表面微生物测试标准操作规程

版药典表面微生物检测操作规程

1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。

洁净室表面微生物检测规程

洁净室表面微生物检测规程一、目的：建立一个洁净室(区）表面微生物的检验操作规程。

二、范围：适用于本公司的洁净室（区）表面微生物的测定。

三、责任：洁净室（区）表面微生物的检测人员、化验室主任及质量部部长对实施本规程负责。

四、内容：1.标准依据《药品生产质量管理规范》（2010版）2.洁净区测试点选择表面微生物监测的采样点数目及布局根据以下几个方面设置:2.1 空调系统验证的结果2.2 房间的大小和布局2.3房间的用途2.4与产品的距离2.5 人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

3.洁净区微生物测试频率和限度3.1 日常监控一月一次3.2接触碟（φ55mm）50cfu/25cm2,警戒40cfu/25cm2纠偏45 cfu/25cm2。

4.洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）4.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

4.2 取样：取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

4.3 取样后，应立即用75%酒精喷洒被取样表面，以除去残留琼脂。

4.4 培养：收好的营养琼脂接触碟在30-35℃培养3天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.2 回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.3 回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4 检查人员的更衣程序是否正确；5.5 检查清洁设备和消毒剂的质量；5.6 查看操作员工的培训记录。

6.洁净区表面微生物的趋势分析每年应对洁净区表面微生物进行趋势分析。

如果发现表面微生物有增加的趋势，应立即通知质量部，展开调查。

根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。

物体表面微生物监测标准操作规程

物体表面微生物监测标准操作规程1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围2.1医院感染高风险部门，每季度进行检测。

2.2 发生有暴发流行。

3.采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样，清洁区根据现场情况确定。

4.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

5.采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

6.采样方法用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1~4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检。

门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。

若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

见表（5.5）。

表5.5化学消毒剂的常用中和剂消毒剂相应中和剂浓度（%）含氯消毒剂硫代硫酸钠0.2～1.0复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.2～1.0+2.0+0.3过氧乙酸硫代硫酸钠0.1~0.5过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.5～1.0+2.0+0.3碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温80 0.5+2.0甲醛双甲酮+马林 1.0+0.6戊二醛甘氨酸+吐温80 2.0+2.0乙醇吐温80+卵磷脂 3.0+0.3氯已定吐温80+卵磷脂注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂。

7. 检测方法将采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。

8.结果计算：8.1规则物体表面物体表面菌落总数计算方法见式（A.2）：物体表面菌落总数(CFU/cm2)= 平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数.........（A.2）采样面积(cm2)8.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

微生物限度检查标准操作规程

微生物限度检查标准操作规程《微生物限度检查标准操作规程》一、目的微生物限度检查是药品、食品、化妆品等产品质量的重要指标之一，其目的是为了保障产品的安全性和稳定性。

本标准操作规程旨在规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果的准确性和可靠性。

二、范围本标准操作规程适用于药品、食品、化妆品等产品的微生物限度检查，包括大肠菌群、金黄色葡萄球菌、霉菌和酵母菌等微生物指标的检查。

三、检查设备和试剂1. 培养基：根据不同的微生物指标选择适当的培养基，如大肠培养基、Mannitol盐琼脂、Sabouraud葡萄糖琼脂等。

2. 培养皿：使用符合规定的试验培养皿。

3. 培养箱：保证培养条件的恒温培养箱。

4. 其他常用实验用具：包括无菌采样容器、吸管、移液器、无菌培养皿等。

四、操作流程1. 样品采集：从产品中采集适量样品，保持无菌状态。

2. 制备稀释液：根据样品的特性，选择适当的稀释液将样品进行适当稀释。

3. 接种培养：将稀释后的样品接种在适当的培养基上，并在符合条件的培养箱中进行培养。

4. 观察和统计：观察培养皿中微生物的生长情况，统计出微生物的数量。

5. 结果判定：根据标准规定的微生物限度标准，判断检测结果是否符合规定。

五、质量控制1. 实验员必须进行严格的无菌操作训练，并使用正确的个人防护用具。

2. 培养基的质量必须符合规定，避免培养基带有细菌污染。

3. 检查设备必须经过定期的检查和校准，保持正常的工作状态。

4. 标本的采集、处理、保存和运送必须符合规定，避免外界的污染和干扰。

六、结果报告根据检测结果和规定的限度标准，出具检测报告，标明产品的微生物限度是否符合规定，以及具体的检测结果数据。

七、总结微生物限度检查是产品质量检验的重要环节，严格按照标准操作规程进行操作，可以保证检测结果的准确性和可靠性。

实验员在操作过程中也需严格遵守规程，做好个人防护措施，确保实验室的安全和卫生。

药典表面微生物检测操作规程

题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

表面微生物测试标准操作规程

1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。

4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向同一种培养基（对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

）5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。

5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。

5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。

取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。

微生物检验操作规程

微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。

样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。

如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。

1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。

2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。

洁净区(室)表面微生物检测规程

目的：建立一个洁净室(区）表面微生物的检验操作规程。

范围：适用于本公司的洁净室（区）表面微生物的测定。

责任：洁净室（区）表面微生物的检测人员、化验室主任及质量部部长对实施本规程负责。

内容：1.标准依据《药品生产质量管理规范》（2010版）2.洁净区测试点选择表面微生物监测的采样点数目及布局根据以下几个方面设置:2.1 空调系统验证的结果2.2 房间的大小和布局2.3房间的用途2.4与产品的距离2.5 人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

3.洁净区微生物测试频率和限度3.1 日常监控一月一次3.2接触碟（φ55mm）50cfu/25cm2,警戒40cfu/25cm2纠偏45 cfu/25cm2。

4.洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）4.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

4.2 取样：取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

4.3 取样后，应立即用75%酒精喷洒被取样表面，以除去残留琼脂。

4.4 培养：收好的营养琼脂接触碟在30-35℃培养3天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.2 回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.3 回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4 检查人员的更衣程序是否正确；5.5 检查清洁设备和消毒剂的质量；5.6 查看操作员工的培训记录。

6.洁净区表面微生物的趋势分析每年应对洁净区表面微生物进行趋势分析。

如果发现表面微生物有增加的趋势，应立即通知质量部，展开调查。

根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

表面微生物检测标准

表面微生物检测标准表面微生物检测是指对物体表面的微生物进行检测和监测的过程，其目的是为了评估物体表面的卫生状况，并采取相应的控制措施。

在食品生产、医疗卫生、日常生活等领域，表面微生物检测标准具有重要的意义。

本文将介绍表面微生物检测标准的相关内容，以期为相关领域的从业人员提供参考和指导。

一、检测方法。

表面微生物检测的方法主要包括接触平板法、印记法、拭子法等。

其中，接触平板法是指将含有营养物质的培养基平板与被测物体表面接触一段时间后，进行培养和计数。

印记法是通过将含有营养物质的培养基平板与被测物体表面接触后，形成微生物印记，然后进行培养和计数。

拭子法是指用含有缓冲液的拭子在被测物体表面来回擦拭一定次数后，将拭子放入培养基中培养一段时间，然后进行计数。

不同的检测方法适用于不同的场景和要求，需要根据具体情况进行选择。

二、检测标准。

在表面微生物检测中，常用的标准包括微生物总数、大肠杆菌群、金黄色葡萄球菌等。

微生物总数是指单位面积或单位物体表面上的微生物总数，反映了表面的卫生状况。

大肠杆菌群是一类肠道致病菌的指标，其检测结果可以评估物体表面是否受到粪便污染。

金黄色葡萄球菌是一种常见的皮肤致病菌，其检测结果可以评估物体表面的卫生状况。

根据不同行业的要求和相关法规，表面微生物检测标准可能会有所不同，需要根据具体情况进行确定。

三、检测设备。

进行表面微生物检测需要使用相应的检测设备，例如培养基平板、拭子、离心机、恒温培养箱等。

培养基平板是进行微生物培养和计数的基本工具，不同的培养基适用于不同类型的微生物。

拭子是用来采集被测物体表面微生物样本的工具，需要选择合适的拭子材料和缓冲液。

离心机和恒温培养箱是用来进行微生物培养和计数的设备，需要保证其工作正常和准确。

四、检测流程。

进行表面微生物检测需要按照一定的流程进行，包括样品采集、样品处理、培养计数和结果分析等步骤。

在样品采集时，需要选择合适的采样点和采样方法，保证样品的代表性和可比性。

微生物检验操作规程

微生物检验操作规程为规范检验程序，提高检验结果的准确性，要求微生物检验员严格按照本操作规程检验。

样品准备：准确称取10g±1g样品，剪碎后加入到200ml已灭菌的生理盐水中，充分混匀，静置10分钟，待生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数，液体样品可用原液直接做样液。

如果被检样品含有大量吸水树脂材料而导致不能吸出足够样液时，稀释量可按每次50ml递增，直至能吸出足够测试用样液。

在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时相应调整稀释度。

1.细菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱35℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、营养琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的营养琼脂培养基15～20ml倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置35℃±2℃培养48h后，计算平板上的菌落数。

结果计算：X1=A*K/5式中：X1→细菌菌落总数，cfu/g或cfu/mlA→5块营养琼脂培养基平板上的细菌菌落总数K→稀释度4）如果样品菌落总数超过标准的规定，应进行复检。

将留存的复检样品依前法复测2次，2次结果平均值都达到标准规定，则判定被检样品合格，其中有任何1次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。

2.真菌菌落总数检测方法1）仪器：培养箱25℃±2℃、天平（精确至0.1g）、医用剪刀、吸球、移液管1ml、250ml锥形瓶、平皿、酒精灯。

2）试液：0.9%生理盐水、玫瑰红钠琼脂。

3）步骤：用已灭菌的1ml移液管移取1ml样液，均匀地洒在平皿上，共接种5个平皿。

然后用冷却至45℃左右熔化的玫瑰红钠琼脂培养基15～20ml 倒入每个平皿内混合均匀。

待琼脂凝固后翻转平皿做好记号并置25℃±2℃培养7天，分别于3、5、7天观察,计算平板上的菌落数，如果发现菌落蔓延，以前一次的菌落计数为准。

洁净室(区)表面微生物检测操作规程

标准操作规程（STANDARD OPERATING PROCEDURE ）题目洁净室（区）表面微生物检测规程编码SOP-QC-011-00 文件属性■新订；□确认；□修订，第次，替代起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门品质管理部颁发日期2018.07.23 生效日期2018.08.01 分发部门品质管理部1份，检验检测部2份，行政人事部1份，共印4份1. 目的：规范洁净室（区）表面微生物检测程序，以确切反映生产活动对环境的影响程度。

2. 适用范围：适用于洁净室（区）内包括设施、墙面、地面、设备表面和洁净服、操作手套等表面的微生物监测。

3. 责任人：QC：负责培养基的准备及取样后培养观察记录结果。

负责培养皿（液）的中间转运、记录填写及报告发放。

各车间工序指定人员：负责正常生产时对无菌注射剂车间动态洁净区的表面微生物检测。

4. 正文：4.1 测试条件：4.1.1 被测洁净室（区）温、湿度、静压差、换气次数和空气的流速必须控制在规定范围内；4.1.2 测试前，被测试洁净室（区）已经消毒；4.1.3 被测净化空调系统正常运行不少于30min后开始测定。

4.2 测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服；4.3 测试前准备：4.3.1 定量法培养皿的准备：为购买的预灌装表面接触碟平皿，成分为大豆酪蛋白琼脂营养基（TSA），具有三层包装且经钴60辐照的预灌装表面接触碟平皿，可供采样用。

4.3.2 定性法培养基的准备：4.3.2.1 取250ml锥形瓶加入200ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.2 取500ml锥形瓶加入400ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.3 取20ml试管注入10ml营养肉汤培养基后加塞，置121℃湿热灭菌20min后备用。

4.3.3 擦拭工具准备：4.3.3.1 擦拭用洁净棉签放在烧杯里包裹后，经过121℃湿热灭菌20min后备用。

表面微生物测试操作规程20170123

1 目的：建立洁净室（区）表面微生物测试操作规程，确定洁净区中物体（包括工作服）表面微生物污染的程度以及洁净区的消毒效果。

2 适用范围：适用于公司洁净室（区）、无菌室和净化工作台的表面，洁净室（区）设备表面，进入洁净室区人员表面。

日常动态检测和空气净化系统确认时的检测。

3 责任者：质量控制部、质量保证部、化验员、负责洁净区洁净度动态测试的质监员。

内容1 测试方法：接触平皿法、棉签擦拭法、表面冲洗法。

测试方法必须考虑取样的准确性和代表性，可以从定性和定量来选择。

1.1 接触平皿法：只适用于规则物体的表面。

1.2 棉签擦拭法：适用于平皿接触法不适用的设备和不规则表面的取样。

棉质和涤纶棉签可以浸入到肉汤培养基内得到定性结果。

1.3 表面冲洗法：当需要确定设备表面的生物载荷时，或面积较大时。

用无菌水来冲洗内表面，然后收集、膜过滤后得到定量结果。

2 仪器、用具与培养基：2.1 仪器：电热恒温干燥箱、压力蒸汽灭菌器、药物天平、冰箱。

2.2 用具：培养皿（ф55mm×18mm的培养皿）2.3 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。

3 操作前准备及要求3.1 培养基平皿的制备3.1.1 培养皿的清洗与灭菌：取培养皿，用饮用水清洗，凉干后浸入清洁液中，浸泡12小时以上，用饮用水冲洗干净，再用纯化水冲洗三遍，置铁筒等密闭容器内，121℃湿热灭菌20分钟，备用。

3.1.2 培养基的制备：称取大豆酪蛋白琼脂40g，置2000ml烧杯中，加水1000ml，置电热炉上，加热煮沸使溶解，滤过，分装于500ml三角瓶中，用棉塞把瓶口塞好，包扎牛皮纸，在121℃湿热灭菌15分钟，备用。

3.1.3 培养基平皿的制备：将培养基加热熔化，冷却至约45℃时，在无菌操作下取培养基约10ml，注入无菌培养皿中，加盖后室温放至凝固，制备后培养基平皿在2℃～8℃存放。

使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养皿及培养基有变质、破损或污染的不能使用，存放时间不得超过一周。

表面微生物测试标准操作规程

1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本）3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。

4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。

5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。

5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。

取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。

表面微生物测试标准操作规程

一、目的：建立表面微生物检验标准操作规程，确保表面微生物检验结果的准确。

二、适用范围：适用于表面微生物检验操作。

三、责任人：QC检验人员负责本规程的实施，QA负责人、QC负责人监督检查。

四、内容：1、测试方法方法提要表面微生物测试可采用棉签擦拭法取样或市售预制TSA培养皿直接接触采样法，即通过对一定面积的（约25m2）的表面进行取样后，接种至培养基后，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内表面和操作人员单位面积表面的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

所用的仪器、设备和培养基a）一次性采样管；b）培养皿；c）培养基；d）恒温培养箱。

注意事项：1）采样用采样棒及培养皿或培养基均应在有效期内且包装密封完好。

2）所有取样操作应在生产关键操作结束后取样。

2、测试步骤：、棉签擦拭法取样选择取样点后，打开一次性采样管，提出采样棒，于管口处轻轻挤压多余的溶液，在取样范围内，在向前移动的同时将其从一边移到另一边；翻转取样棉签，让棉签的另一面也进行擦拭，但与前次擦拭移动方向垂直，擦拭时稍用力。

取样方式：擦拭取样示意图取样后立即将采样棒插入采样管中，拧紧，并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。

将取样后的采样管用力振摇3分钟以上，将管内溶液照微生物限度检查法（薄膜过滤法）进行检查，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

、表面接触皿取样选择取样点后，打开市售预制TSA培养皿，对取样范围表面进行接触取样，接触时间不少于5秒钟，取样完成后立即加盖,并用消毒剂对取样点进行表面擦拭。

将取样后的培养皿用其所附包装袋包装好后，置于30～35o C恒温培养箱中，培养72小时，计数。

3、取样对象及取样点3．1 洁净区操作间及设备表面100级区（A级区）：每班3个样品，在关键操作点任意取样（灌装机轨道、台面，胶塞振荡斗、胶塞下料轨道、理瓶盘、触摸屏、冻干箱搁板、周转盘、人手须接触的容器具表面、不锈钢桶盖提手处）万级无菌区：每班任意在工作面取2-3个样品（回风口上方墙面、地面、人物流门把手）万级区、十万级区：在关键操作点设备、容器具表面或操作间表面取3-5个点。

标准微生物操作规程

标准微生物操作规程微生物操作规程是用于规范实验室中微生物的处理和操作的一套标准化程序。

这些规程的制定和执行有助于确保实验室中的微生物操作的安全性和准确性。

下面是一份标准微生物操作规程的示例，包括样品的处理、培养基的配制、菌种的传代和储存等方面。

一、样品的处理1. 所有样品在处理前必须进行消毒处理，使用酒精喷雾器或其他消毒方式进行表面消毒。

2. 需要处理的液体样品应使用无菌移液器进行移液操作，避免污染。

二、培养基的配制1. 根据实验需求选择合适的培养基，并按照标准配方准备。

2. 使用无菌的培养基瓶或试管，避免外界污染。

3. 配制好的培养基需要经过高温高压灭菌处理，确保无菌。

三、菌种的传代1. 选择新鲜菌落进行传代，避免使用已经繁殖过多的菌落。

2. 使用无菌的培养基瓶或试管接种菌落，并尽量避免接触到容器外部。

3. 传代过程中需要进行切口贴片观察，确保菌种纯度。

四、菌种的储存1. 储存菌种时，选择适合的储存方法，如冷冻、冷藏或干燥保存。

2. 冷冻保存时，使用无菌的冷冻管存放菌种，加入保护剂并封存，冷冻温度为-80℃。

3. 冷藏保存时，使用无菌的试管或培养基瓶进行存储，冷藏温度为4℃。

4. 干燥保存时，使用无菌的琼脂坡上存放菌种，放入干燥箱中进行干燥处理。

五、废弃物的处理1. 废弃的培养基、试剂和细菌培养物等实验废弃物必须进行规范的处置。

2. 废弃物应放置在专用的生物危险废弃物容器中，并进行正确的标识。

3. 废弃物容器应定期消毒和按规定处理。

六、个人安全措施1. 在进行微生物操作前必须正确佩戴个人防护用品，如实验服、手套和口罩等。

2. 在操作过程中应避免直接接触微生物，尽量使用无菌移液器等工具。

3. 操作完毕后，洗手消毒并正确处理实验室工作区域，确保清洁和消毒。

七、事故处理1. 发生微生物泄漏或其他事故时，立即向上级报告，并按指导进行相应的处理。

2. 发生化学品或其他危险品泄漏时，立即采取措施进行清理和处理，并按相关规定报告。

洁净区表面微生物检测方法标准操作规程

目的：建立检测洁净区的表面微生物污染的检测方法，保证洁净区达到要求。

应用范围：适用于洁净室的质量控制责任人：化验室微生物检验员。

内容：1 仪器与材料灭菌的培养皿及营养琼脂培养基，每个培养皿中倒入20ml培养基、121℃灭菌30分钟，然后30～35℃培养24小时，如无菌生长，则可用于试验。

2 取样检测方法包括：接触平皿法、棉签擦拭法及表面冲洗法。

取样人员于取样前检查琼脂平皿。

不得使用被污染、水汽过多、过于干燥或分装不均的平皿。

同一物体应在其不同的地方采2个样。

2.1 接触平皿法2.1.1 适用于对平整的有规则性表面进行取样。

碟子为直径50～55mm，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。

2.1.2 取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，再盖上碟盖。

2.2.3 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

2.2 棉签擦拭法2.2.1 适用于平皿接解法不适用的设备和不规则表面取样。

2.2.2 棉签的种类可选棉质、涤纶等。

将100个棉签用无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约50ml浸湿，包上铝箔放入不锈钢饭盒中，121℃灭菌30分钟。

2.2.3 取样时，握住棉签柄，以30角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积24～30 cm2，然后将取样头折断放入浸湿溶液中，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。

2.3 表面冲洗法2.3.1需要确定设备内表面的生物载荷或面积较大时采用此法。

2.3.2用经121℃灭菌30分钟无菌水冲洗内表面，刻度吸管吸取淋洗液1ml，膜过滤后，检测。

3 培养 30～35℃培养48小时。

4 采样量每个采样点分别用棉签法取样或使用接触平皿法充分接触。

5 采样结果每个培养皿中的菌落数与限度比较得出最后的评判。

6 偏差纠正发现表现检测结果超标，可以采取以下行动进行调查和评估6.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质等。

表面微生物测试标准操作规程

表⾯微⽣物测试标准操作规程表⾯微⽣物测试标准操作规程（接触平⽫法）1．⽬的建⽴表⾯微⽣物测试标准操作规程，保证测试⼈员操作规范化、标准化。

2．依据《药品⽣产质量管理规范》（2010年修订本）3．范围本规程适⽤于本公司对洁净区的表⾯微⽣物的检测。

4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执⾏5．内容洁净区微⽣物测试点选择表⾯微⽣物监测的采样点数⽬及其布局根据以下⼏个⽅⾯设置：空调系统验证的结果房间的⼤⼩和布局房间的⽤途与产品的距离⼈流物流⽅向如何布点：对于同⼀洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地⽅采2个样。

如墙⾯2个采样点，地⾯2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

注：表⾯微⽣物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的⼤⼩；2.设备、管路等的复杂程度；3.⽣产活动的重要性；4.易受污染的部位等。

应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把⼿、地板（⾄少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，⾄少两点）、公⽤介质的管路（不易被清洁/消毒部位）、⽣产设备的关键性部位（如灌装针、易与⼈员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。

根据洁净区内设施、设备等表⾯对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表⾯分为三类：关键表⾯（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表⾯）⼀般表⾯（如设备的外表⾯、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微⽣物限度要求。

表⾯微⽣物的每点取样⾯积宜控制在25cm2左右。

为避免⼲扰，宜在⽣产活动结束后取样。

洁净区微⽣物测试频率和限度⽇常监控⼀⽉⼀次接触碟（55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏45cfu/25cm2 。

洁净区表⾯微⽣物测试⽅法（接触平⽫法）。

洁净区表⾯微⽣物测试必须在动态下监测。

仪器与材料：如使⽤⾃制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac （Replicate Organism Detection and Counting）的培养⽫，也可在外购买。