丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

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综述：大肠杆菌中重组蛋白的表达：进展与挑战

大肠杆菌中重组蛋白的表达：进展与挑战毫无疑问，重组蛋白在微生物中的表达革新了生物化学领域。

以前，纯化少量的目的蛋白需要处理几千克的动物或植物组织，或是大量的生物体液，这个时代已经一去不返了。

对于每个研究者来说，如果他要开始一个项目，需要某种纯化的蛋白。

他马上就会想到，怎样通过重组表达的方式获得这种蛋白。

目的重组蛋白的大量表达使人们能够对其生物化学性质进行分析，将其应用于工业并发展成为商业化产品。

从理论上来讲，获得重组蛋白的过程相当直接：获得目的基因，克隆到表达载体，转入表达宿主，诱导，纯化。

然而，实际上，事情通常并不是这样。

宿主菌生长差，包涵体的形成，蛋白无活性，甚至无法获得任何蛋白，这些都是实验中会遇到的问题。

在过去，有许多综述详细地介绍了这个课题。

综合来说，这些论文收集了2000多个例子。

然而在重组蛋白表达纯化领域，一直都在进步着。

因此，在本综述中，我们对本领域最近取得的进展做了评述。

同时，对于那些那些对异源表达还不大熟练的研究人员，我们通过回答项目开始就需要解决的问题，提供的许多选择和方法，。

这些选择和方法，在过去的几十年里，曾被成功的用来表达一系列的蛋白。

问题一：选择哪种生物体作为表达宿主？整个过程的开始就是要选择宿主细胞，利用它的蛋白合成机制来获得珍贵的蛋白。

宿主的选择决定了我们以后所需要的技术，包括各种分子工具，仪器或者试剂。

在这些微生物体中，现有的宿主系统包括细菌，酵母，filamentous fungi, 和 unicellular algae。

他们各有优点和缺点，宿主的选择可能取决于我们要表达的蛋白。

例如，如果目的蛋白需要翻译后的修饰，那么我们就要选择真核表达系统。

在本篇综述里，我们主要详细介绍大肠杆菌表达系统。

众所周知，利用大肠杆菌作为宿主具有很多优点。

1.它有无可比拟的快速生长机制，在glucose-salts培养基中，以及在最优的环境条件下，它扩增一倍的时间大约是20分钟。

免疫学抗体中英文对照表

免疫学抗体中英文对照表免疫学B细胞膜表面免疫球蛋白 B cell surface membrane immunoglobulin B因子B factorC反应蛋白 C reactive protein, CRPT3淋巴细胞亚群T3 lymphocyte subpopulationT4淋巴细胞亚群T4 lymphocyte subpopulationT淋巴细胞转化试验T lymphocyte transformation test阿米巴血清学试验ameba serological test白细胞杀菌功能试验leucocyte bactericidal function test 白细胞介素2可溶性受体soluble receptor of interleukin 2白细胞粘附抑制试验leucocyte adherence inhibition test包虫病血清学试验hydatidosis serologica test孢子丝菌病血清学试验sporotrichosis serological test丙型肝炎病毒核酸测定hepatitis C virus nucleic acid test补体1q plement 1q,C1q补体1r plement 1r,C1r补体1s plement 1s,C1s补体1抑制因子plement 1 inhibitor补体2 plement 2,C2补体3 plement 3,C3补体9 plement 9,C9补体受体plement receptor,CR布氏杆菌凝集试验brucell agglutination test超敏反应，变态反应Allergy,hypersensitivity单纯疱疹病毒血清学试验herpes simple_ virus serological test 丁型肝炎病毒核酸测定hepatitis D virus nucleic acid test肥达反应Widal reaction肥大细胞脱颗粒试验mastocyte degranulation test弗氏佐剂Freund"s adjuvant副蛋白免疫学检查paraprotein immunoassay干扰素interferon钩端螺旋体病血清学试验leptospirosis serological test黑热病血清学试验kala-azar serological test鲎试验limulus test化支睾吸虫病血清学试验clonorchiosis serological test蛔虫病血清学试验ascariasis serological testpoliovirus serological test脊髓灰质炎病毒血清学试验甲胎蛋白alpha ferotein, AFP,α-FP巨噬细胞吞噬功能试验macrophage phagocytic function test聚合酶链反应polymerase chain reacton, PCR军团菌血清学试验legionella serological test抗EB病毒抗体anti-Epstein-Barr virus antibody抗IgA抗体anti-IgA antibody抗Q热抗体anti-Q fever antibody抗SS-A抗体，抗RO抗体anti-SS-A antibody, anti-RO antibody抗SS-B抗体anti-SS-B antibody抗白蛋白IgG抗体anti-albumin IgG antibody抗白蛋白IgM抗体anti-albumin IgM antibody抗斑疹伤寒抗体anti-typhus antibody抗甲型肝炎病毒IgG抗体anti-hepatitis A virus IgG antibody抗甲型肝炎病毒IgM抗体anti-hepatitis A virus IgM antibody抗丙型肝炎病毒抗体anti-hepatitis C virus antibody抗丁型肝炎病毒抗体anti-hepatitis D virus antibody抗乙型肝炎病毒e抗体anti-hepatitis B virus e antibody, HBeAb 又称抗HBe抗乙型肝炎病毒表面抗体anti-hepatitis B virus surface antibody,HBsAb又称抗HBs抗乙型肝炎病毒核心IgG抗体anti-hepatitis B virus core IgG antibody 又称抗HBc-IgG抗乙型肝炎病毒核心IgM抗体anti-hepatitis B virus core IgM antibody 又称抗HBc-IgM抗乙型肝炎病毒核心抗体anti-hepatitis B virus core antibody, HBcAb 又称抗HBc抗补体抗体anti-plement antibody抗单链DNA抗体anti-single-stranded DNA antibody抗风疹病毒IgG抗体anti-rubella virus IgG antibody抗风疹病毒IgM抗体anti-rubella virus IgM antibody抗副流感病毒IgG抗体anti-parainfluenza virus IgG antibody抗副流感病毒IgM抗体anti-parainfluenza virus IgM antibody抗肝细胞膜抗体anti-liver cell membrane antibody抗弓形体IgG抗体anti-to_oplasma IgG antibody抗弓形体IgM抗体anti-to_oplasma IgM antibody抗骨骼肌抗体anti-skeletal muscle antibody抗核抗体anti-nuclear antibody, ANA抗核因子anti-nuclear factor,ANF抗核提取物抗体anti-nuclear e_tract antibody抗红细胞抗体anti-erythrocyte antibody抗呼吸道合胞病毒抗体anti-respiratory syncytial virus antibody抗甲状腺球蛋白抗体anti-thyroglobulin antibody抗甲状腺微粒体抗体anti-thyroid-microsome antibody抗结核抗体anti-tuberculosis antibody抗精子抗体anti-sperm antibody抗巨噬细胞抗体anti-macrophage antibody抗巨细胞病毒IgG抗体anti-cytomegalovirus IgG antibody抗巨细胞病毒IgM抗体anti-cytomegalovirus IgM antibody抗狂犬病毒抗体anti-rabies virus antibody抗链球菌溶血素O试验anti-streptolysin O test,ASO test 抗淋巴细胞抗体anti-lymphocyte antibody,ALA抗磷壁酸抗体anti-teichoic acid antibody抗流行性出血热病毒IgG抗体anti-epidemic hemorrhagic fever virus IgG antibody抗流行性出血热病毒IgM抗体anti-epidemic hemorrhagic fever virus IgM antibody抗卵巢抗体anti-ovary antibody抗脑组织抗体anti-brain tissue antibody抗平滑肌抗体anti-smooth muscle antibody抗染色体抗体anti-chromosome antibody抗人类免疫缺陷病毒抗体anti-human immunodeficiency virus antibody 抗腮腺管抗体anti-parotid duct antibody抗肾上腺细胞抗体anti-adrenal cell antibody抗肾小球基底膜抗体anti-glomerular basement membrane antibody抗双链DNA抗体anti-double-strand DNA antibody抗凝血酶Ⅲ抗体anti-trrombine Ⅲ antibody抗生物素蛋白，亲和素avidin抗水痘-带状疱疹病毒抗体anti-varicella-zoster virus antibody抗髓磷脂抗体IgA anti-myelin antibody IgA抗体依赖性细胞介导毒性试验antibody dependent cell-mediated cytoto_in test, ADCC test抗胃壁细胞抗体anti-gastric parietal cell antibody抗戊型肝炎病毒抗体anti-hepatitis E virus antibody抗线粒体抗体anti-mitochondria antibody,AMA抗腺病毒抗体anti-adenovirus antobody抗心肌抗体anti-myocardium antibody抗心磷脂抗体anti-cardiolipin antibody抗血小板相关IgG抗体anti-platelet associated IgG antibody抗胰岛素抗体anti-insulin antibody抗胰岛素受体抗体anti-insulin receptor antibody抗胰岛细胞抗体anti-islet cell antibody抗乙酰胆碱受体抗体anti-acetylcholinergic receptor antibody抗硬皮病抗体anti-scleroderma antibody抗载脂蛋白A1抗体anti-apolipoprotein A1 antibody抗中性粒细胞抗体anti-neutrophil antibody抗中性粒细胞胞质抗体Anti-neutrophil cylasmic antibody,ANCA 抗中性粒细胞颗粒抗体anti-neutrophil granules antibody抗着丝点抗体anti-centromere antibody抗组蛋白抗体anti-histone antibody柯萨奇病毒血清学试验Co_sackievirus serological test莱姆病血清学试验Lyme disease serological test类风湿因子rheumatoid factor,RF冷凝集试验cold agglutination test冷球蛋白cryoglobulin立克次体血清学试验rickettsia serological test淋巴因子活化的杀伤细胞lymphokine activated killer cells, LAK cells 流行性乙型脑炎病毒血清学试验epidemic encephalitis B virus serological test抗血管内皮细胞抗体anti-endothelial cell antibody,AECA抗血友病因子anti-hemophilic factors抗生物素蛋白(亲和素)-生物素复合物avidin biotin ple_,ABC麻疹病毒血清学试验measles virus serological test脉冲场凝胶电泳pulsed-field gel electrophoresis, PFGE酶谱zymogram免疫球蛋白A immunoglobulin A, IgA免疫球蛋白D immunoglobulin D, IgD免疫球蛋白E immunoglobulin E, IgE免疫球蛋白G immunoglobulin G, IgG免疫球蛋白M immunoglobulin M, IgM囊虫病血清学试验cysticercosis serological test尿液轻链试验light chain test in urine农民肺血清学试验farmer"s lung serological test疟疾血清学试验malaria serological test球孢子菌病血清学试验coccidioidomycosis serological test曲霉菌病血清学试验aspergillosis serological test人轮状病毒抗原测定human rotavirus antigen test腮腺炎病毒血清学试验mumpus virus serological test沙眼衣原体血清学试验chlamydia trachomatis serological test嗜碱性粒细胞脱颗粒试验basophilic degranulation test嗜异性凝集试验heterophile agglutination test鼠疫血清学试验plague serological test丝虫病血清学试验filariasis serological test土拉菌病血清学试验tularemia serological test外斐试验Weil-Feli_ reaction外周血α干扰素测定α-interferon determination in peripheralblood戊型肝炎病毒核酸测定hepatitis E virus nucleic acid test限制性片段长度多态性restriction fragment length polymorphism,RFLP新型隐球菌荚膜抗原Cryptococcus neoformans capsular antigen 旋毛虫病血清学试验trichinosis serological test血吸虫病血清学试验schistosomiasis serological test循环免疫复合物测定circulating immunople_ test恙虫病血清学试验scrub typhus (tsutsugamushi disease)serological test乙型肝炎病毒e抗原hepatitis B virus e antigen, HBeAg乙型肝炎病毒表面抗原hepatitis B virus surface antigen, HBsAg乙型肝炎病毒表面抗原前S2蛋白hepatitis B virus surface antigen pre-s2 protein乙型肝炎病毒核心抗原hepatitis B virus core antigen, HBcAg 支原体肺炎血清学试验mycoplasmal pneumonia serological test 植物血凝素Phytohemagglutinin,PHA自然杀伤细胞功能试验natural killer cell function test自身免疫autoimmunity自体凝集autoagglutination组织胞浆菌血清学试验hislasma serological test组织中免疫复合物测定immunople_ test in tissue 免疫学补充（邓耀祖）免疫，免疫性immunity免疫学immunology细胞免疫cellular immunity体液免疫humoral immunity抗体antibody,Ab免疫球蛋白immunoglobulin同种型isotype同种异型allotype独特型idiotype重链，H链heavy chain,H chain轻链，L链light chain,L chain可变区variable region高变区hypervariable region单克隆抗体monoclonal antibody,mAb,McAb补体plement细胞因子cytokine干扰素interferon,IFN白细胞介素interleukine, IL集落刺激因子tumor necrosis factor,CSF生长因子growth factor趋化性细胞因子chemokine（遗传）多态性polymorphism连锁不平衡linkage disequilibrumHLA分型HLA typing白细胞分化抗原leukocyte differentiation antigen 分化群cluster of differentiation,CD粘附分子adhesion molecule选择素selectin钙粘蛋白cadherin自然杀伤细胞natural killer,NK cell抗原提呈细胞Antigen presenting cell,APC树突状细胞dendritic cell,DCT细胞（抗原）受体T cell receptor辅助性T细胞T help cell，ThB细胞（抗原）受体 B cell receptor,BCR抗原antigen免疫原immunogen半抗原hapton载体carrier抗原决定基Antigenic determinant,Ad表位epie共同抗原mon antigen交叉反应cross-reaction易接近性accessibility胸腺依赖性抗原thymus dependent antigen,TD-Ag 胸腺非依赖性抗原thymus independent antigen,TI-Ag 异种抗原_enogenic antigen 同种异体抗原Allogenic antigen自身抗原autoantigen异嗜性抗原heterophilic antigen超抗原superantigen佐剂adjuvant内性抗原andogenous antigen抑制性T细胞Suppressor T dell,Ts变应原allergen速发型超敏反应Immediate hypersensitivity细胞毒性超敏反应cototo_ic hypersensitivity免疫复合物型超敏反应immune-ple_ hypersensitivity 迟发型超敏反应delayed hypersensitivity自身免疫autoimmunity自身免疫病autoimmune disease免疫缺陷病immunodeficiency disease重症联合免疫缺陷综合征severe bined-immunodeficiency disease,SCID 肿瘤抗原tumor antigen(neoantigen)肿瘤特异性抗原tumor specific antigen,TSA 肿瘤相关抗原tumor associated antigen,TAA 胚胎抗原fetal antigen癌胚抗原carcinoembryonic antigen,CEA甲胎蛋白alpha-ferotein宿主抗移植物反应host versus graft reaction,HVGR移植物抗宿主反应graft versus host reaction,GVHR组织配型tissue matching凝集agglutination沉淀precipitation免疫扩散immunodiffusion免疫电泳immunoelectrophoresis免疫荧光immunofluorescence酶联免疫吸附试验enzyme linked immunosorbentassay,ELISA生物素-亲和素biotin-avidin放射免疫测定radioimmunoassay,RIA免疫印迹Western blotting免疫治疗immunotherapy主动免疫治疗active immunotherapy被动免疫治疗passive immunotherapy过继免疫治疗adoptive immunotherapy计划免疫planned immunization抗毒素antito_in抗精子抗体antisperm antibody癌抗原125 cancer antigen 125,CA125癌胚抗原cacinoembryonic antigen,CEA酶免疫测定EIA有需要的相关抗体可以在Fantibody全球抗体搜索引擎进行咨询doc/b4a6f118f18583d04964599f.全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来于全球范围的研究机构与商业公司。

2023年高级临床医学检验主治技师专业技术知识考试题库附含答案

2023年高级临床医学检验主治技师专业技术知识考试题库（附含答案）一、单选题1、老年男性患者，因不明原因的发热人院，应优先选择A.尿培养B.痰培养C.血培养D.脑脊液培养E.骨髓培养正确答案：C【解析】因为不明原因的发热，主要原因可能是由于血液感染，故应在使用抗菌药物前、发热初期或高热期采集血液进行培养。

2、不属于临床实验室范畴的是A.微生物学实验室B.细胞学检验实验室C.临床病理实验室D.化学检验实验室E.血液免疫学实验室正确答案：C3、丙型肝炎病毒(HCV)基因组中变异最大的部位位于A.5端非编码区B.核心蛋白区C.包膜蛋白区D.非结构蛋白编码区E.3端非编码区正确答案：C【解析】考点：HCV病毒的生物学性状。

解析HCV为长约9、4kb的单股正链RNA病毒，其中E1、E2区是HCV基因组中变异最大的部位，其编码的包膜糖蛋白可能刺激机体产生保护性抗体。

4、在鸡胚卵黄囊内培养可形成芽胞的是A.贝纳柯克斯体B.立氏立克次体C.羌虫病立克次体D.腺热埃立克次体E.汉赛巴通体正确答案：A【解析】立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，结构与革兰阴性菌非常相似。

贝纳柯克斯体有荚膜,约20nm厚，呈绒毛状。

鸡胚是培养立克次体的极好宿主。

在鸡胚卵黄囊或细胞内培养的贝纳柯克斯体均可有芽胞形成，用芽胞染色法可着色，但不合此咤二竣酸。

5、下列哪一类细胞产生IgEA.T淋巴细胞B.B淋巴细胞C.巨噬细胞D.肥大细胞E.嗜碱性粒细胞正确答案：B【解析】免疫球蛋白的生物学活性包括亲细胞作用。

6、下列哪项可导致血清总蛋白增高A.消耗增加B,营养不良C.丢失过多D∙脱水E.肝功能障碍正确答案：D【解析】急性失水时，血清总蛋白浓度可明显升高。

7、一位年轻的未婚妇女因子宫出血过多住院。

患者主诉子宫出血与她的月经有关，去年就发生过几次。

医师按照其主诉施行相应的治疗。

一位正在妇科实习的护士和患者很谈得来，成为无话不谈的好朋友。

丙型肝炎病毒实验室检测技术(63页)

重组免疫印迹法（RIBA）
凯荣、MP、厦大与万泰合作的。
HCV抗原检测试剂
试剂名称生产厂商
丙型肝炎病毒抗原测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法） Murex Ag/Ab combination assay(Abbott） *Monolisa HCV 丙型肝炎病毒核心抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）丙型肝炎病毒抗原检测试剂盒（酶联免疫法）
丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)水平变化可反映肝细胞损害程度，但ALT、 AST水平与HCV感染引起的肝组织炎症分度和病情的严重程度不一定平行；急性丙型肝炎患者的ALT和AST水平一般较低，但也有较高者。急性丙型肝炎患者的血清白蛋白、凝血酶原活动度和胆碱酯酶活性降低较少，但在病程较长的慢性肝炎、肝硬化或重型肝炎时可明显降低，其降低程度与疾病的严重程度成正比。
试剂名称生产厂商最低检测限iuml备注cobasampliscreenhcv20roche罗氏25cobastaqscreenmpxroche罗氏107cobastaqscreenmpx20roche罗氏107与一代相比二代能够直接鉴别出hbvhcv或hiv阳性procleixultrioassaychiron诺华血源筛查hbvhcvhiv一1病毒核酸检测试剂盒pcr一荧光探针法100hbvhcvhiv1bloodscreeningrealtimepcrkit916nucleicacidtestkithbvhcvhivrealtimepcr100人类免疫缺陷病毒hiv1丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒pcr荧光法233hcv核酸定性检测血筛试剂尚未在中国上市试剂名称生产厂商最低检测限iuml线性范围iumlcobasampliprepcobastaqmanhcvtestroche罗氏1543e0169e07cobasampliprepcobastaqmanhcvtest20roche罗氏国内未见此资料amplicorhcvmonitor20roche罗氏内未见此资料50e0250e05cobastaqmanhcvhpsroche罗氏1528e0114e09abbottrealtimehcv1212e0110e08versanthcvrna30西门子国内未见此资料615e0277e06丙型肝炎病毒hcv核酸定量检测试剂盒pcr荧光探针法50010e0350e07丙型肝炎病毒核酸扩增荧光pcr定量检测试剂盒50010e0310e07丙型肝炎病毒rna定量荧光pcr检测试剂盒艾康生物50010e0380e08丙型肝炎病毒rna定量检测试剂盒磁珠法东北制药2510e0210e08hcv核酸定量检测试剂试剂名称生产厂商区分亚型丙型肝炎病毒基因分型检测试剂盒pcr反向点杂交法1b2a3a3b6ahcv基因分型测定试剂盒荧光pcr法上海之江生物仅能区分i型versanthcvgenotypeassaylipa20西门子6个型均能区trugenehcvgenotypingassay西门子6个型均能区abbottrealtimehcvgenetyping仅能区分1a和1b中国公共卫生杂志河南数据河南省175岁人群的hcv抗体hcvrna调整流行率分别为064035

丙型肝炎病毒基因分型的研究进展

丙型肝炎病毒基因分型的研究进展解莹;谢晨【摘要】丙型肝炎病毒是一个高度异质性的RNA病毒,目前可分为6个基因型与不同的亚型.本文就 HCV基因型构成、HCV基因分型的检测方法与命名、HCV基因型的流行病学的意义、HCV基因型与疾病严重性、急性HCV感染的转归、IFN-α疗效、HCV基因分型与疫苗的研制等有关的研究作一综述.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2010(032)004【总页数】5页(P470-474)【关键词】丙型肝炎病毒;基因分型;研究进展【作者】解莹;谢晨【作者单位】大连医科大学附属第二医院,传染科,辽宁,大连,116023;大连医科大学附属第二医院,传染科,辽宁,大连,116023【正文语种】中文【中图分类】R512.6+3丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染呈全球分布，全世界人群HCV感染率为3.0 %(0.1%～10%)。

在中国HCV的感染率为3.2%，约3800万。

近年来，中国丙型肝炎的诊断率在不断的提高，丙型肝炎新报告病例也不断增加[1]。

HCV 感染后病情隐匿，50%～80%会转变成慢性肝炎，如未经合理治疗，其中10%～30%经10～20年后会发展成肝硬化，1%～3%会发展成原发性肝癌[2,3]，严重危害患者的健康和生命。

HCV具有高度异质性，不同地区、不同患者，甚至同一患者在不同病程中HCV分离株，无论是核苷酸序列，还是氨基酸序列均有显著差异[4-6]。

本文就丙型肝炎病毒基因分型及其临床意义作一综述。

1 HCV基因型1.1 HCV基因型构成20世纪70年代初就提出了非甲非乙型肝炎(NANB肝炎)的概念，1975年，英国Lancet杂志首次使用这个名词。

1989年，美国Chiron公司Choo[7]等先采用分子生物学技术成功地将HCV cDNA克隆成功，并在日本东京召开的“国际非甲非乙型肝炎和经血传播的传染病学术会议”上正式命名HCV。

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达¹100039北京解放军第302医院成军施双双钟彦伟夏小兵王刚王琳刘妍陈菊梅摘要利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体(ScF v)的原核表达载体,并在大肠杆菌JM109中表达可溶性的HCV-core-ScFv。

以重组的HCV核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有HCV-core-ScFv基因的噬菌体克隆。

从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经NcoI/Not I酶切鉴定,该ScFv基因由750bp组成。

将其亚克隆到pCAN TA B5E表达载体中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒进行DN A序列测定,符合ScF v的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。

I PT G诱导转化的大肠杆菌JM109,在其培养上清中获得了可溶性HCV-core-ScFv的表达。

酶联免疫吸附法(EL ISA)证实表达的HCV-core-ScFv具有重组HCV核心蛋白的反应活性和特异性。

对转化的JM109大肠杆菌上清中表达的HCV-co re-ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAG E),证实表达的HCV-core-ScFv的分子量为28kDa。

为应用HCV-core-ScF v进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

关键词丙型肝炎病毒;核心蛋白;单链可变区抗体;表达中国图书资料分类号Q78EXPRESSION OF SOLUBLE HUMAN ScFv AGAINST C ORE PROTEIN OF HEPATITIS C VIRUS IN E COLICheng Jun,Shi Shuangshuang,Zhong Yanw ei et al.Gene T herapy Research Center, Institute of Infectious Diseases,The302Hospital of PLA,Beijing100039 Abstract T o construct expr essive vector for human ScF v against core protein of hepatitis C vir us(HCV-core-ScF v),and to ex press soluble HCV-core-ScF v in E.coli JM109.U sing phage display technique,the recombinant phages were panned by recombinant core antigen which was coated in a microtiter plate,and after fiv e rounds of biopanning,86 clones were identified specific to cor e antig en.750bp fr ag ment could be released from the plasmid of posit ive phage clones,and the sequence analysis indicated that we hav e obrained the ScFv DN A fragment.T hen DN A fragment was inserted into the expressive vector pCA NT AB5E,and E.coli host JM109was transfor med and induced by IPT G.T he specificity of ScFv in the cultur e medium was ev aluated by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).T he molecular weig ht of expressed HCV-core-ScFv protein is28000dalton as deter mined w ith the aid of SDS-polyacr ymide gel elec-trophoresis(PAG E).T he ex pressed HCV-cor e-ScFv protein w ill be useful in the immunohi stochemical study of liver tissue fr om patients w ith hepatit i s C and gene therapy against HCV infection.Key words HCV;core,single chain Fv ant ibody;expression丙型肝炎病毒(HCV)感染的抗病毒治疗,目前除了部分病人对重组干扰素A(IFN A)具有一定的治疗反应以外,还没有更为确切的治疗方法。

抗人Clq轻链可变区基因在E．coli中的表达

抗人Clq轻链可变区基因在E．coli中的表达
陈克敏;朱锡华
【期刊名称】《免疫学杂志》
【年(卷),期】1995(11)3
【摘要】应用基因工程技术，将抗人Ｃｌｑ轻链可变区基因（ＣｌｑＶ＿Ｌ）由重组质粒ｐＧＥＭ－ＣｌｑＶ＿Ｌ中分离，克隆进表达载体ｐＪＬＡ５０２。

该表达载体含ＣＩＴｓ８５７抑制子基因，通过开温诱导法，重组表达子在宿主菌ＨＢ１０１中表达，获得抗人Ｃｌｑ轻链可变区片段，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明其分子量范围为１２～１３ＫＤ。

这为进一步抗人Ｃｌｑ小抗体的表达积累了经验，有利于用于抗原－抗体结构功能的研究。

【总页数】4页(P147-149)
【关键词】轻链可变区;基因表达;单克隆抗体;大肠杆菌
【作者】陈克敏;朱锡华
【作者单位】第三军医大学免疫学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11;R392.2
【相关文献】
1.抗人纤维蛋白单克隆抗体重链和轻链可变区基因克隆和表达 [J], 宋增璇;蔡英林
2.抗人膀胱癌单克隆抗体轻链可变区基因的克隆及其原核表达载体的构建 [J], 陈家存;张俊杰;温儒民;薛松;胡书群;孙亚峰;裴冬生
3.抗人Clq单克隆抗体轻链可变区基因的克隆及序列测定 [J], 陈克敏;朱锡华
4.抗人C(1-INH) McAb轻、重链可变区基因的克隆及其在E.coli中表达的研究[J], 高宁;朱锡华
5.抗人C_1q轻链可变区基因在DH_（5α）中的表达及序列同源性分析 [J], 陈克敏;朱锡华
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【疾病名】丙型病毒性肝炎【英文名】viralhepatitistypeC【缩写】【别名】C

【疾病名】丙型病毒性肝炎【英文名】viral hepatitis type C【缩写】【别名】C hepatitis；丙型肝炎；肠道外传播性非早非乙型病毒性肝炎【ICD号】B17.1【概述】丙型病毒性肝炎(viral hepatitis type C，HC简称丙型肝炎)，系丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的疾病，主要经血源性传播。

临床表现有发热、消化道症状及肝功能异常等。

与乙型肝炎类似，但较轻。

多数病例呈亚临床型，慢性化程度较为严重，也可导致暴发性肝衰竭。

多见于与其他病毒合并感染者。

【流行病学】HCV呈世界性分布，但不平衡。

南欧、中东、南美和部分亚洲国家人群抗-HCV阳性率较高，西欧、北美诸国和澳大利亚人群抗-HCV阳性率较低。

据估计，目前全世界至少有一亿HCV携带者，每年新发病例在美国和西欧各为17万，日本为35万，并有上升趋势。

我国1992～1995年全国30个省、市、自治区调查结果，丙肝流行率为3.2%，其中辽宁省最高(5.1%)，上海最低(0.9%)。

高峰区集中在15岁以上年龄段。

丙型病毒性肝炎的传染源是病人和无症状病毒携带者，携带HCV的供全血与供血浆人员的传染源作用尤其重要。

HCV的传播途径主要有以下几方面：1.经血传播 HCV主要经血液或血液制品传播。

输血后HCV感染率国内外报告差异较大，可能与血源、输血量、人群HCV携带率等因素有关。

HCV经血液制品传播也屡见不鲜。

我国曾发生因单采血浆回输红细胞过程中，血液交叉污染引起HCV的传播及输入美国进口的Ⅷ因子引起的丙型肝炎暴发。

经常暴露血液者，如血友病患者、妇产科、外科医生、手术者、胸外手术体外循环患者、肾移植血液透析患者及肿瘤患者，输入大量库血或多次输血均极易感染丙型肝炎。

静脉毒瘾者亦是HCV感染的高危人群。

据云南昆明441名药瘾者分析，抗-HCV阳性率为60.54%。

2.性接触传播关于丙型肝炎的性接触传播说法不尽相同，但比较倾向性的意见仍认为HCV的性接触传播不容忽视。

重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化

高中组11年级生物化学3人项目重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化重组蛋白IFNGA在大肠杆菌中的表达与纯化摘要：干扰素γ（Interferon gamma，IFN-γ）是体内重要的细胞因子，能够通过调控免疫相关基因的转录协调机体的免疫反应，具有抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力能功能。

目前对于IFN-α、IFN-β重组表达的较多，而关于IFN-γ 蛋白的纯化表达较少.因此,本研究使用PCR方法扩增IFN-γ基因，将IFN-γ基因分别插入原核表达载体pET-30构建重组表达质粒pET-30--IFN-γ，转化大肠杆菌BL21和Rosetta菌株，在IPTG诱导下表达IFN-γ，SDS-PAGE分析重组表达蛋白。

结果表明：成功构建重组表达质粒pET-30-IFN-γ；表达产物主要以包涵体形式存在；经Ni2+-NTA亲和层析纯化，获得高纯度重组蛋白。

本实验纯化的蛋白有望在今后用于医学和生物学研究中。

关键词：干扰素；IFN-γ 蛋白；大肠杆菌表达系统；重组表达；蛋白纯化；一、研究背景干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒（比如：乙肝病毒）的复制。

其类型分为三类，α-（白细胞）型、β-（成纤维细胞）型，γ-（淋巴细胞）型；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。

干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。

它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。

其中，IFN-γ是体内重要的免疫调节因子，能通过与细胞表面受体结合，诱导病毒感染细胞产生多种抗病毒蛋白，使细胞内产生抗病毒状态而发挥抗病毒作用。

在诱导效应因子表达的同时，由于IFN-γ能够提高细胞表面MHC分子的表达，增强免疫活性细胞对病原体的杀伤作用，从而协同促进了机体对病毒感染细胞的杀灭，而使机体处于抗病毒状态。

抗人乙酰胆碱受体单链抗体1956#在大肠杆菌中的可溶性表达

论著文章编号:1007-8738(2008)03-0292-04抗人乙酰胆碱受体单链抗体1956#在大肠杆菌中的可溶性表达宋　琛1,徐　江1,张芳琳2,白文涛2,李柱一13(第四军医大学:1唐都医院神经内科,陕西西安710038;2基础部病原生物学教研室,陕西西安710032)收稿日期:2007-09-11;　接受日期:2007-10-08基金项目国家自然科学基金资助项目(356)作者简介宋　琛(8),女,山东日照人,硕士T 283382;2@3,2z y @f [摘要]　目的:重组表达抗人乙酰胆碱受体(ACh R )单链抗体(scFv)1956#,提高scFv1956#的可溶性表达量。

方法:用PCR 扩增含抗人ACh R scFv 1956#的载体pHE N1中的s cFv 1956#结构基因,并将其插入到原核表达载体pET44a (+)。

用重新构建的载体转化 E.coli BL21(DE3)pLysS,IPTG 诱导表达。

用SDS 2PAGE 来比较更换载体及不同温度和时间对可溶性表达量的影响,并通过W estern bl ot 进行鉴定。

结果:PCR 产物大小为785bp,与预计相符;所构建质粒经测序证实scFv1956#核苷酸序列正确,并正确插入载体pET 44a (+)。

诱导后得到的可溶性表达量优于原载体pHE N1。

结论:载体pET 44a(+)表达的端融蛋白Nus A 可以帮助scFv 1956#的正确折叠,从而获得大量可溶性表达。

低温长时间诱导有助于提高可溶性表达的量。

[关键词]重症肌无力;乙酰胆碱受体;单链抗体;Nus A [中图分类号]R392.11 [文献标识码]B 重症肌无力(m yasthenia gravis,MG )是由乙酰胆碱受体抗体(AChR Ab )介导,并有补体参与的自身免疫性疾病[1]。

神经肌肉接头(neur om uscular junc 2ti on,N MJ)处,位于突触后膜的乙酰胆碱受体(AchR )受到自身抗体AchR Ab 攻击:一方面,二价的AchR Ab 与AchR 的α亚单位结合后与其交联,拉近AchR ,加速受体内化、降解[2](抗原调变作用antigen modu 2lation,A M );另一方面,AchR A b 的Fc 段可以激活补体系统,使大量的补体沉积于N MJ 处,溶解、破坏突触后膜和AchR ,导致突触后膜萎缩[3]。

外源蛋白在大肠杆菌中的表达

外源蛋白在大肠杆菌中的表达一、引言外源蛋白是指不属于宿主生物体自身的蛋白质，通常是由其他生物体合成的蛋白质。

在大肠杆菌中表达外源蛋白已经成为了基因工程和生物技术领域中的一个重要研究方向。

本文将从大肠杆菌表达外源蛋白的原理、方法、策略等方面进行详细阐述。

二、原理1. 大肠杆菌表达系统原理大肠杆菌表达系统是指利用大肠杆菌作为宿主细胞，通过转化外源DNA进入细胞，使其在细胞内得到表达并产生相应的蛋白质。

这个系统包括三个部分：载体、宿主细胞和诱导剂。

2. 质粒载体质粒载体是指一种环状DNA分子，可以携带外源DNA序列并在大肠杆菌中进行复制和表达。

常用的载体有pUC19、pET28a等。

3. 宿主细胞宿主细胞是指被转化了质粒载体的大肠杆菌细胞。

常用的宿主细胞有BL21(DE3)等。

4. 诱导剂诱导剂是指在宿主细胞中引发表达外源蛋白的物质。

常用的诱导剂有IPTG、L-arabinose等。

三、方法1. 克隆外源DNA序列到质粒载体中将外源DNA序列克隆到质粒载体中，形成表达载体。

常用的方法有限制性酶切和连接法、PCR扩增法等。

2. 将表达载体转化到宿主细胞中将表达载体通过热激转化或电转化等方法导入到宿主细胞中，使其在细胞内进行复制和表达。

3. 选择正常表达的克隆通过筛选，选择出正常表达目标蛋白的克隆。

常用的筛选方法有PCR 检测、Western blotting等。

4. 诱导表达目标蛋白在选定的克隆中加入适量的诱导剂，使其开始表达目标蛋白。

通常在温度、时间、浓度等方面进行调节，以得到最佳效果。

四、策略1. 选择合适的载体和宿主细胞根据需要表达的外源蛋白的不同，选择适合的载体和宿主细胞。

例如，如果需要表达带有His标签的蛋白质，可以选择pET28a载体和BL21(DE3)宿主细胞。

2. 优化表达条件通过调节温度、时间、浓度等参数来优化表达条件，以提高目标蛋白的表达量和纯度。

3. 联合表达将多个外源蛋白基因克隆到同一个载体中，使其在同一宿主细胞中进行联合表达。

真核基因在大肠杆菌中的表达形式

真核基因在大肠杆菌中的表达形式大肠杆菌被内膜和外膜隔成3个腔：胞内、周质和胞外，表达的蛋白定位于这3个腔内。

真核基因在大肠杆菌的表达形式根据表达产物的定位一般可分为两类：胞内表达和蛋白分泌表达。

胞内表达是最主要的表达形式，表达产物以可溶性蛋白和/或不溶性的包涵体形式存在于大肠杆菌细胞内。

而根据表达产物本身的性质又分为融合表达和非融合表达。

一、胞内表达1、非融合表达非融合表达即直接表达天然蛋白，所表达的真核生物蛋白肽链的N端不含有任何原核肽段。

真核基因通常缺乏能被原核生物的转录和翻译系统识别的序列，包括启动子、有效地核糖体结合位点，有时还缺乏ATG起始密码子和转录终止子，因此必须插入带有这些调控序列的表达载体方能表达。

有时，非融合表达不能产生目的蛋白，尤其是目的蛋白的氨基酸含有甲硫氨酸时。

由于甲硫氨酸是由ATG编码的，在大肠杆菌中，氨基端的甲硫氨酸会被不同程度地去除。

此外，非融合蛋白易被宿主蛋白酶破坏，产生无活性的蛋白，这是影响表达效率的重要因素。

克服的方法有：①采用Ion-营养缺陷型宿主。

大肠杆菌蛋白酶的合成主要依赖于黄嘌呤核苷（Ion），用Ion-宿主，使蛋白酶不能合成，从而保护真核蛋白；②克隆Pin基因。

T4噬菌体Pin基因产物为细菌蛋白酶抑制剂，将Pin基因克隆到质粒上，并转化大肠杆菌，可保护真核蛋白。

2、融合表达融合表达即表达的真核蛋白肽链N端含原核生物肽段，融合表达的方法是将真核基因插入启动子后已证实能高效表达的原核结构基因的下游，以产生融合蛋白的方式表达目的基因。

由于融合基因5'端为表达载体中的原核基因序列，已优化的翻译起始区的二级结构不受插入外源基因的干扰，因此，融合表达的效率高。

需要注意的是，插入基因的转录方向和阅读框架必须与原核片段的阅读框架相吻合，不能产生移码，否则不能表达。

融合蛋白需经处理后方能释放出真核蛋白，常用的后处理方法有溴化氰和蛋白酶裂解，这就要求融合蛋白在其原核肽段与目的蛋白间应含有能被溴化氰和蛋白酶裂解的序列，而且目的蛋白内部不能含有溴化氰和蛋白酶切割位点。

荧光蛋白基因在大肠杆菌中的表达与检测

绿色荧光蛋白基因在大肠杆菌中的表达与检测一、背景介绍1．绿色荧光蛋白1955年，Davenport和Nicol 在太平洋海里的一种发光生物—维多利亚水母(Aequorea victoria)中发现并发表了荧光蛋白的生物发光现象，但是对生物发光现象的机理并不了解。

1962年，日本科学家下村修在水母中纯化鉴定出了一种能催化化学发光的蛋白质分子并将其命名为aequorin，aequorin能将化学能转化为光能，从而产生出波长为470nm的蓝色光(lmax=470nm)，但是水母发出的光是独有的绿色，因此水母发光的蛋白质并非aequorin。

与此同时，发现和分离了一个受紫外线激发能发出绿色荧光的蛋白质—绿色荧光蛋白(GFP)。

1971年，Morin和Hastings提出了GFP这个名称。

1985到1992年间，科学家Douglas Prasher 测定完成了aequorin 和GFP的基因和蛋白质序列，并通过蛋白质序列分析和核磁共振分光术(NMR spectroscopy)确定了GFP发光位点。

1994年，美国科学家钱永健开始改造GFP，目前所用的大多数是钱永健实验室改造后的变种，有的荧光更强，有的可激活、变色。

1996年，解析得到了GFP的晶体结构，它的发光过程是也在日后的应用中得到了解答。

纵观整个过程，从1961年到1974年，下村修的研究遥遥领先，却很少有人注意。

在1974年以后，特别是八十年代后，绿色荧光蛋白的研究得到了广泛的重视和发展。

绿色荧光蛋白，分子质量约为28kDa，由238个氨基酸构成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团，经共价键连接而成对羟苯甲基咪唑烷酮，它可以被光激发产生荧光，是主要发光的位置。

绿色荧光蛋白分子的形状呈圆柱形，就像一个桶，发光的基团位于桶中央，因此，它可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”。

其发光团的形成不具有物种专一性，发出的荧光稳定，且不需要依赖其他基质而发光。

几种单克隆抗体表位的分析方法综述-免疫学论文-基础医学论文-医学论文

几种单克隆抗体表位的分析方法综述-免疫学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——摘要：单克隆抗体具有高度均一性及对靶分子的高亲和性、特异性，已广泛应用于自身免疫性疾病、炎性疾病和癌症的治疗。

单克隆抗体与相应抗原的反应性决定于其所识别的抗原表位，确定相应表位在抗原结构上的位置是单克隆抗体筛选中的关键步骤。

本文主要对几种单克隆抗体表位的分析方法，包括ELISA法、生物酶解法及化学切割法、噬菌体随机肽库、X-射线晶体学、丙氨酸扫描、氢氘交换质谱（hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry, HDX-MS）、生物信息学表位预测方法的原理、特点及研究进展作一综述。

关键词：单克隆抗体；抗原表位；酶联免疫吸附试验；噬菌体随机肽库；X-射线晶体学；丙氨酸扫描；氢氘交换质谱；生物信息学；单克隆抗体技术的出现不仅促进了免疫学的发展，也促进了许多其他学科的发展，该技术广泛用于医学领域，已成为重要的临床诊断手段和有效的药物治疗方法[1], 特别是治疗性单克隆抗体已成为近几年来生物制药业发展最快的领域之一[2], 同时，也为一些新技术提供了基础平台，如抗体偶联药物[3]、双特异性抗体[4]及新兴的CAR-T细胞治疗[5-6].由于单克隆抗体具有高度均一性及对靶分子的高亲和性、特异性，极大改变了医学实践，提高了病患的生存质量，挽救了更多患者的生命。

单克隆抗体作为一种治疗恶性肿瘤和炎症性疾病的被动免疫制剂进入临床使用，再进一步发展至其他领域，包括神经系统疾病（如阿尔兹海默病等）及自身免疫疾病（如红斑狼疮等）[7].抗体功能取决于其与靶抗原结合的表位，表位是抗原的一部分，与抗体的可变区结合，与不同表位结合发挥特定的功能，这些功能可能表现为抑制活性或激活某个信号等。

单克隆抗体的表位分析能促进抗体治疗的发展，指导疫苗的设计，评估免疫者体内保护性抗体的反应，或是定位抗菌剂作用于病原微生物的靶点[8].单克隆抗体与相应抗原的反应性决定于其所识别的抗原表位，确定相应表位在抗原结构上的位置是单克隆抗体筛选中关键步骤[9].同时，可进一步分析这类表位的差异，正确评价单克隆抗体的特异性和交叉反应性，可用于评价某抗原表位是某种菌株不同血清型的共同表位，还是特异表位。

牛病毒性腹泻病毒E2抗体的制备

收稿日期：2021-03-09基金项目：山东省重点研发项目（2017GNC10125，2019GSF107020）作者简介：李胜文，女，硕士研究生，细胞生物学专业通信作者：何成强，E-mail：*****************.cn ·简报·牛病毒性腹泻病毒E2抗体的制备摘要：为获得牛病毒性腹泻病毒（BVDV ）E2蛋白的多克隆抗体，本研究截短了BVDV E2氨基端前600个碱基，并构建原核表达载体pET28a-E2，优化E2序列并将重组载体转化到BL21感受态细胞中。

37℃、1 mmol/L IPTG 条件下诱导4 h ，SDS-PAGE 凝胶电泳观察在15 kDa 处表达目的蛋白。

Ni-NTA 亲和层析纯化E2蛋白并免疫小鼠制备鼠抗血清。

以获得的血清为一抗，Western blot 检测pET28a-E2在BL21中表达的总蛋白，证明免疫性良好。

利用BVDV 感染MDBK 细胞，Western blot 成功检测到MDBK 细胞表达的E2蛋白，证明E2抗体具有良好的特异性。

ELISA 检测E2多克隆抗体的效价达1∶128 000。

本研究成功制备出BVDV E2多克隆抗体，为进一步研究该蛋白的功能及BVDV 活载体疫苗的鉴定提供了技术和材料支持。

关键词：牛病毒性腹泻病毒；E2基因；原核表达；多克隆抗体中图分类号：S852.65文献标志码：B文章编号：1674-6422（2023）04-0189-06Preparation of E2 Antibodies Against Bovine Viral Diarrhea VirusLI Shengwen, WANG Wei, ZHAO Wendong, DING Naizheng, WANG Hongmei,HE Hongbin, HE Chengqiang(Shandong Key Laboratory of Animal Resistance, College of Life Sciences, Shandong Normal University, Jinan 250014, China)李胜文，王炜，赵文栋，丁乃峥，王洪梅，何洪彬，何成强（山东师范大学生命科学学院山东省动物抗性重点实验室，济南250014）Abstract: In order to obtain the polyclonal antibody against bovine viral diarrhea virus E2 protein, in this study, the ﬁ rst 600 bp of the amino terminal of BVDV E2 was truncated and the prokaryotic expression vector pET28a-E2 was constructed, the E2 sequence was optimized, and the recombinant vector was transformed into BL21 capable cells. The target protein was induced at 37℃ and 1mmol/L IPTG for 4 h, SDS-PAGE gel electrophoresis was used to observe the expression of target protein at 15 kDa. Ni-NTA affinity chromatography was used to purify protein and immunize mice to prepare anti-serum. The prepared serum was used as the primary antibody, Western blot to detect the total protein expressed by pET28a-E2 in BL21, which proved that the immunity was good. Using BVDV to infect MDBK cells, Western blot successfully detected the E2 protein expressed by MDBK cells, which proved that the prepared had good speciﬁ city. The titer of polyclonal antibody against E2 was 1: 128 000 by ELISA. This study successfully prepared the corresponding E2 polyclonal antibody, which provided technical and material support for further study of the function of the protein and the identiﬁ cation of BVDV live vector vaccine.Key words: Bovine viral diarrhea virus; E2 gene; prokaryotic expression; polyclonal antibodiesChinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报2023,31(4):189-194牛病毒性腹泻（bovine viral diarrhea, BVD）是由牛病毒性腹泻病毒[1]（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）引发牛产生的以腹泻、流产、持续性感染（PI）[2]为临床症状的重大疾病，对养殖业造成了严重的经济损失[1-2]。

Nanog蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及发酵优化

Nanog蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及发酵优化摘要：Nanog蛋白能够维持胚胎干细胞的自我更新与多能性，是关键的转录因子。

目前Nanog蛋白的体外生产形式主要通过微生物进行异源表达，为了能够高效制备可溶性的人源Nanog蛋白，降低Nanog蛋白的应用成本，本研究通过分子克隆技术构建重组大肠杆菌，通过IPTG诱导来进行可溶性的融合表达。

关键词：Nanog;原核表达;蛋白质纯化;发酵优化Nanog蛋白于2003年被发现，一直以来主要通过动物细胞分离提取获得，这种获取方式的缺点在于过程过于繁琐且产率较低。

现阶段已经成功通过大肠杆菌实现了小鼠来源的Nanog蛋白表达，但其产物是包涵体。

通过大肠杆菌实现的人源Nanog假基因的蛋白原核表达，产物也是包涵体。

虽然目前市面上已经有人源Nanog蛋白销售，但并没有人源Nanog蛋白表达的相关研究报道，而且人源Nanog蛋白的售价十分昂贵，为了降低其应用成本和促进医学实验研究，便于后期大量制备Nanog多克隆抗体，本次研究通过pET32a-Nanog构建重组质粒转入到大肠杆菌中，实现人源Nanog蛋白和硫氧还蛋白的可溶性容和表达，最终通过肠激酶酶切后得到人源Nanog蛋白，通过摇瓶来对诱导温度、诱导剂含量以及补料碳源进行优化，在15L的发酵罐上进行补料发酵的分批考察，对不同的温度控制和溶氧水平对菌体产蛋白的影响进行观察，为后期大规模制备人源Nanog蛋白和多克隆抗体打下良好基础。

1、材料与方法1.1实验材料1.1.1 菌株和质粒大肠杆菌、载体和均为本实验室保存。

1.1.2 试剂与培养基（1）种子培养基：胰蛋白胨、酵母提取物均在温度下进行的灭菌处理。

（2）斜面保藏培养基：胰蛋白胨酵母提取物、琼脂均在温度下进行的灭菌处理。

（3）发酵培养基：葡萄糖蛋白胨酵母粉5g/L，均在温度下进行的灭菌处理。

（4）补料培养基：的甘油溶液。

（5）试剂：加拿大产聚合酶、限制性内切酶；国产酵母膏、胰蛋白胨、质粒小量提取试剂盒、DNA片段纯化试剂盒、胶回收试剂盒；国产氨苄霉素、免抗Nanog多克隆抗体及羊抗兔的二抗、核糖核酸酶。

计算机检索基础知识 09-11

肝细胞癌 and 破裂 and CT not 动脉期
2）组配副主题词，提高检索的专指性。
HIV感染/预防与控制
3）限制检索词出现的字段
标题：HIV感染
4）选用词表中更专指的下位词
性传播疾病性传播疾病, 病毒性 HIV感染
获得性免疫缺陷综合征
分类 R186.3; R512.910.25; R512.910.3 号
肝炎灭活疫苗肝炎减毒活疫苗
示例 2
词尾替代（PubMed）：
名称截词符运算符 “ * ”
Truncation Symbol
逻辑关系
替代任意多个字符
举例
结果
Immun* immune a.免疫的 n.免疫
者） immunity n.免疫力;免疫性） immunization n.免疫 immuno(immunochemistry) immunology n.免疫学
运算符——字段限定符
• 例：检索昆明医学院李树清2008年发表在《中国病理生理杂志》上的文献
1/2 • 限制字段【题名】缺血后适应对树鼬海马CA1区脑血流及星形胶质细胞活化的影响及可能机制 – 机构：昆明医学院模糊检索【作者】李树清罗海芸 – 作者：李树清精确检索【机构】昆明医学院基础医学院病理生理教研室,云南昆明650031 – 名】中国病理生理杂志.2008,24(6).-1090-1095 【刊出版年=2008
A
C
B
示例：逻辑“或”运算
微量元素与克山病的关系
（A OR B OR C） AND D （A+B+C）*D
逻辑“非”
A NOT B A-B
AA