高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性
两株高效聚磷菌的筛选及其聚磷特性的研究2009
收稿日期:2008-9-19;修回日期:2008-10-17作者简介:傅宏兵(1970-),男,硕士研究生,专业方向为环境微生物技术;通讯作者:吴 涓(1969-),女,博士,副教授,研究方向为水污染控制及环境生物技术,E 2mail:wujuan@ustc .edu 。
基金项目:安徽省自然科学基金项目资助(070413132)doi ∶10.3969/j 1issn 11008-9632.20091061023两株高效聚磷菌的筛选及其聚磷特性的研究傅宏兵,吴 涓(安徽大学生命科学学院,合肥230039)摘 要:采用梯度驯化及平板分离技术,从巢湖底泥中筛选到两株高效聚磷菌,分别命名为P6与P8。
经过厌氧和好氧两个阶段的处理,两种菌株的聚磷率均达到80%以上。
实验结果表明,P8菌株在10℃～40℃以及pH 值4～11的较宽范围内都显示出稳定的聚磷效果,而P6菌株仅在30℃～35℃以及pH 值4～5的狭窄范围内达到较高的聚磷率。
不同碳氮源的影响实验表明,除了乳糖以外,P8菌株在所考察的多种碳氮源下都能表现出较高的聚磷率,当乙醇浓度为3.75g/L 时,聚磷率可达到92.9%;而P6菌株对碳氮源则有较严格的要求。
关键词:聚磷菌;筛选;生物量;聚磷率中图分类号:Q932335;X172文献标识码:A文章编号:1008-9632(2009)06-0023-04水体富营养化是全球普遍存在的严重环境问题,近些年来,随着工农业生产的高速发展和人们生活水平的不断提高,含磷的化肥、农药、洗涤剂的使用量不断上升。
水体中磷的含量日益增加。
虽然氮磷同为水体生物的重要营养物质,但是在所有的营养元素中,磷被认为是引起水体富营养化的最关键因素[1-3]。
然而,我国现有的污水处理厂主要集中于有机物的去除,对磷等营养物的去除率只达到10%～20%,其结果远达不到国家二级排放标准[4-5]。
因此,有效降低排放废水中的磷含量,已成为防治水体富营养化的重要途径之一。
高效聚磷菌的筛选
磷矿废水中高效聚磷菌的筛选近年来我国水体富营养化越来越严重，水体受到污染不仅破坏了环境与动植物的生存也影响了人们的生活和人们的工农业发展。
而水体富营养化都与水中的磷含量剧增有关，所以除去水中的磷对治理水体富营养化特别重要，这也是个社会非常关注的问题。
我校的南湖水体污染特别严重是我校的美中不足。
关键词：生物去磷聚磷菌筛选环境污染污水处理目前城市污水处理主要使用生物除磷，它是利用聚磷菌一类的微生物从水中摄取磷，并将磷存于体内，在水低形成高磷的污泥，达到了去磷防水体富营养化的效果。
聚磷菌是生物除磷的决定生物，而聚磷菌的工作受到环境的影响，如氧浓度，PH值，温度等，且不同的聚磷菌的聚磷能力不同，所以要想达到高去磷的效果就必须筛选出聚磷效率高的菌种.实验材料与方法1.1主要的的仪器设备摇床，超净工作台，全自动高压灭菌锅，培养箱，电子天平，酸度计，离心机,可见分光光度计，培养皿20个，细菌过滤器，移液枪（100ul和1000ul），量筒（10ml和50ml各一个)，锥形瓶（150ml,250ml和500ml），草酸铵结晶紫，革兰氏碘液，95%的酒精，石碳酸复染红，显微镜，载玻片及盖玻片。
1.2主要的试剂微生物分离纯化用的试剂均是国产分析纯，主要有牛肉膏，蛋白胨，琼脂，乙酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸亚铁，氢氧化钠硫酸铵，钼酸钾，抗坏血酸，酒石酸锑钾，磷酸二氢钾，氢氧化钾过硫酸钾，MOPSHighPurityGrade,Tricine,X--Pi.1.3样本采集磷矿废水1.4培养基及溶液（1)YG培养液：酵母侵膏1g,葡萄糖1g，K2HPO4 0.3g KH2PO4 0.25g 七水硫酸镁0.2g, 蒸馏水1000ml.（2)MOPS培养基:100ml的10*MOPS 8.370g, tricine 0.717g, 30ml的去离子水，10mol/L KOH调PH到7.4. 总体积44ml. 0.01mol/L, 硫酸亚铁1ml，按下列加：氯化铵（1.9mol/L)5ml, 硫酸钾（0.276mol/L)1ml,二水氯化钙0.02mol/L)0.025ml, 六水氯化镁（2.5mol/L)0.21ml, NaCl(5mol/L)10ml, 微量元素混合液0.02ml, 葡萄糖0.1g, )取25ml置于两个500ml的三角瓶中，向一个三角瓶加0.0087gK2HPO4，成为限磷培养基。
油茶根际高效溶磷细菌的筛选、鉴定及其安全性测试
油茶根际高效溶磷细菌的筛选、鉴定及其安全性测试王舒;张林平;郝菲菲;张扬;胡冬南【期刊名称】《林业科学研究》【年(卷),期】2015(028)002【摘要】本研究利用溶磷圈法和钼锑抗比色法,从油茶根际分离出20株高效溶无机磷细菌,并对其溶磷能力进行定性和定量测试,结果发现,D/d与溶磷细菌的有效磷含量之间没有显著的相关性,而培养液pH与有效磷含量之间存在极显著的负相关性关系(P＜0.01).并采用形态特征、生理生化、Biolog系统和16SrDNA序列分析对一株溶磷效果最好的菌株NC285进行菌株鉴定,确定其为Bacillus aryabhattai.通过苜蓿植物模型和cblA毒力基因测定对该菌株进行安全性检测,结果发现,该菌株未检测到cblA基因,对洋葱和苜蓿安全无致病性.本研究对溶磷细菌的安全应用及提高油茶土壤磷素利用效率具有重要意义.【总页数】7页(P166-172)【作者】王舒;张林平;郝菲菲;张扬;胡冬南【作者单位】江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045;江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045;江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045;江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045;江西农业大学园林与艺术学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】S794.4【相关文献】1.一株高效溶磷细菌的筛选鉴定及溶磷效果的研究 [J], 李娜;洪坚平;谢英荷;乔志伟;李元;张平2.油茶根际溶磷菌3-Y-08的筛选与鉴定 [J], 刘小玉;付登强;陈良秋;杨伟波;李东霞;符海泉;贾效成3.两株根际高效溶磷菌的筛选、鉴定和溶磷特性 [J], 陈佳怡;徐晶秀;陈紫茵;陈敏威;徐迎傲;方勇4.马尾松根际溶磷细菌Paraburkholderia sp.的筛选、鉴定及溶磷特性研究 [J], 吕俊;潘洪祥;于存5.玉米根际高效溶磷菌的筛选、鉴定及溶磷特性研究 [J], 邢芳芳;高明夫;禚优优;胡兆平;李新柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大麦根际高效溶磷菌的筛选、鉴定及促生效果研究
华北农学报·2016，31（增刊）：252-257收稿日期：2016－09－26基金项目：山东省科技重大专项（新兴产业）（2015ZDXX0502B02）作者简介：邢芳芳（1982－），女，山东临沂人，工程师，硕士，主要从事新型肥料研发及其施肥研究。
通讯作者：李新柱（1975－），男，山东济宁人，工程师，博士，主要从事新型肥料研发及其施肥研究。
大麦根际高效溶磷菌的筛选、鉴定及促生效果研究邢芳芳，高明夫，禚优优，胡兆平，李新柱（金正大生态工程集团股份有限公司，农业部植物营养与新型肥料创制重点实验室，国家缓控释肥工程技术研究中心，山东临沂276700）摘要：为得到高效溶磷、促生菌株，对大麦根际土壤的溶磷细菌进行筛选，将筛选得到的高效解磷菌PSM 进行分子生物学鉴定，并进行溶磷性能及促生效果研究，为解磷微生物肥料的研发提供依据。
结果表明，通过16S rDNA 序列分析鉴定表明菌株PSM 为枯草芽孢杆菌，35ħ在以Ca 3（PO 4）2为唯一磷源的无机磷液体培养基中培养6d 水溶磷含量达到449．1mg /L 。
盆栽试验表明PSM 解磷菌对小白菜的促生作用明显，显著提高小白菜的叶绿素、生物产量和叶片数，以添加5．0ˑ108cfu /g PSM 解磷菌剂的处理增产效果最好，鲜质量、干质量与单施复合肥处理（CK1）相比差异极显著，鲜质量增幅达到16．72%，干质量增幅达到18．68%，与单施草炭载体的处理（CK2）相比，施加菌剂的T4处理鲜质量增幅达到11．77%，干质量增幅达到11．70%，有明显的促生作用。
关键词：溶磷细菌；筛选鉴定；枯草芽孢杆菌；促生中图分类号：Q939．96文献标识码：A文章编号：1000－7091（2016）增刊－0252－06doi ：10．7668/hbnxb．2016．S1．042Screening and Identification of Phosphate Solubilizing Bacteria in Hordeumvulgare Ｒhizosphere and Its Growth Promoting EffectXING Fangfang ，GAO Mingfu ，ZHUO Youyou ，HU Zhaoping ，LI Xinzhu（Kingenta Ecological Engineering Group Co．，Ltd．，Key Laboratory of Plant Nutrition and New Fertilizer Ｒ＆D ，Ministry of Agriculture P．Ｒ．China ，National Engineering TechnologyＲesearch Center for CＲF ，Linyi 276700，China ）Abstract ：In order to obtain efficient dissolving phosphorus and growth-promoting Bacteria of Hordeum vulgare rhizosphere ，we took study on screening ，P-dissolving characteristics ，growth promoting effect and identified by se-quence analysis of 16S rDNA of strain PSM ，which provided the basis for the development of solubilizing microbial fertilizer．The sequence analysis of 16S rDNA results showed that PSM was Bacillus subtilis ，which had strong ability of degradation of inorganic phosphorus effect．After 6days fermentation at a temperature of 35degrees in the medi-um with Ca 3（PO 4）2as the sole phosphorus source ，soluble phosphorus content reached to 449．1mg /L．PSM had obvious effect on promoting growth of Brassica campestris L．，the adding of 5．0ˑ108cfu /g PSM had the best effect on increasing the biological yield and number of leaves significantly．Compared with the single application of com-pound fertilizer （CK1），fresh weight and dry weight was increased by 16．72%and 18．68%respectively．Com-pared with the single application of peat carrier （CK2），fresh weight and dry weight was increased by 11．77%and 11．70%respectively．PSM showed evident promoting effect on plant．Key words ：Phosphorus dissolving Bacteria ；Screening and identification ；Bacillus subtilis ；Growth promoting effect我国磷矿资源总储量丰富，总量有167．86亿t ，但是其中能够被开采利用的储量非常少，仅占总储量的八分之一左右。
大豆根际高效溶磷菌株的分离及溶磷能力分析
经在线比对并构建系统发育树，发现其分布在 7 个不同种当中，其中溶磷能力最强的菌株 SＲ95 为成团泛菌，这在以
往研究中未见报道。
关键词： 大豆； 根际； 溶磷菌； 溶磷能力
中图分类号： S565． 1
文献标识码： A
DOI： 10． 11861 / j． issn． 1000-9841． 2014． 03． 0404
3期
ห้องสมุดไป่ตู้
王 浩等： 大豆根际高效溶磷菌株的分离及溶磷能力分析
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1 材料与方法
28℃ 培养 5 ～ 7 d，观察菌落特征，并计数。挑取单菌 落于 NA 斜面 4℃ 保存。
1． 1 材料
供试土壤为黑钙土取自国家大豆工程技术研 究中心大棚，pH6． 89，有机质含量 19． 80 g·kg － 1 ，全 氮含量（ N） 0． 580 g·kg － 1 ，速效磷（ P2 O5 ） 含量 42． 9 mg·kg － 1 ，速效钾（ K2 O） 含量 78． 6 mg·kg － 1 ，电导率 （ EC） 23． 6 mS·m － 1 。供试大豆品种选用东北农业 大学的育成品种东农 46。
1． 2． 3 菌株溶磷能力测定 初筛： 挑取新鲜培养的 菌体 于 无 机 磷 合 成 培 养 基 平 板 上 划 线，28℃ 培 养 7 d，观察所产生的单菌落有无溶磷圈产生，并测量 溶磷比（ 溶磷圈直径 /菌落直径） 。
溶磷量测定： 对溶磷比≥1． 5 的菌株，接种 1 mL 菌液（ 108 cfu·mL － 1 ） 于 50 mL 蒙金娜无机磷液体培 养基中，28℃ 振荡培养 7 d，超声波破碎细胞 20 min， 4 000 r·min － 1 离心 20 min，取上清 3 mL，以不接菌培 养基作为 对 照，采 用 钼 锑 抗 比 色 法［6］，测 定 菌 株 的 溶磷量。 1． 2． 4 高效溶磷菌株的鉴定 对菌株进行革兰氏 染色，在显 微 镜 下 观 察 菌 体 形 态 及 大 小。 同 时，参 照刘晓颖等［7］的方法提取菌体 DNA，采用 16S rDNA 通用引物 799F（ 5'-AACMGGATTAGATACCCKG3'） 和 1492Ｒ（ 5'-TACGGHTACCTTGTTACGACTT-3'） 扩增菌体部分 16S rDNA 序列。序 列 提 交 到 Genbank 数据库中，并与相近参比菌株进行在线比对， 用 Clustal X 软 件 包 程 序 对 序 列 进 行 排 列 后 采 用 Mega 4． 0 软件构建系统发育树进行遗传鉴定。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定植物的生长发育过程中需要多种微量元素，其中磷和钾是最重要的两种元素之一。
磷是植物体内的主要构成成分之一，是ATP、DNA、RNA等重要生物活性物质的组成成分；钾则必须在植物体内保持适宜的浓度，否则会导致植株生长发育的异常。
因此，提高土壤中磷和钾元素的有效利用能力，尤其是在一些磷、钾资源缺乏的土壤环境中，成为了高效农业生产的重要问题之一。
目前，应用微生物技术促进土壤中的磷和钾元素的有效利用已成为解决该问题的重要手段之一。
其中，溶磷解钾菌是一类在土壤生态系统中广泛存在的微生物，能够通过酶学反应降解复合肥料、有机肥、磷矿物质、锰氧化物等多种化学物质，释放可溶性磷、钾等营养元素，促进农作物生长发育。
因此，本文主要通过分离筛选和鉴定的方法，寻找和鉴定一株高效溶磷解钾菌，并对其生长特性和功能进行初步研究，为土壤微生物肥使用及合理施肥提供理论和技术依据。
材料与方法：（1）采样：收集自然界或人工培养基中的黑土或其他土壤，装分体积的试管中备用。
（2）筛选培养基与条件确定：分别利用羟基磷酸盐(Pi)、黄素(Hym)、柠檬酸(Citr)、葡萄糖(Glu)等物质为碳源以及K2HPO4和KCl作为磷源和钾源，配制筛选培养基，并根据需求进行调整。
（3）接种：将土壤样品通过适当的前处理（如筛选、稀释、高温处理等）后，采用无菌操作方法，将其分别接种于上述培养基中。
（4）粗分离与纯化：经过一段时间培养后，从培养皿中分离出单一菌株，连续传代3次，达到细菌单纯化的目的。
（5）生理生化指标测定：① 磷解酸酶(Piase)活性测定：在含有Pi培养基中培养菌株，用质量浓度为10g/L的6%硫酸铵钼酸溶液加10%的三氯乙酸，和加去离子水的对照组，低温下静置30分钟后，读取532nm的吸光度值。
② 钾溶菌特性测定：在含有K2HPO4和KCl的培养基中培养菌株，研究菌株的钾溶菌特性。
（6）菌株鉴定：运用生理生化特征以及16S rRNA基因测序技术等方法，确定该菌株的分类和鉴定结果。
黑土区林地土壤高效解磷细菌的分离、筛选及其解磷效果
（ 东北林业大学 ， 哈尔 滨 ， １ ５ ０ ０ ４ ０ ）
摘 要 采 用平板溶磷 圈法对典型 黑土区 ４种 林地（ 美青杨林 、 水曲柳 林 、 落叶松林和 樟子松林 ） 土壤 的磷 细 菌进行 了分 离和 筛选 ． 并测定 了其解磷 能力。结果表 明： ４种林地 土壤 中分布 了大量 的解磷 菌和溶磷 茵 ， 其 中每克 解磷 茵 的 茵 落形 成 单位 （ Ｃ Ｆ Ｕ） 为（ ５ ． ４ ３～１ ６ ． ８ １ ） × １ ０ 、 溶磷 菌为 （ ０ ． ４ ９～３ ． １ ６ ） × １ ０ ， 且 解磷 菌数 量 多于溶磷 菌。 从 ４种 林地土壤 中分 离得 到 了 ｌ ５株分解有机磷 的解磷 菌和 ｌ １ 株溶解无机磷 的溶磷 茵； 其 中有 ２株解磷 茵解磷 能 力较高 ． 解磷 圈直径与 茵落直径 比值 均大 于２ ． Ｏ， 解磷 量分 别为 ０ ． ５ ０ 、 １ ． １ ３ ｍ ＃Ｌ ； 有 ２株 溶磷 茵溶磷 能力较 高， 溶 磷 圈直径与 菌落直径 比值 均大 于 ２ ． ０， 溶磷量 分别为 ０ ． ９ ０、 ０ ． １ ８ ｍ ｇ ／ Ｌ 。 关键词 解磷 细菌 ； 解磷 能力； 溶磷 圈； 黑土
（ １ １ ） ． － ８ ３～ ８ ５， １ ２ ２
Ｔｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ｏ ｎ ｒ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｆ ｏ ｕ ｒ ｋ ｉ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｓ ｓ ｏ ｉ ｌ ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ ｇ Ｐ ｏ ｐ ｌ ａ ｒ
三株红壤高效溶磷菌的分离、鉴定、溶磷特性及其对花生促生效应的研究的开题报告
三株红壤高效溶磷菌的分离、鉴定、溶磷特性及其对花生促生效应的研究的开题报告一、研究背景随着农业的发展和人工农业生态系统的建设，土壤肥力逐渐下降，而农业生产对肥料的需求也日益增加。
传统的化肥施用虽然能够快速提高农作物的产量，但长期使用会产生许多负面影响，如土壤污染、植物抗性降低等。
因此，寻找一种环境友好型的肥料促进方式变得尤为重要。
在这一背景下，利用微生物改良土壤成为了一种备受关注的研究方向。
红壤是中国南方的一种特有土壤类型，其独特的物理、化学和微生物特性使其具有潜在的促生作用。
其中的溶磷微生物特别值得研究。
溶磷菌是一类能够利用磷酸盐为能源并将其降解为更易被植物利用的磷化合物的微生物。
因此，利用红壤中的高效溶磷菌促进农作物生长已成为目前的研究热点。
二、研究目的本研究旨在分离、鉴定三株红壤高效溶磷菌，并深入研究其溶磷特性和对花生的促生效应，以期为利用微生物促进农业生产提供一种可行的途径。
三、研究内容和方法1. 红壤样品的采集和处理。
从华南地区的红壤中采集土样，将其进行处理后分别与培养基接种。
2. 红壤高效溶磷菌的分离和鉴定。
通过稀释平板法进行初步筛选，然后对降解磷酸二氢钾等溶磷肥料的细菌进行传代、鉴定和纯化处理。
3. 高效溶磷菌的溶磷特性研究。
包括培养条件、生长曲线、酶活性测定、磷酸酯酶电泳等。
4. 对花生促生效应的研究。
将红壤高效溶磷菌接种于花生种子上，以生长指标、生理指标、碳氮代谢等作为评估指标，研究其对花生促生效应的影响。
四、研究意义本研究将对微生物促进农业生产的新型肥料技术提供新的思路和方法，探究红壤中高效溶磷菌的特性，研究其在农业生产中的应用前景和促进作用，为促进绿色农业的发展和提高农业生产效益提供参考。
高效聚磷菌的筛选及除磷特性分析2009
第37卷第10期东 北 林 业 大 学 学 报Vol.37No.10 2009年10月JOURNAL OF NORT HE AST F ORESTRY UN I V ERSI TY Oct.2009高效聚磷菌的筛选及除磷特性分析李 博 赵 敏 李宝赫 刘哲君(东北林业大学,哈尔滨,150040) 摘 要 从运行稳定的S BR反应池好氧末端的活性污泥中分离筛选出1株高效聚磷菌LB4,结合生理生化特征分析和16S r DNA分子生物学技术,鉴定该聚磷菌为鲍曼不动杆菌(A cinetobacter baum annii);以E BPR工艺过程为载体,模拟将来可能采用的含可利用碳源的工业废水作为进水,探讨了不同营养条件下菌株LB4的除磷行为,初步分析了其代谢机理,研究表明:菌株LB4除磷的最佳温度为30℃、最适pH值为7.0,微量元素的有无对该菌株的除磷效能影响不大,提高生物除磷系统除磷效率的关键是提高厌氧释磷量。
关键词 聚磷菌;鉴定;除磷效能;基质代谢分类号 X703Screen i n g of Stra i n L B4w ith H i gh Capab ility of Accu m ul a ti n g Polyphospha te and Its Character isti cs/L i Bo,ZhaoM in,L i Baohe,L iu Zhejun(College of L ife Sciences,Northeast Forestry University,Harbin150040,P.R.China)//Journal of Northeast Forestry University.-2009,37(10).-85～87A strain LB4,with a high capability of accu mulating phos phate,was is olated fr om activated sludge of sequencingbatch react or.The strain was identified as A cinetobacter baum annii in ter m s of its mor phol ogical and physi ol ogical featuresby16S r DNA sequence analysis.The phos phate2accu mulating effects of strain LB4were studied with industrial waste waterunder different nutriti onal conditi ons according t o the enhanced bi ol ogical phos phorus re moval p r ocess,and the metabolicmechanis m of strain LB4was als o analyzed.The op ti m u m pH and temperature for accu mulating polyphos phate were7.0and30degrees C,res pectively.The effect of m icr oele ment on phos phate re moval rate was unobvi ous.The key t o increasethe phos phate re moval capacity is t o i m p r ove the efficiency of phos phorus up take in the bi ol ogical phos phorus re moval sys2te m during the anaer obic stage.Keywords Polyphos phate2accu mulating organis m s;I dentificati on;Capability of phos phate re moval;Metabolic mechanis m 近年来,由于生物除磷具有低能耗、低成本、少污染和高效率等优点而逐渐成为治理水体磷污染、克服富营养化的研究热点。
一株高效解磷细菌的筛选、鉴定及其溶磷能力的研究
养 ，提 高 作 物 产 量 ，降 低 土壤 磷 素 污 染 风 险 ＿ ５ Ｉ ６ ］ 。
目前 已报道 的具 有解 磷 能力 的微 生 物包 括 细 菌 、真
收 稿 日期 ：２ ０ ｌ ６— ０ ３— ２ ９；最 后 修 订 日期 ：２ ０ １ ６—０ ５— ２ ２ 基 金项 目 ：武 汉 市农 科 院 集 成 创新 项 目 （ ｃ ｘ ｔ ｄ ２ ０ １ ５ ０ ５） 。 作者简介：杜雷 （ １ ９ ８ ５一） ，男 ，湖 北 咸 宁 人 ，农 艺 师 ，硕 士 ，主
量２ ％ ，在 该 条件 下 菌 株 Ｐ １ 溶解 磷酸三钙的量为 ４ ４ ３ ． １ ｌ ｍｇ ／ Ｌ 。试 验还 发 现 菌 株 Ｐ ｌ的 溶 磷 量 与 培 养 液 的 ｐ Ｈ 值 呈 极显著负相关性 关 键 词 ：根 瘤 菌 ：解 磷 菌 ；溶 磷 能 力 ：微 生 物肥 料 中 图分 类 号 ：Ｑ ９ ３ ９ ． １ 文 献标 识码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ６ ７ ３— ６ ２ ５ ７（ ２ ０ １ ７ ）０ ３— ０ １ ３ ６— ０ ６
难溶 性无 机磷 培养 基 ：葡 萄 糖 １ ０ ｇ ，磷 酸 三钙
５ ｇ ，硫 酸 铵 ０ ． ５ ｇ ，氯 化 钠 ０ ． ３ ｇ ，氯 化 钾 ０ ． ３ ｇ ， 七水 硫 酸镁 ０ ． ３ ｇ ，七 水 硫 酸 亚 铁 ０ ． ０ ３ ｇ ，一 水 硫 酸锰 ０ ． ０ ３ ｇ ，琼 脂 粉 １ ８ ｇ ，蒸 馏 水 １ Ｌ ，ｐ Ｈ 值
用磷 肥 不仅 降低 土壤 对磷 的吸 附量 ，加 大各 种 形 态 磷 素 向土体 较深 层次 土壤 迁 移 的 能力 ，使 土壤 中各 种 形态 磷在 土体 中 出 现 明显 积 累 的 土层 逐渐 加 深 ， 从 而增 加 了土壤 的渗 漏 率 ，加大 其 对 水 体 富 营养 化
溶磷草酸青霉菌筛选及其溶磷效果的初步研究
1. 1 溶磷微生物的筛选 1. 1. 1 土壤来源 样品取自不同生境下的褐土与 潮土 。采样点为土壤有效磷低 、多年未施肥料 、土壤 瘠薄的农田或非耕地 ,筛选重点放在不施磷肥田块 和闲荒地的土壤样品 。田间采取的新鲜土壤样品放 入塑料袋中 ,封口 ,置于 4 ℃冰箱保存 ,不能及时放 入冰箱的样品则先风干 ,粉碎过 2mm 的土筛 。 1. 1. 2 筛选方法 分离溶磷真菌培养基 : PD YA + 10 % K2 HPO4 + 10 % CaCl2 + 0. 02 % 链 霉 素 + 0. 007 %孟 加 拉 红[12 ] ; 筛 选 溶 磷 真 菌 采 用 改 良 的 Pikovskaya 培 养 基 ( g/ L ) : ( N H4 ) 2 SO4 0. 5 , NaCl 0. 2 , KCl 0. 2 ,MgSO4 :7 H2O 0. 03 ,MnSO4 0. 03 , Fe2 SO4 0. 003 ,酵母粉 0. 5 ,葡萄糖 10. 0 ,磷酸三钙 5. 0 , 琼脂 20. 0 。
采用 SAS 统计软件对数据进行分析 ( SAS IA) 。
2 结果与分析
2. 1 溶磷真菌的筛选 2. 1. 1 筛选 土壤样品在新沉淀难溶磷培养基上 进行了溶磷微生物的分离 。待琼脂培养基上长出明 显的菌落 ,根据溶磷圈直径的大小初步分离出溶磷 真菌 20 株 。然后 ,在磷酸三钙为唯一磷源的选择性 培养基上 ,比较了这些溶磷菌株的溶磷能力 ,最后获 得 3 株溶磷能力较强的真菌 ,暂将它们定名为 P8 、 Pn1 和 A6 。 2. 1. 2 分类鉴定 将菌株 P8 和 Pn1 送中国科学 院微生物研究所进行了鉴定 ,鉴定结果 : P8 、Pn1 为 草 酸 青 霉 菌 ( Penicilli u m ox alicu m Currie & Thom) 。经文献检索 ,还没有草酸青霉菌的溶磷研 究报道 。菌株 A6 未进行鉴定 ,从菌落形态与孢子
1株高效溶磷细菌的分离、鉴定和溶磷能力研究
河南农业科学，2018,47(3):55-58,91Journal of Henan Agricultural Sciences d〇i：10. 15933/ki. 1004-3268.2018.03.011 1株高效溶磷细菌的分离、鉴定和溶磷能力研究屈建航，张璐洁，符运会，李海峰，田海龙(河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001)摘要：自太湖沉积物中分离高效溶磷细菌，鉴定并研究其溶磷能力。
以C/3(P〇4)2为难溶性磷源，传统10倍梯度稀释法结合透明圈定性筛选溶磷菌株，生理生化特征结合16S—C A基因系统发育分析法鉴定分类地位，钼蓝比色法测定溶磷量。
结果筛选到1株高效溶磷细菌HXZ -21 -'，经鉴定为伯克氏菌（80,'0+ec)sp.)，该菌最高溶磷量为16. 6 $mol/mL，溶磷量变化趋势与p H值呈负相关关系。
该菌株能有效提高土壤磷的溶出效率，具有良好的应用推广前景。
关键词：溶磷细菌；沉积物'筛选'微生物肥料中图分类号：S154.39 文献标志码：A文章编号：1004 -3268(2018)03 -0055 -05Isolation "Identification and Phosphorus-dissolving Capacity ofan Efficient Phosphate-solubilizing BacteriumQU Jianhang，ZHANG Lujie，FU Yunhui，LI Haifeng，TI t VN Hailong(College of Biological Engineering，H e n a n University of Technology，Zhengzhou 450001，China)A bstract：From the sediment of Tailiu Lake，an eficient phosjDhate-solubilizing bacterial strain was isolated and the capacity was studied.Witli Ca3( PO4)2as phosjDhate source，traditio lution metliod witli transparent circle combined was used for the functional strain screening，physiological characteristics and phylogenetic analysis of16S rRNA gene were used for the taxon tion，molybdenum blue colorimetry was used for determination of the content of dissolved phosphorus.Resuits showed that an efficient phosphate-solubilizing strain HXZ-21-' was isolated and identified as80,-h o ld e r ia sp.，which had the phosphate-solubilizing capacity of 16. 6 $mol/mL，negatively related to thepH value of c ircumstance.The strain distinctly stimulated thephosphate-solubilizingof soil and had agood application prospect<Key w ords：Phosphate-solubilizing bacteria;Sediment;Screening;Microbial fertilizer土壤中磷元素对植物的生长至关重要，但土壤 中能被植物体直接吸收利用的可溶性磷含量较低[1]，而具有溶磷能力的微生物能够将土壤中的难溶性磷转化为生物有效磷，从而改善土壤的磷源结构，提高作物产量[2]。
玉米根际高效溶磷菌的筛选及溶磷特性研究的开题报告
玉米根际高效溶磷菌的筛选及溶磷特性研究的开题报告一、研究背景及意义随着农业生产的发展和化肥的广泛使用，土壤中磷元素含量的下降成为了一个普遍存在的问题。
而缺乏磷元素会严重影响植物的生长发育，导致农作物产量的降低。
传统的解决方法是采用化学肥料来补充磷元素，但随着环保意识的提高和化学肥料施用对土壤环境的影响逐渐凸显，开发磷肥替代技术迫在眉睫。
目前，已经证明，土壤微生物对土壤中的磷循环与利用起到了重要的作用。
研究土壤中溶磷微生物便成为研究磷素循环利用的重点研究领域。
为进一步提高农业生产效益，本研究将筛选玉米根际高效的溶磷菌，并分析其溶磷特性，为利用土壤中微生物来替代化学磷肥提供理论基础。
二、研究内容及主要目标本研究将从玉米根际土壤中筛选出高效的溶磷菌，并通过磷酸盐溶解实验，研究菌株的溶磷能力和对不同磷酸盐的选择性。
本研究的主要目标是：1. 筛选出玉米根际土壤中高效的溶磷菌，鉴定菌株的种属和系统发育关系。
2. 测定菌株的溶磷能力和对不同磷酸盐的选择性。
3. 分析菌株的溶磷机制和作用途径，探索菌株在提高土壤磷素利用效率方面的应用前景。
三、研究方法和步骤1. 样品采集和处理从玉米根际土壤中采集土样，并在不同富含磷元素的培养基中筛选出高效的溶磷菌，进行纯化和鉴定。
2. 溶磷能力的测定采用碘化钾法和钼酸铵分光光度法测定溶磷菌的溶磷能力，并比较不同磷酸盐的溶解能力。
3. 反应机制的分析采用荧光定量PCR技术研究溶磷菌与根际植物之间的共生关系，探究溶磷机制和作用途径。
四、预期结果及意义本研究预期可以筛选出玉米根际土壤中高效的溶磷菌，测定菌株的溶磷能力和对不同磷酸盐的选择性，并分析菌株的溶磷机制和作用途径。
通过这些研究结果，可以深入了解微生物固氮作用机制，为利用土壤中微生物来替代化学磷肥提供理论基础，为农业生产提高效益，同时降低对环境的污染做出贡献。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定一、分离筛选1. 采集样品分离一株溶磷解钾菌的第一步是采集土壤样品。
在采集土壤样品时，应选择农田、果园或者蔬菜地等农作物生长的土壤。
避免采集林地或者草原等非农作物生长的土壤。
2. 筛选培养基为了筛选出具有溶磷解钾功能的菌株，需要选择适合菌株生长的培养基。
一般来说，可以选择含有磷钾养分的培养基，比如含有三钠憎水性纤维素和磷酸的培养基。
3. 筛选过程将采集到的土壤样品进行稀释，然后在筛选培养基中进行培养。
适宜的温度和湿度有利于细菌的生长。
在培养过程中，通过溶磷解钾功能的鉴定方法，筛选出具有溶磷解钾功能的菌株。
4. 筛选结果筛选出的溶磷解钾菌株，可以进行单菌纯化和鉴定鉴定。
接下来，对所得的溶磷解钾菌株进行鉴定。
二、鉴定1. 形态观察可以通过形态观察对菌株进行初步鉴定。
包括菌落形态、菌体形态、芽生孢和孢子等。
2. 生理生化特性可以进行一系列生理生化特性的鉴定。
包括对菌株的产酶特性、产酸特性、色素特性等的鉴定。
这些特性可以帮助确定菌株的种属和特征。
3. 分子生物学鉴定可以借助分子生物学的鉴定手段对菌株进行鉴定。
通过16S rRNA基因序列分析，可以快速准确地确定菌株的系统发育学地位，确定其种属。
分离筛选和鉴定过程，可以帮助我们选出高效的一株溶磷解钾菌，并对其进行深入的研究。
通过研究，可以进一步探究这一株溶磷解钾菌的生物特性、功能特性和应用前景。
相信在不久的将来，这一株溶磷解钾菌将在农业生产中发挥重要的作用，为提高作物产量和质量提供重要支持。
溶磷菌YM3-2S溶磷特性及溶磷基因的克隆的开题报告
溶磷菌YM3-2S溶磷特性及溶磷基因的克隆的开题报告
一、研究背景及意义
土壤中的磷是植物所需的重要营养元素之一，但大部分土壤磷并不容易为植物所吸收利用，因此寻找高效利用土壤磷的微生物是提高植物生长和产量的有效途径之一。
当前，利用溶磷菌增施溶磷菌肥已成为农业生产中的重要方法之一，而YM3-2S是一
株分离自土壤中的嗜磷菌，其能够有效地溶解土壤中的磷，因此对YM3-2S菌株的研
究不仅有助于理解土壤微生物的代谢和调节机制，还可为利用溶磷菌促进植物生长提
供基础。
二、研究内容及方法
本研究的主要内容是对YM3-2S菌株的溶磷特性进行研究，同时利用PCR技术克隆YM3-2S菌株中的溶磷基因。
具体的研究方法如下：
1. YM3-2S的分离与鉴定
从土壤样品中分离纯化YM3-2S菌株，进行形态学、生理生化和分子生物学等方面的鉴定。
2. YM3-2S的溶磷特性研究
通过测定YM3-2S菌株的溶磷能力、酸性和碱性磷酸酶活性等指标，探究YM3-
2S菌株的溶磷特性。
3. PCR扩增YM3-2S的溶磷基因
根据YM3-2S菌株已知的16S rDNA序列设计特异性引物，利用PCR技术扩增
YM3-2S菌株中的溶磷基因。
随后，将扩增产物进行克隆、测序和比对分析。
三、研究预期结果
本研究将通过对YM3-2S菌株的溶磷特性研究，探究其溶磷机制和代谢途径。
同时，利用PCR技术克隆YM3-2S菌株中的溶磷基因，为深入研究YM3-2S菌株的代谢
和调节机制奠定基础。
该研究预期将为利用溶磷菌促进植物生长提供理论依据和实践
方法。
高效解磷细菌的分离筛选及其与磷矿物相互作用研究的开题报告
高效解磷细菌的分离筛选及其与磷矿物相互作用研究的开题报告一、研究背景和意义随着农业生产规模的扩大和精细化管理的推广，迫切需要开发一种高效稳定的解磷微生物制剂，以降低农业生产的氮磷耗损和环境污染。
高效解磷微生物可通过利用多种途径显著提高土壤有效磷含量，提高农作物的磷利用效率，同时减轻化肥施用压力和水体富营养化，具有显著的环境和经济价值。
当前，国内外对解磷微生物的研究主要集中在筛选高效解磷菌株上，但是高效解磷菌株的筛选成为了研究的一大瓶颈，如何高效快速的筛选到高效解磷微生物，成为了解决问题的一个关键点。
因此，对于高效解磷微生物的筛选、鉴定和其与磷矿物相互作用的研究具有很大的实际应用和理论意义。
二、研究内容和方法本文旨在探讨高效解磷微生物的分离筛选及其与磷矿物的相互作用。
本研究将从以下三个方面展开：（1）样品的采集和处理。
采集不同产地的土壤和污泥样品，并进行预处理，以提高筛选高效解磷微生物的效率。
（2）高效解磷微生物的筛选与鉴定。
采用传统的菌落计数法、酶活性测定法、磷酸盐测定法、荧光定量PCR法等多种方法对样品进行高效解磷微生物的筛选与鉴定，并对其进行生理生化特性分析。
（3）高效解磷微生物与磷矿物的相互作用研究。
采用SEM、TEM、XRD、FTIR等仪器对高效解磷微生物与磷矿物之间的互作进行分析，探究微生物在解磷过程中与矿物表面的相互作用机制。
三、预期成果本研究旨在分离筛选高效解磷微生物，并探究其与磷矿物的相互作用机制。
预期将获得以下成果：（1）筛选得到多种高效解磷细菌，并进行鉴定和生理生化特性分析；（2）探究高效解磷微生物与磷矿物之间的相互作用机制，揭示微生物解磷过程中的关键环节和分子机制；（3）为高效解磷微生物的应用提供理论基础和实验依据，为缓解土壤磷资源匮乏和环境污染问题提供参考和支持。
四、研究进度安排本研究计划历时2年，主要研究任务安排如下：第一年：（1）采集样品进行预处理，并建立高效解磷微生物筛选平台；（2）筛选高效解磷微生物，并进行鉴定和生理生化特性分析；（3）研究高效解磷微生物对不同磷矿物的解磷效果及其作用机制。
1株溶磷细菌的筛选及其溶磷物质分析
1株溶磷细菌的筛选及其溶磷物质分析张淑红【摘要】为了获得高效溶磷菌并了解其溶磷机制,从生活垃圾堆积地采集土样,筛选出10株对卵磷脂和磷酸钙均有溶解能力的菌株,通过液体摇瓶复筛,得到1株高效兼溶磷酸钙和卵磷脂的溶磷菌LY8,培养6d后2种难溶磷发酵液中水溶性磷质量浓度分别达到647.8 mg/L和26.6 mg/L.结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定其为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).在不同难溶性磷源条件下LY8分泌的主要溶磷物质不同,对于无机难溶磷磷酸钙,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是有机酸,其次是磷酸酶;而对于有机难溶磷卵磷脂,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是磷酸酶,且其分泌的有机酸、蛋白质和多糖可能也具有一定的溶磷效果.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2014(043)008【总页数】4页(P64-67)【关键词】溶磷菌;磷酸钙;卵磷脂;溶磷物质;巨大芽孢杆菌【作者】张淑红【作者单位】唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000【正文语种】中文【中图分类】S154.39溶磷菌在转化土壤难溶磷、提高磷肥利用率、促进作物生长方面都具有显著作用，而不同溶磷菌对不同形态难溶磷的溶解能力存在差异[1-3]。
溶解难溶性磷酸盐的细菌主要有芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、节杆菌(Arthrobacter)、沙雷氏菌(Serratia)、肠杆菌(Enterobacter)和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)等，溶磷量最高可达643.2 mg/L；而溶解有机磷的细菌主要有芽孢杆菌(Bacillus)，溶磷量达到26.5 mg/L[4]。
溶磷菌溶磷机制各不相同，大部分溶磷菌以分泌物溶磷，其胞外分泌物中含有多种溶磷物质，近年来的研究主要集中在有机酸和磷酸酶方面[5-7]。
研究表明，大部分溶磷微生物的胞外分泌物中含有大量有机酸，所以一致认为有机酸是主要的溶磷物质[8-10]；另外微生物生长繁殖过程中，分泌出酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，这些磷酸酶能够不断地将环境中的有机磷转化为无机磷[11]。
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邵锴,邱业先，徐婧.高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性[J ].江苏农业科学,2017,45(8) =253 -257. doi ： 10.15889/j . issn . 1002 - 1302.2017. 08. 068高效溶磷菌的筛选、鉴定及其溶磷特性邵锴，邱业先，徐婧(苏州科技学院，江苏苏州21000)摘要:为了从根际土壤中筛选出具有较高溶磷能力的菌株及优化溶磷条件,通过种子萌发初步研究溶磷促生效应。
通过稀释涂布法分离、筛选菌株,并进行ATB 细菌鉴定仪及16S rD N A 测序鉴定;采用单因子试验及正交试验优 化菌株溶磷发酵条件，利用种子发芽指标测定菌株的促生能力。
结果显示，筛选出菌株B D -1的溶磷能力最强，经 ATB 细菌鉴定仪及16S rD NA 测序，该菌株被鉴定为路德维希肠杆菌。
正交试验结果表明，在温度为30丈、摇床转速为180 r /mm 、接种量为2 ml ^、初始p H 值为7.0的条件下培养7 d 的溶磷效果最好，其溶磷量为181.73 g /L 。
种子萌 发试验结果表明,该溶磷菌对作物种子萌发具有一定的促进作用。
关键词:溶磷菌;微生物肥料;条件优化;解磷能力;种子萌发;鉴定;筛选;溶磷特性 中图分类号：S 154. 38 + 1文献标志码：A文章编号：1002 -1302(2017)08 -0253 -04江苏农业科学2017年第45卷第8期一 253 —磷是植物生长必需的营养元素之一，植物的光合作用和 体内的生化过程都必需有磷参与[1<，但其在土壤中主要以 难溶性矿物态存在[3]，难溶性矿物态磷无法被作物直接吸收 利用。
为提高作物产量，超过/ k /hm 2磷肥被施用于土壤 中[]，部分磷肥被作物吸收利用，大部分被转化成难溶性磷 返施于土壤。
大量化学磷肥的施用，伴随土壤板结、土壤酸 化、土壤贫瘠化日益严重。
因此，提高土壤中磷的利用效率对 降低化学磷肥的施用量具有十分重要的意义。
土壤中存在大 量的微生物，能够将植物难以吸收利用的磷转化为可吸收利 用形态，具有这种能力的微生物称为解磷菌或溶磷菌[]。
溶 磷微生物作为微生物肥料的开发和利用已经成为人们关注的 焦点。
土壤中存在的溶磷微生物能够通过自身生长代谢，转 化难溶性磷为可溶性磷，促使作物吸收利用。
但是，微生物仅 能够溶解难溶性磷，还不能被认为就是溶磷菌，溶磷菌还须考 虑作物促生效应[]。
目前，有关农作物溶磷微生物的分离和 应用也有一定的研究。
李倩利用蒙金娜无机溶磷培养基从桂 花树根际黏附土壤中分离筛选出1株高效溶磷菌株，为洋葱 伯克霍尔德氏菌，并测得其溶磷量为503.53|^//1111[7]。
刘文 干等从花生根际土壤样品中筛选到1株溶磷能力强的菌株黑 曲霉，溶磷量达到17.4 m //L [8]。
因此，合理利用溶磷微生 物与开发微生物肥料对提高作物产量、减少化学肥料使用、降 低环境土壤污染具有巨大前景[/“°]。
大多数学者从单一磷 源中筛选溶磷菌，而进行多种磷源筛选溶磷菌、提高溶磷菌的 质量与特性就尤为重要。
本研究以采自作物的根际土壤为研 究对象，分离、筛选出溶磷细菌，通过A T B 细菌鉴定仪及16S /N A 测序鉴定出溶磷细菌，研究高效溶磷菌的溶磷效果，运 用单因素试验和正交试验[11-2]对溶磷菌的溶磷效果进行优收稿日期：016-01 -14基金项目：江苏省苏州市科技计划（编号:SNG201353)。
作者简介:邵锴（19/一）男，江苏扬州人，硕士研究生，主要从事环境微生物研究。
E - mail:964/7037l@qq. com 。
通信作者:邱业先，博士，教授，博士生导师，主要从事农业微生物研 究。
E - mail:qyx542@163. com 。
化，并通过种子萌发进行溶磷促生初步效果验证，为溶磷菌菌 剂开发微生物肥料打下基础。
1材料与方法1.1材料1.1.1 土壤来源于2015年4月15日采集江苏省扬州市 江都区双沟陈甸果园里长势良好的扁豆、韭菜、红薯、毛豆等 作物的根际土壤。
土样采集后放置于无菌袋中，于实验室 4丈冰箱内保存。
1.1.2培养基有机磷筛选培养基:葡萄糖10/、CaC 〇35/、(NH4)2S 04 0.5 /、MgS 04 0.3 /、FeS 04 0. 3 /KC 10. 3 /、NaCl 0.3 /卵磷脂 0.2 /、MnS 〇4 0.03 / 无菌水 1 000 mL，PH 值 7.0~7.2;L B 培养基:胰蛋白胨10 g 、酵母粉5 g、NaCl 10 g , 无菌水1 000 mL 。
1.2方法1.2.1溶磷细菌的筛选1.2.1.1溶磷细菌的分离称取5/土样加人45 m L 无菌 水，于28丈、180/m in 下振荡0.5 h ，充分混匀，制成10-1浓 度梯度，按10倍稀释法制备成10—3、10—4、10—5、10—6各梯度土样悬液，各梯度吸取10 pL 土样悬液均匀涂布在有机磷培 养基上，每个梯度设3组重复。
倒置平板于28丈恒温培养箱 中培养4 d ，用无菌的牙签挑取菌落，并通过划线分离纯化得 到单菌落，保存于L B 斜面培养基中,4 T 冰箱保存。
1.2. 1.2溶磷细菌的筛选（1)将斜面保存的菌种用无菌牙签挑取出来转接于固体培养基上，倒置平板于28 T 恒温培 养箱中培养4 d ，用游标卡尺测量菌落的直径（心和透明圈的 直径(£〇,用表征溶磷菌的溶磷能力以作为初筛。
（2) 将初筛得到的菌种用无菌生理盐水制备成相应浓度菌悬液， 于150 r /min 、28丈下培养5 d ,以接无菌水的摇瓶作对照。
培 养物转移至无菌的50 m L 离心管中，采用超声波破碎，处理时 间为20 min ,使之释放出细胞内的有效磷。
以4 000 /m in 的 转速进行离心20 min ,留上清液待测，参考张祥胜的钼锑抗比 色法测上清中有效磷含量[3]。
一 254— 江苏农业科学2017年第45卷第8期1.2.1.3溶磷细菌对不同磷源的溶磷效果将有机磷的磷源依次替换成等量的磷酸三钙、磷酸铁、磷酸铝，通过上述钼锑抗比色法测量溶磷细菌对不同磷源的溶磷效果。
1.2.2溶磷细菌的鉴定1.2. 2.1A TB细菌的鉴定参照A TB细菌鉴定手册对溶磷细菌进行鉴定。
1.2.2.2 16S rD N A测序分离得到的溶磷细菌BD - 1用Ezup柱式细菌基因组D N A抽提试剂盒提取D N A并进行PCR扩增。
PCR所用引物为：27?，5;-人&人&1^&人冗(^&-GCTCAG - 3(； 1492R,5, - GGTTACCTTGTTACGACTT - 3(。
PCR 反应体系：rag PCR Master Mix 25 |jX、DNA template1 |^L、Primer F2 ^L、Primer R 2 ^L、Nuclease - free ddH2020 p L。
PCR反应条件:95 ^ 3 min;94 "C1min，55 ^ 40 s，72丈1.5 min,循环30次;72丈5 m i。
PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测后用试剂盒纯化，由生工生物工程（上海）股份有限公司测序。
将测序结果输人到N C B I数据库中进行BLAST比对，通过CLUSTAL X进行多重序列比对，将比对结果转换为MEGA格式，输人到MEGA5构建系统发育树探讨目的菌株的亲缘性。
1.2.3溶磷菌溶磷条件优化采用正交设计对溶磷效果进行优化，根据溶磷细菌溶磷效果响应时间变化，主要考虑温度、转速、接种量、初始p H值对溶磷效果的影响，采用4因素3水平进行L9(34)正交试验，3组重复，正交试验设计见表1。
表1溶磷菌溶磷条件优化正交试验设计水平A:温度(C)B:转速(r/m in)C:接种量(mLD:初始p H值1281201 6.523015027.033218037.51.2.4种子发芽指标的测定根据优化结果培养溶磷菌制 备菌悬液，挑选颗粒饱满的白菜苏州青种子，先用70%乙醇 消毒，再用0. 1%H g C l浸泡1min,无菌水清洗3次，放人预 先灭菌好的培养皿中，每皿50粒，无菌注人稀释10倍的上述 菌悬液10 mL，无菌水处理为对照（CK)，于25 C恒温培养 7 d。
根据发芽试验期间的记录，计算各项发芽指标:发芽势 (G£)=前 3 d发芽种子数/种子总数x 100%;发芽率(GP) =7 d发芽种子数/种子总数x100% ;发芽指数（G/)= G,/A(G,指在* d内的发芽数，A为相应的发芽时间）；活力 指数（W)x幼苗生长势;幼苗生长势=预选时间内供试种子平均芽长+平均根长（芽长为发芽7 d量取的幼苗芽 长;根长为发芽7 d量取的幼苗根长）。
2结果与分析2.1 溶嶙细菌的筛选本研究筛选到有透明圈的菌株为43株，发现透明圈fl/d 的值与摇瓶复筛并不成线性比列，与许多学者研究结果一样，所以以摇瓶复筛选取10株值较大菌株结合不同磷源的液体摇瓶复筛，结果见表2,其中M D-8在初始卵磷脂摇瓶筛 选中溶磷量最大，对其他3种磷源溶解效果不是很明显，而 BD- 1在不同磷源下的水溶性磷都比较大，所以BD- 1被选 作进一步研究的菌株。
表2溶磷细菌在不同磷源中释放出的溶磷量菌株编号fl/d溶磷量（m g L)卵磷脂磷酸铁磷酸三钙磷酸铝MD-9 1.7344.7013.559.0436.40M D-15 1.2664.2118.0644.1235.97B D-1 1.4588.0835.9754.8947.03 MD-8 1.69107.8518.2125.3420.25 HC-1 2.1948.4921.9914.2816.75 JC-13 1.3566.1012.9718.0633.06 MD-5 1.5958.5338.8829.2722.72 JC-6 1.4357.8033.4938.3016.46 JC-4 1.8273.6740.6336.1123.30 HC-2 1.5687.7913.8413.5515.14 2.2溶磷细菌的鉴定2.2.1 A TB细菌鉴定结果A T B细菌鉴定仪测定的生化反 应谱如表3所示，鉴定结果为肠杆菌属菌株。
表3 BD-1的生化反应谱生化项目名称生化项目结果1-鼠李糖（RHA) +乙酰-葡萄糖胺（NAG) +f l-核糖（RIB) +肌醇(IN0) +蔗糖(SAC) +f l-麦芽糖(MAL) +衣康酸盐同化（TA) -辛二酸盐同化（SUB) -丙二酸盐（MNT) -乙酸盐（ACE) +〇t-乳酸盐同化（LAT) +丙氨酸同化（ALA) +f l-甘露醇(MAN) +〇-葡萄糖(〇1奶+水杨素（SAL) -f l-蜜二糖（MEL) +[-岩藻糖^沉）+f l-山梨醇(S0R) +阿拉伯糖(ARA) +丙酸盐同化（PR0) -癸酸盐（CAP) -戊酸盐同化（VAL) -柠檬酸盐利用（CIT) +组氨酸同化（HIS ) -5-酮基葡糖酸盐(5KG) -糖原（GLY) -3-羟基-苯甲酸盐同化（m0B) -2-酮基葡萄糖(2KG) +3 -羟基-丁酸盐(30B) +4-羟基-苯甲酸盐同化（p0B) -丝氨酸同化（SER) +脯氨酸(PR0 )___________________________________+_____________ 2.2.2 16S rD N A测序结果根据16S rD N A测序与NCBI数 据库BLAST比对的结果，对溶磷菌BD- 1与参比菌株构建系 统发育树。