生物化学检验常用技术共66页
生物化学检验常用技术(共66张PPT)
单色光 均匀介质 吸收物质无相 互作用
5、空白溶液的选择
在分光光度法中，为消除显色剂及样品中各种共存有色物质产生的干扰、抵消比色皿和 试剂对入射光的影响而用来调节仪器百分透光率为100%的溶液。
不
蒸 馏 水
试
样
含 待
剂
品
测
元
不
显 色
素
1、溶剂空白：不加样品和任何试剂，用纯溶剂（如蒸馏水或其他有机溶剂）作参比溶液。 选择原则：当显色剂及其它试剂均无色，被测试样中又无其他有色离子时，选用溶剂参比。
常用的固定化技术有：吸附、试剂交联、共价键合、
包埋法(酶与载体聚丙酰胺混合后直接包在电极 敏感部分形成酶凝胶层)。
几种酶电极的品种与性能
测定物质
酶
检测物 测定范围(mol/L)
葡萄糖 葡萄糖氧化酶
尿素(脲)
脲酶
胆固醇 胆固醇氧化酶
L－谷氨酸 谷氨酸脱氢酶 L－赖氨酸 赖氨酸脱羧酶
O2 NH3 H2O2 NH4+ CO2
单色器
滤光片
棱镜
光栅
吸收池
检测器
玻璃比色皿
石英比色皿
显示器
4
(一)、分光光度技术的基本原理
1、吸光度与透光度
当光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光 被吸收，另有一部分光透过溶液。设入射光强度为I0，透射光强度为I，I和I0之比称为透 光度，即：
入射光 I0
透射光 I
T = I/I0
10-4～2*10-2 10-5～10-2 10-5～10-2 10-4～10-1 10-4～10-1
离子选择性电极的分析方法
生物化学检验常用分析技术
待测管 2 待测管 1 标准管 试剂空白管
物质颜色和吸收光颜色的关系
物质颜色
黄绿 黄 橙 红
紫红 紫 蓝
绿蓝 蓝绿
吸
颜
色
紫 蓝 绿蓝 蓝绿 绿 黄绿 黄 绿 红
收 波
光 长(nm)
400 ~ 450 450 ~ 480 480 ~ 490 490 ~ 500 500 ~ 560 560 ~ 580 580 ~ 600 600 ~ 650 650 ~ 750
Lambert-Beer定律要求条件 • 1、入射光必须是单色光 • 2、被测样品必须是均匀介质 • 3、吸收过程中，吸收物质之间不发生相互作用
4、Lambert-Beer定律的偏离现象
• 1. 吸收定律本身的局限性 • L-B 定律是一个有限的定律，只有在稀溶液中才能成立。 • 2、仪器因素(非单色光的影响) • 3、化学因素 • 溶液中的溶质可因 c 的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发
最大吸收波长
吸 光 度
波长范围
0.80
Ax 0.60
0.40
0.20
0.00
cx
0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL)
（二）原子吸收分光光度法 原子吸收分光光度法是基于元素所产生的原子蒸 气中待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术。 即在一定条件下，原子的吸光度同原子蒸气中待测元素基态原子的浓度成正比。 常用的定量方法有： 标准曲线法、标准加入法、内标法。
如果溶液浓度以质量体积比表示时，此常数称为比吸光系数（ ），它 表示当溶液浓度为1g/L、液层厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度 值。摩尔吸光系数ε和比吸光系数 可相互换算。
临床生物化学检验常用技术ppt课件 ppt课件
ppt课件
20
❖ 1、制备标准液 ❖ 2、显色反应 ❖ 3、比色 ❖ 4、作图 ❖ 5、制作检量表。
ppt课件
21
标准曲
1
线法
0.5
吸光度
0 0 20 40 60 80 100
标准曲线
浓度
将一系列浓度不同的标准溶液按照、 一定操作过程显色后， 分别测吸光度，以吸光度为纵坐标， 浓度为横坐标绘制标准曲线。 从标准曲线找出相对应的待测样品的浓度， 即标准曲线法。
第3章
临床生物化学检验常用技术
ppt课件
1
本章主要内容
① 光谱检验技术 ② 电化学分析技术 ③ 电泳技术 ④ 干化学技术 ⑤ PCR技术
ppt课件
2
精品资料
• 你怎么称呼老师？
• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
熟悉离心技术，其它电泳技术和层析技术 中的HPLC及亲和层析的原理和应用；免疫分析 技术、生物传感技术的概念和应用原理。
了解色谱、层析等常用生化技术的应用原 理和方法，生物芯片技术的概念和应用原理。
ppt课件
5
第一节 光谱分析技术
分光光度技术的基本原理 分光光度计的基本结构 分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法
ppt课件
22
制作和应用标准曲线时应注意下面几点：
（1）浓度范围足够大 （2）减少偶然误差 （3）当待测液吸光度超过线性范围时，应将标本稀释后再测定。
（4）标本测定的条件应和标准曲线制作时的条件完全一致。
（5）测定条件发生变化时（如更换标准品和试剂等），应重新绘 制。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
临床生物化学检验技术完整
15
A
B
C
D
16
A
B
C
D
E
17
A
B
C
D
E
18
A
B
C
D
E
19
A
B
C
D
E
20
A
B
C
D
21
22
23
24
25
26
27
28
与临床蛋白质和核苷酸代谢紊乱有关的生化检验作业
1
第六章
6.1
1
A
B
C
D
2
A
B
C
D
6.2
1
A
B
C
D
2
A
B
C
D
与微量元素和维生素异常有关的生化检验作业
1
2
第七章
7.1
1
A
B
C
D
2
A
B
C
D
7.2
B
C
D
28
A
B
C
D
29
A
B
C
D
30
A
B
C
D
31
A
B
C
D
32
A
B
C
D
33
A
B
C
D
34
A
B
C
D
35
A
B
C
D
36
A
B
C
D
37
A
B
C
D
38
A
B
C
D
常用生物化学检验技术_百替生物
第五章 常用生物化学检验技术临床生化检验常用的分析技术有光谱分析技术、电化学分析技术、电泳分析技术、层析和离心分析技术及自动化分析技术。
其中光谱分析技术是最基本和最常用的技术，它具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点而被广泛应用。
第一节 光谱分析技术光谱技术是根据物质吸收或发射辐射能而建立起来的一类分析方法，因不同分子的原子团和原子，其发射光谱和吸收光谱不同，而相同的物质在一定条件下，其发射光谱和吸收光谱的强度与该物质的含量成正比关系。
因此可对物质进行定性和定量分析，此类技术称为光谱技术。
是一种最常用的生化检验测定技术，它主要包括吸收光谱（可见紫外、红外原子吸收光谱法）、发射光谱（荧光法、火焰发射光谱法）和散射光谱（比浊法）。
光是一种高速传播的电磁辐射，具有波、粒二象性，光的波长（λ）的常用单位纳米（nm ），可见光波长400～760nm ，＜400nm 称为紫外光，＞760nm 称为红外光，波长愈短，能量愈大。
可见，紫外吸收光谱是由于多原子分子的价电子在电磁辐射的作用下，由基态跃迁到激发态，这种因物质分子对辐射的选择性吸收而得到的光谱称为吸收光谱。
处于高能态的分子（激发态分子）是不稳定的，当返回基态时，便发射出相应的光谱，称为发射光谱。
可见，紫外吸收光谱用于定量分析的依据是光的吸收定律，即Lambert-Beer 是律，它是吸收光谱法的基本定律。
一、分光光度法的基本原理（一）吸光度与透光度当光线通过均匀、透明的溶液时，一部分光被散射，一部分光被吸收，另一部分光透过溶液。
设入射光强度为Io ，透射光强度为It ，It 与Io 之比称为透光度（T ），即IoIt =T ）透光度（T 常用百分数表示（T%），也称为百分透光度。
透光度的负对数称为吸光度（A ），又称为消光度（E ），光密度（OD ），即It Io lg =IoIt lg －=T lg －=A 吸光度与透光度的换算：T lg －100lg =T1lg=T lg －=A 如透光度=10％时 A = lg100－lg10 = 2－1 = 1透光度=20％时A = lg100－lg20 = 2－1.3 = 0.7（二）Lambert-Beer 定律1. Lambert 定律 当一束强度为Io 的单色光透过某种吸光溶液后，由于溶液吸收了一部分光，则透过的光线为It 。
常用生物化学检验技术
常用生物化学检验技术
目 录
• 生物化学检验技术概述 • 常用生物化学检验技术 • 生物化学检验技术的应用领域 • 生物化学检验技术的挑战与解决方案 • 生物化学检验技术的前景展望
01 生物化学检验技术概述
定义与特点
定义
生物化学检验技术是通过生物学 、化学等手段，对生物体或生物 样品进行检测和分析的技术。
详细描述
为了确保检测结果的准确性和可靠性，必须建立完善的标准化体系和质量控制体系。这包括制定统一 的检测标准和方法、建立完善的质控流程和质控标准、加强实验室管理等措施。同时，还需要加强国 际合作和交流，推动生物化学检验技术的标准化和质量控制。
05 生物化学检验技术的前景 展望
高通量自动化检测技术
签提供数据支持。
食品添加剂检测
02
通过检测食品中的添加剂种类和浓度，确保食品添加剂使用符
合国家规定。
食品中有害物质检测
03
利用生物化学检验技术检测食品中的有害物质，如农药残留、
重金属等，保障食品安全。
环境监测
水质检测
利用生物化学检验技术检 测水体中的有害物质，如 重金属、有机污染物等， 评估水质状况。
利用物质在紫外可见光激发下产生的 荧光特性，通过测量荧光信号，用于 检测物质的存在和含量。
气相色谱法
利用不同物质在色谱柱上的吸附或溶 解性能不同，通过测量各组分的保留 时间和峰高或峰面积，用于检测混合 物中各组分的存在和含量。
微生物学检验技术
01
02
03
细菌培养与鉴定
通过培养、分离、鉴定微 生物，用于检测感染性疾 病的病原体。
大气污染监测
通过检测大气中的有害气 体和颗粒物，了解大气污 染状况，为环境治理提供 依据。
生物化学检验常用技术
生物化学检验常用技术生物化学检验是医学领域中非常重要的一个环节，它通过对人体体液、组织和细胞中的化学成分进行分析和测定，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。
在生物化学检验中，有许多常用的技术，下面我们就来一一介绍。
一、光谱分析技术光谱分析技术是利用物质对不同波长的光的吸收、发射或散射特性来进行分析的方法。
其中，最常见的是分光光度法。
分光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。
它通过测量物质在特定波长下的吸光度，来计算物质的浓度。
这种方法操作简单、快速、灵敏度较高，广泛应用于测定蛋白质、核酸、糖类、酶等生物大分子的含量。
另外，原子吸收光谱法也是光谱分析技术中的一种重要方法。
它主要用于测定金属元素的含量，在生物化学检验中常用于检测血液、尿液等样本中的微量元素，如铁、锌、铜等。
二、电化学分析技术电化学分析技术是基于物质在溶液中的电化学性质而建立的分析方法。
其中，电位分析法是一种常见的电化学分析技术。
电位分析法通过测量电极电位来确定溶液中物质的浓度。
例如，在pH 测定中，使用玻璃电极和参比电极组成电池，根据测量的电位值计算溶液的 pH 值。
此外，电导分析法通过测量溶液的电导来确定物质的含量。
这种方法常用于水质分析和电解质浓度的测定。
三、色谱分析技术色谱分析技术是一种分离和分析混合物中各组分的有效方法。
常见的色谱技术包括气相色谱法和液相色谱法。
气相色谱法适用于分析挥发性和热稳定性较好的化合物。
在生物化学检验中，可用于检测血液中的药物浓度、脂肪酸组成等。
液相色谱法则适用于分析热不稳定、不易挥发的大分子化合物，如蛋白质、核酸等。
高效液相色谱法（HPLC）具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快等优点，广泛应用于生物化学检验中的药物分析、激素测定等领域。
四、免疫分析技术免疫分析技术是利用抗原与抗体的特异性结合反应来进行检测的方法。
常见的免疫分析技术包括酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫分析（RIA）和化学发光免疫分析（CLIA）等。
常用临床生物化学检验技术
5
500 0.42 250000 210
合计 1500 1.32
477
平均 300
550000 0.264
b
Σxy Σx 2
Σ xn· Σ y （Σnx）2
477
1500· 1.32 5
550000
（1500）2 5
0.00081
X为ALT单位,Y为吸光度
b
Σxy
Σx 2
Σ xn· Σ y （Σnx）2
射频区
• 波长 0.1～100cm
微波
• 波长 760～1000nm 远红外射线
• 波长 400～760nm
可见光
• 波长 200～400nm
紫外光
• 波长 10～200nm
远紫外光
• 波长 10-３～10nm
x射线
• 波长 5×10-3～0.14nm γ射线
二、波长与颜色
不同波长光线的颜色
光的波长（nm） 颜 色
第四章 常用临床生物化学检验技术
临床生化检验教研室 李 艳
常用临床生物化学检验技术
• 光谱分析技术: 最基本和最常用 • 电化学分析技术 • 电泳分析技术 • 层析和离心分析技术 • 自动化分析技术
教学目的和要求
掌握：分光光度技术的基本原理及定性和定量方法 自动生化分析仪的工作原理及参数设置
熟悉: 分光光度计的的基本结构 操作方法光源检查和波长校正 离心机相对离心力公式
20×30cm2比例坐标纸， • 浓度全距占多少格，A的全距也应占多
少格 • 空白A等于0，则绘出的曲线通过原点，
成45o角的直线，若曲线大于或小于45o 都不能准确
②样品浓度的选择
• 一般包括待测样品的可能变异的最高值与最 低值。例如血LDH比色法测定，正常波动范 围在190~437金氏单位，疾病时可能低至190 金氏单位，高至750金氏单位，所以标准曲线 浓度应从125~1000金氏单位
临床生物化学常用技术
第四节 电泳分析技术
38
一、电泳技术的原理及其影响因素
1． 原理：带电粒子在电场中的移动现象 称为电泳(Electrophoresis)。带负电荷的 粒子向电场的正极移动；带正电荷的粒子 则向负极移动。各种物质由于所带净电荷 的种类和数量不同，因而在电场中的迁移 方向和速度不同。利用物质的这种性质可 以对物质进行分离和鉴定。
它具有分辨力好，对蛋白质吸附极少，拖尾现象 轻微；不吸附染料，对区带周围的染料能完全洗 去，不干扰测定；样品需要量少、介质又可以透 明后定量扫描等优点。
临床生物化学上分离血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、 血红蛋白、甲胎蛋白及同工酶等大分子物质。
45
缺点和注意事项： 吸水性差，水份易蒸发。 电泳槽要求密闭，维持水蒸气饱和 电流强度不宜过大，0.4~0.6mA/cm宽。
16
（二）分光光度技术的定量方法
2.标准曲线法 用途：
1、确定分析范围 2、减少系统误差 3、比较方法的灵敏度
17
方法：
根据Lambert-Beer定律，液体的浓度在一定范 围内与吸光度成正比关系。配制一系列浓度的标准 品溶液（浓度应包含高、中、低浓度范围），按标 本处理方法作相同处理，在特定波长下测定吸光度， 以标准液浓度为横座标，以吸光度为纵座标，将对 应各点连成一条通过原点的直线，这条直线称为标 准曲线。待测溶液测定吸光度后，从标准曲线上可 查出其相应的浓度。
4
光的本性 光的描述：波长和能量 可见光：400nm~760nm 紫外光:200 nm~400nm 红外光: 760nm~1000nm
5
光谱分析技术原理：
利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特 征，以此来确定物质性质、结构或含量。
临床生物化学检验常用技术
3.将装有溶液的比色皿放置比色架中。 4.旋动波长手轮，把测试所需的波长调节 至刻度线处。
33
5.盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置 于光路，调节透过率“100%T”旋钮，使数 字显示为“100.0T” （如果显示不到100%T，则可适当增加灵 敏度的档数，同时应重复“2”，调整仪器 的“00.0”）。
7
选择吸收 ----组成物质的分子仅吸收与其内能变化(基
态与激发态能量差)相对应的波长或频率的 光，所得到的光谱称为吸收光谱。
8
能量释放 ----处于较高能态的分子(激发态分子)不稳定，
当其返回基态时，以热或发射光谱的形式将能 量释放出来。所发射出的相应光谱，称分子发 射光谱。
9
激发态 发 射 光 谱
49
电池电动势和电极电势
电池电动势：将电位差计接在电池的两个电极之间而直
接测得的电势值习惯上称之为电池的电动势
电极电势：当采用相对电势法时，系用一定的参比电极
与研究电极组成电池， 这一电池的电动势称为相对于给定参比 电极而确定的研究电极电势。(金属和溶液相接触的内电位差即 为金属电极和溶液间的电极电势)
散射光谱分析技术：比浊法
5
2、光的基本性质---高速传播的电磁波
微粒性(E=hv)
波粒二象性
波动性(=c/v)
E=hv =hc/
----光的能量与光的波长成反比，与
光的频率成正比
6
3、物质对光吸收的基本原理：
能量转移
---- 当光 辐射通 过某种 物质时，组成该物质 的分子（原子）与光 子发生“碰撞”，光 子的能量因此转移至 分子（原子）上，使 它们由基态(低能态)跃 迁到激发态(高能态)， 这种跃迁称为激发。
生物化学基本实验技术
Ⅰ生物化学基本实验技术一、分光光度法（一）原理光线的本质是电磁波的一种，有不同的波长。
肉眼可见的彩色光称为可见光，波长范围在400—760nm。
短于400nm的光线称为紫外线（200—400nm为紫外光区），短于200nm 的叫远紫外线，再短的就是X射线和γ射线了。
长于760nm的光线称为红外线（760—500000nm为红外区），再长的就是无线电波了。
可见光区的电磁波，因波长不同而呈现不同的颜色，这些不同颜色的电磁波称为单色光，单色光并非单一波长的光，而是一定波长范围内的光，太阳及钨丝灯发出的白光，是各种单色光的混合光，利用棱镜可将白光分成按波长顺序排列的各种单色光，即红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等，这就是光谱。
当光线通过透明溶液介质时，其辐射的波长有一部分被吸收，一部分透过，因此光线射出溶液之后，部分光波减少。
例如，可见光通过有色溶液后，或红外线通过多种气体后，部分光波被吸收。
不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力也不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱，在一定条件下，其吸收程度与该物质浓度成正比，故可利用各种物质的不同的吸收光谱特征及其强度对不同物质进行定性和定量的分析。
在可见光范围内，利用溶液的颜色深浅来测定溶液中物质含量的方法，称为比色法。
采用适当的光源、棱镜和适当的光源接受器，可使溶质浓度的测定范围不仅仅局限于可见光，尚可扩大到紫外光区和红外光区。
这就是分光光度法。
分光光度法是生物化学中最有价值的测定方法之一。
通过测定紫外、可见或红外的特征吸收光谱可以鉴定未知化合物；通过测量在某一波长的光吸收可以测定溶液中未知化合物的浓度。
分光光度法所依据的原理是Lambert和Beer定律。
1．Lambert定律一束单色光通过透明溶液时，一部分波长的光波被吸收，被吸收光波的量与溶液厚度有一定的比例关系。
即：e-al (1)I=I为入射光强度式中II为通过溶液后的光强度l为溶液的厚度e为自然对数的底2.718a为溶液的吸光率（1）式可改写为：/I= al (2)ln I将（2）式换算成常用对数式，即：/I = 0.4343.allg I令 k=0.4343.a则/I = kl (3)lg I此处以k为吸光率。
常用生物化学检验技术
I0
It
用数学式表示为：
It 透光度T＝ I0
透光度随溶液厚度增加而减少，其关系 是透光度的负对数（－lgT，吸光度A）与溶 液厚度成正比，即
It I0 A lgT lg lg K L I0 It
2. Beer定律
当一束强度为Io的单色
光透过某种吸光溶液后，若液层厚度不变，
（二）标准曲线法
配制一系列浓度不同的标准液，按一 定操作方法显色后，用选定的波长分别测 定它们的吸光度，然后以吸光度为纵坐标， 标准液浓度为横坐标，在坐标纸上标出各 坐标点，通过连接各点，使其成一直线， 即A-C曲线。
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
·
·
· · ·
2 4 6 8 10 12
常用生物化学检 验技术
第一节 光谱分析技术 第二节 电化学分析
第三节 电泳技术
第四节 层析技术
第五节 自动生化分析
技术
光谱分析技术是根据物质吸收或发 射辐射能而建立起来的一类分析方法， 因不同分子的原子和原子团，其发射光 谱和吸收光谱不同，而相同的物质在一 定条件下，其发射光谱和吸收光谱的强 度与该物质的含量成正比关系。因此可 对物质进行定性和定量分析，此类技术 称为光谱分析技术。
C
注意事项
1. 测定条件发生变化时（如更换标准品 和试剂等），应重新绘制。 2. 标准品应有高的纯度，标准液的配制 应准确。
3. 当待测液吸光度超过线性范围时，应 将标本稀释后再测定。 4. 标本测定的条件应和标准曲线制作时 的条件完全一致。
五、紫外分光光度法
用波长 200 ～ 400nm 的紫外光谱测定无 色物质的方法称为紫外分光光度法。芳香族 类及含有共轭双键的烯烃、炔烃等不饱和烃 类，在200～400nm波长范围具备光吸收特性， 故不需经显色反应就能直接利用紫外分光光 度法测定，其选择性和灵敏度均高于比色分 析法。