牛血清在细胞培养中的作用与质量要求
血清在细胞培养中的作用和质量要求
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天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的,基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体;基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。
细胞工程领域更离不开细胞培养技术,杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展,培养基的质量是关键,而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。
在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的,所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性,保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物,其大部分成分已为人所知,但还有一部分仍不清楚,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有以下几类:1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎牛血清中含胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,最主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。
包括:胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:促生长激素:促进细胞增殖的效应;氢化可的松:血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。
细胞培养时为什么要加入胎牛血清
![细胞培养时为什么要加入胎牛血清](https://img.taocdn.com/s3/m/4f11a2ce453610661fd9f411.png)
细胞培养时为什么要加入胎牛血清?许多临床和做科研的小伙伴们都要涉及到细胞培养,在细胞培养实验中,血清无疑成为影响实验成功与否的重要因素,而在众多血清之中,牛血清是最为常用的。
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,其中含有丰富的细胞生长所必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
牛血清是一种成分复杂的混合物,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有蛋白质,多肽类,激素类,其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。
我们都知道牛血清根据取材时间不同而有不同的区分。
分别有胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。
由于胎牛从未接触过外界,与新生牛和小牛血清相比,抗体含量明显降低,故抗体与培养细胞发生交叉反应的风险也较低,是理想的细胞生长补充剂。
市场上胎牛血清的品牌种类很多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣。
小编汇总了多家用户和血清经销商以及网络的经验,分析如下:养过细胞的童鞋大都有着这样的共识:血清,由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素,它既是细胞生长的必备营养,也是细胞死亡的致命毒药,当我们废寝忘食的,呕心沥血的,鞠躬尽瘁的养着细胞同时,也极有可能因为一时的疏忽和大意选错了血清,导致珍贵的细胞意外身外,一切归零,不得不洗心革面重头开始!当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;目前,由于同一厂家,不同批次的血清,内毒素数值也可能有较大差异,因此很多血清厂家在名称上已不注明级别。
但使用者仍可通过检测报告,自行甄别挑选。
编辑Ausbian品牌许晴将经过初步检测合格的很多供体胎牛的粗血清,混合在一起,在低温条件下,经七次加压过滤,最后三次为0.1 µm无菌过滤处理,保证用血清的安全性,同事价格上也有较大优势,是一款高性价比的血清品牌。
细胞培养级牛血清白蛋白的用途
![细胞培养级牛血清白蛋白的用途](https://img.taocdn.com/s3/m/13df980b32687e21af45b307e87101f69e31fb8c.png)
细胞培养级牛血清白蛋白的用途细胞培养级牛血清白蛋白,指的是从牛血清中提取的纯化的白蛋白,通常用于细胞培养和生物技术领域。
牛血清是一种重要的培养基补充剂,含有多种细胞生长因子、蛋白质和其他有益成分,可以提供细胞生长所需的营养物质和环境条件。
而牛血清白蛋白则作为其中最丰富的蛋白质成分之一,具有多种应用价值。
1.作为细胞培养基的补充剂:细胞培养是生物学及生物技术领域的核心实验技术之一,牛血清白蛋白作为细胞培养基的重要组分,可以提供细胞生长、增殖和分化所需的基础营养物质。
牛血清白蛋白中富含的氨基酸、蛋白质和胺基酸代谢产物可以为细胞提供能量和构建蛋白质的原料;牛血清白蛋白还含有多种细胞生长因子和细胞黏附因子,可以促进细胞的粘附和增殖,提高细胞培养的成功率和效果。
2.作为抗氧化剂和稳定剂:牛血清白蛋白具有良好的抗氧化性能,可以帮助细胞对抗氧化应激,减少氧自由基对细胞的损伤。
它还可以稳定细胞培养基的pH值和渗透压,维持培养基的稳定性和一致性。
在细胞培养的过程中,添加适量的牛血清白蛋白可以提高培养基的稳定性,增强细胞生长和维持细胞的正常功能。
3.作为纯化蛋白的辅助剂:在生物技术研究中,常常需要纯化重组蛋白或其他生物大分子。
牛血清白蛋白可以作为纯化过程中的辅助剂,帮助使蛋白质易于溶解和稳定,并减少非特异性结合和不必要的蛋白质互作,提高纯化效率和纯度。
此外,在一些生物技术过程中,牛血清白蛋白还可以作为载体或稀释剂,方便蛋白质的储存、运输和使用。
4.用于细胞研究和细胞治疗:细胞研究和细胞治疗是现代医学和生物技术研究的热点领域,牛血清白蛋白可以作为细胞研究和细胞治疗的重要辅助物质。
在细胞研究中,添加牛血清白蛋白可以提供细胞生长所需的环境和营养,帮助研究人员更好地观察和了解细胞的行为和功能;在细胞治疗中,牛血清白蛋白可以作为细胞注射和移植的载体,保护细胞并促进其存活和功能恢复。
总之,细胞培养级牛血清白蛋白在细胞培养和生物技术研究中具有重要的应用价值。
细胞培养级牛血清白蛋白的用途
![细胞培养级牛血清白蛋白的用途](https://img.taocdn.com/s3/m/fae81a160166f5335a8102d276a20029bd64633b.png)
细胞培养级牛血清白蛋白的用途细胞培养级牛血清白蛋白(Fetal Bovine Serum,FBS)是一种从胎牛胎血中提取的血清,它在细胞培养研究中具有广泛的应用。
FBS富含丰富的生长因子、营养物质和抗体,能够提供细胞所需的营养和生长条件,因此被广泛用于细胞培养、细胞凋亡、细胞增殖和细胞分化等方面的研究。
本文将介绍细胞培养级牛血清白蛋白的用途及其在各个领域的应用。
细胞培养级牛血清白蛋白在细胞培养中起到了至关重要的作用。
细胞培养是一种在体外培养和繁殖细胞的技术,常用于生物医学研究和药物开发。
在细胞培养过程中,细胞需要获得足够的营养物质和生长因子才能正常生长和分裂。
而细胞培养级牛血清白蛋白中含有丰富的营养物质和生长因子,能够满足细胞的需求,促进细胞的生长和分裂。
细胞培养级牛血清白蛋白还被广泛应用于细胞凋亡研究。
细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡方式,常常在生长发育、免疫调节和疾病发生等过程中发挥重要作用。
研究人员通过添加细胞培养级牛血清白蛋白到培养基中,可以提供细胞所需的生长因子和营养物质,维持细胞的生存状态,从而研究细胞凋亡的发生机制和调控途径。
细胞培养级牛血清白蛋白还在细胞增殖研究中发挥着重要作用。
细胞增殖是指细胞数量的增加和细胞生长的过程,通常与细胞分裂密切相关。
细胞培养级牛血清白蛋白中含有丰富的生长因子和营养物质,能够为细胞提供必要的条件,促进细胞增殖。
研究人员可以通过调整细胞培养级牛血清白蛋白的浓度和添加时间,来控制细胞的增殖速率,从而研究细胞增殖的机制和调控途径。
细胞培养级牛血清白蛋白还被广泛应用于细胞分化研究。
细胞分化是指细胞从一种形态和功能上不同的状态向另一种形态和功能上不同的状态转变的过程。
细胞培养级牛血清白蛋白中富含的生长因子和营养物质能够为细胞提供分化所需的条件,促进细胞分化。
研究人员可以通过调整细胞培养级牛血清白蛋白的浓度和添加时间,来控制细胞的分化方向和程度,从而研究细胞分化的机制和调控途径。
牛血清白蛋白配制注意事项
![牛血清白蛋白配制注意事项](https://img.taocdn.com/s3/m/d8947619ac02de80d4d8d15abe23482fb5da0279.png)
牛血清白蛋白配制注意事项
牛血清白蛋白是一种重要的生化试剂,常用于细胞培养、免疫
学和生物化学实验中。
在进行牛血清白蛋白的配制时,有一些注意
事项需要牢记。
首先,要确保在配制过程中严格遵守无菌操作的原则,使用经
过消毒的器皿和工具,并保持清洁的工作环境,以防止外源性污染。
其次,牛血清白蛋白的配制需要使用高纯度的蒸馏水或无菌缓
冲液,以确保配制出的溶液不受微生物污染和离子污染。
在配制过
程中,要注意溶解牛血清白蛋白的温度和速度,通常建议在室温下
缓慢加入溶剂,并轻轻振荡而非搅拌,以避免产生气泡或使蛋白质
变性。
另外,牛血清白蛋白在配制过程中可能会出现凝聚或沉淀的情况,这可能是由于溶剂选择不当或溶解过程中的机械刺激所致。
因此,在溶解过程中要轻柔操作,避免剧烈振荡或搅拌。
此外,配制好的牛血清白蛋白溶液需要进行无菌过滤,以去除
悬浮的微生物和杂质,确保最终溶液的纯度和无菌性。
最后,配制好的牛血清白蛋白溶液要储存在干燥、阴凉、避光
的环境中,并且要密封保存,避免受到空气、光线和污染物的影响。
总的来说,牛血清白蛋白的配制需要严格遵守无菌操作原则,
注意溶剂选择和溶解过程中的操作细节,以及储存条件,确保最终
溶液的质量和稳定性。
希望这些注意事项能够对你有所帮助。
牛血清在细胞培养中的作用
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牛血清在细胞培养中的作用1.提供养分和生长因子:牛血清中含有多种营养物质,如葡萄糖、氨基酸、无机盐等,可以提供细胞生长所需的养分。
此外,牛血清还含有多种生长因子和激素,如胰岛素样生长因子、表皮生长因子等,它们可以促进细胞的增殖和分化。
2.维持细胞外基质的完整性:细胞外基质是细胞外的支持结构,对于细胞的附着、生长和分化起着重要作用。
牛血清中的纤维蛋白原和胶原蛋白可以在培养基中形成凝胶,维持细胞外基质的完整性,并且提供了一个支持细胞生长的三维结构。
3.抗氧化和抗炎作用:牛血清中含有多种抗氧化剂,如谷胱甘肽和超氧化物歧化酶等,可以减少细胞受到氧化应激的损伤。
此外,牛血清中的一些成分还具有抗炎作用,可以抑制细胞因子的释放和炎症反应的发生。
4.提供细胞黏附基质:牛血清中含有一些黏附蛋白,如纤连蛋白、胶原蛋白等,它们能够在培养基中与细胞表面的受体结合,促进细胞的附着和生长。
5.调节细胞凋亡:牛血清中的一些成分可以调节细胞的凋亡(程序性死亡)过程。
它们可以促进细胞的存活或促使细胞死亡,从而对细胞发育和功能提供调控。
然而,也需注意到牛血清在细胞培养中存在一些问题。
首先,由于牛血清是从动物体内提取得到的,存在一定的批次差异,质量和成分的稳定性有时会不稳定。
其次,牛血清中可能含有一些未知的病原体,如病毒、细菌等,这些病原体可能会对细胞培养产生不良影响。
此外,牛血清也存在一些伦理和道德问题,因为获取牛血清需要对动物进行捕杀和处理。
总之,牛血清在细胞培养中扮演着关键角色,可以提供细胞生长所需的营养和生长因子,维持细胞外基质的完整性,具有抗氧化和抗炎作用,调节细胞凋亡等。
然而,随着对血清替代品的不断研究和发展,未来可能会有更好的替代选择来替代牛血清在细胞培养中的作用。
动物血清在细胞培养作用论文
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动物血清在细胞培养中的作用[摘要]在动物细胞培养培养基中要加入动物血清,因其成分十分复杂,其功能并不明确。
本文从血清的成分入手,逐一分析各成分在动物细胞培养中的作用,从而解决高中教学中的相关问题。
[关键词]动物细胞培养动物血清动物细胞培养培养基中要加入动物血清,而其在培养过程中究竟起什么作用,一直是高中教学的疑点。
为了解决这个问题通过查阅相关资料从血清的成分出发得出以下结论。
一、血清及其成分血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体。
如将血液自血管内抽出,放人试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。
凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝血后经离心取得。
从成分上看动物血清的成分主要包括:水90.7血清白蛋白4.4血清球蛋白2.1氨基酸氮0.005尿素氮0.012其他非蛋白氮0.025葡萄糖0.08乳糖0.025各种脂肪酸0.38脂肪0.14卵磷脂0.2胆固醇o,22钠离子0.38钾离子0.02钙离子0.01镁离子0.0035亚铁离子0.0001氯离子0.36磷酸氢根离子0.01硫酸根离子0.001碳酸氢根离子0.17dpg sgot各种激素酶碱基各种氨基酸(以上数据均为百分比)。
从成分上看血清在动物细胞培养中的作用是很复杂的。
二、各成分的功能1 可以起到营养物质的作用动物在代谢的过程中所需的营养包括水、无机盐、维生素、糖类、脂肪、氨基酸和纤维素等。
这些成分动物血清都可以提供给体外培养的动物细胞,但这些营养物质(除水以外)的含量在动物血清中所占的比例很少,而且主要的营养物质在动物细胞培养基的配制中已经添加了。
所以,从这些角度看动物细胞培养加入的动物血清虽然能起到为培养的动物细胞提供营养物质的作用,但这并不是主要的作用。
2 可以起到调节的作用动物细胞的代谢离不开调节。
在动物体内有两种调节方式来维持动物代谢的稳定,而细胞本身的代谢调节中激素调节的作用很关键。
血清中提供了适量且比例适中的各种各样的激素来保证动物细胞离体后的正常代谢。
动物血清在细胞培养中的作用
![动物血清在细胞培养中的作用](https://img.taocdn.com/s3/m/ce56052ab4daa58da0114a7f.png)
使在 细胞 传 代时使 剩余 胰 蛋 白酶失 活 ,保 护细 胞不 受伤 外 )的含量 在 动物 血清 中所 占的 比例很 少 ,而且 主 要的营 养 物质 在动 物 细胞培 养基 的配制 中已经添 加 了 。所 以 ,从这 些 害 。 角度看 动物 细胞 培 养加 入 的动物 血 清虽 然 能起到 为培 养 的动 物细胞 提供 营养 物质 的作 用 ,但这 并 不是 主要 的作用 。 2 可 以起 到调 节的作 用 . 总之 ,动 物血 清是 细胞 培养 中用 量最 大 的天 然培养 基 ,
动物血 清
逐一 分析各 成 分在 动物 细胞培 养 中的作 用 ,从 而 解决 高 中教 学 中的相 关问题 。
[ 关键 词]动物 细 胞培 养
动物 细胞培 养 培养 基 中要加入 动 物血 清 ,而其 在培 养过 们的作用非常重要 ,细胞需要它们合成核酸和蛋 白质 ,缺乏 程 中究竟 起什 么作 用 ,一 直是 高 中教学 的疑 点 。为 了解 决这 要导 致 细胞 生 长不 良甚 至死 亡 ;提供 结 合蛋 白 ,能识 别维 生 个 问题通 过查 阅相 关资 料从 血清 的 成分 出发得 出以下结 论 。 素 、脂类、金属和其他激素等 ,能结合或调变它们所结合的 血 清及 其成 分 物 质 活力 ; . 提供 对 维 持 细胞 指数 生 长的激 素 ,基础 培 养基 血 清 是 血 液 凝 固 析 出 的 淡 黄 色 透 明 液 体 。 如 将 血 液 中没有 或量 很少 的营 养物 ,以及 主要 的低 分 子营养 物 。这些 自血 管 内抽 出 ,放 入 试 管 中 ,不 加 抗 凝 剂 ,则凝 血 反 应 被 物质 都 存在 于血 清 中 ,如 果 在配 制培 养基 的 时候一 项项 添 加 激 活 ,血 液迅 速 凝 固 ,形 成 胶 冻 。 凝 血 块 收 缩 ,其周 围所 是 非常麻 烦 的 。所 以加入 动 物血 清类 似微 生 物培养 中的天 然
依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准
![依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准](https://img.taocdn.com/s3/m/759313edd0f34693daef5ef7ba0d4a7302766c95.png)
依科赛乌拉圭胎牛血清是一种常用的生物制剂,在生物制药和医疗领域有着广泛的应用。
其质量标准的建立对于保障产品质量、确保安全有效地使用具有重要意义。
本文就依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准进行论述,并对其关键内容做出解读。
一、依科赛乌拉圭胎牛血清的来源与特点依科赛乌拉圭胎牛血清是通过养殖场从健康的乌拉圭胎牛中采集血清,并在高标准的生产工艺下加工而成。
该血清具有良好的免疫功能,含有丰富的营养成分和生长因子,是细胞培养、病毒研究、生物制药生产等领域的理想选择。
二、依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准1.纯度要求依科赛乌拉圭胎牛血清的纯度需符合相关标准,其中蛋白质含量、脂肪含量、水分含量等是主要指标。
高纯度的血清有助于避免产生不良反应,确保其在医疗和生物制药领域的安全应用。
2.微生物指标微生物指标是评价血清细菌、真菌、病毒等微生物污染情况的重要指标。
合格的依科赛乌拉圭胎牛血清应具有较低的菌落总数和内毒素水平,确保产品的安全性和稳定性。
3.生长因子含量依科赛乌拉圭胎牛血清中的生长因子含量对于其在细胞培养和生物制药生产中的效果具有重要影响。
其含有丰富的生长因子,有助于促进细胞生长、增殖和表型稳定,提高细胞培养的成功率和产物的表达量。
4.其他物理化学指标除了上述指标外,依科赛乌拉圭胎牛血清还需符合一系列的物理化学指标,如pH值、密度、凝固点等。
这些指标的合格性决定了血清的稳定性和可操作性。
三、依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准建立过程依科赛乌拉圭胎牛血清的质量标准的建立经历了以下主要步骤:1.立项和准备阶段:项目立项后,相关单位负责人确定研究的主要内容和目标,并筹备相关资料和人员。
2.市场调研:通过对市场的调研,了解行业现状和需要,明确依科赛乌拉圭胎牛血清的使用范围和潜在市场。
3.技术研究:组建专业的研究团队,开展依科赛乌拉圭胎牛血清的生产工艺和质量控制技术的研究,制定合理的检测方法和标准。
4.对照标准制定:参照相关的国家标准和行业标准,制订符合依科赛乌拉圭胎牛血清特点的质量标准。
血清和细胞培养常识
![血清和细胞培养常识](https://img.taocdn.com/s3/m/f11d616348d7c1c708a1457a.png)
细胞培养否应马上去除DMSO? 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除 ? 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 1)可以放入含有10-15ml新鲜培养基之培养瓶中, 待隔天再置换新鲜 培养基以去除DMSO ,2)直接离心后,丢上清,将细胞重悬,补足培养基后培养。 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 可否使用与原先培养条件不同之培养基? 可否使用与原先培养条件不同之培养基? 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提 供之培养条件不同之培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。因为PH 和培养基的基础成分不同。 可否使用与原先培养条件不同之血清种类? 可否使用与原先培养条件不同之血清种类? 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源, 所以血清的种类和品质对于 细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内 容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。最好一批实验用同一批 次的血清。
细胞培养常识( 细胞培养常识(二)
培养细胞时应使用5 培养细胞时应使用 % 或10% CO2? ? 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统, 而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量 为每公升3.7 g 时,细胞培养时应使用10 % CO2;当培养基中NaHCO3 为每公升 1.5 g 时, 则应使用5 % CO2 培养细胞。( 配置培养基时,如果搅动过多会使 NaHCO3 转变为气体而丢失,使培养基的PH缓冲能力下降。) 何时须更换培养基? 何时须更换培养基? 视细胞生长密度而定, 扑满皿或瓶即可更换培养基即可。 培养基中是否须添加抗生素? 培养基中是否须添加抗生素? 除于特殊筛选系统中外, 一般正常培养状态下, 培养基中不应添加任何抗生 素。 欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速? 欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速? 欲回收动物细胞, 其离心速率一般为300g (约1,000rpm),5 - 10 分钟, 过高 之转速, 将造成细胞死亡。
浅析影响胎牛血清质量的几大因素
![浅析影响胎牛血清质量的几大因素](https://img.taocdn.com/s3/m/adb605d8dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f8.png)
浅析影响胎牛血清质量的几大因素胎牛血清作为一种常用的培养基添加剂,被广泛用于细胞培养、疫苗制备、抗体生产等领域。
其质量的好坏直接关系到最终产品的质量和效果。
下面将重点分析影响胎牛血清质量的几大因素。
1.采集方式:采集胎牛血清的方式有两种,一种是直接采集胎牛静脉血,另一种是采集到胎儿自然脱落的胎盘血。
直接采集胎牛静脉血可以获得更多的血清,但胎牛的死亡率较高,容易造成血清污染和质量下降。
而采集胎盘血则减少了对胎牛的伤害,但血量较少,收集效率低。
因此,选择适当的采集方式可以更好地保证胎牛血清的质量。
2.饲养管理:胎牛的饲养管理直接关系到血清的质量。
饲养环境应该干净卫生,并严禁使用生长激素、抗生素和激素类药物等对胎牛进行干预。
合理的饲料和草料供应可以保证胎牛的健康成长,进而提高血清的质量。
3.血样处理:从采集到的胎牛血样中提取血清时,需要经过一系列处理步骤,如离心、分离、过滤等。
这些步骤的操作技术和条件都可能影响血清的质量。
离心速度和时间的不当可能导致沉淀和杂质的残留。
分离过程中,应避免血样与外界的接触,以避免污染。
过滤时应选择合适的滤膜和过滤器,以确保血清的纯净度。
4.保存条件:胎牛血清的保存条件对血清的质量起着重要作用。
一般来说,胎牛血清应存放在低温环境下,常见的保存温度为-20℃或-80℃,并避免频繁的冻融循环。
此外,胎牛血清应避免阳光直射和暴露在高温环境下,以防止脂质氧化和蛋白质降解。
适当的保存条件可以保持血清的活性和稳定性。
5.检测方法:血清的质量可通过多种方法来进行评估,如蛋白质浓度检测、免疫球蛋白含量检测、内毒素浓度检测等。
选择合适的检测方法,可以及时发现质量问题,并进行调整和改进。
定期对血清质量进行检测,是保证血清质量的重要手段。
总之,影响胎牛血清质量的因素很多,包括采集方式、饲养管理、血样处理、保存条件和检测方法等。
只有综合考虑这些因素,并采取相应的措施,才能有效提高胎牛血清的质量,满足各种应用的需求。
特级优级标准级牛血清分类标准
![特级优级标准级牛血清分类标准](https://img.taocdn.com/s3/m/cc262b99cf2f0066f5335a8102d276a200296034.png)
特级优级标准级牛血清分类标准特级优级标准级牛血清分类标准在现代医学和生物技术领域,牛血清是一种广泛使用的重要生物制剂。
牛血清中富含的多种蛋白质和生物活性物质,使其在细胞培养、免疫学研究、生物工程等领域具有不可或缺的作用。
为了满足不同领域对牛血清的需求,根据其成分和纯度的不同,国际上将牛血清分为特级、优级和标准级三个等级,以确保其质量和效果。
一、特级牛血清特级牛血清是牛血清中质量最高的等级,也被称为FBS(Fetal Bovine Serum)。
特级牛血清采集于未出生胎儿,其成分更加纯净且质量更高。
在细胞培养中,特级牛血清起着促进细胞生长和分裂、提供营养和生长因子等作用。
特级牛血清中的抗生素成分非常低,微生物污染的风险也更小。
特级牛血清的分类标准非常严格,包括以下几个方面:1. 物理性质:特级牛血清具有良好的透明度和均一的色泽,没有异物或沉淀物。
2. 成分含量:特级牛血清中富含多种生物活性物质,如生长因子、抗体、激素等。
这些物质对细胞培养和免疫学研究具有重要影响。
3. 纯度:特级牛血清的纯度较高,微生物污染风险较低,通常通过灭菌和病毒过滤等工艺进行处理。
4. 生物活性:特级牛血清的生物活性非常重要,如细胞生长和分裂的促进作用,对细胞培养和研究具有不可替代的作用。
特级牛血清的应用范围广泛,包括但不限于以下几个领域:1. 细胞培养:特级牛血清可以作为细胞培养基的重要组分,提供细胞所需的营养和生长因子,促进细胞的生长和分裂。
2. 免疫学研究:特级牛血清中含有丰富的抗体和免疫调节因子,可以用于体外免疫实验和抗体制备等研究。
3. 生物工程:特级牛血清可以用于蛋白质表达和分离纯化等生物工程领域,提供良好的生长环境和辅助物质。
二、优级牛血清相比特级牛血清,优级牛血清的成分和质量略有降低,但仍然是医学和生物技术领域中常用的补充品。
优级牛血清的分类标准相对宽松,适用于许多实验和应用。
优级牛血清与特级牛血清相比,主要有以下差异:1. 成分含量:优级牛血清中生物活性物质的含量相对较低,如生长因子和免疫调节因子等。
牛血清白蛋白使用说明书
![牛血清白蛋白使用说明书](https://img.taocdn.com/s3/m/1fae465e7f21af45b307e87101f69e314232fa71.png)
牛血清白蛋白使用说明书
一、产品名称
牛血清白蛋白
二、产品简介
牛血清白蛋白是一种从牛血清中提取的天然蛋白质,其纯度高,无毒副作用,广泛应用于生物制药、生物技术、医药卫生等领域。
经精制、冻干、灭菌等工艺加工而成。
三、产品规格
规格:5g/瓶、10g/瓶、50g/瓶、100g/瓶
四、主要功能
1. 作为生物药物及细胞培养基的添加剂,用作载体保护活性成分。
2. 作为生物制品的稳定剂,延长生物制品的保质期。
3. 用于临床医学制备悬浮液、注射液、输液、眼液、软膏等。
五、使用方法
1. 加入到细胞培养基、生物药物、生物制品中作为稳定剂使用。
2. 制备药品时,按照需要的添加量添加到药材中并充分混合。
3. 直接使用时,先将瓶子从冰箱取出,稍微晾放一下后打开盖子取出所需用量即可。
六、贮存与保质期
1. 本产品为白色或淡黄色固体粉末,应存放在阴凉、干燥、不受阳光直射的地方。
2. 开封后应立即使用,未使用完的产品应密封并置于-20℃以下的冰箱中保存。
3. 本品自生产日期起,在上述保质条件下,保质期为三年。
七、注意事项
1. 本品为生物制品,应在无菌条件下使用。
2. 开封后应立即密封并置于-20℃以下的冰箱中保存。
3. 本品禁止过期使用。
4. 如尘封、湿度过高或发生霉变,不再适用。
5. 本品仅供实验室研究使用,不得用于临床或其他用途。
八、联系方式
公司名称:xxxx
公司地址:xxxx
联系电话:xxxx
传真:xxxx
邮箱:xxxx
网址:xxxx。
细胞培养血清使用方法
![细胞培养血清使用方法](https://img.taocdn.com/s3/m/95011a44eef9aef8941ea76e58fafab069dc4428.png)
细胞培养血清使用方法一、细胞培养血清的选择1.获取合适的细胞培养血清:在选择细胞培养血清时,应根据细胞类型和培养需求来选择适合的血清种类。
常见的细胞培养血清包括胎牛血清(FBS)、小牛血清(CS)、羊血清(GS)等。
2.质量检测:在使用细胞培养血清前,应进行必要的质量检测。
常见的检测项目包括细胞毒性检测、内毒素检测、抗体检测等,以确保细胞培养血清的质量符合要求。
二、细胞培养血清的保存与预处理1.储存温度:细胞培养血清应保持在-20℃以下的低温环境中保存,避免冻融过程中引起的细胞因子等成分的损失。
2.解冻方法:在使用前,需要将细胞培养血清从冷冻状态解冻。
解冻时应将血清瓶或管直接放入37℃的水浴中,待完全解冻后再使用。
避免频繁冻融对细胞培养血清质量造成影响。
3.灭菌处理:为防止细胞培养血清中的微生物污染细胞培养系统,使用前应对血清进行灭菌处理。
常见的方法有过滤灭菌和紫外线灭菌等。
三、细胞培养血清的使用方法1.添加量:在培养基中添加适量的细胞培养血清,通常按照5%-20%的比例添加,视细胞类型、生长阶段和实验要求而定。
同时,将血清的添加量逐渐减少,有助于维持细胞类型和稳定细胞表型。
2.血清浓度试验:在初始阶段的细胞培养中,可以进行不同浓度细胞培养血清的试验,以确定最适合细胞生长和增殖的血清浓度。
3.细胞分配与传代:在细胞传代过程中,应根据细胞的生长情况和实验要求,精确计算和添加细胞培养血清的量。
通常情况下,传代时应先将细胞离心,去除老化的细胞和细胞碎片,再将新鲜培养基补充到细胞中,继续传代和培养。
四、细胞培养血清的注意事项1.避免重复冻融:频繁冻融对细胞培养血清质量会有影响,因此在使用前需要根据实验需求,将血清储存和使用合理安排,避免过多的冻融过程。
2.避免污染:在使用细胞培养血清时,应注意防止污染对细胞培养的影响。
避免细菌、真菌和其他微生物的污染,同时在操作过程中注意无菌操作,避免引入外源性污染。
3.使用正常生长因子替代:部分细胞类型在一定条件下可以使用无血清培养基进行培养,无血清培养基中含有正常生长因子的替代物,能够促进细胞的生长和增殖。
牛血清的组成及应用
![牛血清的组成及应用](https://img.taocdn.com/s3/m/b5fa0750f08583d049649b6648d7c1c709a10b5e.png)
牛血清的组成及应用牛血清是从牛血液中提取得到的液体,在生物学和医药领域有着广泛的应用。
牛血清主要由蛋白质、糖类、脂类以及无机盐等多种成分组成。
下面将分别介绍牛血清的组成及应用。
首先,牛血清中最丰富的成分是蛋白质。
牛血清中含有多种蛋白质,如白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白等。
这些蛋白质是人体正常生理功能的必需物质,具有多种生物学活性,如调节细胞凋亡、细胞增殖、抗炎作用等。
其中,免疫球蛋白是牛血清中含量较高的一种蛋白质,具有抗体活性,可以用于制备抗体、免疫诊断等方面。
其次,牛血清中还含有糖类。
糖类是生物体能量的重要来源之一,也是细胞的重要组成部分。
牛血清中的糖类主要包括葡萄糖、半乳糖、甘露糖等。
这些糖类能够提供细胞所需的能量,维持细胞正常代谢活动。
此外,牛血清中还含有脂类。
脂类是细胞膜的重要构成成分,对细胞的结构和功能有着重要影响。
牛血清中的脂类主要包括甘油三酯、磷脂等。
这些脂类能够为细胞提供能量,并维持细胞膜的完整性和功能。
最后,牛血清中还含有多种无机盐。
无机盐对于维持人体内的酸碱平衡、水电解质平衡以及细胞正常功能起着重要作用。
牛血清中的无机盐主要包括钠、钾、钙、镁等。
这些无机盐能够参与细胞内外的物质交换,维持细胞正常的渗透压和离子平衡。
牛血清在生物学和医药领域有着广泛的应用。
首先,牛血清可以作为培养基的重要组成部分,用于细胞培养和组织工程等方面的研究。
牛血清中的蛋白质、糖类、脂类和无机盐等成分可以提供细胞所需的营养物质和生长因子,促进细胞的生长和增殖。
其次,牛血清具有抗体活性,可以用于制备抗体。
研究人员可以从牛血清中提取免疫球蛋白,用于制备特异性抗体。
这些抗体可用于免疫诊断、免疫治疗等方面,对于疾病的早期诊断和治疗具有重要意义。
此外,牛血清还可以作为饱和作用试剂,用于分离和纯化蛋白质。
由于牛血清中的蛋白质种类繁多,并且含有大量的免疫球蛋白,可以与其他蛋白质特异结合,从而实现纯化和分离其他目标蛋白质的目的。
胎牛血清正确的溶解方法
![胎牛血清正确的溶解方法](https://img.taocdn.com/s3/m/a8331f251fd9ad51f01dc281e53a580216fc5019.png)
胎牛血清正确的溶解方法胎牛血清 (Fetal bovine serum, FBS) 是一种常用的细胞培养基组分,具有提供细胞生长所需的营养物质和激素的作用。
正确地溶解和使用胎牛血清对于维持和促进有效的细胞培养非常重要。
下面将介绍胎牛血清的正确溶解方法,以确保获得最佳的培养效果。
1.选择适当的容器和容量:根据实验需要选择一个干净、无菌、具有足够容量的容器。
常见的选择包括离心管、烧杯或试管。
2.注意无菌操作:在溶解胎牛血清前,确保所有操作都在无菌条件下进行。
进行洗手,并将所有使用的仪器和材料进行灭菌处理。
3.降温:将所需量的胎牛血清从冰箱中取出,放置在冰上或在冷冻块上预冷数分钟。
这将有助于缓慢解冻和防止蛋白质的降解。
4.缓慢解冻:将预冷的胎牛血清缓慢解冻至室温。
确保避免急速解冻,以免破坏血清中的蛋白质。
5.预先过滤:在血清完全解冻之前,将其过滤以去除可能存在的细菌和颗粒。
可以使用0.22微米或更小的孔径的过滤器进行过滤。
将有限量的胎牛血清注入过滤器中,轻轻挤压滤器以过滤血清。
6.活化:在细胞培养基中加入所需量的胎牛血清。
通常胎牛血清的添加量是细胞培养基总体积的10-20%。
慢慢滴加血清,同时轻轻搅拌。
避免快速注入,以免造成泡沫的形成。
7.细胞适应:在初始使用胎牛血清的细胞培养中,请确保适当的细胞适应。
这可以通过逐渐增加细胞培养基中的血清浓度来实现。
例如,从1%的血清浓度开始,每隔几天增加1-2%,直到达到所需的血清浓度。
8.储存:如果未使用完全部的胎牛血清,在保存之前请确保将其保存在-20°C或更低的温度下。
储存过程中要小心避免血清的变质,最好将其分装在无菌的小容器中,以减少多次开封所引起的污染和变质的风险。
总结起来,正确的溶解胎牛血清的方法包括降温、缓慢解冻、过滤、活化和细胞适应。
正确的操作流程和无菌操作可以确保血清的质量和细胞培养的成功。
胎牛血清对细胞培养具有重要的作用,通过遵循正确的操作步骤,可以更好地利用胎牛血清来支持细胞生长和实验研究。
细胞培养过程中血清的作用
![细胞培养过程中血清的作用](https://img.taocdn.com/s3/m/69c76402c950ad02de80d4d8d15abe23482f03ff.png)
细胞培养过程中血清的作用主要包括提供营养、调节细胞生长和代谢、提供生长因子和细胞因子等。
具体来说:
1. 提供营养:血清中含有各种细胞生长所需的营养物质,如氨基酸、糖、维生素、无机盐离子等,这些物质能够为细胞提供生长发育所必需的物质基础。
2. 调节细胞生长和代谢:血清中的各种生物活性物质可以调节细胞的生长、增殖和分化,同时还可以调节细胞代谢途径,促进细胞正常增殖和分化,抑制异常增殖。
3. 提供生长因子和细胞因子:血清中富含各种生长因子和细胞因子,如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板源生长因子等,这些物质能够促进细胞增殖、迁移和分化,调节细胞间的相互作用。
4. 维持细胞环境稳定:血清中含有各种蛋白质和脂质物质,可以维持细胞外基质的黏稠度和渗透压,保持细胞外环境的稳定,从而保证细胞正常生长和增殖。
5. 补充其他必需物质:除了上述主要作用外,血清还可以补充一些其他必需物质,如金属离子、核酸等,这些物质对于细胞的正常生长和增殖也是非常重要的。
在细胞培养过程中,使用血清作为添加剂可以促进细胞的生长和增殖,提高细胞的贴壁能力,增加细胞数量,这对于生物医药研究、药物筛选、临床试验等具有重要意义。
同时,不同品牌和来源的血清其成分和浓度可能有所不同,因此在使用时需要根据实验需求选择合适的血清品牌和来源,并进行适当的配制和质量控制。
牛血清使用说明范文
![牛血清使用说明范文](https://img.taocdn.com/s3/m/f954c96fe3bd960590c69ec3d5bbfd0a7956d5aa.png)
牛血清使用说明范文牛血清是从奶牛血液中提取并经过多道纯化和过滤处理得到的纯净蛋白质溶液,具有丰富的营养物质和生物活性成分,被广泛应用于医疗、生物研究、工业生产等领域。
以下是牛血清的使用说明。
一、储存与保管1.储存温度:牛血清最适宜的储存温度为-20℃或以下。
在此温度下储存,可以有效保持蛋白质的活性和稳定性。
2.储存方式:将牛血清保存在干燥、阴凉的地方,远离阳光直射和高温环境。
应避免频繁反复冷冻和融化,以免对蛋白质造成损伤。
3.包装完好:使用前应检查牛血清包装是否完好,如有破损或渗漏现象应停止使用。
二、使用前准备1.澄清处理:打开牛血清瓶后,应该轻轻摇晃或轻轻转动瓶子,使澄清透明的牛血清完全悬浮。
2.操作环境:在无菌条件下操作,避免任何可能导致污染的情况。
建议在无菌操作台上进行操作,并确保所有仪器和工具已经过严格的清洁和消毒。
三、常见应用领域及使用方法1.细胞培养牛血清常常用于细胞培养中,提供必需的营养物质和生长因子,促进细胞生长和繁殖。
(1)细胞培养基配制:按照细胞培养基配方准确称取细胞培养基粉末,加入适量的牛血清搅拌均匀,最后加入适量的抗生素,经过滤净化即可使用。
(2)细胞传代:将细胞培养物转移到新鲜的培养基中,适量添加牛血清,使细胞继续生长和传代。
2.蛋白质纯化(1)酚(树脂)胶柱层析:将经过预处理的样品加入酚胶柱中,牛血清可以用作洗脱缓冲液,帮助背景蛋白的有效清除。
(2)亲和层析:使用具有特异亲和性的树脂或沉淀剂,结合特定的蛋白质分别和目标蛋白质或其他附属物之间的相互作用,牛血清可以用作洗脱缓冲液或用于阻断非特异性结合。
3.抗感染治疗牛血清具有丰富的免疫球蛋白和抗体,可以用于抗感染治疗。
(1)抗菌和抗病毒:将牛血清溶液直接注射或局部涂抹于感染部位。
要根据具体病原体的类型和感染程度来确定用药方法和剂量。
(2)免疫治疗:将牛血清免疫球蛋白注射到患者体内,使机体产生抗体,增强免疫力。
用于治疗一些传染性疾病和免疫系统功能低下的患者。
胎牛血清的详细介绍
![胎牛血清的详细介绍](https://img.taocdn.com/s3/m/f153434b7dd184254b35eefdc8d376eeaeaa17d8.png)
胎牛血清的详细介绍胎牛血清是从胎牛体内提取的血浆,主要用于细胞培养和生物制品的生产中。
它是一种质量优良的培养液添加剂,能够提供细胞生长所需的营养物质、蛋白质、激素和生长因子等。
胎牛血清的应用广泛,涵盖了医药、生物技术、食品安全等领域。
首先,胎牛血清具有极高的营养价值,尤其是富含蛋白质。
蛋白质是细胞生长和分裂所必需的营养物质,对细胞生理代谢和功能的正常发挥至关重要。
胎牛血清中的蛋白质不仅含有丰富的氨基酸,而且具有多种生物活性,并可作为细胞培养时的生物信号传导分子,调节细胞功能。
其次,胎牛血清中含有多种生长因子和激素,如胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胎牛血清促黄体生成素(bFTC)等。
这些生长因子和激素能够促进细胞生长、增殖和分化,并参与细胞信号传导、细胞外基质合成等生理过程。
它们的存在可以显著提高细胞培养的效率和细胞生长的速度。
此外,胎牛血清还富含多种微量元素和有机物质,如维生素、矿物质等。
这些物质能够提供细胞所需的微量元素和辅酶,在细胞代谢过程中起到催化和调节作用。
此外,胎牛血清还具有抗菌、抗炎和抗氧化等作用,可以保护细胞免受外界环境的损害。
胎牛血清的选择和应用要根据具体的细胞类型和培养需求来确定。
首先,要选择质量好、无致病微生物污染、符合相关标准的胎牛血清。
其次,要注意控制血清的添加量,过高的浓度可能会导致细胞过度生长、突变或凋亡。
此外,还要避免血清批次间的差异,以免影响细胞培养的一致性和稳定性。
胎牛血清广泛应用于细胞培养中,尤其是哺乳动物细胞的培养。
它可以为细胞提供所需的营养物质和生理活性因子,促进细胞的生长和增殖。
在生物技术领域,胎牛血清常用于生物制品的生产,如抗体、疫苗、重组蛋白等。
此外,胎牛血清还可以作为药品安全性测试和病毒灭活等方面的试剂。
然而,胎牛血清也存在一些问题和局限性。
首先,由于血清是从动物体内提取的,存在一定的伦理和动物福利问题。
其次,胎牛血清可能存在微生物污染风险,如病毒、细菌等。
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牛血清在细胞培养中的作用与质量要求————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术,在整个科学技术中占据了特殊的显著地位,特别是生命科学的发展更离不生物技术,生命科学的发展备受各国的重视。
我国在很多大学中都设立了生命科学院。
现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养,杂交瘤单克隆抗体,完全是通过细胞培养来实现的,既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展,培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。
在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的,所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。
保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
ﻫ一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。
ﻫ1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物养物。
ﻫ质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
ﻫ4.是细胞贴壁、铺展在塑5.起酸碱度缓冲液作用。
ﻫ6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时料培养基质上所需因子来源。
ﻫ使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
ﻫ1.蛋白质是牛血清中主要成份。
除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。
纤维粘连素细胞促进细胞附着; α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。
ﻫ2.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。
ﻫ3.激素:激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。
ﻫ促生长激素:促细胞增殖效应。
氢化可的松:血清中含有定量的该成分,它可能兼有促细胞贴附和增殖作用,但有人证明,血清中的氢化可的松,如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。
ﻫ4其他成份ﻫ氨基酸、葡萄糖、ﻫ酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。
与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。
ﻫ三、牛血清的质量要求随着科学技术的发展和生活水平的不断提高对生物医药产品的质量要求也越来越高,所以对制备工艺中所涉及到的各种原材料的质量标准要求也越来越高,特别是对用于细胞培养基中的主要天然成份――牛血清的质量要求也不断提高。
牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。
ﻫ(一)、WH O公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求: ﻫ1. 牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。
并应具备适当的监测系统。
2.有些国家还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。
4.血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。
3.证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。
ﻫ5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家要求无细菌噬菌体污染。
6.对细胞有良好的支持繁殖作用。
ﻫ (二)、我国在对牛血清的质量2000年版《中国生物制品主要原辅料质控标准》中提出比较严格的标准要求。
包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,支持细胞增殖检查。
(三)、美国对牛血清的质量要求:Gibco和Sigma二家主要的美国牛血清供应商的牛血清都已进入到我国市场,他们对其质量标准要求都极为严格,从血清来源到产品质量都有明确规定。
1)血清来源:可从世界各国收集胎牛血清,但是必须符合他的质量标准和美国农业部进口要求。
地方当局还不清楚本地是否有牛海绵状病毒流行的血清不收集,有说明血清质量的证明资料:包括收集过程的全部资料、检验结果和交付情况。
2)血清的收集:胎牛血清是心脏穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10个月内)血清静脉取血。
血清采集条件必须符合工业生产的标准:低温下采集、一次分离、分离后立即混合冻存。
符合要求的血清56℃水浴30分钟灭活。
ﻫ3)血清的制备:a.超低IgG胎牛血清:通过亲和层析工艺去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBS γ球蛋白含量减到最低,一般IgG≤5ug/ml,生物学活性不变。
b. 血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/过氧化酶方法测定)。
c. γ-射线照射:已经证明γ-射线照射可以有效灭活血清中可能污染的病毒、支原体。
照射剂量为30~45KG。
而且这个剂量的γ-射线照射不会改变血清的理化性质和对细胞培养的影响。
ﻫ4)除菌过滤:经过上述处理的粗制血清再经过一系列除菌滤膜过滤包括0.2微米(micron)和0.1微米滤膜。
ﻫ4.终产品血清质量FBS要通过三层0.1微米滤膜,其他血清可通过0.2微米滤膜。
ﻫ1)化学检定:渗透压 pH 蛋白含量――电泳法白蛋白球蛋白血红蛋白随着牛年龄增加血清中总蛋白含量相应增加,总的血清蛋白含量可以确定产品规格和年龄。
2)微生物学检查:细菌、真菌符合USP标准。
ﻫ支原体:在支原体专业培养基上培养了3~4周,培养温度36℃±2℃分别在需氧和厌氧条件下进行,有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4次,Hoe chst荧光素DNA染色检查那些培养法无法检出的支原体如猪鼻支原体等。
ﻫ病毒检查: ﻫ牛兰舌病毒Bovin bluetongue牛腺病毒Bovine Adenovirus牛细小病毒Bovine Parvovirus牛病毒性腹泄病毒BovineViral DiarheaVirus ﻫ狂犬病病毒Rabies呼肠弧病毒Reovirus ﻫ牛呼吸道合胞病毒BRSV副流感病毒Ⅲ型Parainfluenzaﻫ检查方法:已证明无外源因子污染的牛细胞培养物,在细胞生长液中加15%待测血清,连传3代共21天。
阴性对照细胞培养液中加15%已知无病毒污染的牛血清,与试验组同条件下进行。
在观察期内注意细胞形态变化或细胞病变。
在观察期内第14天待检样品和对照样品用标准病毒检测方法检查。
如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到6个含盖玻片的容器内。
阴性对照样品按同样方法。
再将牛腹泄病毒、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照,再培养7天,用荧光抗体技术进行检查。
细胞病变或病毒引起的其他改变通过苏木精或伊红染色进行观察。
取另外一个待检细胞培养瓶用人“O”红细胞、豚鼠红细胞和新鲜鸡红细胞作血球吸附病毒检查。
试验在2~8℃和20~24℃进行。
阴性对照细胞预先感染副流感Ⅲ型病毒作为阳性对照。
未感染的细胞作为阴性对照。
3)内毒素检测用鲎试剂检查。
4)细菌噬菌体检查主要检查E.Coli(C300 or K-12)噬菌体。
5)激素含量测定ﻫ每批FBS对某些激素含量都要进行测定,包括:雌二醇、胰岛素、孕硐、睾丸素、甲状腺素等。
6)血红蛋白检测血红蛋白与氧合血红蛋白的比≥70%,血红蛋白含量≤mg15/dl。
ﻫ7)细胞生长效果测定a.细胞克隆效果测定细胞选择:Sp20/Ag-14或P3X63-Ag8.653血清浓度与细胞数:10%血清/1个细胞/孔ﻫ4%血清/5个细胞/孔ﻫ细胞培养基RPMI-1640,96孔培养盘36℃±2℃,5%二氧化碳培养10~15天。
试验中选择一个已知参考牛血清作对照。
ﻫ克隆效率计算:ﻫ克隆效率=(阳性孔平均数/培养孔总数)X100% ﻫ相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率b.贴壁效率试验:ﻫ用人的传代细胞作每批血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血清的贴壁变化。
采用6孔培养盘每批血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清――100细胞/孔,4%血清200介细胞/孔。
放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~ 14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效率。
从这两种不同血清浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。
贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率ﻫc. 二倍体纤维细胞促生长试验人二倍体细胞株WI28MRc5 ﻫ25cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5X105细胞连传3代,每代血清浓度和接种细胞数相同,每代培养7天,每代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。
以同样条件用已知参考血清进行平行培养。
每代收获细胞计数,计算每批待检血清与参考血清的相对生长率(RGR)。
ﻫ RGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) X100% ﻫ牛血清主要质量要求(Sigma)胎牛血清新生牛血清成牛血清牛龄胎10~14天<10个月无菌-- -病毒---支原体---噬菌体---内毒素(ng/ml)≤1.0≤10.0≤10(15)ﻫ血红蛋白(g%)3.0~4.5 3.5~6.05.0~8.5ﻫpH6.7~8.0 7.0~8.0 7.0~8.0渗透压(mom/Kg H2O) 240~340 240~340240~340新的药品管理法即将公布,新的药品管理法对生物制品提出更严格的质量要求。
特别是我国即将加入WTO,会有更多的国外生物制品进入中国市场,我国的生物制品也希望更多地走向国际市场,所以在制品质量上要求会更高, 产品的市场竞争应主要靠质量竞争。
所以对产品中的主要原材料的质量要求也会越来越严格。
如实验动物我国SDA 已提出严格的质量标准,并提出全国各使用部门达到标准的期限。