斐林试剂热滴定定糖法
实验八糖类的定量测定1
1
实验目的
1、了解3，5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原 理。 2、掌握还原糖及总糖测定的操作方法。
糖类包括多糖、寡糖、单糖。还原糖是指含有 自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单 糖和某些双糖（如乳糖和麦芽糖）。多糖和蔗 糖等为非还原性糖。 糖类的测定方法有物理方法和化学方法两类。 物理法是通过糖的折光率、比旋度的变化、比 重计进行测定。化学测定法主要是利用自由醛 基或酮基的还原性质，与试剂（氧化剂）进行 氧化还原反应作为测定基础。由于化学方法比 较精确，常常用于还原糖和总糖的测定。
（3）砷钼酸比色法（Somogyi铜试剂比色法） 还原糖将铜试剂还原生成氧化亚铜，在浓硫酸存在 下，砷钼酸试剂可与氧化亚铜生成蓝色复合物，蓝色 产物砷钼酸在560nm下的吸光度与还原糖含量呈正比关 系，适用于测定测定范围为25-200ug的还原糖含量。 （4）蒽酮比色法 糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，该衍生物 与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有 最大吸收。该法灵敏度高、简便快速，适用于测定动 物组织中糖原、葡萄糖的含量，也可用于测定植物材 料中可溶性糖的含量。 （5）3，5一二硝基水杨酸比色定糖法 该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较 少，是糖定量测定的一种基本方法。
二、标准葡萄糖浓度梯度和样品待测液的测定
取10根25 ml比色刻度管，从0-9编号后，按下表顺序操作
空 白 管号 1mg/ml葡萄糖标 准液 样品待测液（ml） 蒸馏水（ml） DNS试剂 2.0 2.0 1.8 2.0 1.6 2.0 1.4 2.0 1.2 2.0 1.0 2.0 0 0 还原糖 （A） 5 1.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 6 7 总糖 （B2） 8 9
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法xx 生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】1. 还原糖还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 CuO的沉淀。
托伦斯试剂被还2原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2. 费林试剂费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3. 实验方法本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。
【实验仪器】1. 移液管(5、10 毫升)2. 100 毫升容量瓶3. 水浴锅4. 铁架台5. 胶头滴管【实验材料】1.面粉2. 酚酞试剂3. 菲林试剂（甲、乙液）4. 10%氢氧化钠5. 标准葡萄糖（1mg/ml）6. 6M HCl7. 烧杯8. 玻璃棒9. 碱式滴定管10. 电炉11. 分析天平【实验操作】1. 总糖的提取准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
糖类测定实验报告
一、实验目的1. 掌握糖类检测的基本原理和方法。
2. 学习使用化学试剂对糖类进行定量和定性分析。
3. 了解糖类在生物体中的重要性及检测方法在生物学研究中的应用。
二、实验原理糖类是一类生物大分子，广泛存在于自然界中，是生物体的重要营养物质。
本实验采用化学试剂法对糖类进行检测，主要利用糖类与特定试剂发生颜色变化的原理。
1. 斐林试剂法：还原糖在斐林试剂的作用下，加热后生成砖红色沉淀，根据沉淀的量可以定量分析还原糖的含量。
2. 苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂法：脂肪在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，呈现红色或橙色，可以定性检测脂肪的存在。
3. 双缩脲试剂法：蛋白质与双缩脲试剂反应，产生紫色复合物，可以定性检测蛋白质的存在。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：待测生物组织样品、斐林试剂、苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂、双缩脲试剂、蒸馏水、移液器、试管、酒精灯、烧杯、显微镜等。
2. 实验仪器：分析天平、恒温水浴锅、显微镜、电子天平等。
四、实验步骤1. 糖类检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入2 mL斐林试剂，混合均匀。
（3）将试管放入50-65℃的恒温水浴锅中加热2分钟。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
2. 脂肪检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入3滴苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂，混合均匀。
（3）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
3. 蛋白质检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入1 mL双缩脲试剂A液，摇匀。
（3）加入4滴双缩脲试剂B液，摇匀。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖类检测实验结果显示，待测生物组织样品在斐林试剂的作用下，溶液呈现砖红色沉淀，说明其中含有还原糖。
2. 脂肪检测实验结果显示，待测生物组织样品在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，溶液呈现红色，说明其中含有脂肪。
3. 蛋白质检测实验结果显示，待测生物组织样品在双缩脲试剂的作用下，溶液呈现紫色，说明其中含有蛋白质。
斐林氏试剂滴定法
斐林氏试剂滴定法斐林试剂(Fehling's solution)是一种可以鉴别还原性物质的试剂，一般由氢氧化钠与硫酸铜溶液配成，由德国化学家赫尔曼·冯·斐林在1849年发明的。
斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在，可与还原性糖反应生成砖红色沉淀。
定义1849年，德国化学家斐林（Hermann vonFehling，1812年-1885年）发明了斐林试剂。
它是由氢氧化钠的含量为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的含量为0.05 g/mL的溶液，还有含量为0.2g/mL酒石酸钾钠配制而成的，其本质是铜离子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合铜（高中认为是新制的氢氧化铜）。
斐林试剂是二价铜离子的酒石酸钾钠配合物，可以被脂肪醛或还原性糖还原为氧化亚铜。
斐林试剂为深蓝色溶液，在与脂肪醛或还原性糖共热时，蓝色消失，析出红色的氧化亚铜沉淀。
在氧化亚铜析出过程中，反应液的颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→红色沉淀的逐渐变化，反应较快时，直接观察到红色沉淀。
它与可溶性的还原性糖（葡萄糖、果糖和麦芽糖）在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
[2]配制方法配制方法：0.1 g/mL NaOH（甲液）和0.05 g/mL CuSO4（乙液）。
甲液配制方法是将50g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500 mL蒸馏水中（贮于带橡皮塞的瓶中）。
乙液配制方法是将34.5g结晶硫酸铜溶于500mL水中，加0.5 mL硫酸。
混合均匀。
斐林试剂的使用方法：一般将斐林试剂甲液和乙液等体积混合（或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液），再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热（高中人教版生物必修一中为60℃水浴加热）。
如待测液中存在还原糖，则呈现砖红色沉淀；如待测液中不存在还原糖，则仍然呈蓝色。
还原糖实验1、向试管内注入2mL待测组织样液。
2、向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀，甲液量较多，乙液只需少量。
还原糖测定(菲林法)
还原糖的测定(菲林试剂法)
一.基本原理
还原糖可以将菲林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，反应终点可以由次甲基兰指示（蓝色消失形成砖红色），根据一定量的菲林试剂完全还原所需的还原糖量，可计算加入样品中的还原糖的含量。
二.试剂和仪器
1.试剂
菲林试剂甲液：称取69.3g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解，定容至1000ml
菲林试剂乙液：称取346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml
次甲基蓝溶液：1g次甲基蓝溶于100ml水
2.仪器
水浴锅
三.操作步骤
体积的确定
1 倾倒出一半样品于烧杯，于水浴锅加热至不产生气泡
2 菲林试剂的标定
取菲林试剂甲乙液各5ml，于250ml锥形瓶，加水10ml，并从滴定管中加入0.4％标准葡萄糖若干毫升，电炉上加热至沸，并保持微沸2min，加2滴次甲基蓝溶液，继续用标准葡萄糖滴定。
至要求操作在1min内完成，记录耗用的标准葡萄糖的体积V0。
3定糖预备实验
菲林试剂甲乙液各5ml于250ml锥形瓶，准确加入20ml样液，摇匀加热至沸。
加2滴次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖体积
V1毫升
4样品中还原糖的测定
准确量菲林试剂甲乙液各5ml于250ml锥形瓶，准确加入20ml样液，摇匀，
补加V0—V1毫升蒸馏水，并从滴定管中预加V1毫升样液。
摇匀加热至沸，保持微沸2min，加入2滴次甲基兰溶液，继续用样液滴定至蓝色消失。
记录消耗样液的总体积。
总糖、总酸的测定方法总结
总糖的测定方法及步骤：(直接滴定)取待测夜5ml于容量瓶中（两份重复）↓待测夜中加入乙酸钾（21.9%）和亚铁氯酸钾（10.6%）各5ml，蒸馏水稀释原液↓用100ml容量瓶定容，静置30min↓加入5ml盐酸恒温水解15min（恒温水浴锅温度67±1℃）↓滴入甲基红指示液↓调节pH（先加入5mlNaoH 标准溶液进行中和，调节pH值在6~7之间）↓定容于100ml容量瓶中待测↓各取5ml斐林试剂甲液和乙液于两个锥形瓶中↓用定容后待测夜匀速滴定加热沸腾的斐林试剂，记下待测夜的滴定体积为V（现象：从蓝色变为待测液本身的颜色为止，置于空气中变为紫红色为准；若至于空气变为黑绿色说明滴定过量了）总糖的计算公式:9.8总糖（%）= ——————————————* 100%5*50—————* 0.01 * V250式中：9.8 ----------斐林试剂标准浓度V -------------待测夜滴定体积0.01--------------稀释倍数总酸的测定方法及步骤：酸碱中和滴定称取W为1g待测夜两份（电子天平）↓用50ml蒸馏水稀释，记下体积为V↓取一定体积为V1的待测液加入酚酞指示液（10g/ml GB）↓用0.1mol/LNaoH标准溶液滴定,记下体积为V2（现象：从红色变为橙色为准）总酸的计算公式：式中：V——样品稀释总体积（mL）V1——滴定时取样液体积V2——消耗氢氧化钠标准液毫升数C——氢氧化钠标准液摩尔浓度W——样品重量（g）折算系数：即不同有机酸的毫摩尔质量（g/mmol），食品中的总酸度往往根据所含酸的不同，而取其中一种主要有机酸计量。
食品中常见的有机酸以及其毫摩尔质量折算系数加下：苹果酸——0.067（苹果、梨、桃、杏、李子、番茄、莴苣）醋酸——0.060（蔬菜罐头）酒石酸——0.075（葡萄）柠檬酸——0.070（柑橘类）乳酸——0.090（鱼、肉罐头、牛奶）。
还原糖检测方法
糖液质量的检测方法1、糖浆OD值的检测方法：1ml糖浆样品（DS%≈30%）＋9ml无水乙醇，迅速混匀后，在650nm下测其OD值。
2、斐林滴定法测DE值淀粉酶将淀粉水解成短链的糊精及少量的葡萄糖。
斐林试剂由甲乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙液分别储存，测定时才等体积混合，混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀。
NaOH + CuSO4→Cu（OH）2+NaSO4生成的氢氧化铜和酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠与铜的络合物，使氢氧化铜溶解。
COOK（CHOH）2COONa + Cu（OH）2→COOK（CHO ）2 Cu COONa +2H2O 酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜就是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：2 Cu（OH）2→COOK（CHO）2Cu COONa + CHO（CHOH）4CH2OH +2 H2O→2 COOK（CHOH）2COONa + COOH（CHOH）4CH2OH + Cu2O剩余的二价铜在酸性调价下与碘化钾反应，生成碘，用硫代硫酸钠滴定，I2被还原成I-，随着其缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变成黄色，当呈现淡黄色时，2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代硫酸钠直至溶液中的蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。
通过这个反应，能够测量存在于淀粉水解物中的还原糖含量。
用纯水代替样品与斐林试剂反应，所消耗硫代硫酸钠的体积为空白值。
定义：葡萄糖当量浓度（DE）代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖计算的还原糖含量占干物质的百分率，其数值的大小与淀粉水解的程度成正比。
化学试剂：Na2CO3C 4H4O6KNa，4H2OCuSO4NaOH葡萄糖（Dextrose）；HPLC级KII2H2SO4Na2S2O35H2O蒸馏水试剂：试剂配置方法有效期斐林试剂：甲液69.3g CuSO45H2O溶解在大约600ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线6个月斐林试剂：乙液346g C4H4O6KNa4H2O和100g NaOH溶解在大约800ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线。
糖分的测定标准
糖分的测定标准一、斐林试剂法斐林试剂法是一种常用的糖分测定方法，其原理是根据糖在加热条件下与斐林试剂发生氧化还原反应，产生砖红色沉淀来指示糖的存在和含量。
该方法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等优点，适用于各种糖类的测定。
具体步骤如下：1.试剂准备：准备好斐林试剂，包括甲液（硫酸铜溶液）和乙液（碱性酒石酸铜溶液）。
2.样品处理：将待测样品研磨成粉末状，并加入一定量的蒸馏水，制成样品溶液。
3.加热：将样品溶液放入沸水浴中加热一定时间，使糖与斐林试剂充分反应。
4.沉淀：取出样品溶液，加入一定量的氢氧化钠溶液，使溶液中的铜离子生成氢氧化铜沉淀。
5.比色：将沉淀后的溶液倒入比色管中，与标准糖溶液进行比色，根据颜色深浅计算样品中糖的含量。
二、快速法快速法是一种简便、快速的糖分测定方法，适用于快速测定甜菜糖、蔗糖等可溶性糖的含量。
该方法使用酶法水解样品，然后通过滴定法测定水解产物中葡萄糖的含量。
具体步骤如下：1.试剂准备：准备好所需的试剂和器具，包括酶溶液、酸溶液、葡萄糖标准溶液等。
2.样品处理：将待测样品研磨成粉末状，加入一定量的蒸馏水，制成样品溶液。
3.水解：将样品溶液加入酶溶液中，在适宜的温度下保温一定时间，使样品中的糖类物质充分水解成葡萄糖。
4.滴定：取出一定量的水解产物，用酸溶液中和后，用葡萄糖标准溶液滴定，根据滴定量计算样品中糖的含量。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种高效、高分辨率的分离技术，可用于糖分的定性和定量分析。
该方法利用不同糖分子在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现糖类的分离。
具体步骤如下：1.样品处理：将待测样品制成溶液，经过滤膜过滤后注入高效液相色谱仪。
2.分离：在色谱柱中，不同糖分子根据其分配系数在不同时间流出色谱柱。
3.检测：用紫外检测器或其他适宜的检测器检测流出液中的糖类物质。
4.定性定量：根据色谱图上出现的峰及峰面积确定样品中各糖类的含量。
非还原糖
非还原糖非还原糖;nonreducingsugar性质：不能还原斐林试剂或托伦斯试剂的糖。
蔗糖是非还原糖。
多糖的还原链末端反应性极差，实际上也是非还原糖。
单糖、双糖或寡糖在与苷元生成糖苷后，也成为非还原糖。
基本思路就是将非还原糖分解为还原糖，然后用检测还原糖的方法检测1斐林试剂吸取1.2.3.1项下已制备的样品液50ml，注入1000ml容量瓶中，加6N盐酸5ml，在68～70℃水浴中加热15min，冷却后加甲基红指示液2滴，用20%氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，混匀，然后滴定：精密吸取制备的试样溶液50ml于400ml烧杯中，加入碱性酒石酸铜甲、乙液各25ml，盖一表面皿，置电炉上加热，在4min 内沸腾，再煮沸2min，趁热用铺有石棉的古氏坩埚(或垂融坩埚)抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯和沉淀，至洗液不呈碱性为止。
将古氏坩埚放回原400ml烧杯中，加硫酸铁溶液25ml和水25ml，用玻捧搅拌，使氧化亚铜完全溶解，以0.1N高锰酸钾标准溶液滴定至微红色。
同时取水50ml，加碱性酒石酸铜甲、乙液各25ml，做试剂空白试验。
2酶系水解法3运用植物细胞看是否在没有改变浓度的情况下能够质壁分离后自动复原4漏斗上绑半透膜并在漏斗中注入该糖，还原糖水位先上升后下降，非还原糖上升后水位不变5铁氰化钾法分别吸取1.1.3.1样品液及空白液各5ml于试管中，先在剧烈沸腾的水浴中加热15min(样品液中非还原糖转化为还原糖)，取出迅速冷却后，加入碱性铁氰化钾溶液5ml，混匀后，再放入沸腾水浴中继续加热20min，取出迅速冷却后滴定：将试管内容物倾入100ml锥形瓶中，用25ml乙酸盐溶液洗荡试管一并倾入锥形瓶中，加5ml10%碘化钾，混匀后，立即用0.1N硫代硫酸钠滴定至淡黄色，再加1ml 淀粉溶液，继续滴定直至溶液蓝色消失，记下用去硫代硫酸钠溶液体积(V1)。
常见非还原糖如淀粉、纤维素、蔗糖等多糖的还原链末端反应性极差，实际上也是非还原糖。
斐林试剂法测定还原糖的误差分析
斐林试剂法测定还原糖的误差分析史建国杨俊慧马耀宏张利群（山东省科学院中日友好生物技术研究中心济南 250014）摘要：本研究根据斐林试剂测定还原糖的基本原理，采用自动控制系统调整反应条件，定量分析了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响。
关键词：还原糖斐林试剂自动滴定仪还原糖是谷氨酸发酵生产中重要的生化控制指标，如何快速而准确地测定还原糖是各生产厂家普遍关心的问题。
目前，我国谷氨酸生产企业主要采用斐林试剂测定法。
由于该法在实际测定过程中易受很多因素的干扰，严重影响测定的准确性［１］。
而不同的操作人员控制反应条件的技术不同，测定误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来很多麻烦，严重影响了生产技术水平的提高。
本文主要研究了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响，确定了误差来源。
为正确掌握斐林试剂滴定法，提高测定的准确度，提供了新的依据。
１试剂与仪器1.1 试剂配制1.1.1斐林甲液：称取35g硫酸铜（CuSO4·5H2O），取1%次甲基蓝溶液5mL，用水共容后定容至1000mL。
1.1.2斐林乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾，用水共容后定容至1000mL。
1.1.31０％标准葡萄糖溶液：精确称取100g分析纯葡萄糖（105℃干燥2h，恒重），加水溶解，并加10 mL分析纯盐酸，定容至1000mL。
1.1.4 1.0%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液100mL，加水稀释定容至1000mL。
1.1.5 0.1%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液10mL，加水稀释定容至1000mL。
1.2仪器设备全自动测定仪（山东省科学院中日友好生物技术研究中心研制生产）：按实验要求分别调整加热温度、加热时间、滴定速度、搅拌力度。
2测定方法2.1开机：按动开/关键、仪器自动清洗一次，开机完成。
2.2定标：按定标键。
用微量进样器注入1.0%的标准葡萄糖液100uL，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。
总糖的测定实验报告
总糖的测定实验报告一、实验目的总糖是指样品中所有还原糖和非还原糖的总和。
本次实验的目的是掌握总糖测定的原理和方法，学会使用化学分析手段准确测定样品中的总糖含量，并通过实验数据的处理和分析，评估实验方法的准确性和精密度。
二、实验原理总糖的测定通常采用直接滴定法。
在加热条件下，用稀硫酸将样品中的多糖水解为单糖，然后在碱性条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用斐林试剂进行滴定。
斐林试剂由甲液（硫酸铜溶液）和乙液（氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液）组成，甲液中的硫酸铜与乙液中的氢氧化钠反应生成氢氧化铜沉淀。
在加热条件下，氢氧化铜与酒石酸钾钠反应生成酒石酸钾钠铜络合物。
还原糖与酒石酸钾钠铜络合物反应，将二价铜离子还原为一价铜离子，自身被氧化。
次甲基蓝的氧化型为蓝色，还原型为无色。
当溶液中的还原糖全部被氧化后，稍过量的一滴还原糖将次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
三、实验材料与仪器1、实验材料葡萄糖标准溶液：准确称取 10000g 经过 98-100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后定容至 1000mL，浓度为 1mg/mL。
6mol/L 盐酸溶液。
10%氢氧化钠溶液。
斐林试剂甲液：称取 15g 硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）及 005g 次甲基蓝，溶于水中并稀释至 1000mL。
斐林试剂乙液：称取 50g 酒石酸钾钠与 75g 氢氧化钠，溶于水中，再加入 4g 亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至 1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
20%氢氧化钠溶液。
01%标准葡萄糖溶液：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用少量水溶解后，定容至 100mL。
样品溶液：＿____（注明样品来源和处理方法）2、实验仪器电子天平：精度 00001g。
可调式电炉。
酸式滴定管：50mL。
容量瓶：100mL、250mL、500mL。
移液管：1mL、2mL、5mL、10mL、20mL。
锥形瓶：250mL。
玻璃棒。
漏斗。
滤纸。
糖定性实验报告
一、实验目的1. 了解糖的化学性质和反应原理。
2. 掌握糖的定性分析方法，包括还原糖、非还原糖和多糖的检测。
3. 通过实验，加深对糖类物质的理解。
二、实验原理糖类物质是一类具有多羟基的醛或多羟基酮，可分为还原糖、非还原糖和多糖。
还原糖具有游离的醛基或酮基，能够还原斐林试剂、本尼迪克特试剂等；非还原糖没有游离的醛基或酮基，不能还原上述试剂；多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的聚合物。
本实验采用以下方法进行糖的定性分析：1. 还原糖的检测：利用斐林试剂和本尼迪克特试剂检测还原糖。
2. 非还原糖的检测：利用硫酸铜试剂检测非还原糖。
3. 多糖的检测：利用碘液检测多糖。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 纯葡萄糖- 纯蔗糖- 纯淀粉- 纯果糖- 斐林试剂- 本尼迪克特试剂- 硫酸铜试剂- 碘液- 乙醇- 硫酸- 氢氧化钠- 水浴锅- 试管- 试管架- 移液器- 酒精灯- 滴定管- 玻璃棒2. 实验仪器：上述实验材料中所列仪器。
四、实验步骤1. 还原糖的检测：（1）取三支试管，分别加入少量纯葡萄糖、纯蔗糖和纯淀粉溶液。
（2）向三支试管中分别加入等量的斐林试剂。
（3）将试管放入水浴锅中加热，观察颜色变化。
（4）取三支试管，分别加入少量纯葡萄糖、纯蔗糖和纯淀粉溶液。
（5）向三支试管中分别加入等量的本尼迪克特试剂。
（6）将试管放入水浴锅中加热，观察颜色变化。
2. 非还原糖的检测：（1）取三支试管，分别加入少量纯葡萄糖、纯蔗糖和纯淀粉溶液。
（2）向三支试管中分别加入等量的硫酸铜试剂。
（3）观察颜色变化。
3. 多糖的检测：（1）取三支试管，分别加入少量纯葡萄糖、纯蔗糖和纯淀粉溶液。
（2）向三支试管中分别加入等量的碘液。
（3）观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 还原糖的检测：（1）纯葡萄糖溶液中加入斐林试剂和本尼迪克特试剂后，水浴加热，溶液呈现红棕色沉淀。
（2）纯蔗糖溶液中加入斐林试剂和本尼迪克特试剂后，水浴加热，溶液无颜色变化。
斐林试剂知识点总结
斐林试剂知识点总结一、斐林试剂的原理斐林试剂包含的化学成分为磷钼酸铵和磷钼酸六水合物，其工作原理是基于这两种物质和还原性实验物质发生反应。
当斐林试剂与蛋白质、葡萄糖等还原性物质发生反应时，会产生一种蓝色物质，其吸光度与被测物质的浓度成正比。
这种蓝色物质的形成是由于还原性物质在碱性条件下与磷钼酸铵和磷钼酸六水合物发生反应，生成了一种可溶的蓝色化合物。
斐林试剂作为一种常用的生化分析试剂，其工作原理是基于还原性物质和酸性条件下进行的化学反应。
因此，在使用斐林试剂进行实验时，需要注意保持酸性条件和避免有色干扰物质的干扰。
此外，还需要根据被测物质的性质选择合适的实验条件和操作方法。
二、斐林试剂的应用由于斐林试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点，因此被广泛应用于生化学领域的蛋白质、葡萄糖、总胆固醇等物质的测定。
下面将对其应用进行详细介绍。
1. 蛋白质测定斐林试剂可以用于测定蛋白质的含量，其原理是基于蛋白质与碱性条件下发生的化学反应。
当蛋白质溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与蛋白质的浓度成正比。
这种方法具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定蛋白质的含量。
2. 葡萄糖测定斐林试剂也可以用于测定葡萄糖的含量，其原理是基于葡萄糖在酸性条件下与斐林试剂发生的化学反应。
当葡萄糖溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与葡萄糖的浓度成正比。
这种方法同样具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定葡萄糖的含量。
3. 总胆固醇测定斐林试剂还可以用于测定总胆固醇的含量，其原理是基于总胆固醇在酸性条件下与斐林试剂发生的化学反应。
当总胆固醇溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与总胆固醇的浓度成正比。
这种方法同样具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定总胆固醇的含量。
以上介绍了斐林试剂在生化分析中的应用，其原理和操作方法。
斐林试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点，因此被广泛应用于蛋白质、葡萄糖、总胆固醇等物质的测定。
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法xx 生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】1. 还原糖还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 CuO的沉淀。
托伦斯试剂被还2原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2. 费林试剂费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3. 实验方法本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。
【实验仪器】1. 移液管(5、10 毫升)2. 100 毫升容量瓶3. 水浴锅4. 铁架台5. 胶头滴管【实验材料】1.面粉2. 酚酞试剂3. 菲林试剂（甲、乙液）4. 10%氢氧化钠5. 标准葡萄糖（1mg/ml）6. 6M HCl7. 烧杯8. 玻璃棒9. 碱式滴定管10. 电炉11. 分析天平【实验操作】1. 总糖的提取准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
高考生物常用的试剂知识汇总
高考生物常用的试剂知识汇总高考生物常用的试剂1、斐林试剂：成分：0.1g/mlnaoh(*液)和0.05g/mlcuso4(乙液)。
用法：将斐林试剂*液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红*。
2、班氏糖定*试剂：为蓝*溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红*沉淀。
用于尿糖的测定。
3、双缩脲试剂：成分：0.1g/mlnaoh(*液)和0.01g/mlcuso4(乙液)。
用法：向待测液中先加入2ml*液，摇匀，再向其中加入3-4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫*。
4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄*(被苏丹Ⅳ染成红*)。
5、二苯*：用于鉴定dna.dna遇二苯*(沸水浴)会被染成蓝*。
6、*基绿：用于鉴定dna.dna遇*基绿(常温)会被染成蓝绿*。
7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染*，再用50%的酒精溶液洗去浮*。
8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变*。
低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强;而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。
75%的酒精溶液常用于手术前、打针、换*、针灸前皮肤脱*消毒以及机械消毒等。
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集dna.10、15%的盐*：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染*体着*，可将染*体染成紫*，通常染*3-5分钟。
(也可以用醋*洋红染*)12、20%的肝脏、3%的过氧化*、3.5%的*化铁：用于比较过氧化*酶和fe3+的催化效率。
(新鲜的肝脏中含有过氧化*酶)13、3%的可溶*淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
生物化学实验预习及实验报告范例 还原糖和总糖的测定
实验还原糖和总糖的测定实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法一、实验目的和要求1．初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2．正确掌握滴定管的使用方法和热滴定终点的判断方法。
二、实验原理思考(一)基本原理还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖、麦芽糖)。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于还原糖的定性和定量测定。
(二)本实验反应原理1、Fehling试剂（又称作酒石酸铜溶液）介绍：A液：由硫酸铜和次甲基蓝组成1、硫酸铜的作1、Cu2+用于将来被还原成Cu+是什么？2、次甲基蓝的作用是什么？2、氧化还原指示剂B液：由氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾组成3、氢氧化钠3、一、生成Cu(OH)2↓，二、创造碱性反应环境作用是什么？4、酒石酸钾钠的作用是什么？4、用以生成可溶性络合物酒石酸钠铜5、亚5、生成可溶性复盐，铁氰化钾的作用是什么？以便于观察滴定终点用前将A 、B 两液等体积混合时，依次反应：(1) 2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2↓ （天蓝色）+ Na 2SO 4 (2) 在碱性溶液中：酒石酸钠铜为可溶性络合物。
2、酒石酸铜与还原糖热滴定时的反应： 红色氧化亚铜沉淀生成：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒Cu(OH)2 +COOK C O H COONaCOHCOOKC OH H COONaCOHHCu + 2H 2O石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解反应生成的氧化亚铜沉淀与斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：6、为什么要生成可溶性复盐？6、便于观察滴定终点亚甲基蓝为氧化-还原指示剂指示滴定终点 7、为什么亚7、因为亚甲基蓝氧化能力比Cu 2+弱，因此Cu 2+会先COOK C O H COONaCOHCu 6H 2O3Cu 2O ↓H 2CO 3CHO(CHOH)4CH 2OH++COOK C OH H COONaCOHH+(CHOH)4CH 2OHCOOH++CuO 2 + K 4Fe(CN)6 + H 22 Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH甲基蓝可为滴定终点指示剂？被还原。
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费林试剂热滴定定糖法
xx 生科四班201100140120 同组者：xx
【实验目的】
1.初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2.正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】
1.还原糖
还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu2O的沉淀。
托伦斯试剂被还原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2.费林试剂
费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3.实验方法
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧
化铜作用形成可溶性的络合物。
【实验仪器】
1.移液管(5、10 毫升)
2.100 毫升容量瓶
3.水浴锅
4.铁架台
5.胶头滴管
【实验材料】
1.面粉
2.酚酞试剂
3. 菲林试剂（甲、乙液）
4.10%氢氧化钠
5.标准葡萄糖（1mg/ml）
6. 6M HCl
7.烧杯
8.玻璃棒
9.碱式滴定管
10.电炉
11. 分析天平
【实验操作】
1.总糖的提取
准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后用 10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容
至 100 毫升。
准确吸取该溶液 10ml，移入 100ml容量瓶内并定容至刻度，即
为测定总糖的样品液。
2.空白测定
山东大学实验报告
果带来一定的实验
误差。
【注意事项】
1.菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒
石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀；
2.总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可
以使面粉更容易溶解，沸水浴30min 后检查是否水解完全，若未则应继续加热；
3.用酚酞作指示剂时用 10%氢氧化钠调 PH 至 7，应先计算大概需加入氢
氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠；
4.空白滴定中一定以每滴1-2 秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至
蓝色变成黄色且在30s 内颜色又变成深红色为止；
5.平行三次后所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
6.称量面粉后及时记录数据，以免过后遗忘或记错。