纤维素分解菌..
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将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶 中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振 荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复 选择培养。
3.梯度稀释
按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后 的菌液进行等比稀释101～107倍。
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4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 （1）制备鉴别培养基:
分解纤维素的微生物的分离
课题重难点：
从土壤中分离分解纤维素的微生物
一、基础知识
㈠纤维素与纤维素酶
1.纤维素
纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高 分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。
土壤中某些微生物能够分解利用纤维素，
原因是能产生 纤维素酶
2.纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括 三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶
方法一：先 培养微生物 ，再加入刚果红进 行颜色反应。（后置染色法） 方法二：在 倒平板 时就加入刚果红。
（前置染色法）
补充：
方法一中NaCl溶液的作用？
漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红， 以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶 活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖 底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能 分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结 合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红 洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈 当然分解纤维素的能就强！
②制备选择培养基：
培养基成分分析
培养基组成
纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 碳源 氮源、无机盐 1.2g 0.5g 无机盐 生长因子、碳源、氮源 氮素、生长因子
NaNO3 1g KCl 0.5g KH2PO4 0.9g Na2HPO4· 7H2O MgSO4 · 7H2O 0.5g 0.5g
酵母膏 水解酵素
溶解后，蒸馏水定容至1000mL
水
A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有， 是如何进行选择的？ 有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能 分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择 培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤 维素改为葡萄糖。
透明圈 ，可以通过___________________________ 是否产生透明圈 为中心的________ 来筛选纤维素分解菌。
2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解 菌，下列说法错误的是 A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物
B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物
C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物
②各加入一张滤纸条
③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L 的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失
甲
乙
（二）纤维素分解菌的筛选
刚果红染色法 。 1、筛选纤维素分解菌的方法______________ 颜色 反应直接筛选。 该方法可以通过________ 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成 红色复合物 ，当纤维素被_________ 纤维素酶 分解后， ____________ 纤维素分解菌 红色复合物无法形成，出现以_____________
C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶
纤维素
纤维二糖
葡萄糖
练一练：
1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种
B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁
D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖
实验：纤维素酶分解纤维素的实验
①取二支20mL的试管
D） 3下列对刚果红染色法的叙述，不正确的是（
A.可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 B.可以在倒平板时就加入刚果红
C.既可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应， 也可以在倒平板时就加入刚果红 D.可以将刚果红与培养基中的其他物质混合后再灭菌倒 平板
5、挑选菌落
挑取产生明显的透明圈的菌落， 一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养 基上，在300C－ 370C培养，可进一步 纯化培养。
③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年 积累的枯枝败叶等。
④如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤 中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对 集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的 适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的 土壤中。
2、选择培养 ①目的：
增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从 样品中分离所需要的微生物。
说明：分析“纤维素分解菌的选择培养基
配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少 量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中 生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，
因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量
繁殖。
2、选择培养 ①目的：
增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从 样品中分离所需要的微生物。
②制备选择培养基： ③操作：
鉴别纤维素分解菌的培养基
培养基组成 CMC-Na 5~10g
(水溶性羧甲基纤维素钠)
提供的主要营养物质
碳源 碳源、氮源、生长因子 无机盐 碳源、生长因子 凝固剂
酵母膏 KH2PO4 土豆汁 琼脂
1g 0.25g 100mL 15g
上述物质溶解后，加蒸 馏水定容至1000mL
氢元素、氧Leabharlann 素刚果红染色法D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛 选出了纤维素分解菌
(三)、实验设计
土壤
取样
什么 样的 环境 取样?
选择 培养
梯度
稀释
将样品涂 布到鉴别 培养基 ①鉴别培养基 的特点? ②如何鉴别?
挑选 菌落 挑选什 么样的 菌落?
① 培养的目的? ②选择培养基的 特点?
操作步骤
1、土壤取样：
①分布环境 富含纤维素的环境中 ②原因 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素 的环境中纤维素分解菌的含量相对提高
五、课题延伸
为了确定分离得到的是纤维素分解菌，
发酵产纤维素酶 还需要进行_____________ 实验，纤维素酶的 发酵方法有______ 固体 发酵。纤 液体 发酵和______
3.梯度稀释
按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后 的菌液进行等比稀释101～107倍。
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4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 （1）制备鉴别培养基:
分解纤维素的微生物的分离
课题重难点：
从土壤中分离分解纤维素的微生物
一、基础知识
㈠纤维素与纤维素酶
1.纤维素
纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高 分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。
土壤中某些微生物能够分解利用纤维素，
原因是能产生 纤维素酶
2.纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括 三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶
方法一：先 培养微生物 ，再加入刚果红进 行颜色反应。（后置染色法） 方法二：在 倒平板 时就加入刚果红。
（前置染色法）
补充：
方法一中NaCl溶液的作用？
漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红， 以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶 活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖 底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能 分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结 合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红 洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈 当然分解纤维素的能就强！
②制备选择培养基：
培养基成分分析
培养基组成
纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 碳源 氮源、无机盐 1.2g 0.5g 无机盐 生长因子、碳源、氮源 氮素、生长因子
NaNO3 1g KCl 0.5g KH2PO4 0.9g Na2HPO4· 7H2O MgSO4 · 7H2O 0.5g 0.5g
酵母膏 水解酵素
溶解后，蒸馏水定容至1000mL
水
A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？ 是液体培养基，原因是配方中无凝固剂（琼脂） B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有， 是如何进行选择的？ 有选择作用，本配方中纤维素作为主要碳源，只有能 分解纤维素的微生物可以大量繁殖。 C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用 提示：自变量为培养基的种类，即普通培养基和选择 培养基。可用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照,或者将纤 维素改为葡萄糖。
透明圈 ，可以通过___________________________ 是否产生透明圈 为中心的________ 来筛选纤维素分解菌。
2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解 菌，下列说法错误的是 A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物
B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物
C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物
②各加入一张滤纸条
③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L 的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失
甲
乙
（二）纤维素分解菌的筛选
刚果红染色法 。 1、筛选纤维素分解菌的方法______________ 颜色 反应直接筛选。 该方法可以通过________ 2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成 红色复合物 ，当纤维素被_________ 纤维素酶 分解后， ____________ 纤维素分解菌 红色复合物无法形成，出现以_____________
C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶
纤维素
纤维二糖
葡萄糖
练一练：
1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种
B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁
D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖
实验：纤维素酶分解纤维素的实验
①取二支20mL的试管
D） 3下列对刚果红染色法的叙述，不正确的是（
A.可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 B.可以在倒平板时就加入刚果红
C.既可以先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应， 也可以在倒平板时就加入刚果红 D.可以将刚果红与培养基中的其他物质混合后再灭菌倒 平板
5、挑选菌落
挑取产生明显的透明圈的菌落， 一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养 基上，在300C－ 370C培养，可进一步 纯化培养。
③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年 积累的枯枝败叶等。
④如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤 中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对 集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的 适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的 土壤中。
2、选择培养 ①目的：
增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从 样品中分离所需要的微生物。
说明：分析“纤维素分解菌的选择培养基
配方”可知，该配方中的酵母膏也能够提供少 量的碳源，因此其他微生物也能在该培养基中 生长繁殖。只不过，由于酵母膏的含量极少，
因此，只有以纤维素为碳源的微生物才能大量
繁殖。
2、选择培养 ①目的：
增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从 样品中分离所需要的微生物。
②制备选择培养基： ③操作：
鉴别纤维素分解菌的培养基
培养基组成 CMC-Na 5~10g
(水溶性羧甲基纤维素钠)
提供的主要营养物质
碳源 碳源、氮源、生长因子 无机盐 碳源、生长因子 凝固剂
酵母膏 KH2PO4 土豆汁 琼脂
1g 0.25g 100mL 15g
上述物质溶解后，加蒸 馏水定容至1000mL
氢元素、氧Leabharlann 素刚果红染色法D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛 选出了纤维素分解菌
(三)、实验设计
土壤
取样
什么 样的 环境 取样?
选择 培养
梯度
稀释
将样品涂 布到鉴别 培养基 ①鉴别培养基 的特点? ②如何鉴别?
挑选 菌落 挑选什 么样的 菌落?
① 培养的目的? ②选择培养基的 特点?
操作步骤
1、土壤取样：
①分布环境 富含纤维素的环境中 ②原因 生物与环境的互相依存关系，在富含纤维素 的环境中纤维素分解菌的含量相对提高
五、课题延伸
为了确定分离得到的是纤维素分解菌，
发酵产纤维素酶 还需要进行_____________ 实验，纤维素酶的 发酵方法有______ 固体 发酵。纤 液体 发酵和______