河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-4(hs)株ORF5-7基因变异分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因变异分析

第29卷第1期2009年2月郑州牧业工程高等专科学校学报Jour nal of Zhengzho u Co lleg e of A nimal Husbandry Eng ineer ing V o l.29N o.1February 2009收稿日期:2006-12-15基金项目:河南省基础与前沿技术研究计划项目(072300430060),河南省重点科技攻关(072102130023),河南省高校科技创新人才支持计划作者简介:曹素芳(1973- ),女,四川武胜人,博士,副教授。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因变异分析曹素芳,王岩,肖松云,唐桂芬(郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011)摘要:采用RT -P CR 方法对疑似P RRS 阳性病料进行克隆和测序获得了O RF7基因片段。

序列分析结果表明获得的O RF7基因序列不存在缺失现象。

与美洲型代表毒株VR -2332的核苷酸序列的同源性为9113%,氨基酸同源性为9216%;与我国最早的PRR SV 分离株CH -la 相比,核苷酸同源性为9315%,氨基酸同源性为9216%;与我国高致病性P RRSV 毒株SD-Z Q 的核苷酸同源性最高为9811%,氨基酸只有两个不同,同源性为9813%;与本省的Hn-1/06毒株的核苷酸同源性为9713%,氨基酸同源性为9715%;与2004年分离的F J-2株与O RF7基因的核苷酸差异稍大为8514%,氨基酸同源性为8816%;与欧洲型分离株LV 株和N-34株ORF 7基因的核苷酸差异很大,同源性仅为4111%和40%,氨基酸同源性为4711%和4716%。

表明所获得序列的流行毒株属于美洲型,但其毒力已发生了变异。

关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;O RF7基因;变异中图分类号:S852165 文献标识码:A 文章编号:1008-3111(2009)01-0001-03Variation Analysis of Porcine Syndromeand Reproductive and Respiratory Virus ORF 7G eneCAO Su-fang,WANG Yan,XIAO So ng -yun,T ANG Gui-fen(Zhengzhou Co llege o f Animal Husbandry Eng ineering ,H enan Zheng zho u 450011,China)Abstract:T he O RF7genes of patho log ic materia l suspected PR RS w as amplified by R T -PCR 1T he product w as se -quenced after clo ning into pM D18-T v ecto r 1T he sequence was analysed by D NA M A N softw are and com par ed w ith those of V R-2332,CH -la,SD-ZQ ,H n-1/06,F J-2,L v and N -341it show ed that the nucleot ide sequence ho -molog y w ere 9113%,9315%,9811%,9713%,8514%,4111%and 40%respectiv ly 1And the deduced amino acide ho -molog y w ere 9216%,9315%,9813%,9715%,8816%,4711%and 4716%respectivly 1I t indicated that the iso late strain w as related to t he N or th Amer ican P RRSV genoty pe 1A mo ng them the nucleotide sequence and amino acide ho -molog y both wer e the hig hest comparing w ith highly pat ho genic po rcine r epr oductive and r espir ator y syndr ome vir us SD-ZQ strain 1Key words:Po rcine repro ductiv e and respirato ry syndr ome vires;O RF7gene;v ariat ion analy sis猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syn -drome,PRRS)的病原,主要引起母猪早产、流产等繁殖障碍,仔猪、育肥猪呼吸困难[1]。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的变异分析

*基金项目：国家重点基础研究发展规划(973)项目（No.G1999011901）。

高志强：1974年生，男，博士研究生。

**通迅作者。

Author for correspondence,E-mail:<yhanchun@>.收稿日期：2003-04-17接受日期：2003-05-12农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12(3):283~287·研究论文·猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因的变异分析*高志强郭鑫查振林陈艳红杨汉春**（中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室，北京100094）摘要：从河北、江西猪场中分离到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒（HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002和JX-1/2002）。

采用RT-PCR 方法扩增其完整的基因片段，进行了序列测定，并与其它5个国内毒株的基因序列进行了比较和变异分析。

所有这些毒株的基因均编码200个氨基酸，推导的氨基酸相似性在88.2%~99.0%之间。

其中BJ-4、S1及J1间的相似性较高，在98%~99%之间；HB-1(sh)/2002，HB-2(sh)/2002，JX-1/2002及CH-1a 间的相似性为92%~96%之间。

根据基因核苷酸序列的遗传进化距离，这些毒株可分为两个亚群，BJ-4、S1和J1为一个亚群，与VR2332及疫苗毒株接近；HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002、JX-1/2002和CH-1a 为另一个亚群。

关键词:猪繁殖和呼吸综合征病毒；基因；变异分析Variation Analysis of the Gene of Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus （PRRSV ）GAO Zhi-Qiang GUO XinCHA Zhen-Lin CHEN Yan-Hong YANG Han-Chun**(Key Laboratory of Preventive Veterinary Medicine ，Ministry of Agriculture ，China Agricultural University,Beijing 100094,China)Three porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRSV)isolates (HB-1(sh)/2002，HB-2(sh)/2002and JX-1/2002)were obtained from Hebei and Jiangxi Provinces'pig farms.A RT-PCR method was used to amplify the complete gene of the viruses.Variation analysis ofgene of the three isolates and other five published PRRSV isolates in China showed that all ofthese isolates belonged to American type,and percent identity of amino acid ranged from 88.2%to 99.0%.gene among BJ-4,S1and J1had higher similarity,sharing 98%~99%identity of the deduced amino acid.HB-1(sh)/2002,HB-2(sh)/2002,JX-1/2002and CH-1a showed 92%~96%identity among theirgene.Phylogenetic analysis suggested that these isolates could be dividedinto two subgroups according to the genetic distance.BJ-4,S1and J1belonged to one subgroup,which are more close to VR2332and vaccine strains,whereas HB-1(sh)/2002,HB-2(sh)/2002,JX-1/2002and CH-1a belonged to anothersubgroup.porcine reproductive and respiratory syndrome virus;gene;variation analysis猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus ，PRRSV)为动脉炎病毒科成员之一,可引起妊娠母猪流产、早产、产死胎、弱胎、木乃伊胎、仔猪和肥育猪的呼吸道症状。

猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析

道。．福建省某种猪场自２０年来，也不时出现少数母猪产死胎和木乃伊胎，１２月龄仔猪出现。０１ —
呼吸障碍，显示出ＰＲ症状．２０ＲＳ０３年底至２００４年初，该猪场爆发较严重疑似ＰＲＲＳ疾病，经本研究室利用Ｒ —ＣＴＰＲ技术确诊为ＰＲｌ，初步推定病毒属于美洲型，但病毒基因序列不清楚．本研究ＲＳ８Ｌ】
［摘要］根据猪繁殖和呼吸综合征病毒（ＲＶ）已发表的核苷酸序列，设计了１特异性引物Ｐ／ＰＲＳ对１Ｐ，用Ｒ．Ｃ２ＴＰＲ扩增了ＰＲＶ福建毒株Ｆ．Ｆ＿ＲＳＪ１和Ｊ２的全长核衣壳蛋白基因（Ｒ大肠杆菌Ｄ１Ｂ，提取阳性重组质粒进行序列测定与分析．结果表明：Ｆ．Ｈ０Ｊ１和Ｆ．Ｊ２毒株ＯＦ因均为３２ｂ，编码１３个氨基酸，与美洲型参考毒株Ｖ．３２及欧洲型参考毒株ＬＲ７基７ｐ２Ｒ２３Ｖ的核苷酸同源性分别为９．６％，９．５％和６．ｏ％，０６５１４３１４６．５％，其推导的氨基酸同源性分别为９．３％，９．２％５９５１和５．９％，５．３％．研究表明，福建流行的Ｆ．和Ｆ－属于美洲型ＰＲＶ毒株．６４５７Ｊ１Ｊ２ＲＳ［关键词］ＰＲＶ；福建毒株；ＯＦ；序列分析ＲＳＲ７［中图分类号］Ｓ８２６；Ｑ７５．５８［文献标识码］Ａ
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第ｌ卷１
第３期
集美大学学报（自然科学版）
Ｊｕｎｌｆｉｉｎｖｒｉ（ａｒｃｎｅｏｒａｏｍｅＵｉｅｓｙＮｔａＳｉｃ）Ｊｔｕｌｅ

猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析

猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析吴国平;刘冰心;郭川;曹敏杰;苏文金【期刊名称】《集美大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2006(011)003【摘要】根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定与分析.结果表明:FJ-1和FJ-2毒株ORF7基因均为372 bp,编码123个氨基酸,与美洲型参考毒株VR-2332及欧洲型参考毒株LV的核苷酸同源性分别为95.16 %,94.35 %和61.40 %,60.65 %,其推导的氨基酸同源性分别为95.93 %,95.12 %和56.49 %,55.73 %. 研究表明,福建流行的FJ-1和FJ-2属于美洲型PRRSV毒株.【总页数】6页(P217-222)【作者】吴国平;刘冰心;郭川;曹敏杰;苏文金【作者单位】集美大学水产学院、水产生物技术研究所,福建,厦门,361021;厦门大学生命科学学院,福建,厦门,361005;集美大学生物工程学院,福建,厦门,361021;厦门大学生命科学学院,福建,厦门,361005;集美大学生物工程学院,福建,厦门,361021;集美大学生物工程学院,福建,厦门,361021【正文语种】中文【中图分类】S852.65;Q78【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达[J], 梁望旺;徐涤平;熊忠良;刘泽文;杨克礼;伍锐;邓均华;段正赢;余爱冬;唐文娟2.杂交野猪猪繁殖与呼吸综合征病毒分离及其ORF6、ORF7基因的序列分析 [J], 李冰;卢赫;冯方周;丁壮3.11株猪繁殖与呼吸综合征病毒中国分离株NSP2、ORF5、ORF7基因的序列分析 [J], Li J;吴艳4.猪繁殖与呼吸综合征病毒北京分离株的ORF7克隆与序列分析 [J], 高云;杨汉春5.猪繁殖与呼吸综合征病毒山西分离株ORF7基因序列分析 [J], 樊振华; 刘文俊; 武守艳; 吴忻; 孟帆; 焦福林; 薛翼鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起怀孕母猪发热、厌食、早产、晚期流产、死胎、弱仔和木乃伊胎等繁殖障碍以及仔猪的呼吸系统症状和高病死率的接触性传染病。

该病于1987年首次在北美发现[1]，1991年欧洲发生本病,并在荷兰首次分离到PRRSV，命名为Lelystad病毒(LV) [2]；美国于1992年分离PRRSV，命名为VR-2332[3-4]；郭宝清等[5]于1996年首次从我国疑似PRRS病猪中分离到PRRSV，从而证实了该病毒在我国的存在。

本病可经水平和垂直两种方式传播，其流行已给养猪业造成了巨大的经济损失。

PRRSV是一种有囊膜的正股单链RNA病毒，与马动脉炎病毒（EAV）、鼠乳酸脱氢酶病毒（LDV）和猴出血热病毒（SHFV）同属于最近分类的动脉炎病毒科(Arteriviridae)[6]。

PRRSV病毒基因组长约15kb，含8个开放阅读框架(ORFs)，LeCall等［7］研究表明，8个开放阅读框架中ORF7高度保守，即使是在体内传代也很少引起ORF7的核苷酸序列变异。

此外，ORF7编码的核衣壳蛋白（N蛋白）具有良好的免疫原性及反应原性[8-9]，机体产生的PRRSV抗体主要是针对N蛋白。

因此，N蛋白常可作为诊断抗原来检测PRRSV。

本实验以ORF7基因为研究对象，应用分子克隆技术对ORF7基因进行扩增、构建原核表达载体、序列分析，为今后进一步深入研究该片段奠定基础。

1材料1.1病毒、细胞及载体PRRSV毒株（北京分离株）、猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因原核表达载体的构建及序列分析张永富1,2,3，马国文1，刘月焕2，刘永宏2,4，李明刚3，张秋雨3，刘锋3(1.内蒙古民族大学动物科技学院内蒙古通辽028000；2.北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100089；3.北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司,北京100043；4.内蒙古农业大学动物科学与医学学院,呼和浩特010018)摘要：根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7基因序列，设计合成一对引物，应用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的ORF7基因（N基因）。

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF3基因的克隆及变异分析

・
３・试验研究２
广东畜牧兽医科技２１年（３卷）１００第５第期
猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ＯＲ３基因的克隆及变异分析Ｆ
王娇，赵泽坤，王坤，孙继国ｅ匕利农业大学动物科技学院，河北保定０１０７０９
摘要：从河北唐山分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒，接种Ｍｒ－４细胞，经过４ａｃ１５代盲传后，出现细胞病变，经鉴定为ＰＲＶＲＳ，命名为Ｔ株根据Ｇｎａｋ公布的ＰＲＶＪＡ株０Ｆ基因的核苷酸序ｓｅＢｎＲＳＸ１Ｒ３列，设计并合成一对特异性引物，用Ｒ－Ｃ方法扩增完整０Ｆ基因，将扩增产物连接到ｐＤ９Ｔ载体并ＴＰＲＲ３Ｍ１一转化克隆菌，阳性重组质粒ＰＤＧ３将Ｍ－Ｐ进行序列测定与分析。应用ＤＡＳａ软件，将测序结果与国内外已Ｎｔｒ
ｏｈｒＰｔｅＲＲＳｓｒｉｓｉｎｎｙｕｉｇＤＮＡＳａｏｗａｅａｄｔｅｐｙｏｅｅｉｔｅｓｄａ．ｔｌｉｅＶｔａｎＧｅＢａｋｂｓｎｎｔｒｓｆｒｎｈｈｌｇｎｔｅｗａｒｗｎＩｄｔｔｃｒａｈ
ｃｌＴｈｌｌｎｔｆｅ１ｅｆｌｅｇｈｏＦｅｅｏＲＶｔａｎＴｓｍｐｉｅｖＲＴ．ＣＲｔａｒｏｅｉｃｐｍｅ．ｕ－ＯＲ３ｇｎｆＲＳｓｉＳｗａＰｒａｌｄｂＰｉｆｗｉａｐｉｆｓｃｆｒｈｐｉｉ￣ｄｓｎｄａｃｒｉｇｔｅＯＲｅｕｎｅｏＲＲＳＪｅｉｅｃｏｄｎｔＦ３ｓｑｅｃｆｇｏｈＰＶＸＡｌｓａｎａｄｔｅｌｎｄｉｔｌｓｄｐＤ１－Ｔｅｔｉ，ｎｎｃｏｅｏｐａｍｉＭｒｈｎ９Ｔ．ｈ

猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组分子遗传特征分析

息。
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果降低
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果持续时间缩短
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果产生耐药性
病毒基因组变异可能导致疫苗免疫效果产生副作用
基因组测序技术：二代测序、三代测序等
基因组组装：利用生物信息学方法进行基因组组装
基因变异分析：通过比对基因组序列，分析基因变异
抗病毒药物的研发和应用，还可以为猪繁殖与呼吸综合征病毒的预防和治疗提供新的手段和方法，提高猪场的生产效益。
汇报人：
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的定义和
作用
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的分类和
特点
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记的检测方
法和技术
猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组遗传标记在疾病诊
断和研究中的应用
抗原性变异的定义：病毒表面抗原发生变异，导致
免疫系统无法识别
抗原性变异的原因：病毒基因突变、重组、插入、
基因功能预测：利用生物信息学方法预测基因功能
基因组进化分析：通过比较不同物种的基因组，分析基因组的进化关系
基因组数据可视化：利用生物信息学软件，可视化基因组数据
基因测序：通过DNA测序技术，确定基因序列基因分型：通过基因分型技术，确定基因型基因突变检测：通过基因突变检测技术，确定基因突变基因表达分析：通过基因表达分析技术，确定基因表达情况
病毒免疫逃逸：抗原变异、免疫抑制等
病毒与宿主相互作用：病毒感染、免疫应答、免疫调节等
病毒基因组变异：的能
力
变异与致病力的关系：变异可能导致致病力的增强或减
弱
研究意义：为疫苗研发和疾病防控提供依

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展
王永志;曹三杰;文心田
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2005(26)4
【摘要】猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,引起猪严重繁殖障碍和呼吸道疾病.该病的病原体属于动脉炎病毒属,是一种不分节段的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框(ORFs),ORF1编码非结构蛋白,ORF2～ORF7编码结构蛋白.其中ORF7编码的核衣壳(N)蛋白和ORF6编码的非糖基化基质(M)蛋白为优势结构蛋白.猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组存在广泛的遗传变异性,M蛋白和N蛋白在所有的毒株之间相对比较保守,可作为血清学诊断的靶抗原.文章就猪繁殖与呼吸综合征病毒在分子生物学方面的研究情况做作一综述.
【总页数】4页(P50-53)
【作者】王永志;曹三杰;文心田
【作者单位】四川农业大学动物科技学院,四川雅安,625014;四川农业大学动物科技学院,四川雅安,625014;四川农业大学动物科技学院,四川雅安,625014
【正文语种】中文
【中图分类】S857.22
【相关文献】
1.猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 [J], 张梅;刘光瑞
2.猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 [J], 李国娟;田永强;李建强;李宝
玉;柳纪省
3.猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 [J], 李彩珠
4.猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展 [J], 袁宝;任文陟
5.猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染研究进展 [J], 温永俊;蔡雪辉
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猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF6基因的克隆及原核表达

２ＣｒｌｏｎｕｔｒｍｏｉｅｔｆｔｅＭｉｓｙｏｏ．ｉｕａｎＩｄｓｙＰｏｔｎＣｎｅｏｎｔｆＣｍｍｅｅｅｉ１０７，ｈａｃｔｉｒｏｒｈｉｒｒ，ｉｎ００Ｃｉ）ｃＢｊｇ０ｎＡ｜ＴｅｆｌｌｇｈｏＲ６ｇｎｎｏｉｈｎｅｏｅｇｃｐｏｅ（Ｐ）ｏＲＶＨ－（）ｓａｂ允ｈｕｌｅｔｆＯＦｅｅｅｃｄｇｔｅｅｖｌｌｏｒｔｎＧ６ｆＰＲＳＢ３ｃｔｉ血 —ｎｎｐｙｉｚｒｎｉｌｅｒｍＣｎｚｏＢｉｗｓａｐｉｅｙＲ —Ｃｉａｆｓｅｉｃｐｍｅｓ（１２ｅｉｅｃｓａｄｆａｇｈｕＨｅｅａｍｌｄｂＴＰＲｗｔａｐｉｏｐｃｒｒｐ／ｐ）ｄｓｎｄａ— ｏｔｏｉｆｈｒｉｆｉｇ
ｐｏｅｎｓＥＴ－ｗｅｅｉｈｙｘｒｓｅｉＥｓｈｒｃａｏｉｒｔｉｐＭｒｈｇｌｅｐｅｓｄｎｃｅｉｈｉｃｌＢＬ２１Ｗｅｔｒ－ｌｔｎｓｏｄｈａｔｅｅｏｂｎｎ．ｓｅｎｂｏｔｇｈｗｅｔｔｈｒｃｍｉａｔｉｐｏｅｎｃｕｄｒａｔｗｉｅｐｒｉｅｐｌｃｏａａｔｏｙａａｓＲＲＳｒｔｉｏｌｅｃｔｔｏｃｎｏｙｌｎｌｎｉｄｇｉｔＰｈｈｂｎＶ．
０１０；．７Ｏ１２商务部流通产业促进中心，北京
ｌ０７）０Ｏ０
摘要：从河北沧州分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒，种Ｍｒ一４接ａｃ１５细胞，４经代盲传，出现细胞病变，经鉴定为ＰＲＶ命名为Ｈ－（Ｚ株。根据ＧｎａｋＲＳ，Ｂ３Ｃ）ｅＢｎ公布的ＰＲＶＪＡ株ＯＦ基因的核苷酸序列，ＲＳＸ１Ｒ６设计并合成对特异性引物（１Ｐ）用Ｒ－Ｃ方法扩增完整０Ｆ基因，Ｐ／２，ＴＰＲＲ６将扩增产物连接到ｐＭＴＧ — 载体并转化克隆茵，阳性重组质粒ＰＭＭ进行序列测定与分析。后将克隆质粒ＰＭＭ双酶切后连接原核表达载体ｐＴ３ａ＋，ＲｓｅａＤ３Ｇ－Ｇ－Ｅ一２（在ｏｔ— Ｅ）ｓ中成功获得表达，Ｗｓｅｎｂｏｔｎ分析表明，经ｅｔｒ－１ｔｉｇ表达蛋白与阳性血清发生特异性反应关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；河北分离株；Ｒ６ＯＦ基因；原核表达中图分类号：８２６９６￥５．５．文献标识码：文章编号：０５９４（０９０ —０４０Ａ１ —４Ｘ２０）４０３－３０

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因变异分析曹素芳;王岩;肖松云;唐桂芬【期刊名称】《郑州牧业工程高等专科学校学报》【年(卷),期】2009(029)001【摘要】采用RT-PCR方法对疑似PRRS阳性病料进行克隆和测序获得了ORF7基因片段.序列分析结果表明获得的ORF7基因序列不存在缺失现象.与美洲型代表毒株VR-2332的核苷酸序列的同源性为91.3%,氨基酸同源性为92.6%;与我国最早的PRRSV分离株CH-la相比,核苷酸同源性为93.5%,氨基酸同源性为92.6%;与我国高致病性PRRSV毒株SD-ZQ的核苷酸同源性最高为98.1%,氨基酸只有两个不同,同源性为98.3%;与本省的Hn-1/06毒株的核苷酸同源性为97.3%,氨基酸同源性为97.5%;与2004年分离的FJ-2株与ORF7基因的核苷酸差异稍大为85.4%,氨基酸同源性为88.6%;与欧洲型分离株LV株和N-34株ORF7基因的核苷酸差异很大,同源性仅为41.1%和40%,氨基酸同源性为47.1%和47.6%.表明所获得序列的流行毒株属于美洲型,但其毒力已发生了变异.【总页数】4页(P1-3,14)【作者】曹素芳;王岩;肖松云;唐桂芬【作者单位】郑州牧业工程高等专科学校,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,河南,郑州,450011;郑州牧业工程高等专科学校,河南,郑州,450011【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因克隆与遗传演化分析 [J], 吴鹏;张勋;梁田;陈新凯;肖媛媛;盛金良2.猪MBL-C及DUSP1基因变异对猪繁殖与呼吸综合征病毒抗性影响的初步分析[J], 袁焰平;任钰为;江一波;贾启涛;徐亚杰;肖犟;方瑞;李其安;赵俊龙3.杂交野猪猪繁殖与呼吸综合征病毒分离及其ORF6、ORF7基因的序列分析 [J], 李冰;卢赫;冯方周;丁壮4.11株猪繁殖与呼吸综合征病毒中国分离株NSP2、ORF5、ORF7基因的序列分析 [J], Li J;吴艳5.猪繁殖与呼吸综合征病毒山西分离株ORF7基因序列分析 [J], 樊振华; 刘文俊; 武守艳; 吴忻; 孟帆; 焦福林; 薛翼鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的遗传变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒（ｏｃｅｒｐｏｕ— Ｐｒｉｅｒｄｃｎ
ｔｅｎｅｐｒｔｒｙｄｏｉｕ，ＲＶ）于动ｉｄｒｓｉｏｙｓｎｒｍｖｒｓＰＲＳ属ｖａａ
法主要有免疫过氧化物酶技术、荧光标记抗体法、原
ＤＱ９８８、ＡＦ４４４８００９０２、ＡＹ３６２、ＤＱ４９１和６５５８３１
ＬＹＯＬＥＥＰＹＮＶ（Ｖ）用Ｄｔｒ中的ＥｉｅＬ，ＮＡＳａｄｔｑＳ
位杂交等。这些检测方法仍多应用ＰＲＶ保守的ＲＳ
脉炎病毒科、脉炎病毒属，动主要引起怀孕母猪流核衣壳蛋白（Ｎ蛋白）的单克隆抗体作为一抗。本文
ＲＲＶ的全基因和ＯＲ７因序列进行基因进Ｆ基产、死胎、乃伊胎、木早产、产弱仔等繁殖障碍和仔猪对ＰＳ呼吸困难、死亡率及育肥猪呼吸道症状。ＰＲ高ＲＳ生以来，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，已成为全球规模化猪场的主要疫病之一。
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动物医学进展。０７２（１：６３２０，８１）２ —０
ＰｒｇｅｓｉｅｅｉｒｅｉｉｏｒｓｎＶｔｒｎａｙＭｄｃｎｅ
猪繁殖与呼吸综合征病毒ＯＲＦ７基因的遗传变异分析
摘
要：ＧｅＢｎ从ｎａｋ中随机选取２５株猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ的全基因序列进行同源性分ＰＲＶ）

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析

【要】采用Ｒ摘Ｔ—ＰＲ方法对不同省份疑似ＰＲＣＲＳ阳性病料进行克隆和测序，得１获４个ＯＦＲ５基因片段。序列分析结果表明，获得的１４个ＯＲ５因序列不存在缺失现象，苷酸的同源性为９．％～９．％，导编码氨基Ｆ基核８８９７推
呼吸道疾病及免疫抑制和持续性感染，而导致新生仔猪发从生继发感染，长发育受阻，时可出现神经症状，亡率升生有死高，。１８４９７年在美国首先发现此病，９１年在荷兰首次分１１９离到病原，名为ＬｌｓｄＶｉｓＬ。１９命ｅｔｒ（Ｖ）９２年美国学者也ｙａｕ分离到该病毒，命名为ＡＴＲ一２３１。１９ＴＣＶ３２２］９６年郭宝清
７ ℃ 终延伸５ｍｉ。按常规方法将ＰＲ产物纯化后与２ｎＣｐ１ＭＤ８一Ｔ载体连接，化Ｄａ受态细胞，氨苄抗性筛转Ｈ５感经选及双酶切对重组菌进行鉴定。
病 ’ 。近年来我国各地也陆续报道有本病的流行。研究表３
之高，明这些毒株可能均起源于同一个毒株，说通过猪的运输流通等在全国流行。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；ＯＲＦ５基因；变异
猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ属于动脉炎病毒科、ＰＲＶ）

猪繁殖与呼吸综合征病毒主要流行毒株检测方法的建立

价值。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；ＯＲＦ５基因；Ｎｓｐ２基因；反转录一聚合酶链反应
中图分类号：￥８５２．６５文献标识码：Ａ文章编号：１００７ — ５０３８（２０１７）０６－０００１ — ０５
续３０个氨基酸的缺失（４８１位和５３３ — ５６１位氨基酸）＿７］。之后的分子流行病学研究显示，ＨＰ — ＰＲＲＳＶ
逐步成为田间流行的优势毒株【５］。２０１３年以来，一种新的ＰＲＲＳＶ变异毒株在田间被检测到，代表性
ＨＰ — ＰＲＲＳＶ的Ｎｓｐ２编码区具有特征性的不连猪繁殖与呼吸综合征（Ｐｏｒｃｉｎｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄ示，ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）是由猪繁殖与呼吸综
郭振华，陈鑫鑫，郭军庆，乔松林
（河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州４５０００２）
摘要：旨在建立针对猪繁殖与呼吸综合征病毒田间主要流行毒株的鉴别诊断方法。通过比对当前田
间主要流行毒株的基因序列，分别设计了针对ＯＲＦ５基因的通用引物和针对Ｎｓｐ２基对引物针对不同的毒株均可以扩增出特异性的目的条带，通用引物可以用来检测田间主要的流行毒株，鉴别引物可以区分当前田间主要流行的不同毒株。所建立的检测方法具有良好的特异性和敏感性，可以方便地应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学监控和快速检测诊断，具有良好的应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆、高效表达与鉴定张秀云;吴斌;肇慧君;贾赟;刘霞;张瑞【期刊名称】《大连工业大学学报》【年(卷),期】2011(030)001【摘要】根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)VR2332株ORF7的全长基因序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR扩增出完整的ORF7基因,并将PCR产物克隆至pMD-18T载体进行测序分析.双酶切测序后重组质粒pMD-18T-N得到目的片段连接至原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-N.再转化至BL21宿主菌,对诱导表达条件(IPTG质量浓度、诱导时间、诱导温度)进行优化.结果显示,在37 ℃、0.2 mmol/L IPTG诱导5 h可实现重组N蛋白的高效表达.该重组N蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,Western-blotting分析显示,重组的N蛋白与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明表达的重组N蛋白具有较好的反应活性.【总页数】5页(P18-22)【作者】张秀云;吴斌;肇慧君;贾赟;刘霞;张瑞【作者单位】大连工业大学生物工程学院,辽宁大连,116034;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;辽宁出入境检验检疫局,辽宁大连,116001;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF7基因的克隆、序列分析及原核表达[J], 梁望旺;徐涤平;熊忠良;刘泽文;杨克礼;伍锐;邓均华;段正赢;余爱冬;唐文娟2.北疆地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因克隆与遗传演化分析 [J], 吴鹏;张勋;梁田;陈新凯;肖媛媛;盛金良3.猪繁殖与呼吸综合征病毒NX-1株ORF5,ORF7基因的克隆 [J], 杜平;刘学荣;黄银君;贺延玉;牟克斌4.猪繁殖与呼吸综合征病毒S-1株ORF5和ORF7基因的克隆及变异分析 [J], 张春玲;张婉华;臧克伟;王英;蒋凤英;邹勇;李春华;何锡忠5.高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与原核表达 [J], 李国旺;苗志国;陈俊杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析

河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异分析董李学;袁万哲;左玉柱;王建昌;王金凤【摘要】In order to recognize the prevalence status of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) and its genetic variation trend in pigs in Hebei Province,the 18 pig farms that were attacked by PRRSV in 10 areas were investigated. Applying the RT-PCR,a total of 23 virus strains with partial loss ofNSP2 gene and complete loss of ORF5 gene were identified. The sequence analysis results showed that all the 23 strains exhibited a 30 discrete amino acid deletion,confirming the prevalence situation of PRRSV variant strain of America type in Hebei Province. According to the phylogenetic tree ofORF5 gene drew by reference to the 23 isolates and the gene sequences published in and outside China,there were 20 isolates belonging to the subgroup that included JXA1 strain,and the other 3 isolates belonged to the subgroup that included DADC30 strain. With the largest variability,the latter 3 isolates would be the main objects of future clinical research. At last,the comparison results of amino acid showed there was much variation in the protein encoded byORF5 gene in the prevalent PRRSV strain in Hebei Province,therefore more attention should be raised in the process of PRRS future clinical diagnosis and prevention and control by vaccine.%为了解河北省猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行情况及毒株遗传变异趋势,应用RT-PCR方法,对河北省10个地区的18个发病猪场进行调查,分别扩增出23株缺失部分NSP2基因和完整ORF5基因的毒株.序列分析结果显示,23株PRRSVNSP2基因均缺失了不连续的30个氨基酸,从而证实河北省存在美洲型PRRSV变异株的流行.23株PRRSV ORF5核苷酸序列与国内外已发表的基因序列绘制的遗传进化树表明:20个毒株与JXA1形成一个基因亚群;而另3个毒株与NADC30毒株形成一个基因亚群,并且变异最大,是以后的主要临床研究对象.推导编码氨基酸的比较结果表明,河北省流行的PRRSV毒株ORF5基因编码蛋白已发生较大变异,需在今后临床诊断与疫苗防控中引起重视.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2018(035)006【总页数】5页(P89-93)【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒;美洲型;基因变异分析;NSP2基因;ORF5基因【作者】董李学;袁万哲;左玉柱;王建昌;王金凤【作者单位】唐山市畜牧水产品质量监测中心,河北唐山 063000;河北农业大学动物医学院,河北保定 071001;河北农业大学动物医学院,河北保定 071001;河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北石家庄 050051;河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北石家庄 050051【正文语种】中文【中图分类】S851.31猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种高度接触性传染病，主要引起怀孕母猪后期流产、早产，产死胎和木乃伊胎等繁殖障碍，仔猪出现呼吸道症状和断奶前死亡率增高，同时还可引起免疫抑制、继发感染及其他疾病免疫失败等[1-2]。

河北省2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析

河北省2010年猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异分析王金凤;王占峰;韩庆安;孙继国【摘要】为了解2010年河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒变异趋势，用RT—PCR 方法对2010年河北省发病猪场的病料进行PRRSV Nsp2和0RF5基因扩增、克隆和测序，利用DNAStar软件对所测序列进行分析。

结果显示，扩增的Nsp2基因氨基酸序列相似性为91．4％～98．8％，与GenBank中参考毒株的氨基酸序列相似性为61．4％～99．4％；扩增的ORF5基因龚基酸序列相似性为95％～99．5％，与VR-2332和MLV的相似性分别为84．6％～88．6％和84．1％-87．6％；从2010年的病料中扩增的%To investigate the variation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in Hebei province, samples collected from six intensive pig farms suffered from PRRSV in 2010 were used for RT-PCR. The ORF5 and Nsp2 genes were subjected to PCR amplifica【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2011(036)004【总页数】5页(P32-36)【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒;Nsp2基因;ORF5基因;变异分析【作者】王金凤;王占峰;韩庆安;孙继国【作者单位】河北农业大学动物科技学院,河北保定071001;北京海淀中海动物保健科技公司,北京100086;河北省动物疫病预防控制中心,河北保定071000;河北农业大学动物科技学院,河北保定071001【正文语种】中文【中图分类】S856猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的以母猪发热、流产，断奶前后仔猪死亡率升高，不同年龄猪呼吸障碍等为临床特征的疾病，它能引起免疫抑制、继发感染及其他疾病的免疫失败等。

河北猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株N基因变异分析及原核表达

河北猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株N基因变异分析及原核表达陈赛娟;刘涛;曹洪战;张斌;付新城;张丽青;孙继国【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2008(031)005【摘要】为了给河北地区预防和控制猪繁殖与呼吸综合征提供理论数据.应用RT-PCR方法特异性扩增HB-3(cz)株的ORF7(N)基因片段,将扩增片段克隆入pMD-T 载体后测序,应用DNAstar分析软件对序列进行分析,并与GenBank中发表的PRRSV毒株序列进行比较.结果显示:HB-3(cz)株与高热病毒株JXAl、HUB2等及传统河北分离株HB-1(sh)氨基酸同源性高达97.6%,属美洲型毒株.将目的片段克隆入原核表达载体pGEX-6P-1,重组质粒pGEX-N转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下成功获得表达,经Western-blotting分析表明:表达的融合蛋白分子量约为39.5 kDa,能与PRRSV的阳性血清发生特异性反应,为PRRSV血清学诊断方法的建立奠定了基础.【总页数】4页(P85-88)【作者】陈赛娟;刘涛;曹洪战;张斌;付新城;张丽青;孙继国【作者单位】河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;商务部流通产业促进中心,北京,100062;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;廊坊市畜牧水产局,河北,廊坊,102800;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001;河北农业大学,动物科技学院,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-4(hs)株ORFS-7基因变异分析 [J], 刘涛;陈赛娟;孙继国;苏霞;王娇;赵泽坤;张平;付琦2.猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株E11105N基因的序列分析与原核表达 [J], 张升波;陈绍品;温贵兰;伍昌华;李天珍;李晨;王开功;文明;龚新勇3.猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究 [J], 刘永宏;张永富;刘月焕;王凤龙;韩春华;林健;王金玲;杨龙峰;赵丽;张秋雨4.猪繁殖与呼吸综合征病毒HB-3(cz)株ORF5基因序列分析及原核表达 [J], 刘涛;陈赛娟;曹洪战;刘子伟;朱子杰;苏霞;孙继国5.河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-3(cz)株ORF5基因变异分析 [J], 刘涛;陈赛娟;张丽青;张秀珊;杜冬华;孙继国;李聪研因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征病毒S-1株ORF5和ORF7基因的克隆及变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒S-1株ORF5和ORF7基因的克隆及变异分析张春玲;张婉华;臧克伟;王英;蒋凤英;邹勇;李春华;何锡忠【期刊名称】《上海农业学报》【年(卷),期】2008(24)2【摘要】PRRSV S-1株经Marc-145复苏后,通过RT-PCR扩增了ORF5和ORF7基因.利用酶切位点将2个基因分别连接到原核表达载体PET-32C中,筛选阳性克隆送测序,序列分析表明:PRRSV S-1株ORF5基因变异性较高,与VR-2332毒株和CH-1a毒株的同源性分别是:核苷酸同源性为91%和89%,氨基酸同源性是87%和85%;ORF7基因相对保守,核苷酸的同源性分别是97%和94%,氨基酸的同源性分别是95%和93%.【总页数】6页(P40-45)【作者】张春玲;张婉华;臧克伟;王英;蒋凤英;邹勇;李春华;何锡忠【作者单位】上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;山东农业大学,泰安,271018;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海,201106【正文语种】中文【中图分类】S828;S855【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)江苏分离株NJGC ORF5基因的克隆及遗传变异分析 [J], 李彬;郭容利;周俊明;倪艳秀;吕立新;毛立;何孔旺;刘彦玲;温立斌;俞正玉;茅爱华;王小敏;张雪寒2.猪繁殖与呼吸综合征病毒NX-1株ORF5,ORF7基因的克隆 [J], 杜平;刘学荣;黄银君;贺延玉;牟克斌3.11株猪繁殖与呼吸综合征病毒中国分离株NSP2、ORF5、ORF7基因的序列分析 [J], Li J;吴艳4.河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-3(cz)株ORF5基因变异分析 [J], 刘涛;陈赛娟;张丽青;张秀珊;杜冬华;孙继国;李聪研5.猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株ORF5基因的克隆与变异分析 [J], 周海范;夏平安;崔保安;柴春霞;张红英;杨霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的变异分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的变异分析高志强;郭鑫;查振林;陈艳红;杨汉春【期刊名称】《农业生物技术学报》【年(卷),期】2004(12)3【摘要】从河北、江西猪场中分离到3株猪繁殖与呼吸综合征病毒(HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002和JX-1/2002).采用RT-PCR方法扩增其完整的ORF5基因片段,进行了序列测定,并与其它5个国内毒株的ORF5基因序列进行了比较和变异分析.所有这些毒株的ORF5基因均编码200个氨基酸,推导的氨基酸相似性在88.2%～99.0%之间.其中BJ-4、S1及J1间的相似性较高,在98%～99%之间;HB-1(sh)/2002,HB-2(sh)/2002,JX-1/2002及CH-1a间的相似性为92%～96%之间.根据ORF5基因核苷酸序列的遗传进化距离,这些毒株可分为两个亚群,BJ-4、S1和J1为一个亚群,与VR2332及疫苗毒株接近;HB-1(sh)/2002、HB-2(sh)/2002、JX-1/2002和CH-1a为另一个亚群.【总页数】5页(P283-287)【作者】高志强;郭鑫;查振林;陈艳红;杨汉春【作者单位】中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京,100094;中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京,100094;中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京,100094;中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京,100094;中国农业大学农业部预防兽医学重点开放实验室,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)江苏分离株NJGC ORF5基因的克隆及遗传变异分析 [J], 李彬;郭容利;周俊明;倪艳秀;吕立新;毛立;何孔旺;刘彦玲;温立斌;俞正玉;茅爱华;王小敏;张雪寒2.2018年广东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因变异分析[J], 陈盛楠; 张海龙; 谢博; 黄良宗; 顾万军3.2019年福建某原种猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的遗传变异分析 [J], 林楚云;刘建奎;林志锋;林日丹;杨小燕;戴爱玲4.2019年福建某原种猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株ORF5基因的遗传变异分析 [J], 林楚云;刘建奎;林志锋;林日丹;杨小燕;戴爱玲5.2019年四川省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析[J], 孔军;朱国坡;康斌;武玉梅;李少丽;邵攀峰;尹忠良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。