拮抗菌和药剂对银杏病原菌的抑菌试验

拮抗菌和药剂对银杏病原菌的抑菌试验作者：俞家楠杨策鲍竹姜华

来源：《天津农业科学》2015年第04期

摘 ; ;要：银杏（Ginkgo Biloba L.）是常见的城市园林观赏绿化树种，并具有极高的材用、食用和药用价值。近年来，辽宁省大连市银杏树发生了较严重的叶斑病，防治病情蔓延已迫在眉睫。大连银杏叶斑病由链格孢（Alternaria alternata）和细极链格孢（Alternaria tenuissima）两种真菌感染所致，本文采用抑菌圈法，以4种细菌和5种药剂对这两种致病菌进行了抑菌活性检测，旨在为防治此病提供理论依据。结果表明：环状芽孢杆菌对细极链格孢的抑菌效果较好，抑菌率高达80.88%，300 g·L-1苯甲丙环唑对两种病原菌的抑菌率分别为75.79%和

80.11%。

关键词：链格孢;细极链格孢;拮抗菌;抑菌试验

中图分类号：S792.95 ; ; ; ; ; ; ; ;文献标识码：A ; ; ; ; ; ; ; DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.04.026

Antibacterial Effect of Antagonistic Bacteria and Farm Chemicals on Pathogens of Ginkgo biloba

YU Jia-nan， YANG Ce， BAO Zhu， JIANG Hua

（College of life science， Liaoning Normal University， Dalian， Liaoning 116081，China）

Abstract： Ginkgo （Ginkgo Biloba L.） is a common tree species for ornamentation and afforestation in urban landscape with a high timber-used， edible and medicinal value. In recent years， serious leaf spot of ginkgo tree occurred in Dalian City，Liaoning Province. Therefore， it is imminent to find out a way to prevent the spreading of the disease. Dalian ginkgo leaf spot disease were caused by Alternaria alternata and Alternaria tenuissima， in order to provide a theoretical basis to control the disease， four kinds of antagonistic bacteria and five kinds of farm chemicals were tested for the antibacterial activity of the two kinds of pathogen fungi by colony inhibition method in this paper. The results showed that Bacillus circulans had obvious bacteriostatic effect on Alternaria tenuissima， its inhibition rate was high to 80.88%; the inhibition rate of 300 g·L-1 Benzoyl propiconazole to the two kinds of pathogenic fungi was 75.79% and 80.11%， respectively.

Key words： Alternaria alternata; Alternaria tenuissima; antagonistic bacteria; antibacterial test

银杏（Ginkgo biloba L.）是我国重要的经济树种。除供观赏、材用外，银杏叶含有银杏内酯和黄酮类等活性物质，对高血压、脑动脉硬化、心血管疾病和衰老等有独特的疗效[1]。近年来，银杏越来越成为城市园林绿化中大量栽培的树种，由此银杏叶部病害也开始受到广泛关注。姜华等人[2]对近年来辽宁省大连市银杏树发生的叶斑病进行了病原菌分离鉴定，现已查明大连银杏叶斑病致病菌分别为链格孢属的细极链格孢（Alternaria tenuissima）和链格孢（Alternaria alternata）。本研究为大连银杏叶斑病病原研究的延续，主要针对其致病菌进行抑菌试验，旨在筛选出抑菌效果较好的拮抗菌和化学药剂，为有效地防治银杏叶斑病提供理论依据。

1 ; ;材料和方法

1.1 ; ;材 ;料

1.1.1 ; ;病原菌及拮抗菌 ; ;病原菌为Y3（细极链格孢Alternaria tenuissima）和Y5（链格孢Alternaria alternata）;拮抗菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus stutilis）、环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus Frankland）和苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。病原菌和拮抗菌均由姜华教授课题组分离鉴定[2]。

1.1.2 ; ;供试药剂 ; ;50%多菌灵可湿性粉剂（江苏蓝丰生物化工股份有限公司）;80%代森锰锌可湿性粉剂（美国仙农有限公司）;70%甲基硫菌灵可湿性粉剂（江苏龙灯化学有限公司）;10%苯醚甲环唑水分散粒剂，300 g·L-1苯甲丙环唑乳油（先正达投资有限公司）。

1.1.3 ; ;培养基 ; ;牛肉膏蛋白胨培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。

1.2 ; ;方 ;法

1.2.1 ; ;菌饼和菌悬液的制备 ; ;将病原菌Y3、Y5分别接种在PDA平板上培养5 d左右，待菌丝长满培养皿，用直径为8 mm的打孔器从菌落边缘打取菌饼，备用;取适量菌丝，放入无菌水中，制备孢子悬浮液，以血球计数板计数，备用;以牛肉膏蛋白胨培养基培养拮抗菌，制备细菌悬浮液，备用。

1.2.2 ; ;抑菌试验 ; ;（1）菌饼法。将PDA培养基加热熔化，冷却到45 ℃左右，加入1 mL 拮抗菌液混匀（以等量无菌水作对照），制备平板培养基。每平皿接种1个直径为8 mm的病原菌菌饼，3次重复，28 ℃下培养5 d后，观察菌落大小，计算相对抑菌率。用十字交叉法测量菌落直径，相对抑菌率=（处理菌落直径-对照菌落直径）/处理菌落直径×100%;以血球计数法测定产孢量。

（2）抑菌圈法。取1 mL病原菌孢子液加入到PDA培养基中制平板，用直径为8 mm的无菌滤纸片，蘸取拮抗菌液或药液置于平板中（以蘸无菌水作对照），每皿3片、3次重复。

28 ℃下培养5 d后测量抑菌圈直径。

（3）拮抗菌和药剂对病原菌菌丝抑制效果的检测。各取2 mL拮抗菌液和药液，分别加到含有50 mL病原菌（孢子浓度为5×106 个·mL-1）的液体培养基中，共培养7 d后8 000 r·min-1离心10 min，取沉淀的菌丝用无菌水清洗3次，烘干称质量，计算病原菌菌丝生长抑制率。药剂工作浓度为：多菌灵800倍液、代森锰锌500倍液、甲基硫菌灵1 000倍液、苯醚甲环唑1 000倍液、苯甲丙环唑乳油1 000倍液，无菌水作空白对照。菌丝生长抑制率=（对照菌丝干质量-处理菌丝干质量）/对照菌丝干质量×100%。

每处理3次重复。采用SPSS19.0进行数据处理。

2 ; ;结果与分析

2.1 ; ;拮抗菌对病原菌的抑菌效果

4种拮抗菌的抑菌试验结果表明，枯草芽孢杆菌（B.stutilis）和环状芽孢杆菌

（B.circulans）对2种病原菌菌落的生长均具有明显的抑菌效果，而蜡状芽孢杆菌（B.cereus Frankland）和苏云金芽孢杆菌（B.thuringiensis）无抑制效果（表1和图1）。如表1和图1所示，环状芽孢杆菌的抑菌效果较好，接种培养5 d后，对病原菌Y3和Y5的菌落生长抑菌率分别为80.88%和66.59%;枯草芽孢杆菌也有较好的抑菌效果，对Y3和Y5的菌落生长抑菌率分