要尽快将胶注入，防止其凝固后无法注入玻璃板内。

2. 电泳注意事项：（1）制样：取40uL待测样，加入10uL5×SDS PEGE loading buffer，混匀后煮沸10min （电磁炉1000W），制好的样放至室温后，放4℃保存，待电泳。

（2）电泳：在电泳槽底部加入阳极缓冲液，将制好的胶连同装置放入电泳槽中，在两块胶之间注入阴极缓冲液。

取2uL Marker注入胶孔中作为参照，再一次取5uL样品缓慢注入胶孔中，调整电压800-100V。

待溴酚蓝从浓缩胶进入分离胶后，电压加至120-155V。

继续电泳直到溴酚蓝抵达分离胶底部，断开电源。

小心撬开玻璃板，除去浓缩胶，取出分离胶，加入R250考马斯亮蓝染色40min，再用脱色液脱色。

3. 溶液的配制：（1）正极缓冲液Anode buffer(1×)：12.114gTris加少量ddH2O溶解后，用HCL调PH至8.9，最后用容量瓶定容至500mL，4℃保存。

（2）负极缓冲液Cathode buffer (1×)：6.057gTris+8.96gTricine+0.5SDS加入少量ddH2O 溶解后，定容至500mL，4℃保存。

（3）凝胶缓冲液Gel buffer (3×)：36.342gTris+0.3gSDS加ddH2O定容至100mL，HCL调PH=8.45，过滤4℃保存。

SOP-C SDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程.

答对题目共： 48，得分：96 ,答卷时间共：36分4秒职业道德考试试卷(分值：100 得分：96一、是否题1、社会主义和爱国主义有着共同的奋斗目标，两者都致力于探索中国伟大的复兴之路。

（）（分值：2 得分：2用户作答：A ）A．正确B．错误2、中国特色社会主义事业的精神，需要爱国主义精神的支撑；爱国主义只有融入中国特色社会主义的伟大事业中，才具有强大的生命力；两者内在地统一于中国特色社会主义事业的伟大实践中。

（）（分值：2 得分：2用户作答：A ）A．正确B．错误3、爱国主义、社会主义与党的领导不具有内在的统一性。

（）（分值：2 得分：2用户作答：B ）A．正确B．错误4、在人类社会发展的历史进程中，精英群体始终是推动社会历史发展的主体。

（）（分值：2 得分：2用户作答：B ）A．正确B．错误5、马克思主义权力观，概括起来是两句话：权为民所赋，权为民所用。

前一句话指明了权力的根本来源和基础，后一句话指明了权力的根本性质和归宿。

（）（分值：2 得分：2用户作答：A ）A．正确B．错误6、玩忽职守、敷衍塞责是指公务员对工作有点不负责任、没能履行或不正确履行职责。

（）（分值：2 得分：2用户作答：B ）A．正确B．错误7、所谓履职为公，是指公务员正确运用公权力，努力为人民服务，处理事情公平、公正。

（分值：2 得分：2用户作答：A ）A．正确B．错误8、公务员要要履职为公，就必须树立正确的权力观，正确认识、对待和行使好手中的权力，提高公权公用的意识。

（）（分值：2 得分：2用户作答：A ）A．正确B．错误9、公务员在执行职务过程中,既要服从上级发布的命令,又要遵守社会运行的规则(法律,以保证行政事务执行的效率性和统一性。

（）（分值：2 得分：0用户作答：B ）A．正确B．错误10、公务员是一个特殊的群体，既是党的路线、方针、政策和国家法律法规的具体执行者、国家公务的履行者，又是行政权力的行使者、社会事务的实践者。

SDS-PAGE电泳SOP

SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。

2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。

3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。

6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。

6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。

SDS-PAGE电泳的标准操作规程

SDS-PAGE电泳的标准操作规程（编号：039）1、目的及适用范围SDS-PAGE电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。

2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.815.1g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.35×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。

sds page凝胶电泳sop

原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，它具有两种形式，一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质在电泳中保持完整的状态，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。

而SDS-PAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。

这个技术首先是1967年由shapiro建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，电荷因素可以忽视。

SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。

而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。

在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，于连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。

浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。

当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。

电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。

蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。

电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。

此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。

1.溶液配制1.1.30%（W/V）丙烯酰胺+0.8%双丙烯酰胺用天平称取15g丙烯酰胺、0.4g双丙烯酰胺，加入50ml 去离子水溶解混匀。

SDS-PAGE电泳实验步骤

>垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目的学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。

当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。

本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。

由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。

这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。

同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=—，下层胶pH＝；Tris—HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH，是缓冲配对离子；CI-是前导离子。

在时，缓冲液中的Gly-为尾随离子，而在pH＝时，Gly的解离度增加；这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。

不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。

由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子筛效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。

~如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)，由于SDS带有大量的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下，蛋白质分子内的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质—SDS复合物；此时，蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。

(完整word版)SDS-PAGE电泳具体步骤

SDS电泳具体步骤一、清洗玻璃板1、洗洁精轻轻擦洗2、自来水冲3、蒸馏水冲4、筐里晾干5、梳子用水洗二、配胶材料：玻璃板、梳子、架子、枪（100-1000、20-200、2-20）、DDW、30%Arc-Bis、Tris(pH8.8)、Tris(pH6.8)、10%SDS、10%AP、TEMED。

1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧2、配分离胶3、加入玻璃板中4、加入乙醇1ml等待０.5小时5、用注射器吸出乙醇，6、用水冲洗分离胶3次，第4次最后(加入AP、TEMED前)再用注射器吸出7、配浓缩胶8、将玻璃板加满9、放入小梳子等待０.5小时三、上样材料：蛋白、marker、针筒、电泳槽、电泳液、枪（2-20ul）1、把玻璃板取下，放入小架子，固定于电泳槽（大玻璃板朝外），拔梳子，（若只有一块胶，对面用塑料板）2、将小架子加满电泳液，标记位置，用针筒抽电泳液通膜3、根据要求上样蛋白（如海马），最外侧加马克，用2-20ul枪四、电泳1、放入电泳盒中，盒中加少量电泳液，放上盖子2、开电泳机电压先60V，马克到达分离胶后调制110V，等待约2小时五、转膜材料：6张滤纸、1张PVDF膜（根据分离胶剪，无水甲醇中浸泡1min~2min）、转膜夹、转膜缓冲液1、取胶，将浓缩胶轻轻刮去，去掉多余的分离胶，2、将裁好的胶、浸过甲醇的PVDF膜和滤纸放入转膜缓冲液中，10min左右，3、黑色板在下面，纸—胶—膜—纸（注意赶走气泡）4、转膜夹放入电泳槽，放满转膜缓冲液，外面放冰块，加满水等待120分钟，电压100V六、免疫反应材料：丽春红、TBST、5%牛奶、一抗、二抗1、取出一小盒，加入少量丽春红，（用完回收）2、把膜取出，扔掉胶，依次放丽春红——TBST，（摇床上)3、膜剪成小条带，放入方格盒，放入TBST（摇床），几分钟后放入5%牛奶中封闭抗原（摇床）等待1小时4、配一抗：配5%的牛奶（5g牛奶，加TBST至100ml），将抗体放入牛奶中。

SDS-PAGE电泳标准操作流程

SDS-PAGE电泳标准操作规程1、目的建立SDS-PAGE电泳的标准操作规程,确保电泳操作有序进行，保证电泳的安全性、有效性。

2.范围与职责适用SDS-PAGE电泳操作岗位。

配制岗位操作人员对本标淮实施负责，QA检查员、生产主管负责监督。

3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。

放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。

3.1.2 分离胶的配置3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：3.1.2.2 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm)。

3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。

静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。

3.1.3浓缩胶的配置3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：3.1.3.2插入制胶梳混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。

约30分钟，聚合完全。

3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。

两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。

将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。

倒入1X tris-gly电泳缓冲液。

3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。

对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。

3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10μl，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。

SOP SDS-PAGE银染标准操作规程

文件号: QC-SOP-102 Page 1 of 4 Version: A/0 Print Date:题目：SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验流程目的：为了使员工迅速掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验而编写的操作过程。

范围：成员负责部门：QC Quality Assurance Department姓名签字日期起草人：批准人：QA：生效日期：文件号: QC-SOP-102 Page 2 of 4Version: A/0 Print Date:1.概要1.1 本操作流程用来描述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染的标准操作步骤。

2. 适用范围2.1本流程适用于操作人员进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验的操作过程。

2.2 本流程适用于在普通实验室中进行操作。

3. 责权3.1质量保证部门有责任确保操作人员接受过该流程相关实验技术及操作的培训。

3.2质量保证部门有责任确保该流程操作完全按照以下规范进行。

3.3质量保证部门有责任定期检查修订本流程。

4. 材料准备4.1 试剂和溶液4.1.1 SDS丙烯酰胺凝胶电泳所需的溶液见SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程4.1.2 固定液30ml甲醇，12ml乙酸，50ml水，50 µl甲醛（100ml）4.1.3 漂洗液35%乙醇的水溶液4.1.4 致敏液0.02%硫代硫酸钠的水溶液4.1.5 银染液0.2%硝酸银的水溶液4.1.6 显色液6g碳酸钠，50µl甲醛，2ml致敏液，加水定容到100ml4.1.7 终止液38ml甲醇，12ml乙酸，加水定容到100ml4.1.8 保存液1%乙酸的水溶液4.1.9 分子量标准蛋白标准分子量参照物使用Fermentas公司的PageRuler（10KD~170KD）4.1.10 蛋白样品待分离的蛋白样品可为纯化的蛋白，也可为细胞裂解液。

4.2 设备：4.2.1 蛋白电泳仪公司BIO-RAD 电源型号PowerPac Universal4.2.2 单道可调式移液器公司Eppendorf文件号: QC-SOP-102 Page 3 of 4Version: A/0 Print Date:4.2.3电子天平公司Acculab4.3 耗材：吸头（T-20，T-200，T-1000，T-5000）烧杯( 50mL，三个)Eppendof离心管玻璃表面皿（2个）5. 相关文件5.1 SOP-PUB-EQU-009 PH计（PB-10型）的操作使用以及清洁保养5.2 SOP-PUB-EQU-010 Acculab电子天平操作、清洁与校准5.3 SOP-PUB-EQU-013 单道可调式移液器（Thermo/Gilson）的操作、清洁与校准5.4 SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程6. 操作步骤6.1. 参照SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。

SDS-PAGE电泳的标准操作规程

2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.8g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.315.15×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳SDSPAGE实验原理和操作步骤

S D S聚丙烯酰胺凝胶电泳S D S P A G E实验原理和操作步骤The pony was revised in January 2021SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。

该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。

SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。

在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存，临用前稀释10倍。

8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

(完整版)SDS-PAGE电泳标准操作流程

SDS-PAGE电泳标准操作规程（网上）3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。

放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。

3.1.2 分离胶的配置梳齿下缘约1cm)。

3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。

静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。

约30分钟，聚合完全。

3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。

两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。

将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。

倒入1X tris-gly电泳缓冲液。

3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。

对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。

3.2.4 电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。

电压调至约150v保持恒压。

待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。

3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。

3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，完成后染液倒掉并用水洗掉染液。

sds凝胶电泳

SDS-PAGE电泳1.清洗玻璃板:一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。

两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。

2. 灌胶与上样(1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。

然后垂直卡在架子上准备灌胶。

(操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。

)(2) 按前面方法配10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。

灌胶时，可用10ml 枪吸取5ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。

然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。

(灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。

操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。

加水液封时要很慢，否则胶会被冲变型。

)垂直电泳槽(3 )当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。

再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。

(4 )按前面方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。

将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。

灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。

插梳子时要使梳子保持水平。

由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶。

待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。

(5 )用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。

(小玻璃板面向内，大玻璃板面向外。

若只跑一块胶，那槽另一边要垫一块塑料板且有字的一面面向外。

)(6) 测完蛋白含量后，计算含50 ng蛋白的溶液体积即为上样量。

取出上样样品至0.5ml 离心管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。

(上样总体积一般不超过15 μl，加样孔的最大限度可加20 μl样品。

)上样前要将样品于沸水中煮5min使蛋白变性。

(7)加足够的电泳液后开始准备上样。

(电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。

)用微量进样器贴壁吸取样品，将样品吸出不要吸进气泡。

将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品。